实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验
OFT与MCV联合检测在地中海贫血产前筛查中的应用
OFT与MCV联合检测在地中海贫血产前筛查中的应用杨惠新【摘要】目的探讨红细胞渗透脆性试验(Osmotic fragility test,OFT)与平均红细胞容积检测(Mean corpuscular volume,MCV)两种方法联合使用在孕妇产前地中海贫血筛查的优越性.方法选取2010年8月至2011年10在我站产前检查的孕妇312例,抽取静脉血,独立进行OFT、MCV检测和PCR基因诊断.以PCR基因诊断为参照,对比分析OFT、MCV单项检测及联合检测的灵敏度、特异度和准确度等指标.结果地贫基因携带率为7.69％,OFT检测灵敏度高于MCV (91.67％与87.50％),OFT检测特异度低于MCV (88.54％与92.36％)；OFT和MCV平行联合检测提高检测灵敏度,系列联合检测提高特异度和准确度.结论 OFT和MCV联合检测在产前地中海贫血筛查中具有重要价值,其应用有利于预防与控制地中海患儿出生,提高优生优育服务质量.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2012(023)009【总页数】2页(P95-96)【关键词】地中海贫血;筛查;红细胞渗透脆性试验;平均红细胞容积【作者】杨惠新【作者单位】鹤山市计划生育服务站,广东鹤山 529700【正文语种】中文【中图分类】R446.11+3地中海贫血(地贫)是世界范围最常见的单基因遗传性血红素合成障碍疾病，目前国内外都无有效的治疗方法。
在我国，其发病率为3%～8%，广东、广西和海南等是高发地区。
广泛开展产前筛查，降低地贫儿出生率是降低该疾病发病率的最有效措施[1]。
为优化地贫筛查方法，本站对红细胞渗透脆性试验(Osmotic fragility test，OFT)和平均红细胞容积(Mean corpuscular volume，MCV)两种方法联合使用情况进行评价。
1.1 研究对象选取2010年8月至2011年10月到我站进行产前检查单胎妊娠孕妇为研究对象。
红细胞渗透脆性实验报告
红细胞渗透脆性实验报告
实验目的，通过实验，观察红细胞在不同渗透压下的脆性变化，了解红细胞的渗透脆性特点。
实验原理，红细胞在不同渗透压下会发生渗透作用，当渗透压较高时，红细胞会失去水分而收缩，导致脆性增加；而渗透压较低时，红细胞会吸收水分而膨胀，脆性减小。
实验材料与方法：
1. 材料，新鲜血液、生理盐水、离心管、显微镜、玻璃片、封片、渗透压计。
2. 方法：
a. 取新鲜血液离心，得到红细胞悬液。
b. 分别用生理盐水制备不同浓度的溶液，得到不同渗透压的溶液。
c. 取一定量的红细胞悬液，分别加入不同渗透压的溶液中，放置一段时间后制作干片。
d. 在显微镜下观察红细胞的形态变化，并记录观察结果。
实验结果：经过观察，我们得出以下实验结果：
1. 在高渗透压溶液中，红细胞明显收缩，形态不规则，脆性增加。
2. 在低渗透压溶液中，红细胞膨胀，形态圆润，脆性减小。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：
1. 红细胞在高渗透压下会失去水分而收缩，导致脆性增加。
2. 红细胞在低渗透压下会吸收水分而膨胀，脆性减小。
实验结论，红细胞的渗透脆性与渗透压密切相关，渗透压较高时，红细胞的脆性增加，渗透压较低时，红细胞的脆性减小。
实验意义，通过本实验，我们深入了解了红细胞的渗透脆性特点，为进一步研究红细胞的生理功能提供了重要的实验数据和理论基础。
结语，本实验通过观察红细胞在不同渗透压下的脆性变化，深入探讨了红细胞的渗透脆性特点，对于加深我们对红细胞生理特性的理解具有重要的意义。
希望本实验能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
优质文档红细胞渗透渗出脆性试验
[优质文档]红细胞渗透渗出脆性试验红细胞渗透脆性试验来源于:江西检验医学网红细胞渗透脆性试验red cellosmotic fragility test参考范围:开始溶血 O.40,一0.44, (NaCl液)完全溶血 O.32,一O.36, (NaCl液)临床评价:1(红细胞膜，有人称为鬼影(ghost)，是一种由磷脂、非酰化的胆固醇和糖蛋白等组成膜脂质和主体、膜蛋白质(转运蛋白和表面抗原)与周围膜蛋白质(膜骨架中的收缩蛋白和肌动蛋白以及膜骨架依靠的锚蛋白)所组成。
这些成分要保证红细胞在120天寿命内50，000次通过“急流旋涡”仍能生存;要控制Na+和K+在细胞内的浓度，任何导致K+漏出增高超过Na+的漏入，均会导致细胞内单价阳离子和水分的丢失。
这些生理功能的完善与否，可用简单且明白的膜渗透脆性试验来了解。
2(正常红细胞为双凹盘形，在低渗盐水中吸水膨胀的适应性大(可增加70,的体积而不破裂)，遗传性球形红细胞增多症(HS)等红细胞的S,V比率小，对低渗盐水的适应性小(脆性大)，所以红细胞渗透跪性试验是检测HS最有用的方法，当红细胞混悬于不同浓度的NaCl低渗溶液时，正常红细胞于O(4,一0(44,NaCl浓度时开始溶血，于o(32,一O(36,NaCl浓度时完全溶血。
HS病人的红细胞大多于0(50,一0(75,NaCl时开始溶血，于0(4,NaCl浓度时完全溶血，患者红细胞渗透脆性试验与正常对照组相比提高0.04,(NaCl液)以上即为阳性，还可见于遗传性椭圆形红细胞增多症，某些伴有球形红细胞增多的自身免疫性溶血性贫血。
3(红细胞渗透脆性试验显示，低于参考溶血的NaCl浓度可见于地中海贫血，血红蛋白C、D、E病，缺铁性贫血和肝脏疾病。
4(在试验过程中要严格控制加血量的准确性和防止血标本在体外溶血，否则易影响试验的准确性。
1(原理:悬浮于低张溶液中的红细胞，由于溶液张力差异，可使红细胞外的水渐渐进入红细胞中。
机能学实验——红细胞渗透脆性上课讲义
二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过6小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等【课前讲解】一、实验设计的原理将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。
红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。
但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。
对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。
同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。
将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。
前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。
生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。
等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl 溶液既是等渗溶液又是等张溶液。
成败关键（注意事项）1. 血液最好新鲜制备。
2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。
3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。
4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。
混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造成溶血。
5. 观察溶血情况时以白色为背景。
6. 为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。
实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验解析
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多 重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
Hale Waihona Puke 实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
溶血 ％ = D1 D2 X 1.25 ×100 ％
【参考值（参考范围）】 溶血率％ >65％为正常溶血率；<55％为溶血率降低；（注 56-
64％为溶血率轻度降低）。
【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。 溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因 携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋
白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改
变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多
表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征） 4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
【检验原理】
贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。
测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起
的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
红细胞渗透脆性(仅供参照)
红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。
[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。
试管号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10试管蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。
[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。
1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。
地中海贫血实验诊断的研究进展
地中海贫血实验诊断的研究进展作者：黄莲芬来源：《中外医学研究》2011年第18期【摘要】地中海贫血(thalassaemias)是人类常见的特异性隐性遗传病。
该病为单基因溶血性贫血症，在我国常见于南方人群，具有发病率高、重症患者胎儿死亡率高等特点，目前尚无彻底根治的方案。
筛选恰当的地中海贫血实验诊断方法对该病的预防具有重要意义。
本文综述了地中海贫血的实验室诊断方法，综合阐述了将筛查法和基因诊断法有机结合后统一应用，可以为地中海贫血的实验室诊断方面做出相应的贡献。
随着现代社会科学技术的日益更新，地中海贫血的多种实验室诊断检测方法层出不穷。
【关键词】地中海贫血；实验室诊断；研究进展Laboratory diagnosis of thalassemia Progress HUANG Lian-of Beihai City，Beihai 536000，China【Abstract】Mediterranean anemia(Thalassaemias)the specificity of the human common recessive genetic disease.Single gene disease hemolytic anemia, common in southern populations in China,with a high incidence of severe fetal mortality in patients with advanced features,the program is currently no complete cure. Appropriate screening method for laboratory diagnosis of thalassemia prevention of the disease is important.This paper reviews the laboratory diagnosis of thalassemia,described the comprehensive screening method and combination of genetic diagnosis after the reunification of the application for the laboratory diagnosis of thalassemia and make the appropriate contributions.With the growing science and technology of modern societyupdates,thalassemia endless variety of laboratory diagnostic tests.【Key words】Thalassemia；Laboratory diagnosis；Research地中海贫血(thalassaemias)在人类遗传病中较为常见，它指的是因珠蛋白合成肽链时受阻而引发的特异性隐性遗传病［1］。
地中海贫血与红细胞渗透脆性试验课件
33
PCR-ASO
Normal
Mutant
2
诊断(Diagnosis)
· 临床特点+ 实 验 室 检 查 + 父 母 调 查 阳 性 + (基因分析)
地中海贫血初筛检查
· MCV<80fl 和/或MCH<27pg ,则高度怀疑 为地贫；
· 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test,ROFT;<0.60): 即可 怀疑为地贫；
实验四地中海贫血 与红细胞渗透脆性
试验
地贫的发病率、地域分布及危害
·地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； ·广西发病率为20%; ·重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
和难以估量的精神负担；
地贫患者的困境
4 0 0 0 元：重型地贫患儿平均每月需4000元的治疗费用以维持生
命。成年人每月的治疗费用接近万元，每年治疗费用至少10万元，每例 重症地贫患儿出生给社会和家庭带来的经济负担高达100-300万元。
■ 实验室检查
● 小细胞低色素贫血，有核红细胞和网织红细胞明显升
高
● 红细胞渗透脆性明显降低
· Hb电泳：大量Hb brat's、少量HbH,
无HbA 、HbF
12
β-地贫病理生理
β-珠蛋白基因缺陷
β珠蛋白肽链合成减少或缺如
珠蛋白肽链合成间的平衡异常
HbF比例显著增高，
HbA2增高
正常Hb A生 物合成降低
HbA:a₂ β₂) 合成降低的一种遗传性血红 蛋白病。
· 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋 白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改 变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多 表现为慢性进行性溶血性贫血。
红细胞渗透脆性的测定
红细胞渗透脆性的测定[目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。
将红细…[目的与原理]掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。
将红细胞置于等渗溶液中，其形态和容积可保持不变。
若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力大小与红细胞膜脆性有关。
通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。
反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。
刚能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。
通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。
在刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。
[实验对象]鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl，蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。
[实验步骤]滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观察结果。
多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。
加以混合，以备重复实验使用。
红细胞渗透脆性
红细胞渗透脆性试验[实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法[实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
[实验对象]家兔[实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。
[实验步骤]（一）低渗盐溶液的配制取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。
蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25（二）枸椽酸钠血的制备家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。
[观察项目]用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。
1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。
地中海贫血的实验室诊断进展_代宏剑
成能力,根据患者血小板生成状况制定个性化治疗方案,从而降低治疗风险。
4.2 评估骨髓抑制程度 巨核细胞系统一旦受到抑制,将对机体造成极大危险。
RP对凝血机制的维持起重要作用,有较高RP数量的患者不易出现严重的出血性并发症[11]。
外周血RP能预测骨髓巨核细胞生成血小板的能力,说明在接受放化疗或骨髓移植的患者中,监测RP和IPF的变化对判断骨髓抑制程度及预后评估具有重要意义,有肋于判断继发出血的可能性,也可作为决定是否需预防性输注单采血小板或使用刺激因子的可靠依据。
4.3 判断骨髓抑制后造血重建 RP检测可为预测血小板恢复时间提供有价值的信息[13]。
通过对急性髓细胞白血病化疗后恢复期血小板和RP的连续观察,发现多数病例RP的增加早于血小板。
异基因造血干细胞移植和骨髓移植后,RP、IPF 与外周血血小板计数间的相关性更密切:IPF随血小板数量的下降而下降,并最早开始回升,较血小板和RP回升分别提前2.5d和14d;随着血小板数量的升高,IPF由峰值迅速回落至正常水平,说明I PF能更早反映骨髓抑制后造血重建,是预测骨髓造血重建可靠易行、价值较大的指标[13-14]。
骨髓造血重建时,RP与IP F的回升均早于白细胞,尽管RP与白细胞无直接关系,但仍提示RP在骨髓造血重建初期最早释放入外周血;RP和IP F的检测能更加准确地、全面地反映骨髓抑制的恢复情况,可作为骨髓血小板生成的监控指标[15]。
4.4 观察造血促进因子使用效果 使用巨核细胞刺激因子后,RP是最早出现增加的指标;曹永献等[16]的研究结果表明,外周血RP与IP F是反映化疗后患者骨髓变化的敏感指标,能准确反映血小板的生成情况。
说明RP检测是目前判断巨核细胞刺激因子疗效的最佳选择。
5 结 语外周血RP、IP F的测定,除有助于血小板减少症的诊断及病因学研究外,也可用于评估放化疗前后骨髓血小板生成能力、骨髓抑制程度、骨髓抑制缓解和恢复状况以及造血促进因子疗效。
红细胞脆性实验报告
一、实验目的1. 掌握红细胞渗透脆性试验的原理和操作方法。
2. 通过实验了解红细胞对不同浓度低渗溶液的渗透抵抗力。
3. 分析实验结果，了解红细胞渗透脆性与临床疾病的关系。
二、实验原理红细胞渗透脆性试验是一种检测红细胞膜稳定性的方法。
正常红细胞在低渗溶液中具有一定的抵抗力，当溶液浓度逐渐降低时，红细胞开始膨胀、破裂，直至完全溶血。
红细胞对低渗溶液的抵抗力称为渗透脆性。
渗透脆性高表示红细胞膜稳定性差，易发生溶血；渗透脆性低表示红细胞膜稳定性好，不易发生溶血。
三、实验材料与仪器1. 材料：抗凝血液、生理盐水、5%葡萄糖溶液、1.9%尿素溶液、不同浓度的NaCl溶液、试管、移液管、滴管等。
2. 仪器：离心机、显微镜、天平等。
四、实验步骤1. 准备实验溶液：配制不同浓度的NaCl溶液，分别标记为1号、2号、3号、4号、5号溶液。
2. 标准操作：取抗凝血液1ml，加入试管中，用移液管吸取1ml生理盐水，加入试管中，混匀后用滴管滴加1ml 5%葡萄糖溶液，再次混匀。
3. 溶血观察：将上述混合液分别滴加到不同浓度的NaCl溶液中，观察红细胞溶血情况。
4. 记录结果：记录开始出现溶血的NaCl溶液浓度和完全溶血的NaCl溶液浓度。
5. 数据分析：计算红细胞渗透脆性值，并与正常值进行比较。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 开始出现溶血的NaCl溶液浓度：3.0g/L- 完全溶血的NaCl溶液浓度：2.0g/L2. 结果分析：本实验中，开始出现溶血的NaCl溶液浓度为3.0g/L，完全溶血的NaCl溶液浓度为2.0g/L。
与正常红细胞渗透脆性值（开始出现溶血的NaCl溶液浓度约为2.9g/L，完全溶血的NaCl溶液浓度约为2.3g/L）相比，本实验中红细胞渗透脆性值略高，表明实验者红细胞膜稳定性较差。
六、实验结论1. 本实验通过测定红细胞对不同浓度低渗溶液的渗透抵抗力，成功掌握了红细胞渗透脆性试验的原理和操作方法。
地中海贫血
β地贫产前诊断
产前诊断结果为重型β地贫胎儿的家系，其遗传
咨询原则同重型α地贫。 对于中间型β地贫的遗传咨询，也基本与HbH病 的咨询原则相同，但因中间型β地贫的临床异质 性更为复杂，在该病的遗传咨询过程中，更需 要慎重和严格的知情同意。
谢谢！
分类及发病机制
根据珠蛋白肽链缺ห้องสมุดไป่ตู้不同，地贫可分为α、 β、δ、δβ和γδβ等不同类型，而α和β地贫是最常 见的地贫类型。
α地贫
α珠蛋白基因位于第16号染色体短臂末端的珠 蛋白基因簇中，已知α地贫基因突变类型至少 有77种之多，其中44种点突变，余下的33种为 缺失型突变，虽然点突变多，但临床上以缺失 型突变更为多见，就一个单倍体而言， α地贫 可分为3类缺陷： 1、 α地贫2（ α+地贫），缺失一个α基因（ α/）； 2、 α地贫1 （ α0地贫），两个α基因都缺失（-/）； 3、非缺失型， α基因发生点突变或小的缺失 （ αT α / α αT ）
4、分子筛查：上述血液学表型分析不能工巧 匠00%检出地贫基因携带者，尤其对静止型和 复合型地贫患者，有相当的漏诊率，因此基因 诊断进行确诊才是最为有效的地贫筛查手段， 尤其对于夫妇中一方已确诊为地贫携带者的情 况，另一方除需同时接受上述地贫血液学表型 筛查程序外，分子筛查也是必不可少的，目前 绝大部分的地贫突变均可通基于PCR技术的分 子诊断进行鉴定，分子筛查的灵敏度和特异性 均显著高于血液学表型分析，如双方同时携带 同型地贫基因，则应在医生指导下做好产前诊 断，以避免重型患儿的出生。
产前筛查
血液学筛查：
1、全血细胞计数：地贫的典型特征之一是小红
细胞和低色素，因此地贫筛查最重要的血液学 指征为MCV和MCH，若MCV＜82fl， MCH＜ 27pg则筛查阳性，需要做进一步检查，但这两 项指标在静止型α地贫和αβ复合型地贫的检测中 可能完全正常。
红细胞渗透脆性的测定
目的要求
学习凝血时间的测定方法。
基本原理
• 血液流出血管后，受到刺激的血小板就会 释放出一系列凝血因子，使血中的纤维蛋 白原转换成网状的纤维蛋白，血液发生凝 固。 • 凝血时间是指从血液流出体外时起至凝固 时止所需的时间。测定凝血时间可反映血 液本身的凝血因子是否缺乏或减少。
实验动物与器材
基本原理
• 红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力， 这一特征称为红细胞的渗透脆性。将血液 滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜 对低渗溶液抵抗力的大小。
• 开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该 血液红细胞的最小抵抗力；开始出现完全 溶血时的低渗溶液浓度，则为.8％柠檬酸钠、171mmol/L氯化钠溶 液、蒸馏水；注射器(2ml或5ml)、针头（6 号或6.5号）、5ml试管12支、5ml移液管3 支、滴管、试管架、吸耳球。
方法与步骤
• 1. 配制不同浓度的低渗NaCl溶液：取试管 12支，分别标记后，排列在试管架上，按 表3－1配制各种浓度的NaCl溶液。
• 2．取血，每管1滴，轻轻摇匀后于室温下 静置1～2hr后观察各试管之溶血情况。
• 3．结果判断：从高浓度管开始观察—— • 未发生溶血者：液体下层有大量红细胞下沉，上层为无色 透明，表明无红细胞破裂； • 部分红细胞溶血者：液体下层有红细胞下沉，上层出现透 明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不 完全溶血； • 红细胞完全溶血者：液体完全变成透明红色，肉眼观察管 底已无红细胞，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。 • 开始完全溶血试管之溶液浓度代表红细胞的最高抵抗力， 即最小脆性；开始不完全溶血管之溶液浓度代表红细胞的 最低抵抗力，即最大脆性）。
• 4. 记录开始溶血和完全溶血的两管NaCl浓度。
红细胞的渗透脆性实验报告
红细胞的渗透脆性实验报告红细胞的渗透脆性实验报告引言：红细胞是人体血液中的重要组成部分，具有运输氧气和二氧化碳的功能。
红细胞的渗透脆性是衡量其稳定性和健康状况的重要指标之一。
本实验旨在通过测量红细胞在不同渗透压下的溶血程度，来评估红细胞的渗透脆性。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 新鲜采集的人体全血样本- 生理盐水- 不同渗透压的溶液（0.3%，0.6%，0.9%，1.2% NaCl溶液）2. 实验方法：1. 将采集的全血样本离心，分离出红细胞。
2. 用生理盐水洗涤红细胞，去除血浆和其他细胞成分。
3. 将红细胞悬液分成若干等份。
4. 在不同的试管中，分别加入不同浓度的NaCl溶液和红细胞悬液，形成不同渗透压的溶液。
5. 将试管放入恒温水浴中，保持温度恒定。
6. 按照设定的时间，取出试管，离心沉淀红细胞。
7. 通过测量上清液的吸光度，确定红细胞的溶血程度。
实验结果与讨论：在本实验中，我们选取了不同浓度的NaCl溶液，以模拟不同渗透压环境下红细胞的受损程度。
通过测量上清液的吸光度，我们可以得到红细胞的溶血程度。
实验结果显示，随着NaCl溶液浓度的增加，红细胞的溶血程度也逐渐增加。
当NaCl溶液浓度为0.3%时，红细胞的溶血程度较低，吸光度较小。
随着溶液浓度的增加，红细胞的溶血程度逐渐增加，吸光度也随之增大。
当NaCl溶液浓度达到1.2%时，红细胞的溶血程度最高，吸光度最大。
这一结果表明，红细胞在高渗透压环境下容易发生溶血。
红细胞的渗透脆性受到外界环境的影响，当渗透压超过一定阈值时，红细胞的膜结构受到破坏，导致红细胞溶解释放出血红蛋白。
红细胞的渗透脆性与人体健康状况密切相关。
一些疾病，如贫血和遗传性溶血性贫血等，会导致红细胞的渗透脆性增加。
此外，一些药物和化学物质也可能对红细胞的渗透脆性产生影响。
因此，通过测量红细胞的渗透脆性，可以为临床诊断和治疗提供一定的参考。
结论：红细胞的渗透脆性是衡量其稳定性和健康状况的重要指标之一。
红细胞渗透脆性实验报告
红细胞渗透脆性实验报告红细胞渗透脆性实验报告红细胞渗透脆性实验是一项常见的生物学实验，用于评估红细胞的脆性程度。
本次实验旨在了解红细胞在不同渗透压条件下的渗透脆性，并探讨其与细胞膜完整性的关系。
实验材料和方法：1. 实验材料：新鲜采集的人类全血、生理盐水、不同浓度的高渗溶液（如5%、10%、15%的NaCl溶液）。
2. 实验步骤：a. 将采集的全血分装到离心管中，并在4℃下离心10分钟，以分离红细胞。
b. 轻轻吸取上清液，将红细胞沉淀洗涤3次，每次用生理盐水洗涤。
c. 将洗涤后的红细胞与不同浓度的高渗溶液混合，制备一系列不同渗透压条件下的红细胞悬液。
d. 将悬液置于37℃恒温水浴中孵育30分钟。
e. 孵育结束后，离心悬液，观察上清液的颜色和透明度。
实验结果：根据实验结果观察，可以发现不同浓度的高渗溶液对红细胞的渗透脆性有不同的影响。
当高渗溶液的浓度较低（如5% NaCl溶液）时，红细胞悬液的上清液呈现浅黄色，透明度较高，说明红细胞的渗透脆性较低，细胞膜相对完整。
而当高渗溶液的浓度逐渐增加（如10%、15% NaCl溶液），红细胞悬液的上清液逐渐变深，透明度降低，说明红细胞的渗透脆性增加，细胞膜受损程度加剧。
实验讨论：红细胞的渗透脆性与细胞膜完整性密切相关。
正常情况下，红细胞细胞膜由磷脂双分子层和蛋白质组成，具有较高的弹性和稳定性。
当红细胞暴露于高渗溶液中时，溶液中的溶质会通过渗透作用进入红细胞内部，导致细胞内外渗透压差增大。
当渗透压差超过红细胞膜的承受能力时，细胞膜可能发生破裂或变形，导致红细胞渗透脆性增加。
实验结果表明，高渗溶液的浓度越高，红细胞的渗透脆性越大。
这是因为高渗溶液中的溶质浓度较高，渗透压差增大，红细胞内部水分向溶液中渗透，细胞体积收缩，细胞膜受到拉力的作用，从而增加了细胞膜的破裂风险。
此外，红细胞的渗透脆性还受到其他因素的影响，如温度、pH值等。
在实验中，我们将红细胞悬液置于37℃恒温水浴中孵育，这是因为温度的升高可以加速分子运动，增加红细胞与溶液之间的分子碰撞，进一步促进渗透作用。
地中海贫血的实验室诊断
地中海贫血的实验室诊断在日常生活中，人们对于“贫血”这两个字都比较熟悉，但是很少有人了解地中海贫血这一疾病。
地中海贫血疾病属于遗传病中的一种，其主要产生原因是人们体内造血红细胞内血红蛋白数量与质量发生变化致使红细胞在体内生存时间变短，从而导致血红蛋白的生理特性和功能异常。
患有这一疾病的患者大部分都是天生的，后天形成几乎没有。
根据相关人员调查发现，这一疾病最早在地中海地区的人群中被发现，故称为地中海贫血（简称“地贫”），又被称为海洋性贫血或珠蛋白生成障碍性贫血。
人类珠蛋白基因是本病的致病基因。
由于地中海贫血疾病属于遗传疾病的一种，所以，在临床人员对这一疾病进行筛查和预防时，也会通过遗传咨询、产前检查等方式及早干预，从而避免中重度患儿的出生。
当前，随着科学技术的发展，地中海贫血检测手段也逐渐增多，其也被应用到实验室诊断中。
1、地中海贫血筛查方式1.1 红细胞参数检测这一检测方式是临床检测中较为常见的一个方式。
患有地中海贫血的患者，其体内红细胞参数会与正常人有明显不同，最为明显的特征是患者体内红细胞性低色素。
当前，相关人员在进行地中海贫血疾病进行筛查时，会将MCV<80f、MCH<27pg这一标准作为基础筛查标准，根据此筛查标准，医护人员会发现患者的体内红细胞、白细胞以及血色素等出现异常。
1.2红细胞形态学检查法根据相关人员研究发现，患有地中海贫血的患者其血内红细胞大小不一，在不同状态下，患者的红细胞会呈现出靶形红细胞、嗜碱性点彩红细胞等异常形态，患病严重程度不同，红细胞异常这一症状表现也会存在一定差异。
1.3 红细胞渗透脆性试验法这一检测方式主要是对检测体内红细胞渗透性，主要取决于红细胞的表面积与体积之比。
根据实验结果对红细胞抵抗能力进行判断，以及相关数据的对比确定病情。
红细胞抵抗能力不同，在实验中也会有不同表现。
比如，在检查中，如果工作人员通过检查发现患者体内红细胞小细胞表面积与体积都比较大，并且对低渗盐水抵抗力较大，就表明小细胞的脆性比较小，反之则证明脆性大。
生理学实验教案——红细胞的渗透脆性
红细胞的渗透脆性一、实验目的及原理目的：测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。
原理：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，至于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40％~0.45％ NaCl溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30％~0.35％ NaCl溶液）。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。
二、实验准备1.实验对象：家兔2.实验药品：1％氯化钠、蒸馏水3.实验器材：5ml试管10支、2ml滴管2支、5ml注射器、试管架、棉签4.环境：安静的实验室三、实验学时1学时四、实验方法1.低渗盐溶液的配制取试管10支，洗净烤干，编号后依次排列于试管架上，参照下图向各试管中加入1％ NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2ml。
2.采血从家兔颈总动脉取血2ml，立即向每个试管各加血液1滴，轻摇试管，使血液与盐溶液充分混合。
静置30分钟。
3.实验观察按各试管液体颜色和透明度判断是否溶血、部分溶血或完全溶血。
①未发生溶血试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。
②部分溶血试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，表示红细胞部分溶解，最先出现部分溶血的盐溶液为红细胞的最大脆性（即最小抵抗力）。
③完全溶血试管内溶液呈透明红色，管底无红细胞，说明红细胞全部破裂。
最先出现完全溶血的盐溶液为红细胞的最小脆性（即最大抵抗力）。
五、实验结果认真完成实验，将实验结果记录于下表。
红细胞的渗透脆性观察项目试管编号未发生溶血部分溶血完全溶血六、思考1.什么是红细胞的渗透脆性？红细胞的渗透脆性一般是指红细胞，在低渗溶液中发生溶血的性能，称为渗透脆性。
地中海贫血的诊断方法
地中海贫血的诊断方法B-地中海贫血的筛查和诊断主要依赖实验室检查，方法主要有： 1 血常规检测地中海贫血的重要特征之一是小细胞低色素性贫血，如MCV≤80 fl，MCH≤25．0 Pg，则可疑为地中海贫血患者或基因携带者，可同时测定血清铁和铁蛋白，以排除缺铁性贫血。
2 红细胞渗透脆性试验(一管法)其原理是地中海贫血红细胞膜表面粗糙、凹陷、折叠和浆膜扩展，膜与内容物之比增大，对渗透溶解的抗性增加，在0．32％(或0．36％)NaC1中溶解度降低(脆性降低)。
一管法可用于地中海贫血群体筛查。
3 血红蛋白(Hb)电泳Hb电泳是检测地中海贫血、异常血红蛋白最常用的方法，可观察到HbE、HbH等异常血红蛋白区带，同时可定量检测HbF、HbA2的含量并区分常见类型的地中海贫血。
有研究显示MCV、Hb电泳和红细胞脆性实验三者联合检测的灵敏度可达100％，阴性预告值达100％，联合特异度可达100％，阳性预告值达100％DS。
4 高效液相色谱技术(HPLC)原理：采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱技术，全自动分析仪可分离血红蛋白的变异体与亚型，容易发现重型和轻型B地中海贫血。
在操作上，HPLC采用的是全血标本，不需要制备Hb液，只要将全血标本直接放在仪器上，通过电脑操作便能实现HbA、HbA2、HbF等定量检测。
优点：所需样本量少，自动化程度高，操作简单，快速，能消除人为误差，结果准确。
HPLC也可用于胎儿脐带血的产前诊断，可诊断出重型B地中海贫血，但不能区分正常胎儿和杂合子胎儿。
近年来，地中海贫血高发地区也采用此法进行携带者检测。
5 基因诊断近年来，随着分子生物学研究领域的不断发展，从最初的B珠蛋白基因簇限制性酶切多态性检测至目前的聚合酶链反应(PCR)技术结合其他分子生物学方法，B地中海贫血的诊断已逐步改进和完善。
基因诊断方法有下列几种：5．1 限制性片段长度多态性连锁分析(RFLP连锁分析)原理：DNA限制性内切酶可识别并切割DNA上特定的核苷酸序列，得到一定长度的DNA片段，而碱基的突变可导致酶切位点的丢失或形成，从而改变酶切片段的大小。
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溶血 ％ = D1
×100 ％
D2 X 1.25
【参考值（参考范围）】 溶血率％ >65％为正常溶血率；<55％为溶血率降低；（注 5664％为溶血率轻度降低）。 【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。 溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因 携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。 溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑 贫血症之间。
和难以估量的精神负担；
中国南方人群地贫基因携带率
地区
广西 广东 海南 云南 贵州 重庆
地贫
17.6 8.5 12.7 9.8 4.2 5.2
携带率(%) β地贫
6.4 2.5 2.7 7.3
5.1 2.0
合计
24.0 11.0 15.4 17.1 9.3 7.2
高发区人群遗传负荷评估
定义
• 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血）： 由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失 等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合 成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链 间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb （HbA：α2β2）合成降低的一种遗传性血 红蛋白病。
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5 分钟。
4、将上清液轻轻倒入1.0cm × 1.0cm的比色杯中（切勿搅动 试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水 作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）
5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透 明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。
血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis
肽链分析Peptide chain analyses
123 4
1 2 34
βchain disappear (β0-thal major)
αchain disappear
(HbBart’s hydrop fetalis)
单管多重PCR
【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD）， 置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的 标本为不合格样品。标本采集后，测试应在 三日内完成。
【实验操作】
1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。 2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分 钟。
实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验
地中海贫血与 红细胞渗透脆性试验
Thalassemia
中国南方不同高发地
区人群携带率 3~ 24%
地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一 全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）
地贫的发病率、地域分布及危害
• 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见； • 广西发病率为20%； • 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。
4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊 断，但推荐羊膜腔穿刺。
5.无创性产前诊Байду номын сангаас是未来发展的方向。
羊膜腔穿刺术
羊膜腔穿刺术
实验室检查
--靶型RBC
地贫患者
红细胞脆性实验
正常人
Erythrocyte fragility test
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋 白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少 或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改 变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多 表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征）
4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
PCR-ASO
诊断(Diagnosis)
• 临床特点＋实验室检查＋父母调查阳性＋ （基因分析）
地中海贫血初筛检查
• MCV < 80fl 和/ 或MCH <27pg ,则高度怀 疑为地贫;
• 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test ,ROFT ;< 0.60 ): 即可 怀疑为地贫;
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
结论
1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基 因携带者，推荐配偶行基因检测。
2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产 前诊断。
结语
谢谢大家！
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。 测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起 的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
• HbA2 < 2. 5 % ,则高度怀疑为α地贫基因携 带者;ξ阳性为标准α地贫.
• HbA2 >3. 5 % ,则为β地贫基因携带者
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多
重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序