生产性制备多克隆抗体诱发载体选择家兔的可行性研究

科技广场２０１２．１２

０引言

在人抗兔多克隆抗体生产性制备中，兔的选择是极其重要的环节。随着普通级实验兔养殖费用不断攀升及供求矛盾的日益突出，在保证人抗兔多克隆抗体质量和数量的前提下，为了节省有限的普通级实验兔资源同时降低生产成本，选择家兔作为诱发载体的可行性研究具有实际意义。目前针对这个问题的研究文献较少。本研究利用合成多肽采取同样条件对普通级实验兔和家兔进行免疫，对获得的相应抗体质量和数量进行对比研究，探讨家兔作为诱发载体的可行性。

１材料和方法

1.1用兔和分组

动物分成两组：U组（普通级实验兔）和T组（家兔），每组30只，均采用同样的饲养方式和免疫方式。U组由南昌龙平兔业有限公司（生产许可证：

生产性制备多克隆抗体诱发载体选择家兔的可行性研究ＦｅａｓｉｂｉｌｉｔｙＳｔｕｄｙｏｆＳｅｌｅｃｔＲａｂｂｉｔｆｏｒＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎＰｏｌｙｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＩｎｄｕｃｅｄＣａｒｒｉｅｒ

颜瑞巧１周师洁２江洪涛２吴萍２孙红斌１李卫东２

Yan Ruiqiao Zhou Shijie Jiang Hongtao Wu Ping Sun Hongbin Li Weidong （1.九江学院附属医院，江西九江332000；2.江西省系统生物医学重点实验室（九江学院），

江西九江332000）

（1.Jiujiang University Hospital，Jiangxi Juijiang332000；2.Key Laboratory of Jiangxi Province for System

Bio-medicine（Jiujiang University），Jiangxi Jiujiang332000）

摘要：目的：探讨在生产性制备多克隆抗体使用家兔的可行性，为替代普通级实验兔提供依据。方法：采用普通级实验兔与家兔在免疫前血清背景，诱发抗体数量和质量进行对比研究。结果：实验兔和家兔血清背景检测无明显差异，三次免疫后抗体效价无明显差异，兔单位体重诱发抗体冻干物重量无差异。结论：在生产性制备兔多克隆抗体中选择家兔部分替代普通级实验兔是可行的。

关键词：生产性制备多克隆抗体诱发载体；家兔；普通级实验用兔

中图分类号：R-332文献标识码：A文章编号：1671-4792（2012）12-0214-03

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Objective：To investigate the feasibility of domestic rabbits,as a substitute for general experimental rabbits,as production preparation polyclonal antibody induced carriers.Methods：To observe the difference of serum background before immune,the quality and quantity of induced antibody between domestic rabbits and gen-eral experimental rabbits.Result：There is no significant difference of serum background,antibody tilter after third immune and the weight of lyophilized extracts of induced antibody per unit of body weight between domestic rab-bits and general experimental rabbits.Conclusion：It is a practicable means that domestic rabbits can partly replace general experimental rabbits as production preparation polyclonal antibody induced carriers.

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Production Preparation Polyclonal Antibody Induced Carriers；General Domestic Rabbits；Experi-mental Rabbits

★江西省教育厅重点项目（编号：赣科技字〔2006〕

303）

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生

产性制备多克隆抗体诱发载体选择家兔的可行性研

究

SCXK

（赣）2009-0001）提供普通级日本大耳兔雌雄各半，T 组由市郊农户提供雌雄各半日本大耳兔。

免疫前检验主要包括皮毛（尤其是腹部）、体重、外观、品系及免疫记录等一般状态，入检疫区饲养一周，基本合格后每只兔耳静脉采血2ml ，用West-

en-blot 检测血中已有抗体的状态，检测显示普通级

实验兔与家兔血清背景状态并无差异，淘汰比率相同

（如图一所示）。1.2免疫材料和方法1.2.1抗原

采用化学交联的方法[1]将60种合成的多肽分别交联到担体蛋白上，经交联多肽作为抗原物质。

1.2.2佐剂、乳化和免疫方法

首次免疫，方法：弗氏完全佐剂0.4ml 与

1mg/ml 的抗原0.3ml 混合上自动乳化机（自制）乳

化2小时，检查乳化效果，兔腹部皮下多点（20点）注射。首次免疫后第21天进行二次免疫，方法：弗氏不完全佐剂0.35ml 与1mg/ml 的抗原0.25ml 混合上自动乳化机乳化2小时，检查乳化效果，兔腹部皮下多点（20点）注射。二次免疫后第21天实施三次免疫，方法同二次免疫。

２结果和分析

结果如表一所示。统计分析得出：（1）普通级实验兔和家兔血清背景检测无明显差异（P ＞0.05）。（2）两种兔三次免疫后抗体效价无明显差异（P ＞

0.05）。（3）两种兔单位体重诱发抗体冻干物重量无

差异（P ＞0.05）。

３讨论

选择实验动物时应考虑以下原则：近似性、差异性、易化、相容和匹配、可获性、重复性和均一性原则

[2]

。在免疫学研究中选择实验动物时，需特别注意实

验动物的遗传背景、实验动物的年龄，因不同种属和品系实验动物的免疫反应有很大的差异，年龄影响实验动物的免疫机能[3]。在大量生产性制备多克隆抗体中更加注重可获得性原则、兔龄、体重和皮毛的

健康状态。

家兔在免疫学研究领域常用来生产抗体、制备高效价和特异性强的免疫血清，其制品广泛地应用于人、畜各类抗血清和诊断血清的研制，如病原体血清、间接免疫血清、抗补体抗体血清和抗组织免

疫血清等。家兔有特殊的血清型和唾液型，根据血细胞型凝集素的有无，兔可分

为四个血清型,即α'、β'、α'β'、O 型。兔的α'、

α'β'血清型易产生人血细胞A 型抗体,而β'、O 血

清型易产生人血细胞B 型抗体。兔的唾液已确认有两型，即易获得人血细胞A 型物质者，称排出型；不易获得人血细胞A 型物质者，称非排出型。唾液中有无A 型物质与A 型抗体产生能力有密切关系，欲使之产生A 型抗体，应选用非排出型中的α'、α'β'血清型兔[4]。

多克隆抗体的质量主要决定于抗原的设计和后期纯化，但免疫过程将直接影响抗体质量和数量，在免疫前兔血清本底是否清晰会增加纯化的难度，在免疫前兔血中已经产生与所诱发抗体非常接近的抗体，这将直接影响纯化过程，使目标抗体产量和质量均受到一定程度的影响。但随着生产级别纯化工艺和技术的不断改善，在混杂的粗提物中纯化目标抗体的技术越来越成熟，对诱发抗体的动物体的要求相对降低。本研究中结果无差异的原因，可能是普通级实验用兔的质量标准并不完全针对生产性诱发抗体用兔。生产性抗体诱发主要关注兔血清中已经产

图一部分兔血清Ｗｅｓｔｅｎ－Ｂｌｏｔ结果，左侧为Ｔ组Ｔ１－４、Ｔ２－３、Ｔ３－２不合

格；右侧为Ｕ组Ｕ１－２、Ｕ２－２、Ｕ２－３不合格

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