ELISA2-乙肝两对半5
乙肝两对半检测的临床意义和影响因素
乙肝两对半检测的临床意义和影响因素【摘要】目的：对乙肝两对半检测的结果进行统计分析，探讨其临床意义和影响因素。
方法：选择2014年1月至2015年12月在我中心体检的1658例体检者作为本次的检测研究对象，分析其检测结果及影响结果准确性的因素。
结果：本次研究共检测1658分标本，共检出HbsAg阳性标本62例，占3.74%；HbsAb阳性标本987例，占59.53%；HbeAg阳性标本42例，占2.53%；HbeAb阳性标本18例，占1.09%；HbcAb阳性标本25例，占1.51%，影响检测结果准确性的因素有样本的采集及处理，试剂的影响，操作因素的影响。
结论：乙肝两对半检测对乙肝病毒的检出有重要作用，应尽量排除影响因素的干扰进行鉴别。
【关键词】乙肝两对半；ELISA 检测；临床意义；影响因素乙型病毒性肝炎（下称乙肝）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性传染性疾病，机体一旦感染乙型肝炎病毒，则会出现一系列的反应及临床症状，严重危害患者的身体健康，增加患者的心理及经济负担[1]。
目前主要采用ELISA法检测患者血清中的乙型肝炎血清学标志物来确定患者是否感染乙型肝炎病毒，血清学标志物主要包含HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五种，也就是俗称的乙肝两对半，乙肝的预防、诊断与疗效等方面很大程度都依赖乙肝两对半的检测[2-3]。
酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝免疫学标志物的主要方法，具有简便、灵敏、特异性高等优点，成为基层医院对乙肝诊断分型疗效观察的主要手段。
但ELISA 测定中影响因素较多，有时可见到一些假阳性或假阴性[4]。
因此，排除各种影响因素的干扰，有利于提高检测结果的准确性。
本研究对乙肝两对半检测的结果进行统计分析，探讨其临床意义和影响因素。
1 资料与方法1.1 一般资料选择2014年1月至2015年12月在我中心体检的1658例体检者作为本次的检测研究对象，其中男性检测者625例，女性体检者1033例，年龄19～41岁，平均（31.2±5.24）岁。
ELISA法检测乙型肝炎两对半影响因素分析
ELISA法检测乙型肝炎两对半影响因素分析【中图分类号】r488+3【文献标识码】a【文章编号】1005-0515(2010)010-0042-01酶联免疫吸附试验(elisa)法广泛用于乙型肝炎(下称乙肝)两对半检测。
但其测定影响因素较多,有些因素会导致结果假阳性或假阴性,本文就elisa测定乙肝两对半的影响因素及对策作如下讨论。
1 样本采集与处理的影响1.1 标本严重溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性,催化底物显色造成假阳性,严重溶血标本禁用。
1.2 采血试管洗涤不彻底、反复使用交叉污染。
塑料试管能吸附抗原物质,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
最好使用一次性玻璃试管或真空采血管。
并使用非抗凝标本。
1.3 标本凝固不全,正常血液采集后30 min~2 h开始凝固,18~24 h血块完全收缩。
在工作中,有时为了快速检测,常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清,使血清中仍残留部分纤维蛋白原,在elisa测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉,易造成假阳(阴)性结果。
因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管中加提取。
2 试剂的影响2.1 乙肝两对半试剂厂家较多,不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别。
资料显示,不同厂家试剂的特异性和敏感性也不尽相同,有的厂家酶标板孔间a值差>15%,标记酶的活性及显色液的稳定比较差[1]。
使用劣质试剂必然导致结果的假阳性或假阴性,选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
2.2 不同方法学的检测试剂会使两对半结果出现一些不同。
例如:在实际工作中常用elisa法检测乙肝病毒表面抗原(hbsag)结果为阴性,而电化学发光检测为阳性。
除方法学的灵敏度外,还存在使用单抗或多克隆抗体试剂的差别。
单抗对变异抗原或亚型乙肝标志物检测存在差异,建议试剂厂家对试剂的制备应该考虑亚型及浓度的问题。
乙肝五项定量检测及意义
一、乙肝五项定量检测指标1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量检测：1）参考值：mL2）临床意义：（1）可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标（2）评价拉美呋定的治疗效果（3）监测应用alpha-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制（4）确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量2、乙肝表面抗体（抗-HBs）定量测定：是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV。
（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保护性，需要注射乙肝疫苗（3针：0-1-6方案）。
（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保护性，但较弱，需要乙肝疫苗强化注射（1针）。
（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很强的保护性，不需要注射乙肝疫苗。
3、乙肝病毒e抗原（HBeAg）HBeAg增高说明病毒复制，具有很强的传染性。
4、乙肝病毒e抗体（抗-HBe）抗-HBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱，但并非没有传染性。
抗HBe不是保护性抗体。
5、乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）抗-HBc：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式。
IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可持续多年或终身存在。
二、乙肝五项定量检测的优点由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性检测方法的局限性，会出现假阴性结果，导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能得到及时的治疗，对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁。
乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测，避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展的趋势。
乙肝五项定量检测及意义血清乙肝标志物(俗称两对半定性测定)始于20世纪80年代中期，对乙肝疾病的诊断，病情监测，疗效观察起到了一定的作用。
随着临床医学的发展，定性检测已经远远不能满足临床及患者的要求。
随着检验医学的发展，乙肝两对半定量测定成为可行，大大弥补了酶标(ELISA)定性检测的不足；同时乙肝两对半的定量检测可与血清HBV DNA荧光测定相互补充，综合评价患者病情与药物疗效。
酶联免疫吸附试验检测乙肝两对半的教学体会
酶联免疫吸附试验检测乙肝两对半的教学体会秦静英【摘要】为达成我校以学生的发展为本，提高学生的就业竞争能力、升学竞争能力和可持续发展能力的办学目标，免疫学检验课程制订专业课教学与临床岗位零距离对接的教学目标。
结合酶联免疫吸附试验检测乙肝两对半的理论及实验教学谈谈教学体会。
【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2016(034)016【总页数】3页(P53-54,55)【关键词】酶联免疫吸附试验;乙肝两对半;免疫学检验【作者】秦静英【作者单位】南宁市卫生学校，广西南宁 530031【正文语种】中文【中图分类】G420酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）由于具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点，在临床免疫检验诊断中广泛应用。
乙肝两对半的检测常用ELISA法，该实验检测项目多，步骤繁琐，操作上涉及静脉采血技术，血清稀释，洗板机、酶标仪、离心机、水浴箱的使用［1］，实验诊断受到抗原抗体浓度、酶结合物浓度以及质量控制等因素的影响。
为达成我校以学生的发展为本，提高学生的就业竞争能力、升学竞争能力和可持续发展能力的办学目标，免疫检验课程通过制订专业课教学与临床岗位零距离对接的教学目标，实施学生自主学习—教师点拨辅导的实验教学模式。
按照免疫检验临床实际的工作流程和质量管理，我们对ELISA检测乙肝两对半进行相应教学设计，将理论知识和技术应用能力的训练渗透到实验教学过程中，便于学生牢固地掌握理论知识，让学生学有所得、学有所思、学有所用，以下谈谈笔者的教学体会。
以往的理论授课采用传统的讲授法，由于受到课堂规则、心理环境、激励机制等因素的影响，教师在课堂讲授过程中存在许多不尽如人意的地方。
如ELISA检测乙肝两对半涉及双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法原理，内容上有严谨的系统性和组织性，授课中若只是简单地将知识点堆积，没有讲清知识之间的内在联系，会在一定程度上影响课堂教学的实际效果。
酶联免疫吸附实验-乙肝两对半测定
常见模式及临床意义
HBsAg + + + + + + HBsAb － － － － － － HBeAg + － － － + － HBeAb － + － + － － HBcAb + + + － － － 临 床 意 义 急性或慢性乙型肝炎感染；提示HBV复 制，传染性强－大三阳 急性HBV感染趋向恢复；慢性HBsAg携 带者；传染性弱－小三阳 急性HBV感染；慢性HBsAg携带者；传 染性弱 慢性HBsAg携带者易转阴；急性HBV感 染趋向恢复 急性HBV感染早期或慢性携带者，传染 性强 急性HBV感染早期；急性HBV感染潜伏 期；慢性HBV携带者，传染性弱
操作步骤
加样：分别用加样器在孔中加入阴、阳性 对照或待测血清样本50ul (HBcAb测定时 待测血清用生理盐水1:30稀释－50ul血清 +1.5ml生理盐水)。 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul (HBeAb测定时还要在每孔中加入中和抗原 HBeAg50ul)，轻拍混匀。
操作步骤
温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干 (每次洗涤保持30-60秒的浸泡时间)。 显色：每孔加底物A、B各50ul，轻拍混匀， 置37℃避光15分钟。 终止：每孔加终止液50ul，混匀。 观察结果。
抗人IgM μ链 HBcAb
试剂盒组成
包被板
HBsAg－红色 HBsAb－绿色 HBeAg－蓝色 HBeAb－粉红色 HBcAb－橘黄色
试剂盒组成
阴性对照和阳性对照 酶标记物(HBeAb测定试剂中含中和抗原) 底物A和底物B 终止液 洗涤浓缩液
乙肝两对半ELISA法检测的质量控制
乙肝两对半ELISA法检测的质量控制【摘要】乙肝两对半的检测，是诊断乙型肝炎及观察疗效的重要指标。
我国是病毒性肝炎的高发区，约有10%的人群是乙型肝炎病毒的携带者，由于试剂质量的参差不齐及操作者的技术误差，常误导医生做出错误的诊断，使医生不能很好的掌握病程，对症用药，患者反映极为强烈。
elisa法是一种既特异又敏感的测定方法，方便快捷，无需大型仪器，无核污染等优点，而为广泛应用。
提高两对半的检验质量，显得尤为重要。
【关键词】乙肝两对半；elisa法检测；质量控制doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.745 文章编号：1004-7484（2013）-09-5397-02乙型病毒性肝炎是我国发病率较高的一种传染病，病毒携带者约占总人口的10%左右，而乙肝的预防诊断与疗效等方面很大程度都依赖乙肝两对半的检测。
因此，在实际工作中，加强实验室的科学管理，强化标准流程，加强质量控制，为患者提供准确的检验结果，减少医患纠纷。
2000年仪器设备，试剂盒，蒸馏水，生理盐水，标本的采送，标本的处理，操作规程，结果，检查结果，报告结果，做了全程质量控制，具体操作如下。
1 仪器设备加样器，水浴箱，洗板机，酶标仪等均按临床检验操作规程要求进行调试校正。
2 试剂盒一直沿用上海荣盛生物药业有限公司生产的elisa法试剂盒。
3 蒸馏水和生理盐水使用蒸馏水贮藏未超过7天，生理盐水石河南双鹤华利药业有限公司生产的250ml氯化钠注射液。
4 质控物由卫生部临检中心提供，hbsag2ng/ml。
5 标本的采集各病区要求护士查对患者姓名，床位，连号和贴在采血试管上的标签是否相同，然后采血并登记到采血记录本，登记内容：姓名，床位，连号，采血时间。
将检验单合采血试管卷在一起捏在试管架上。
由检验科专业人员收取，门诊采血由检验人员负责，每采一份血，采血试管及检验单标上抽血序号，号码一致，并即刻卷上检验单，以防差错，上午八点集中送检。
乙肝两对半是什么
乙肝两对半是什么概述乙肝两对半是指乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）之间的相对关系。
正常情况下，HBsAg和HBeAg应该是一对，也就是说，当HBsAg阳性时，HBeAg也应该阳性。
然而，在一些患者中，存在着一种特殊的情况，即HBsAg阳性而HBeAg阴性，这种情况被称为乙肝两对半。
乙肝两对半常见于乙型肝炎慢性感染的时期，这是乙型肝炎病毒（HBV）的一种表现形式。
乙型肝炎属于一种人类病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒感染引起。
乙肝两对半通常出现在乙型肝炎病毒携带者、慢性乙肝病毒感染者以及乙肝病毒携带者的家庭成员中。
HBsAg与HBeAg的解释HBsAg是乙型肝炎病毒表面抗原的缩写，它是乙型肝炎病毒囊膜上的蛋白质。
当HBsAg阳性时，说明乙型肝炎病毒存在于体内，并且可以通过血液传播给他人。
HBeAg是乙型肝炎病毒e抗原的缩写，它是乙型肝炎病毒核心蛋白的一个分子。
HBeAg的存在通常意味着乙型肝炎病毒正在活跃复制。
因此，当HBeAg阴性时，说明乙型肝炎病毒的活跃复制已经被抑制，病程较为缓慢，但仍然有携带乙型肝炎病毒的风险。
乙肝两对半的临床意义乙肝两对半是乙型肝炎病毒感染的一种表现，它通常意味着病毒的活跃复制已经被抑制，这对于乙型肝炎患者来说是一个积极的信号。
乙肝两对半的出现有以下的临床意义：1.预示肝炎病程相对较轻：乙肝两对半通常在乙型肝炎的慢性感染期出现，相对于HBeAg阳性的情况，乙肝两对半的病程较为缓慢，肝功能受损程度较轻，肝脏纤维化的程度也较低。
2.降低传播风险：乙肝两对半意味着乙型肝炎病毒的活跃复制已经被抑制，这意味着病毒的数量和传染性较低，降低了乙型肝炎的传播风险。
然而，即使是乙肝两对半的患者，仍然需要遵守个人卫生习惯，以免传染给他人。
3.治疗指导意义：乙肝两对半的出现对于乙型肝炎的治疗具有指导意义。
根据患者的临床情况和病毒学指标，可以选择适合的治疗方案，如抗病毒治疗、免疫调节治疗等，以控制病情发展和降低肝脏损害。
【实验诊断学】乙肝两对半检查实验
我国HBV感染概况
• 一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者约9 300万 人，占全世界的1/4；
• 其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全世界慢性乙 肝患者的1/3；
• 15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为0.96%；1~ 4岁 组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至72.25%; 抗HBcAb阳性率由 1992年30.08%降至3.76%
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乙型肝炎病毒病毒标志物检测
✓乙型肝炎表面抗原（HBsAg）✓乙肝核心抗体（抗-HBc）
✓乙肝病毒前S1抗原
【实验原理】
• 酶联免疫吸附试验（ELISA） • 一种固相酶免疫测定技术：先将抗体或抗原包被到
某种固相载体表面，与待测样品中的抗原或抗体发生 反应，再加入酶标抗体或抗原与免疫复合物结合，最 后加入酶反应底物，根据底物被酶催化产生的颜色及 其吸光度（A）值的大小进行定性或定量分析。
ELISA检测类型
• HBcAg(核心抗原)： 是乙肝病毒存在的直接标志， 与HBV复制呈正相关。存在于肝细胞内，血中 检测不出。
• 当肝细胞破坏,HBcAg释放出来，被酶水解成 HBeAg,所以HBeAg提示肝细胞损伤，HBeAg阳性 标志着较强的感染和传染性
结果报告
• HBsAg: 阴性（阳性） • HBsAb: 阴性（阳性） • HBeAg: 阴性（阳性） • HBeAb: 阴性（阳性） • HBcAb: 阴性（阳性）
注意事项
• HBcAb测定：待测标本稀释后的检测结果为临 床意义；不作稀释的检测结果为流行病学意义。
用ELISA法检测乙肝五项准确性的影响因素探讨
用ELISA法检测乙肝五项准确性的影响因素探讨【摘要】目的对影响ELISA法检测乙肝五项准确性的因素进行分析，以期为提升ELISA法的检测精准性提供一些依据。
方法将2017年2月－2017年6月到我院接受乙肝五项检测的208例患者选取为研究对象，对所有患者均采取ELISA法进行检测，并对影响检测结果准确性的有关因素进行全面分析。
结果血清样本的质量、开展实验前有关样本的准备工作、检测操作有关事宜、操作人员的素养以及最终检测结果的读取、审核等因素均是影响ELISA法检测乙肝五项准确性的主要因素。
结论采用ELISA法来检测乙肝患者的乙肝五项时，必须要求操作人员保持严谨的态度，严格按照相关的操作规定及准则，认真记录并做好检测过程中的有关实验操作，以免因人为因素而影响乙肝五项检测结果的精准性，同时，必须最大限度地排除可能影响检测结果的各项因素，为提升ELISA法检测乙肝五项准确性提供有效的保障，为准确地诊断乙型肝炎疾病奠定基础。
【关键词】ELISA法；乙肝五项；影响因素乙肝全名乙型病毒性肝炎，其主要是由于肝脏在受到乙肝病毒侵扰时发生炎性病变，导致肝组织受损而诱发的一种疾病，一些乙型肝炎患者的病情还有可能逐步演变为肝硬化甚至肝癌，对患者的生命安全造成巨大危害[1]。
现阶段主要是根据乙肝五项的结果来对乙型肝炎进行诊断，而最为常见的一种检测办法就是ELISA法，但在实际操作过程中，ELISA法的检测结果极易因各种因素而受到影响。
为此，本文将2017年2月－2017年6月到我院接受乙肝五项检测的208例患者选取为研究对象，对影响ELISA法检测乙肝五项准确性的因素进行分析，以期为提升ELISA法的检测精准性提供一些依据。
1.资料与方法1.1一般资料将2017年2月－2017年6月到我院接受乙肝五项检测的208例患者选取为研究对象，其中98例为女性患者，110例为男性患者；最大年龄为93岁，最小年龄为1天。
通过对所有患者的样本收集和检查过程进行回顾性分析，同时，对影响检查结果的各种因素进行分析和总结。
ELISA法检测乙肝五项的影响因素与临床意义
ELISA法检测乙肝五项的影响因素及临床应用【摘要】众所周知，乙肝的致病原是乙肝病毒，乙肝病毒在肝细胞内生存、复制后，再排出到血液中。
所以不仅血流中病毒高负荷，而且肝脏的大多数肝细胞都被感染。
当今社会谈乙肝色变，主要有下列几个方面：长期病毒携带或患病怕传染给亲属和周边的人群，同时亦担心受到社会的歧视；治疗乙肝和各种护肝药名目繁多，且各有利弊而不知所从；长期病毒携带或久治不愈而演化成肝硬化甚至肝癌。
作为检测乙肝五项的工作人员应该慎重操作，对每一个结果负责，不能因假阳性引起患者的心理压力和精神痛苦，造成不必要的纠纷。
【关键词】ELISA法；乙肝两对半；乙肝两对半又称乙肝五项，为国内常用的乙肝病毒(HBV)感染的检测血清标志物。
乙肝病毒免疫学标记有表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs或HBsAb)、e抗原(HBeA g)和e 抗体(抗-HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗-HBc或HBcAb)”。
可检测患者是否感染乙肝及感染的具体情况。
随着现代临床免疫学的发展，酶联免疫吸附试验(ELISA) 因其操作简单、灵敏度高、特异性高等特点而广泛应用于乙肝五项的检测。
但由于乙肝标志物检测生产试剂厂家较多，各种试剂诊断灵敏度及特异性相差很大，因此，如何选择灵敏度高、特异性好的乙肝标志物检测试剂成为乙肝检测中至关重要的问题之一。
本研究分别选择3家国产ELISA试剂盒对来甘肃省武威肿瘤医院参加健康体检患者血液样品进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测，乙肝表面抗原(HBsAg)检测试剂盒，通过ELISA法检测300例健康体检患者血清中HBsAg水平，检测出的阳性标本再用免疫胶体金试纸条检测，比较三个不同公司生产试剂盒检测阳性率及与金标试纸条法检测的一致性，现报道如下：1资料与方法1 ．1一般资料选择我院2013年7月——2 013年11月健康体检患者300例，其中，男170例，女130例；年龄20～54岁，平均30岁。
ELISA2乙肝两对半
6. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)；
注：显色从加入第一滴显色液B开始计时 7. 终止：加终止液50ul； 8. 判读：终止反应后10min内完成。
(450nm处测定吸光度)
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，孔中滞留
【目的要求】
1.进一步熟悉酶标仪及洗板机； 2.掌握乙肝两对半的检测。
【原理】
项目 表面抗原 表面抗体
e抗原 抗e抗体 核心抗体
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc
检测原理 双抗体夹心法 双抗原夹心法 双抗体夹心法 竞争抑制法 竞争抑制法
【器材】
BIORAD680型自动化酶免分析仪、 BIORAD全自动酶标洗板机、微 量加样器、吸头等
结果判断及解释： COV=2.1×N
阴性对照A≤0.10，阳性对照A≥1.0，否 则实验无效。 S≥COV 阳性 S＜COV 阴性
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：按1：20将20×洗液稀释； 3. 加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴
性 4. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 5. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留
时间10-15s，并注满反应微孔；
乙肝两对半两种常用检测方法的临床应用比较
乙肝两对半两种常用检测方法的临床应用比较摘要]比较分析乙肝五项指标两种检测方法（乳胶层析法和ELISA）的应用价值。
方法对353份血清分别采用乳胶层析法和酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测乙肝五项指标，对检测结果进行分析、总结、对比，探讨两种检测方法的临床应用价值。
结果：两种方法的乙肝两对半检测结果比较，HBsAg、HbsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项结果差异性小，无统计学意义(P>0.05)；同时及时对标本做出处理，严格按照操作规程进行，可以提高两种方法的检出率。
结论：两种方法相结合，基本可以满足基层医院的临床诊疗需求。
【关键词】乳胶层析法；ELISA法；乙肝两对半；检测乙肝病毒性肝炎是临床常见疾病，主要是由的乙肝病毒的引起的，且具备传染性，其中具体的传播方式为血液传播、体液传播等形式。
其主要的临床症状以恶心、食欲减退、呕吐和肝功能异常的情况，严重影响患者的身体健康，甚至给患者带来沉重的心理负担。
在我国，乙型肝炎的患病率极高[1]，严重危害人类健康，因此需对其进行有效检测及防治。
而乙肝两对半是目前临床较为常用的乙型肝炎病毒的血清学检测指标,对乙肝的诊治、献血人员筛查等方面有重要作用。
本文采用两种方法对血清标本进行乙肝两对半检测，现将结果汇总如下：1、材料与方法1.1标本采集收集 2015年8月-2016年2月我院353例门诊患者及健康体检者血清，其中男185例，女168例。
1.2试剂与仪器乙肝两对半ELISA法检测诊断试剂盒为上海科华生物技术有限公司生产；乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（乳胶法）为艾博生物医药（杭州）有限公司生产。
1.3方法抽取空腹静脉血3～5mL于干燥试管或者促凝分离胶密封试管内，放置待凝固后，通过离心机对血标本进行处理，其中离心机可以选择3000r/min，最终得到血清样品。
乳胶层析法与ELISA法均严格按说明书进行标准化操作。
ELISA法和ECLIA法检测乙肝五项的结果分析
ELISA法和ECLIA法检测乙肝五项的结果分析发表时间：2016-09-02T16:02:19.587Z 来源：《医药前沿》2016年8月第24期作者：刘志洲吕波刘杨张晓雷郑俞杨鹏（通讯作者）[导读] 我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染人数最多的国家，HBV携带者约占总人口的10%左右[1]。
刘志洲吕波刘杨张晓雷郑俞杨鹏（通讯作者）（解放军第210医院403临床部辽宁大连 116021）【摘要】目的：分析酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光技术（ECLIA）检测乙肝五项的结果差异。
方法：分别用ELISA法和ECLIA法测定107例乙肝病人血清标本的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，检测结果用阴性和阳性来表示，并用χ2检验进行统计学分析。
结果：两种方法对于HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb检测结果无统计学差异，对于HBcAb检测结果有显著性差异。
结论：ECLIA法检测灵敏度可能高于ELISA法，有条件的实验室应尽量采用ECLIA法检测乙肝五项。
【关键词】乙肝；酶联免疫吸附试验；电化学发光技术【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）24-0081-02 Analysis the Results of Detecting Five Items of Hepatitis B Serum Markers by ELISA and ECLIA Liu Zhizhou, Lv Bo, Liu Yang, Zhang Xiaolei, Zheng Yu, Yang Peng.403 Clinical Department, 210 Hospital of PLA, Dalian 116021 【Abstract】 Objective To analysis the results of detecting five items of serum markers for Hepatitis B by ELISA and ECLIA. Methods A total of 107 Hepatitis B patients serum samples were randomly selected to test five items of hepatitis B serum markers, using enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and electrochemiluminescence immunoassay(ECLIA) separately．There were Hepatitis B virus surface antigen(HBsAg)，Hepatitis B virus surface antibody(HBsAb)，Hepatitis B virus e antigen(HBeAg)，Hepatitis B virus e antibody(HBeAb) and Hepatitis B virus core antibody(HBcAb)．The detecting results were described by negative and positive. Date was statistically analysed by χ2 test. Results There are no statistical difference for the detecting results of HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb between two methods. Whereas, there is significant difference for the detecting results of HBcAb . Conclusions The detectability of ECLIA is higher than ELISA, and ECLIA maybe the more appropriate test for detecting five items of serum markers for Hepatitis B.【Key words】 Hepatitis B; ELISA; ECLIA我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染人数最多的国家，HBV携带者约占总人口的10%左右[1]。
用ELISA法检测乙肝两对半的试验中的一点体会
１．１标本 本单位门诊、住院部乙肝两对半阴性的病人标本（一式三份）。 １．２试剂 荣盛公司ＥＬＩＳＡ乙肝表面抗原试剂，批号：２００７０５０３。 １．３仪器离心机 ＬＤ４－２型；微量加样器；酶标仪：百特。 ２方法
江西省宜春市第三人民医院检验科（３３６０００）
万方数据
３１９
中国医药指南２００８年１２月第６卷第２３期ＣｍｉｄｅｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００８，Ｖ０６，Ｎ０２３
１５ｍｉｎ后检测，每板４４份标本中就有０～２份出现阳性结果。由 此可见，当标本被充分离心之后可得到理想的试验结果，这就说 明标本的离心处理确实是影响结果的主要因素。 为避免ＥＬＩＳＡ法的质量问题，降低结果的假阳性率，获得较为 准确的试验结果，可采取下列措施：①使用抗凝血标本，便于标 本的离心分离。②标本过夜之后检测或让标本加热处理，让血块 更好的收缩，使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活，降 低非特异性反映所致的假阳性结果。③检测之前加大离心转数， 延长离心时间，使红细胞和纤维蛋白充分沉淀，使标本的离心分 离更加彻底。④加样时不能加入红细胞和纤维，避免这两种干扰 物质对试验结果的影响。
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ａｃｕｔｅ ｂｌｏｃｋｅｄ ｍｉｘｅｄ ｈｅｍｏｒｒｈｏｉｄｓ；Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔｒｉｐ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ
中图分类号：Ｒ６５７．１８
文献标识码：Ｂ
文章编号：１６７１—８１９４（２００８）２３—０３１９－０２ ２．１手术方法刚 ①术前口服甲硝唑，半流饮食，清洁灌肠。②术中侧卧位，屈 膝屈髋，腰俞麻醉后，常规消毒铺巾。肛管消毒，先扩肛至２～３ 指，动作轻柔，切勿使用暴力。③肛门镜排除其他肛管疾病后，观 察嵌顿痔核的自然分界线，将嵌顿的痔核分为３～５枚，设计预定 保留的肛管皮桥及黏膜桥。主要痔核的内痔上端以大弯血管钳纵向 垂直钳夹，注意不要太多以不超过内痔直径的２／３为宜，予缝线在 齿线上０．２ｃｍ处贯穿结扎内痔牢靠。然后沿水肿的外痔的中间１／２ 做一“Ｖ”形切口，剥离皮下血栓及静脉团，两侧皮瓣要游离充分。 黏膜处切口要小且要平行，分离至齿线下０．３ｃｍ左右，做８字结扎
ELISA法对乙型肝炎“两对半”检测结果影响因素的分析
生 生 长因 子 受 体 ￣ Ｐ Ｆ ） （ ＤＧ Ｒａ 融合 基 因能 区 分 两 者 ， Ｃ Ｌ阳 其 Ｅ
性 ， Ｉ Ｓ一 般 阴性 ｊ 而 ＨＥ ７。 参 考 文献
［ ］ 王 静 ， 梅 ． 酸 粒 细 胞 白 血 病 １例 ［ ］ 实 用 诊 断 与 治 疗 杂 志 ， １ 王 嗜 Ｊ．
向 左 扩 大 ， 平 软 ， 突 下 轻 压 痛 ， 、 肋 下 未 扪 及 ， 骨 压 腹 剑 肝 脾 胸
痛 。辅 助 检 查 ， Ｂ ４ ． Ｗ Ｃ： ９ ７× １ 。 Ｌ； Ｂ ３ ４ × １ ／ ； Ｏ ／ Ｒ Ｃ： ． ９ ０ Ｌ
粒 细 胞 是 恶 性 增 殖 ， 单 克 隆 增 殖 ， 】 Ｓ的 嗜 酸 性 粒 细 胞 为 而 ＨＥ 为 反 应 性 增 殖 ， 多 克 隆 增 殖 。最 近 ， 现 ＦＰ Ｌ ／ 小 板 衍 为 发 ＩＩ １血
胸 骨 压 痛 ｌ ， 且 Ｃ Ｉ 与 Ｉ Ｓ本 质 的 区 别 是 Ｃ Ｉ 的 嗜 酸 性 ６ 而 ］ Ｅ ＨＥ Ｅ
院前约半年 ， 患者 无 明 显 诱 因 开 始 出 现 头 昏 、 闷 、 胸 四肢 乏 力 ，
活 动 后 心 累 ， 出鼻 血 ２次 ， 身 皮 肤 无 瘀 点 、 斑 ， 发 热 。 曾 全 瘀 无
质 ， 以不 同程 度 影 响 检 测 结 果 。常 见 的干 扰 物 质 有 类 风 湿 因 可
子、 甲胎 蛋 白 因 子 。某 些 自身 抗 体 也 会 影 响 结 果 造 成 假 阳 性 。 ５ 药 物 的影 响 高 效 价 的 乙型 肝 炎 免 疫 球 蛋 白 会 与 ＨＢ Ａｇ形 成 复 合 物 ， ｓ
分离胶 的采血管提取… 。 ２ 试 剂 的 影 响 乙 肝 两 对 半 试 剂 种 类 较 多 ， 同种 类 的试 剂 灵 敏 度 与 特 意 不 性 存 在 一定 的 差 异 。资 料 显 示 ， 同 厂 家 试 剂 的 特 异 性 和 敏 感 不
化学发光法与ELISA法对乙肝两对半检测结果的对比分析
【摘要】目的：探讨比较化学发光法与酶联免疫吸附试验（ELISA 法）检测乙肝两对半的结果分析。
方法：选取2020年8月~2021年8月在我院感染科就诊的乙型肝炎156例患者。
所有患者均行化学发光法和ELISA 法检测乙肝两对半，并对两种检测灵敏度以及阳性率结果率进行比较分析。
结果：化学发光法的检测阳性率普遍高于ELISA 法。
化学发光法检测HbsAg 的阳性率为78.85%，ELISA 法阳性率为59.61%，差异有统计学意义（P<0.05）。
化学发光法检测HbsAg 的灵敏度明显高于ELISA 法。
差异有统计学意义（P ＜0.05）。
结论：两组检测方法通过对乙肝病毒五项标志物的检测结果发现，化学发光法检测的灵敏度远高于ELISA 法，并且化学发光法检测的阳性率相较于ELISA 法要高很多，建议临床应用化学发光法检测乙肝两对半。
【关键词】化学发光法；酶联免疫吸附试验；乙肝表面抗原乙型病毒性肝炎的临床症状包括恶心、疲劳、害怕进食、肝痛、腹胀等。
严重者呈慢性肝病面部特征、蜘蛛痣、脾肿大、肝掌和持续性肝功能异常。
按照临床症状可分为轻度、中度和重度[1-2]。
根据有关报道统计，全球有将近2亿例有慢性乙型肝炎病毒感染者，全球每年因为乙肝病毒死亡的约有百万人，乙肝现在已经成为严重危害人们身体健康的疾病之一[3]。
因此，乙肝两对半的实验室检查对预防和治疗乙肝有非常重要的作用。
乙肝表面抗原（HBsAg ）属于乙型肝炎病毒的病毒膜蛋白，它其实本来不具备传染能力的，然而由于它经常与乙肝病毒合并发生，现在已成为乙型肝炎病毒细胞感染的最重要标志之一[4]。
HBsAg 可能出现在人们的血液、精液等各种分泌物中，并可能在人们不注意的情况下引起感染反应。
已感染乙肝的病人有3~6个月潜伏期，在丙氨酸转氨酶升高前约6周左右，血清检测可呈现为阳性。
此外，急性乙型肝炎患者在早期干预后能够转为阴性，而慢性乙型肝炎的相应指标仍为阳性[5]。
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准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔加50ul，同时设阳性对照、阴 性对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；
4. 5.
6.
洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时 间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)；
结果判断及解释
COV=0.5 ×（OD阳性对照+OD阴性对照） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≥1.0，OD阳性对照≤0.05
OD空白对照≤0.015（双波长检测）
【注意事项】
1.不同品种及批号试剂组份请勿混用； 2.试剂从2-8℃条件下取出，先在室温平衡1h； 3.最好用微量移液器加各种组份； 4.每次手工加样，应更换吸头； 5.加样时尽量避免反应微孔中产生气泡； 6.封板膜不能重复使用；
双抗体夹心法
双抗原夹心法 双抗体夹心法 竞争抑制法 竞争抑制法
【器材】
SM-3型自动化酶免分析仪
ZMX-988B型全自动酶标洗板机
微量加样器 吸头等
【试剂】
HBsAgELISA试剂盒 HBsAbELISA试剂盒
HBeAgELISA试剂盒
HBeAbELISA试剂盒 HbcAbELISA试剂盒
4.
加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）；
5.
6.
孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；
显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B
50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)；
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
7.
8.
终止：加终止液50ul；
判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)
检测有效性
OD阴性对照≥1.0，OD阳性对照≤0.05
OD空白对照≤0.015（双波长检测）
c抗体检测(竞争抑制法)
1. 2. 3.
准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔加50ul（1:30稀释样本），同 时设阳性对照、阴性对照和空白对照（不加 样品）；
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 2. 3.
准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性 对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；
4. 5.
【标本】
待测血清
【操作步骤 】
表面抗原检测(双抗体夹心法)
1.
准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min；
2.
3.
配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释；
加样品：每孔加入待测样品75ul/孔，同时 设置阳性对照、阴性对照，空白对照（不加 样品），轻轻振荡混匀；
4.
5.
孵育：贴上封膜，37℃反应60min;
e抗原检测(夹心法)
1.
2.
准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min；
配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩阳性对照、阴性
对照和空白对照（不加样品）；
4.
5.
加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）；
孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；
6.
洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留 时间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)；
6.
显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B
50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)；
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
7.
8.
终止：加终止液50ul；
判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)
结果判断及解释
COV=0.5 ×（OD阳性对照+OD阴性对照） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV
7.
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
8. 9.
终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm 处测定吸光度)。
结果判断及解释
COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05按 0.05计算） 阳性：OD样品≥COV
阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测）
7.洗液如有结晶形成建议放置 37℃充分溶解，
再稀释；
8.洗板：(洗板机)
1)每次使用前、后用蒸馏水或去离子水冲洗，
以防止管路堵塞和腐蚀；
2)加液量不能过多溢出，但又能充满整个反应
微板(350ul);
3)一般洗板次数不应少于5次；
4)最好采用有底部冲洗和两点冲洗的程序。
加酶结合物：每孔加入50ul/孔（空白对照 不加），震荡10秒钟；
6.
孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min;
7.
8.
洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干；
显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应30min(避光)；
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
9. 10.
7.
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
8. 9.
终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)
结果判断及解释
COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05按 0.05计算） 阳性：OD样品≥COV
阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测）
终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处 测定吸光度)。
结果判断及解释
COV=2.1×OD阴性对照
阳性：OD样品≥COV
阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10， OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.04（双波长检测）
表面抗体检测(夹心法)
1. 2. 3.
ELISA-2 （乙肝两对半的检测）
临床免疫学教研室 邓念华
【目的要求】
1.掌握乙肝两对半的检测原理及操作过程； 2.熟悉影响乙肝两对半检测的因素； 3.进一步熟悉酶标仪及洗板机使用；
4.了解乙肝两对半的临床意义。
【原理】
项 目 表面抗原（HBsAg） 表面抗体（抗-HBs） e抗原（HBeAg） 抗e抗体（抗-HBe） 核心抗体（抗-HBc） 检 测 原 理