高三生物生物技术在其他方面的应用PPT精品课件

使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使 有利于细胞分裂，但细
用细胞分裂素
胞不分化
先使用细胞分裂素， 后使用生长素
细胞既分裂又分化
同时使用
分化频率提高
• ③生长素用量比细胞分裂素用量，其比值 不同，对细胞发育的方向影响不同：
• 比值高时：有利于根的分化，抑制芽的形 成
• 比值低时：有利于芽的分化，抑制根的形 成
特别提醒
• 1.植物细胞表现出全能性的条件和步骤
• 植物细胞要表现出全能性，需要经过以下几个 步骤：
• 成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株 • 成熟细胞→愈伤组织→生根出芽→完整植株
• 5.月季的花药培养 • (1)被子植物的花粉发育 • 小孢子母细胞→4个小孢子→1个小孢子(单
核居中期)→1个小孢子(单核靠边期)→花粉 粒(含一个花粉管细胞核和一个生殖细胞核)
(2)产生花粉植株的两种途径
• (3)影响花药培养的因素 • ①不同植物的诱导成功率很不相同； • ②同种植物的生理状况； • ③花粉发育时期；
• (4)透析
• 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将 透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为 20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12 h，目 的是除去样品中相对分子质量较小的杂质。
• (2)凝胶色谱分离
• ①制作凝胶色谱柱
• ②装填凝胶色谱柱
• ③样品加入和洗脱
• (3)结果分析与评价
• ①对于血液样品的处理，需要经过洗涤、 释放、分离、透析几个步骤。由于血红蛋 白与氧气结合变成鲜红色，与二氧化碳结 合变成暗红色，所以刚分离后的血红蛋白 溶液呈红色。
• 比值适中：促进愈伤组织的形成 • (4)温度：一般将温度控制在18~22 ℃ • (5)pH：一般将pH控制在5.8左右 • (6)光照：每日用日光灯照射12 h
• 4.实验操作步骤 • (1)制备MS固体培养基：配制各种母液→配
制培养基→灭菌 • (2)外植体消毒：酒精溶液消毒→无菌水清
洗→次氯酸钠(或氯化汞)溶液→无菌水清洗 • (3)接种 • (4)培养 • (5)移栽 • (6)栽培
细胞。
• 3.影响因素
• (1)外植体的选择：材料本身的种类、年 龄、保存时间长短等。
(2)营养
无机营养
大量元素：如N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：如Cu、Mn、B、Fe、Zn
有机营养：维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇以 及蔗糖等
• (3)植物激素 • ①常用激素：生长素和细胞分裂素。
• ②使用激素顺序不同对试验结果的影 响：
DNA子链 为解螺旋和合成子链供能
为DNA聚合酶提供合成的 3′端起点
• 2.DNA分子复
• 制的人工控制
• 解开螺旋：在80~100 ℃时，DNA双螺旋 打开，形成两条DNA单链，称为变性。
• 恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链 重新形成双螺旋结构，称为复性。
• 3.PCR的反应过程
• 变性：在95 ℃时DNA解旋 • 复性：在50 ℃时引物与DNA单链结合 • 延伸：在72 ℃时合成DNA子链(两个引物
度鉴定
• (1)样品处理
• (1)红细胞的洗涤
• ①采集血样→②低速短时间离心→③吸取 血浆→④盐水洗涤→⑤低速离心→⑥重复 ④⑤步骤三次
• (2)血红蛋白的释放
• 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水 到原血液的体积，再加40%体积的甲苯， 置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min。
• (3)分离血红蛋白溶液
蛋白质的提取和 分离
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• 二、蛋白质的提取和分离 • 1.蛋白质的理化性质 • (1)具有两性 • (2)可以发生水解反应 • (3)可溶性、具有胶体的性质 • (4)盐析 • (5)蛋白质的变性 • (6)颜色反应
• 2.操作步骤 • 蛋白质的提取和分离一般为四步： • ①样品处理→②粗分离→③纯化→④纯
第 十四 章
生物技术实践
第
讲
生物技术在其 他方面的应用
• 一、植物组织培养 • 1.原理：植物细胞的全能性 • 2.基本过程：
(1)脱分化和再分化的比较
起点
关键因素
条件
脱分化 外植体 植物激素 一般暗培养
再分化
愈伤组织
细胞分裂素和 生长素比例
必须要光照
(2)愈伤组织的特点：细胞排列疏松而无规
则，是一种高度液泡化的呈无定形的薄壁
间的序列)
• 4.实验操作 • (1)PCR反映体系：缓冲液、DNA模板、四
种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、 两种RNA引物、水
• (2)实验操作步骤： • ①按照PCR反应体系配方配制反应液 • ②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移
到微量离心管中
• ③将微量离心管放到PCR仪 • ④设置PCR仪的工作参数
• 将搅拌好的混合液转移到离心管中，以 2000r/min的速度离心10min后，试管中的 溶液分为4层：
• 第1层(最上层)：甲苯层(无色透明)
• 第2层(中上层)：脂溶性物质沉淀层(白色薄 层固体)
• 第3层(中下层)：血红蛋白的水溶液层(红色 透明液体)
• 第4层(最下层)：杂质沉淀层(暗红色)
• ②红色区带的移动是实验成功与否的标志。 红色区带在洗脱过程中均匀一致移动，说 明实验分离成功。
• 三、PCR技术的基本操作和应用 • 1.细胞内DNA复制条件分析：
条件 模板 原料
酶
能量
引物
组分 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚 合酶
ATP
RNA
作用
提供复制的模板
合成DNA子链的原料 打开DNA双螺旋催化合成
• ⑥水浴法：将微型离心管依次在95 ℃、55 ℃、72 ℃的恒温水浴锅中循环处理相应时 间
• 5.实验注意事项：
• (1)避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、 蒸馏水等必须进行高压灭菌
• (2)缓冲液和酶分装成小份，-20 ℃保存 • (3)每添加一种反应成分，更换一个移液器
的枪头
• (4)混匀后离心处理，使反应液集中在离心
• ④亲本植株的生长条件、材料和低温预处 理以及接种密度等。
• 6.花粉植株的产生和植物茎的组织培养的 比较 菊花茎的组织培养 月季的花药培养
理论
依据植物细胞的全能性
基本过程
脱分化、再分化
影响因素 选材、营养、激素、pH、温度、光照等
制备固体培养基→
操作流程
外植体消毒→接 种→培养→移栽
→栽培
选材→材料消毒→ 接种和培养→筛 选和诱导→移栽 →栽培选育二、