高三生物生物技术在其他方面的应用PPT精品课件
合集下载
高考生物人教总复习课件选修1第4讲生物技术在其他方面的应用
解析：蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理
、粗分离、纯化和纯度鉴定，提取和分离血红蛋白时，首
先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到 血红蛋白溶液，即样品处理；再通过透析法除去相对分子 质量较小的杂质，即样品的粗分离，然后通过凝胶色谱法 将相对分子质量较大的杂蛋白除去，即样品纯化，纯化过 程中凝胶应用蒸馏水充分溶胀后，配制成凝胶悬浮液，而 不是用生理盐水；最后经 SDS— 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行 纯度鉴定。
方法 步骤
提取 方法 适用 范围
水蒸气蒸馏法
压榨法
萃取法
范围较广、原 如柑橘、柠檬 如玫瑰精油、薄荷油 料细小，充分 等易焦糊原料 等挥发性强的芳香油 浸泡在有机溶 的提取 剂中 生产成本低， 易保持原料原 出油率高，易 简单易行，便于分离 有的结构和功 分离 能 分离较为困 使用有机溶剂 水中蒸馏导致原料焦 难，出油率相 处理不当会影 糊和有效成分水解 对较低 响油的质量
(2)若要进行兰花无病毒植株的培育，首先选择兰花的
________作为外植体。从外植体到无病毒植株试管苗，要
人为控制细胞的________和________过程。 (3) 进行组织培养需配制 MS 培养基，在该培养基中常 需要添加 ________ 、 ________等激素。欲有利于根的分化 ，植物激素的用量比例应为________。 (4)不同植物的组织培养除需营养和激素外，________ 等外界条件也很重要。
性质
提取方法
提取成分 比较项目
玫瑰精油 鲜玫瑰花＋清水→水蒸气蒸 加入NaCl 馏 → 油 水 混 合 物 ――――→ 加入 分 离 油 层 ――――→ 除 水 无水Na2SO4 过滤 ――→玫瑰油
红细胞洗涤——离心去除血清 ↓ (1)样品的处理释放血红蛋白——蒸馏水涨破 ↓ 分离血红蛋白——离心处理
高三生物一轮复习 专题1.4生物技术在其他方面的应用同步课件 新人教版
______。(填“相同”、“不相同”或“不一定相同”)
(5)从植株A到植株C的过程属于______，从植株A到植株B的
过程属于______。(均填生殖方式)
(6)在相同条件和相同发育程度的情况下，植株D表现型同于 植株A的可能性为______。
【解析】(1)实验中选用花药或叶片离体培养后获得新植株， 该项技术称为植物组织培养。 (2)植株A的基因型为AaBb,经减数分裂形成的花粉粒有AB、 Ab、aB、ab四种，花粉粒经植物组织培养形成的植株B也有 AB、Ab、aB、ab四种基因型，均为单倍体植株，由于不能形
答案：(1)植物组织培养
(2)AB、Ab、aB、ab 成正常的生殖细胞 减数分裂时染色体联会紊乱，不能形 染色体加倍
(3)细胞分裂素与生长素 (4)源自同(5)营养生殖(无性生殖)
(6)100%
有性生殖
一、植物组织培养技术
1.植物组织培养过程比较
(1)植物组织培养成功的关键是避免微生物 的污染，确保无菌无毒。 (2)培养基中必须含有植物生长发育的全部营养物质。 (3)影响植物再分化的因素：外植体的遗传特征、取材的位
【解析】选C。PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为
变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产
物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会 与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。DNA变性(90℃～96℃)：双链
DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链 DNA。复性(25℃～
物作为实验材料所做的一些实验示意图，请分析回答：
(1)途径1、2、3中①②过程所采用的生物技术是______。 (2)由途径1形成的植株B的基因型有______，植株B成熟时不 可育的原因是______。使植株B可育的方法是______。
高三生物一轮复习精品课件2：第41讲 生物技术在其他方面的应用
三、植物有效成分的提取 1.提取玫瑰精油实验
(1)方法:_水__蒸__气__蒸__馏__法。 (2)实验流程:
水蒸气蒸馏
无水Na2SO4
NaCl
2.提取橘皮精油的实验
(1)方法:一般采用_压__榨__法。 (2)实验流程:
压榨
过滤
3.胡萝卜素的提取
(1)胡萝卜素性质:_不__溶__于__水,微溶于乙醇,_易__溶__于__石油醚
3.(2011广东T5A)洗涤红细胞时,使用生理盐水可防止红细胞破 裂。( √) 【分析】用生理盐水洗涤红细胞除去血浆,由于生理盐水和红 细胞内的渗透压相等,可防止红细胞破裂。 4.不同植物组织培养的难易程度不同,同一种植物材料培养的 难易程度相同。( ×) 【分析】不同植物组织培养的难易程度不同,同一种植物材料 也会因年龄、保存时间的长短等导致实验结果不同。
(3)血红蛋白的分离过程: 样品处理:红细胞的洗涤→_血__红__蛋__白__的释放→分离血红蛋白溶
液→透析 ↓ 粗分离:用_透__析__法除去血红蛋白溶液中相对分子质量_较__小__的
杂质 ↓ 纯化:用_凝__胶__色__谱__法分离相对分子质量不同的蛋白质 ↓ 纯度鉴定:一般用_S_D_S_-_聚__丙__烯__酰__胺__凝__胶__电__泳__方法,来测定蛋白 质的纯度
第十一单元 生物技术实践 第41讲 生物技术在其他方面的应用
主干知识梳理
一、植物的组织培养技术 1.组织培养过程
脱分化
再分化
愈伤组织
2.培养基 (1)成分:大量元素、_微__量__元__素__、有机物、_植__物__激__素__和琼 脂。 (2)类型:_M_S_培__养__基__、发芽培养基和生根培养基。 (3)作用:植物组织或器官生长和发育的_营__养__条__件__。 (4)配制:称量、溶解、_调__p_H_、分装(三角瓶)、灭菌。
高考生物一轮复习 4 生物技术在其他方面的应用课件 新人教版 新人教版选修1
c．其他条件：如亲本植株的生长条件、材料的 预处理、接种密度等。
(4)实验操作关键 a．材料的选取：挑选完全 育时期最常用方法是 未开放 的花蕾，确定花粉发
醋酸洋红 法。
b．接种：灭菌后的花蕾，在 花药。
无菌 条件下除去萼片和花
瓣，并立即将花药接种到培养基上。剥离花药时尽量不要损伤 25℃ 左右，幼小植株形成后才需 花药 开 裂
2：两种关键性植物激素的使用顺序和使用量的 比例能否影响培养结果？ 提示： 能。使用顺序能影响到细胞分裂和细胞分化的进行， 而二者用量的比例可以影响植物发育的方向。
4．菊花的组织培养
实验操作过程
(1)制备MS固体培养基：配制好的培养基进行 ⑬高压蒸汽
ห้องสมุดไป่ตู้
灭菌。
(2)外植体消毒：
(3)接种：始终在 ⑯酒精灯火焰 旁进行，对接种工具要用 ⑰火焰灼烧 灭菌。将菊花茎段插入培养基中时注意不要倒插。 (4)培养与移栽：在18℃～22℃的 试管苗后进行移栽。 中培养，得到
思一思： 用猪的血液与鸡的血液提取血红蛋白哪个效果更好？ 提示： 用猪的血液；因为猪的红细胞无细胞核，结构简单， 血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。
1．植物芳香油的提取 (1)植物芳香油的主要化学成分：萜类化合物及其衍生物， 具有很强的 挥发性 。提取方法有蒸馏、 压榨 和萃取等。
(2)提取玫瑰精油实验
①原理：
水蒸气蒸馏法
。
②实验流程：
(3)提取橘皮精油的实验
①原理：一般用
压榨法 。
2．胡萝卜素的提取
(1)胡萝卜素性质：不溶于
油醚等有机溶剂。 (2)实验设计 ①原理：萃取法，
水 ，微溶于乙醇，易溶于石
石油醚 最适宜作萃取剂。
最新通用版高考生物一轮复习第11单元-第3讲生物技术在其他方面的应用课件ppt
水
(3)胡萝卜素的提取流程： 胡萝卜→粉碎→干燥 →萃取→ 过滤 →浓缩→胡萝卜素 (4)胡萝卜素的鉴定：纸层析 法。
网络记忆
考点突破| 领悟高考方向 考点1 植物的组织培养 [典例导悟1] 下列关于植物组织培养的叙述，错误的是( A．外植体可以来自于植物的任何细胞 B．培养应在无菌条件下进行 C．以花粉作为外植体可得到单倍体植株 D．不同阶段的培养基中细胞分裂素和生长素的比例不同 )
2．提取橘皮精油的实验 (1)方法：一般采用 压榨 法。 (2)实验流程 石灰水浸泡→漂洗→ 压榨 →过滤→静置→再次 过滤 →橘皮油
3．胡萝卜素的提取 ①不溶于 (1)胡萝卜素的性质②微溶于乙醇 ③易溶于 石油醚等有机溶剂
①提取方法： 萃取法 (2)胡萝卜素的提取 最适宜作萃取剂 ② 石油醚
(5)胚乳(3n)由一个精子与两个极核受精发育而成。若用籼稻种子的胚乳诱 导愈伤组织，培育三倍体，需适时剔除胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的 ________________，还可避免再生苗中混有___________。
【解析】 (1)因为2,4D对形态的发生有一定的抑制作用，常用于诱导形 成愈伤组织，故在愈伤组织的再分化培养基中要降低2,4D的浓度。(2)愈伤组 织再分化产生幼苗时，需要细胞分裂素和生长素的共同作用。(3)愈伤组织的 细胞排列松散，而绿色芽点的细胞是具有分生能力的细胞，排列紧密；刚融合 的籼稻和稗草杂交细胞还未形成新的细胞壁和大的液泡，因此不会发生质壁分 离；胚状体的细胞是已经分化的具有生根发芽能力的细胞，其中有的细胞含有 叶绿体；分化后的细胞在形态、结构和生理功能上会发生稳定性的变化。
(4)叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，故在绿光和黄光的照射下，突变体和 对照组的叶片光合作用无明显差异。突变体的叶绿素a与叶绿素b的比值大于对 照组，而叶绿素的总量不变，则叶绿素a的含量增多、叶绿素b的含量减少，故 色素分离的结果是滤纸条自上而下的第4条色素带窄于对照组。(5)胚乳细胞中 含3个染色体组，胚细胞中含2个染色体组，胚具有分裂和分化的能力，其存在 可能会影响胚乳细胞诱导形成的愈伤组织细胞的增殖与分化，故需剔除，这样 还可避免愈伤组织再分化形成的三倍体幼苗中混有二倍体幼苗。
高三生物大一轮复习选修讲生物技术在其他方面的应用PPT课件
• 【答案】A • 【解析】由于玫瑰精油难溶于水，易溶于 有机溶剂，因此在②步中使用水中蒸馏更简便 易行；在操作时可向蒸馏烧瓶中加入几片碎瓷 片，目的是防止暴沸；提取精油时，为了使油 水分层更彻底，要向油水混合物中加入NaCl； 分离的油层还含有一定的水分，需加入无水 Na2SO4，再用过滤方法将其除去。
一级达标重点名校中学课件
第3讲 生物技术在其他方面的应用
一级达标重点名校中学课件
• [最新考纲] 1.从生物材料中提取某些特定 的成分 2.实验：DNA的粗提取与鉴定
一级达标重点名校中学课件
• 1．DNA的粗提取与鉴定 • (1)DNA粗提取的原理：DNA在不同浓度的 NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的 NaCl溶液中的溶解度最低。 • (2)DNA的鉴定：DNA在沸水浴的条件下， 遇二苯胺会被染成蓝色。 • 2．植物有效成分的提取 • (1)植物芳香油的提取方法：压榨法、蒸馏 法和萃取法等。
• [课前导学]
• 提取玫瑰精油、橘皮精油和胡萝卜素的实
验 项目
提取方法
实验流程
玫瑰精油的 提取
鲜玫瑰花＋清水→水蒸气蒸馏→油水混合 水_蒸___气__蒸__ 馏法 物加―入―N→aCl分离油层加入无―水N―→a2SO4除水
―过―滤→玫瑰油
橘皮精油的 提取
_压___榨___法_
石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→ 再次过滤→橘皮油
一级达标重点名校中学课件
植物有效成分的提取
• 1．植物有效成分的提取的三种方法比较
提取方 法
水蒸气蒸馏法
压榨法
利用水蒸气将 实验原 挥发性较强的
理 植物芳香油携 带出来
通过机械加压， 压榨出果皮中的 芳香油
一级达标重点名校中学课件
第3讲 生物技术在其他方面的应用
一级达标重点名校中学课件
• [最新考纲] 1.从生物材料中提取某些特定 的成分 2.实验：DNA的粗提取与鉴定
一级达标重点名校中学课件
• 1．DNA的粗提取与鉴定 • (1)DNA粗提取的原理：DNA在不同浓度的 NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的 NaCl溶液中的溶解度最低。 • (2)DNA的鉴定：DNA在沸水浴的条件下， 遇二苯胺会被染成蓝色。 • 2．植物有效成分的提取 • (1)植物芳香油的提取方法：压榨法、蒸馏 法和萃取法等。
• [课前导学]
• 提取玫瑰精油、橘皮精油和胡萝卜素的实
验 项目
提取方法
实验流程
玫瑰精油的 提取
鲜玫瑰花＋清水→水蒸气蒸馏→油水混合 水_蒸___气__蒸__ 馏法 物加―入―N→aCl分离油层加入无―水N―→a2SO4除水
―过―滤→玫瑰油
橘皮精油的 提取
_压___榨___法_
石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→ 再次过滤→橘皮油
一级达标重点名校中学课件
植物有效成分的提取
• 1．植物有效成分的提取的三种方法比较
提取方 法
水蒸气蒸馏法
压榨法
利用水蒸气将 实验原 挥发性较强的
理 植物芳香油携 带出来
通过机械加压， 压榨出果皮中的 芳香油
(完整版)生物高考总复习：专题36 生物技术在其他方面的应用(78张PPT)
22 Nhomakorabea点2
多聚酶链式反应扩增DNA片段
• 1.细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较
PCR 80～100 ℃高温解 解旋 解旋酶，边解旋边复制 旋，双链完全分 开 酶 解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶 TaqDNA聚合酶 不 RNA 引物 DNA或RNA 同 ATP 能量 不加 点 温度 体内温和条件 高温 23 一条链连续(先导链)，另一条链不 子链合 两条子链均连续合 细胞内DNA复制
20
用量比例不同，结果也不同： ①高：利于根的分化、抑制芽的 形成 生长素用量 的比值②低：利于芽的分化、抑制根的 细胞分裂素用量 形成 ③适中：促进愈伤组织的生长
21
• 名师提醒 • (1)在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受 伤部位产生愈伤组织，同时还要彻底去除花丝，因为与花丝 相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 • (2)花药开裂长出愈伤组织或释放出胚状体时，应及时转移到 分化培养基上。
19
• 3．植物激素在组织培养过程中的重要作用 • 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关 键性激素，其作用及特点为： • 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 • 使用顺序不同，结果不同，具体如下： 使用顺序 实验结果
先使用生长素，后使用细 有利于细胞分裂，但细
胞分裂素 先使用细胞分裂素，后使 用生长素 胞不分化 细胞既分裂又分化
压榨 和○ 萃取 等。 45 ________ 44 ________ (1)植物芳香油的提取方法：蒸馏、○
水蒸气 将挥发性较强的植物芳香油携带 46 ___________ (2)水蒸气蒸馏法原理是：利用 ○
油层和水层 。根据蒸 47 _____________ 出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出 ○
多聚酶链式反应扩增DNA片段
• 1.细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较
PCR 80～100 ℃高温解 解旋 解旋酶，边解旋边复制 旋，双链完全分 开 酶 解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶 TaqDNA聚合酶 不 RNA 引物 DNA或RNA 同 ATP 能量 不加 点 温度 体内温和条件 高温 23 一条链连续(先导链)，另一条链不 子链合 两条子链均连续合 细胞内DNA复制
20
用量比例不同，结果也不同： ①高：利于根的分化、抑制芽的 形成 生长素用量 的比值②低：利于芽的分化、抑制根的 细胞分裂素用量 形成 ③适中：促进愈伤组织的生长
21
• 名师提醒 • (1)在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受 伤部位产生愈伤组织，同时还要彻底去除花丝，因为与花丝 相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 • (2)花药开裂长出愈伤组织或释放出胚状体时，应及时转移到 分化培养基上。
19
• 3．植物激素在组织培养过程中的重要作用 • 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关 键性激素，其作用及特点为： • 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 • 使用顺序不同，结果不同，具体如下： 使用顺序 实验结果
先使用生长素，后使用细 有利于细胞分裂，但细
胞分裂素 先使用细胞分裂素，后使 用生长素 胞不分化 细胞既分裂又分化
压榨 和○ 萃取 等。 45 ________ 44 ________ (1)植物芳香油的提取方法：蒸馏、○
水蒸气 将挥发性较强的植物芳香油携带 46 ___________ (2)水蒸气蒸馏法原理是：利用 ○
油层和水层 。根据蒸 47 _____________ 出来，形成油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出 ○
高考生物一轮复习课件：第十一单元 生物技术在其他方面的应用(85张ppt)
考点一
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点一 植物组织培养技术
4．月季的花药培养 (1)被子植物的花粉发育过程 花粉母细胞→ 小孢子四分体时期 →单核期→双核期 →花粉粒。 (2)产生花粉植株的两种途径
脱分化
丛芽
愈伤组织
(3)影响花药培养的因素
①主要因素： 材料的选择和 培养基的组成 。
②其他因素：亲本植株的 生长条件 、材料的 低温预处理
盘游戏引入几何概型。分别介绍了用计算器和计算机中的Excel软件产生（取整数值的）随机数的方法，以及利用随机模拟的方法估计随机事件的概率、估计圆周率的值、近似计算不规则图形的面积等。
考点一 植物组织培养技术
1．组织培养过程
脱分化 愈伤 再分化 组织
2．培养基
(1)成分：大量元素、 微量元素 、有机物、植物激素和琼脂。 (2)类型： MS 培养基 、发芽培养基和生根培养基。 (3)作用：植物组织或器官生长和发育的 营养条件 。 (4)配制：称量、溶解、 调 pH 、分装(三角瓶)、灭菌。
考点一
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点一 植物组织培养技术
考点一
基础回扣
要点探究
命题设计
返回
考点一 植物组织培养技术
3．菊花的组织培养 配制各种母液
(1)制备 MS 固体 培养基配制培养基 灭菌
(2)外植体消毒
体积分数为 70% 的酒精
质量分数为 0.1% 的氯化汞
无菌水
(3)接种：始终在 酒精灯 旁进行，对接种工具要用 火焰 灼烧 灭菌。将菊花茎段插入培养基中时注意 不要倒插 。 (4)培养与移栽：在 18～22 ℃的 无菌箱 中培养，得到试 管苗后进行移栽。
高考生物专题复习课件(17)生物技术在其他方面的应用(共26张PPT)
高考考法突破
考点54 生物材料中有效成分的提取
3．红细胞的洗涤与离心要求：红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增 加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同 沉淀，达不到分离效果。 4．蒸馏水和甲苯的作用：血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作 用主要是溶解细胞膜。 5．加快干凝胶膨胀的方法：可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸 腾，通常只需1～2 h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物， 排除胶粒内的空气。 6．判断纯化的蛋白质是否达到要求的方法：使用最多的是SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法 。
考点53 植物组织培养 考点54 生物材料中有效成分的提取
理想树出品
考点53 植物组织培养
应试基础必备 高考考法突破
考法1 植物组织培养的过程
考点53 植物组织培养
考点53 植物组织培养
应试基础必备
1．植物组织培养 (1)概念：指在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织或细胞培养在人 工培养基上，给予适当的培养条件，诱导其产生愈伤组织和丛芽，最终形成完整 的植株。 (2)原理：植物细胞的全能性。 2．菊花组织培养过程 (1)植物组织培养的流程
后流出
(2)电泳法 ①在一定pH下，一些生物大分子(如多肽、核酸等)可解离的基团会带上正电或负电，在电 场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ②由于分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子 产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。 2．凝胶色谱柱与分离结果的关系：凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大 造成洗脱液体积大，样品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
间的序列)
• 4.实验操作 • (1)PCR反映体系：缓冲液、DNA模板、四
种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、 两种RNA引物、水
• (2)实验操作步骤： • ①按照PCR反应体系配方配制反应液 • ②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移
到微量离心管中
• ③将微量离心管放到PCR仪 • ④设置PCR仪的工作参数
使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使 有利于细胞分裂，但细
用细胞分裂素
胞不分化
先使用细胞分裂素， 后使用生长素
细胞既分裂又分化
同时使用
分化频率提高
• ③生长素用量比细胞分裂素用量，其比值 不同，对细胞发育的方向影响不同：
• 比值高时：有利于根的分化，抑制芽的形 成
• 比值低时：有利于芽的分化，抑制根的形 成
• 将搅拌好的混合液转移到离心管中，以 2000r/min的速度离心10min后，试管中的 溶液分为4层：
• 第1层(最上层)：甲苯层(无色透明)
• 第2层(中上层)：脂溶性物质沉淀层(白色薄 层固体)
• 第3层(中下层)：血红蛋白的水溶液层(红色 透明液体)
• 第4层(最下层)：杂质沉淀层(暗红色)
第 十四 章
生物技术实践
第
讲
生物技术在其 他方面的应用
• 一、植物组织培养 • 1.原理：植物细胞的全能性 • 2.基本过程：
(1)脱分化和再分化的比较
起点
关键因素
条件
脱分化 外植体 植物激素 一般暗培养
再分化
愈伤组织
细胞分裂素和 生长素比例
必须要光照
(2)愈伤组织的特点：细胞排列疏松而无规
则，是一种高度液泡化的呈无定形的薄壁
• ④亲本植株的生长条件、材料和低温预处 理以及接种密度等。
• 6.花粉植株的产生和植物茎的组织培养的 比较 菊花茎的组织培养 月季的花药培养
理论
依据植物细胞化
影响因素 选材、营养、激素、pH、温度、光照等
制备固体培养基→
操作流程
外植体消毒→接 种→培养→移栽
→栽培
选材→材料消毒→ 接种和培养→筛 选和诱导→移栽 →栽培选育二、
• 比值适中：促进愈伤组织的形成 • (4)温度：一般将温度控制在18~22 ℃ • (5)pH：一般将pH控制在5.8左右 • (6)光照：每日用日光灯照射12 h
• 4.实验操作步骤 • (1)制备MS固体培养基：配制各种母液→配
制培养基→灭菌 • (2)外植体消毒：酒精溶液消毒→无菌水清
洗→次氯酸钠(或氯化汞)溶液→无菌水清洗 • (3)接种 • (4)培养 • (5)移栽 • (6)栽培
DNA子链 为解螺旋和合成子链供能
为DNA聚合酶提供合成的 3′端起点
• 2.DNA分子复
• 制的人工控制
• 解开螺旋：在80~100 ℃时，DNA双螺旋 打开，形成两条DNA单链，称为变性。
• 恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链 重新形成双螺旋结构，称为复性。
• 3.PCR的反应过程
• 变性：在95 ℃时DNA解旋 • 复性：在50 ℃时引物与DNA单链结合 • 延伸：在72 ℃时合成DNA子链(两个引物
• 5.月季的花药培养 • (1)被子植物的花粉发育 • 小孢子母细胞→4个小孢子→1个小孢子(单
核居中期)→1个小孢子(单核靠边期)→花粉 粒(含一个花粉管细胞核和一个生殖细胞核)
(2)产生花粉植株的两种途径
• (3)影响花药培养的因素 • ①不同植物的诱导成功率很不相同； • ②同种植物的生理状况； • ③花粉发育时期；
细胞。
• 3.影响因素
• (1)外植体的选择：材料本身的种类、年 龄、保存时间长短等。
(2)营养
无机营养
大量元素：如N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：如Cu、Mn、B、Fe、Zn
有机营养：维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇以 及蔗糖等
• (3)植物激素 • ①常用激素：生长素和细胞分裂素。
• ②使用激素顺序不同对试验结果的影 响：
蛋白质的提取和 分离
• 二、蛋白质的提取和分离 • 1.蛋白质的理化性质 • (1)具有两性 • (2)可以发生水解反应 • (3)可溶性、具有胶体的性质 • (4)盐析 • (5)蛋白质的变性 • (6)颜色反应
• 2.操作步骤 • 蛋白质的提取和分离一般为四步： • ①样品处理→②粗分离→③纯化→④纯
• (4)透析
• 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将 透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为 20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12 h，目 的是除去样品中相对分子质量较小的杂质。
• (2)凝胶色谱分离
• ①制作凝胶色谱柱
• ②装填凝胶色谱柱
• ③样品加入和洗脱
• (3)结果分析与评价
• ①对于血液样品的处理，需要经过洗涤、 释放、分离、透析几个步骤。由于血红蛋 白与氧气结合变成鲜红色，与二氧化碳结 合变成暗红色，所以刚分离后的血红蛋白 溶液呈红色。
• ⑥水浴法：将微型离心管依次在95 ℃、55 ℃、72 ℃的恒温水浴锅中循环处理相应时 间
• 5.实验注意事项：
• (1)避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、 蒸馏水等必须进行高压灭菌
• (2)缓冲液和酶分装成小份，-20 ℃保存 • (3)每添加一种反应成分，更换一个移液器
的枪头
• (4)混匀后离心处理，使反应液集中在离心
特别提醒
• 1.植物细胞表现出全能性的条件和步骤
• 植物细胞要表现出全能性，需要经过以下几个 步骤：
• 成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株 • 成熟细胞→愈伤组织→生根出芽→完整植株
• ②红色区带的移动是实验成功与否的标志。 红色区带在洗脱过程中均匀一致移动，说 明实验分离成功。
• 三、PCR技术的基本操作和应用 • 1.细胞内DNA复制条件分析：
条件 模板 原料
酶
能量
引物
组分 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚 合酶
ATP
RNA
作用
提供复制的模板
合成DNA子链的原料 打开DNA双螺旋催化合成
度鉴定
• (1)样品处理
• (1)红细胞的洗涤
• ①采集血样→②低速短时间离心→③吸取 血浆→④盐水洗涤→⑤低速离心→⑥重复 ④⑤步骤三次
• (2)血红蛋白的释放
• 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水 到原血液的体积，再加40%体积的甲苯， 置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min。
• (3)分离血红蛋白溶液
• 4.实验操作 • (1)PCR反映体系：缓冲液、DNA模板、四
种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、 两种RNA引物、水
• (2)实验操作步骤： • ①按照PCR反应体系配方配制反应液 • ②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移
到微量离心管中
• ③将微量离心管放到PCR仪 • ④设置PCR仪的工作参数
使用顺序
实验结果
先使用生长素，后使 有利于细胞分裂，但细
用细胞分裂素
胞不分化
先使用细胞分裂素， 后使用生长素
细胞既分裂又分化
同时使用
分化频率提高
• ③生长素用量比细胞分裂素用量，其比值 不同，对细胞发育的方向影响不同：
• 比值高时：有利于根的分化，抑制芽的形 成
• 比值低时：有利于芽的分化，抑制根的形 成
• 将搅拌好的混合液转移到离心管中，以 2000r/min的速度离心10min后，试管中的 溶液分为4层：
• 第1层(最上层)：甲苯层(无色透明)
• 第2层(中上层)：脂溶性物质沉淀层(白色薄 层固体)
• 第3层(中下层)：血红蛋白的水溶液层(红色 透明液体)
• 第4层(最下层)：杂质沉淀层(暗红色)
第 十四 章
生物技术实践
第
讲
生物技术在其 他方面的应用
• 一、植物组织培养 • 1.原理：植物细胞的全能性 • 2.基本过程：
(1)脱分化和再分化的比较
起点
关键因素
条件
脱分化 外植体 植物激素 一般暗培养
再分化
愈伤组织
细胞分裂素和 生长素比例
必须要光照
(2)愈伤组织的特点：细胞排列疏松而无规
则，是一种高度液泡化的呈无定形的薄壁
• ④亲本植株的生长条件、材料和低温预处 理以及接种密度等。
• 6.花粉植株的产生和植物茎的组织培养的 比较 菊花茎的组织培养 月季的花药培养
理论
依据植物细胞化
影响因素 选材、营养、激素、pH、温度、光照等
制备固体培养基→
操作流程
外植体消毒→接 种→培养→移栽
→栽培
选材→材料消毒→ 接种和培养→筛 选和诱导→移栽 →栽培选育二、
• 比值适中：促进愈伤组织的形成 • (4)温度：一般将温度控制在18~22 ℃ • (5)pH：一般将pH控制在5.8左右 • (6)光照：每日用日光灯照射12 h
• 4.实验操作步骤 • (1)制备MS固体培养基：配制各种母液→配
制培养基→灭菌 • (2)外植体消毒：酒精溶液消毒→无菌水清
洗→次氯酸钠(或氯化汞)溶液→无菌水清洗 • (3)接种 • (4)培养 • (5)移栽 • (6)栽培
DNA子链 为解螺旋和合成子链供能
为DNA聚合酶提供合成的 3′端起点
• 2.DNA分子复
• 制的人工控制
• 解开螺旋：在80~100 ℃时，DNA双螺旋 打开，形成两条DNA单链，称为变性。
• 恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链 重新形成双螺旋结构，称为复性。
• 3.PCR的反应过程
• 变性：在95 ℃时DNA解旋 • 复性：在50 ℃时引物与DNA单链结合 • 延伸：在72 ℃时合成DNA子链(两个引物
• 5.月季的花药培养 • (1)被子植物的花粉发育 • 小孢子母细胞→4个小孢子→1个小孢子(单
核居中期)→1个小孢子(单核靠边期)→花粉 粒(含一个花粉管细胞核和一个生殖细胞核)
(2)产生花粉植株的两种途径
• (3)影响花药培养的因素 • ①不同植物的诱导成功率很不相同； • ②同种植物的生理状况； • ③花粉发育时期；
细胞。
• 3.影响因素
• (1)外植体的选择：材料本身的种类、年 龄、保存时间长短等。
(2)营养
无机营养
大量元素：如N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：如Cu、Mn、B、Fe、Zn
有机营养：维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇以 及蔗糖等
• (3)植物激素 • ①常用激素：生长素和细胞分裂素。
• ②使用激素顺序不同对试验结果的影 响：
蛋白质的提取和 分离
• 二、蛋白质的提取和分离 • 1.蛋白质的理化性质 • (1)具有两性 • (2)可以发生水解反应 • (3)可溶性、具有胶体的性质 • (4)盐析 • (5)蛋白质的变性 • (6)颜色反应
• 2.操作步骤 • 蛋白质的提取和分离一般为四步： • ①样品处理→②粗分离→③纯化→④纯
• (4)透析
• 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将 透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为 20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12 h，目 的是除去样品中相对分子质量较小的杂质。
• (2)凝胶色谱分离
• ①制作凝胶色谱柱
• ②装填凝胶色谱柱
• ③样品加入和洗脱
• (3)结果分析与评价
• ①对于血液样品的处理，需要经过洗涤、 释放、分离、透析几个步骤。由于血红蛋 白与氧气结合变成鲜红色，与二氧化碳结 合变成暗红色，所以刚分离后的血红蛋白 溶液呈红色。
• ⑥水浴法：将微型离心管依次在95 ℃、55 ℃、72 ℃的恒温水浴锅中循环处理相应时 间
• 5.实验注意事项：
• (1)避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、 蒸馏水等必须进行高压灭菌
• (2)缓冲液和酶分装成小份，-20 ℃保存 • (3)每添加一种反应成分，更换一个移液器
的枪头
• (4)混匀后离心处理，使反应液集中在离心
特别提醒
• 1.植物细胞表现出全能性的条件和步骤
• 植物细胞要表现出全能性，需要经过以下几个 步骤：
• 成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株 • 成熟细胞→愈伤组织→生根出芽→完整植株
• ②红色区带的移动是实验成功与否的标志。 红色区带在洗脱过程中均匀一致移动，说 明实验分离成功。
• 三、PCR技术的基本操作和应用 • 1.细胞内DNA复制条件分析：
条件 模板 原料
酶
能量
引物
组分 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚 合酶
ATP
RNA
作用
提供复制的模板
合成DNA子链的原料 打开DNA双螺旋催化合成
度鉴定
• (1)样品处理
• (1)红细胞的洗涤
• ①采集血样→②低速短时间离心→③吸取 血浆→④盐水洗涤→⑤低速离心→⑥重复 ④⑤步骤三次
• (2)血红蛋白的释放
• 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水 到原血液的体积，再加40%体积的甲苯， 置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min。
• (3)分离血红蛋白溶液