流感疫苗生产与研究进展
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
RNA
Hemagglutinin Neuraminidase Antibodies Sialic acid
HA 和/或 NA 基因的点的变异 频繁发生 A 型和B型发生
抗原转换（Antigenic shift)
人类和动物毒株的RNA发生交换 (HA 和/或NA基因的全球性变异),导致新的 亚型出现 少见但后果严重 只在 A型出现
流感疫苗生产及研究进展
内容
1 病毒性灭活疫苗概述 2 流感和流感病毒 3 流感疫苗生产工艺
4 流感疫苗研发
病毒性灭活疫苗概述
• 定义及分类
wenku.baidu.com
病毒接种和培养
培养基质
流感疫苗：鸡胚
出血热及森脑疫 苗：原代地鼠肾 细胞
采用物理或化 学的方式将病 毒灭活
灭活方法： 加热 灭活剂（福 尔马林等）
其他的生 产步骤 纯化：纯化全病 毒疫苗
作用于病原体DNA或 RNA，改变病毒核酸 结构达到灭活目的， 而不直接作用于蛋 白。
1）不破坏病毒的血凝素抗原, 保持 病毒良好的免疫原性； 2）灭活时间短； 3）其水解产物对机体无害，接种反 应轻。
的灭活作用。
常用的裂解剂
Triton X-100
简要介绍
聚乙二醇辛基苯基醚,是一种非离 子型表面活性剂（或称去污剂）
流感和流感病毒
• 流行性感冒（Influenza）即流感，是由甲（A）、 乙（B）、丙（C）三型流感病毒分别引起的急性呼 吸道传染病。常造成不同程度的流行，对人类的健 康造成巨大的威胁。
流感
50 40 30 20 10
0 儿童 成人
发病率 范围
慢性病恶化、 继发感染、 其它……
- 痛苦不堪 - 缺课或缺勤 - 就医 - 使用抗生素 - 住院 - 死亡
流感的流行情况
H1N1
H1N1
H2N2
H3N2
H1N1
1918
1940
1960
1980
2000
2020
1918
Spanish Influenza
H1N1
1957
Asian Influenza
无
（分子筛）
灭活剂：甲醛 含铝佐剂
流感病毒裂解 疫苗
基质：鸡胚 方式：孵化间
超滤浓缩； 裂解剂： 蔗糖密度 Triton 灭活剂：甲醛 无硫柳汞 区带离心 X-100
两种灭活剂的比较
甲醛
β丙内 酯
简要介绍
灭活机理
优缺点
甲醛，化学式
HCHO，称蚁醛。 无色气体，有 特殊的刺激气 味，对人眼、 鼻等有刺激作
• RNA5 1565
• RNA6 1413
• RNA7 1027 • RNA8 890
PB2
RNA转录酶；识别和结合来源于宿主细胞的帽子
PB1
RNA转录酶主要成分；启动转录和RNA合成延伸
PA
具有解旋酶话性
HA
结合靶细胞受体，诱导病毒与靶细胞融合诱导中
和抗体，凝集红细胞
NP
与基因组RNA结合，参与形成核糖核蛋白（RNP）
裂解：裂解疫苗
成品
纯化全病毒疫苗： 冻干人用狂犬病 疫苗
出血热、森脑 ----含氢氧化铝 佐剂
狂犬疫苗：Vero 细胞
亚单位：亚单位 疫苗
裂解：流感病毒 裂解疫苗
灭活疫苗：称死疫苗，是指利用加热或甲醛等理化方法将人工大量培养 的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持免疫原性，并 结合相应的佐剂而制成的疫苗。
人群中总要造成不同程度的超额死亡。
• 流感患者和隐性感染者是流感的主要传染源。从潜伏期末 到发病的急性期（约7天）都有传染性。
流感病毒形态结构
流感病毒形态结构
流感病毒电镜照片
流感病毒的超细微结构照片
甲型流感病毒基因组各节段的大小与功能
节段 长度（bp）编码蛋白
主要功能
• RNAI 2341 • RNA2 2320 • RNA3 2233 • RNA4 1778
长春公司的病毒性灭活疫苗
工艺流程 名称
冻干人用狂犬 病疫苗
病毒培养
基质：Vero细 胞培养 方式：生物反 应器
病毒纯化 病毒裂解 病毒灭活
超滤浓缩；
柱层析
无
（分子筛）
灭活剂：β丙内酯
半成品配 制及分包
装
冻干
双价肾综合征 出血热疫苗 森林脑炎灭活 疫苗
基质：原代地 鼠肾细胞 方式：转瓶
超滤浓缩；
柱层析
流感的流行特点
• 是在短期内突然发生，迅速蔓延，造成不同程度的流行， 包括世界大流行，局部暴发流行及散发。
• 具有一定的季节性：温、寒带地区常在冬、春季节流行， 但热带和亚热带地区任何季节都可以流行。
• 流感病毒传播迅速、流行广泛、抗原易变异，人群的特异 性免疫状况不稳定。
• 发人病群率为死高年亡迈，率体并弱伴升或有高带一超有定过慢的一性死定疾亡病率的患。正者最常。高临每的界次为水流青感少平流年行，后高在危
机理
它能溶解脂质，以增加 抗体对细胞膜的通透性。
Triton N-101
聚乙二醇(壬基苯基)醚,是一种非 溶解脂质 离子型表面活性剂（或称去污剂）
CTAB
十六烷基三甲基溴化铵,阳离子表 面活性剂，是一种阳离子去污剂
与非离子及两性离子表 面活性剂有良好的配位 性，对多种油脂具较好 的乳化作用, 有轻微脱 脂作用.
颗粒
NA
NA活性；水解细胞多糖受体，协助新生病毒颗
粒从被感染宿主细胞表面游离下来，促使子代病
毒释放
M1、M2 病毒基质膜蛋白，有保护作 用；质子通道作用
NS1、NS2 非结构蛋白，抑制宿主细胞蛋白合成或参与
vRNA合成
流感病毒的理化特性 流感病毒对热敏感，通常56℃30min被灭活，但有
些毒株56℃90min被灭活。 最适PH为7.0-8.0 可被紫外线灭活 因其为带囊膜的病毒，故对乙醚、氯仿、丙酮等有
既可作用于病毒含 氨基的核苷酸碱基 （如A,G,U），又可 作用病毒壳蛋白。
用。
1）病原体蛋白的抗原性严重破坏， 可能有病原体存活； 2）灭活时间长； 3）易受温度、pH、浓度、是否存在 有机物、病原体的种类和含氮量等 因素影响； 4）残留的游离甲醛，注入机体后， 会产生制激性反应。
一种杂环类化 合物(C3H4O2)， 沸点155℃，常 温下是无色粘 稠状液体，对 病毒具有很强
机溶剂敏感。
流感病毒的变异
原因：
方式：
–流感病毒结构特点 –天然宿主的广泛存
在
–密切接触
抗原漂移（Antigenic drift） --小变异，同一亚型 --基因点突变所致 --引起流行
抗原转换（Antigenic shift）
--大变异
--基因片段交换
--引起大流行
抗原漂移（Antigenic Drift）
Hemagglutinin Neuraminidase Antibodies Sialic acid
HA 和/或 NA 基因的点的变异 频繁发生 A 型和B型发生
抗原转换（Antigenic shift)
人类和动物毒株的RNA发生交换 (HA 和/或NA基因的全球性变异),导致新的 亚型出现 少见但后果严重 只在 A型出现
流感疫苗生产及研究进展
内容
1 病毒性灭活疫苗概述 2 流感和流感病毒 3 流感疫苗生产工艺
4 流感疫苗研发
病毒性灭活疫苗概述
• 定义及分类
wenku.baidu.com
病毒接种和培养
培养基质
流感疫苗：鸡胚
出血热及森脑疫 苗：原代地鼠肾 细胞
采用物理或化 学的方式将病 毒灭活
灭活方法： 加热 灭活剂（福 尔马林等）
其他的生 产步骤 纯化：纯化全病 毒疫苗
作用于病原体DNA或 RNA，改变病毒核酸 结构达到灭活目的， 而不直接作用于蛋 白。
1）不破坏病毒的血凝素抗原, 保持 病毒良好的免疫原性； 2）灭活时间短； 3）其水解产物对机体无害，接种反 应轻。
的灭活作用。
常用的裂解剂
Triton X-100
简要介绍
聚乙二醇辛基苯基醚,是一种非离 子型表面活性剂（或称去污剂）
流感和流感病毒
• 流行性感冒（Influenza）即流感，是由甲（A）、 乙（B）、丙（C）三型流感病毒分别引起的急性呼 吸道传染病。常造成不同程度的流行，对人类的健 康造成巨大的威胁。
流感
50 40 30 20 10
0 儿童 成人
发病率 范围
慢性病恶化、 继发感染、 其它……
- 痛苦不堪 - 缺课或缺勤 - 就医 - 使用抗生素 - 住院 - 死亡
流感的流行情况
H1N1
H1N1
H2N2
H3N2
H1N1
1918
1940
1960
1980
2000
2020
1918
Spanish Influenza
H1N1
1957
Asian Influenza
无
（分子筛）
灭活剂：甲醛 含铝佐剂
流感病毒裂解 疫苗
基质：鸡胚 方式：孵化间
超滤浓缩； 裂解剂： 蔗糖密度 Triton 灭活剂：甲醛 无硫柳汞 区带离心 X-100
两种灭活剂的比较
甲醛
β丙内 酯
简要介绍
灭活机理
优缺点
甲醛，化学式
HCHO，称蚁醛。 无色气体，有 特殊的刺激气 味，对人眼、 鼻等有刺激作
• RNA5 1565
• RNA6 1413
• RNA7 1027 • RNA8 890
PB2
RNA转录酶；识别和结合来源于宿主细胞的帽子
PB1
RNA转录酶主要成分；启动转录和RNA合成延伸
PA
具有解旋酶话性
HA
结合靶细胞受体，诱导病毒与靶细胞融合诱导中
和抗体，凝集红细胞
NP
与基因组RNA结合，参与形成核糖核蛋白（RNP）
裂解：裂解疫苗
成品
纯化全病毒疫苗： 冻干人用狂犬病 疫苗
出血热、森脑 ----含氢氧化铝 佐剂
狂犬疫苗：Vero 细胞
亚单位：亚单位 疫苗
裂解：流感病毒 裂解疫苗
灭活疫苗：称死疫苗，是指利用加热或甲醛等理化方法将人工大量培养 的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持免疫原性，并 结合相应的佐剂而制成的疫苗。
人群中总要造成不同程度的超额死亡。
• 流感患者和隐性感染者是流感的主要传染源。从潜伏期末 到发病的急性期（约7天）都有传染性。
流感病毒形态结构
流感病毒形态结构
流感病毒电镜照片
流感病毒的超细微结构照片
甲型流感病毒基因组各节段的大小与功能
节段 长度（bp）编码蛋白
主要功能
• RNAI 2341 • RNA2 2320 • RNA3 2233 • RNA4 1778
长春公司的病毒性灭活疫苗
工艺流程 名称
冻干人用狂犬 病疫苗
病毒培养
基质：Vero细 胞培养 方式：生物反 应器
病毒纯化 病毒裂解 病毒灭活
超滤浓缩；
柱层析
无
（分子筛）
灭活剂：β丙内酯
半成品配 制及分包
装
冻干
双价肾综合征 出血热疫苗 森林脑炎灭活 疫苗
基质：原代地 鼠肾细胞 方式：转瓶
超滤浓缩；
柱层析
流感的流行特点
• 是在短期内突然发生，迅速蔓延，造成不同程度的流行， 包括世界大流行，局部暴发流行及散发。
• 具有一定的季节性：温、寒带地区常在冬、春季节流行， 但热带和亚热带地区任何季节都可以流行。
• 流感病毒传播迅速、流行广泛、抗原易变异，人群的特异 性免疫状况不稳定。
• 发人病群率为死高年亡迈，率体并弱伴升或有高带一超有定过慢的一性死定疾亡病率的患。正者最常。高临每的界次为水流青感少平流年行，后高在危
机理
它能溶解脂质，以增加 抗体对细胞膜的通透性。
Triton N-101
聚乙二醇(壬基苯基)醚,是一种非 溶解脂质 离子型表面活性剂（或称去污剂）
CTAB
十六烷基三甲基溴化铵,阳离子表 面活性剂，是一种阳离子去污剂
与非离子及两性离子表 面活性剂有良好的配位 性，对多种油脂具较好 的乳化作用, 有轻微脱 脂作用.
颗粒
NA
NA活性；水解细胞多糖受体，协助新生病毒颗
粒从被感染宿主细胞表面游离下来，促使子代病
毒释放
M1、M2 病毒基质膜蛋白，有保护作 用；质子通道作用
NS1、NS2 非结构蛋白，抑制宿主细胞蛋白合成或参与
vRNA合成
流感病毒的理化特性 流感病毒对热敏感，通常56℃30min被灭活，但有
些毒株56℃90min被灭活。 最适PH为7.0-8.0 可被紫外线灭活 因其为带囊膜的病毒，故对乙醚、氯仿、丙酮等有
既可作用于病毒含 氨基的核苷酸碱基 （如A,G,U），又可 作用病毒壳蛋白。
用。
1）病原体蛋白的抗原性严重破坏， 可能有病原体存活； 2）灭活时间长； 3）易受温度、pH、浓度、是否存在 有机物、病原体的种类和含氮量等 因素影响； 4）残留的游离甲醛，注入机体后， 会产生制激性反应。
一种杂环类化 合物(C3H4O2)， 沸点155℃，常 温下是无色粘 稠状液体，对 病毒具有很强
机溶剂敏感。
流感病毒的变异
原因：
方式：
–流感病毒结构特点 –天然宿主的广泛存
在
–密切接触
抗原漂移（Antigenic drift） --小变异，同一亚型 --基因点突变所致 --引起流行
抗原转换（Antigenic shift）
--大变异
--基因片段交换
--引起大流行
抗原漂移（Antigenic Drift）