实验四、花粉生活力的测定

实验四、花粉生活力的测定

一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。

二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。

三、实验材料：苹果花粉

四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。

五、实验步骤

常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。

1. 形态观察法

直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

2. 染色法

(1) 碘-碘化钾染色法

①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。

②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。

③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。

(2) 蓝墨水染色法

①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍。

②具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴蓝墨水溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。凡被染色呈无色时表示具有生活力，呈蓝黑色者为发育不良生活力弱的花粉。为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉的生活力。

3. 培养基发芽法：

人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱。

(1) 培养基的制作与接种

10%蔗糖+0.01%硼酸+1%琼脂，溶于蒸馏水中，加热煮沸即可。将配好的培养基保持在40℃的水浴锅中保温，即不凝固。用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内，然后用头发沾少量花粉条播。将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签（花粉品种名称、姓名和日期），将培养皿放于25℃暗培养24h后统计发芽率。

(2) 观察记数

在显微镜下观察，每品种观察不同的3个视野，每个视野花粉粒数目≥20粒，求平均值，统计花粉的发芽率。花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。

四、作业

1．绘出花粉发芽前、后的形态特征图。

2．统计碘-碘化钾染色法和蓝墨水染色法测定花粉生活力的结果，并填写表1。

3. 统计培养基发芽法测定花粉生活力的结果，并填写表2。

4. 比较花粉生活力测定的不同方法，并分析引起花粉生活力差异的具体原因。

表1 染色法测定花粉生活力结果统计表

表2 培养基发芽法测定花粉生活力结果统计表