杜氏肌营养不良症课件
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• 多态性连锁分析（RFLP) • 变性梯度凝胶电泳（DGGE) • 单链构象多态性分析（SSCP） • DNA芯片(DNA chip)
DMD为XR遗传病 女性携带者中约有1/3血清肌酐正常 Ⅱ—2为携带者，核型XAXa
假设
Ⅲ-1核型为 Ⅲ-1核型为
XAXa
XAXA
前概率
1/2
1/2
条件概率 1/3
首先应进行家系成员21号染色体上STR标记的分析。
该项检测具备的优点:一是检测21三体综合征,因为在 二次生育时孕妇年龄普遍偏大,生育21三体综合征患儿 的风险大为提高;二是判断是否有母源污染及污染程度 ,有时会出现“胎儿材料”完全是母源的情况;三是核 对所分析的DNA材料是否存在混乱。后两点是导致产 前诊断差错的主要原因。
它是目前用于缺失型DMD诊断最简便最有效的方法, 已成为D/BMD患者基因诊断及产前基因诊断的首选技 术,而且此技术可根据检出缺失外显子是整码还是移码 来判断患者的预后。
多重PCR方法可检测到缺失型男性患者,对女性携带者 及非缺失型突变患者无能为力。目前应用STR-PCR技 术进行连锁分析已成为非缺失型DMD家系连锁分析的 首选技术。
确定胎儿性别
如胎儿为男性,则应针对先证者的基因突变或多态 性标记进行分析,确定胎儿是否获得突变等位基因; 如为女性,则可停止基因诊断,因为女性杂合子通常 不患病。
多重PCR STR-PCR 探针连接多重扩增(MLPA) 变性高效液相色谱(DHPLC) 抗肌萎缩蛋白的免疫组化
DMD是以缺失型突变占基因的突变55%~65%,主要 分布5′端和中央2个缺失热点区,在对其缺失突变热点 区进行基因检测时,可检出至少一半患者。
生物化学诊断
可对血清酶和蛋白质进行定性和定量分析。血清肌
酸激酶（CK）含量在血清酶学检查中最有价值。
基因诊断
直接 诊断
间接 诊断
• 限制性内切酶片段长度多态性(RFLP) • 分子杂交：点印迹 (dot blot) • 斑点杂交(dot and slot hybridization) • 等位基因特异性寡核苷酸杂交(ASO ) • Southern印迹法(Southern blot) • Northern印迹法(Northern blot) • Western印迹法(Western blot) • 聚合酶链反应（PCR）
药物治疗：糖皮质激素治疗是目前唯一被循 证医学证实有效，可延缓DMD病程的药物。 短期口服激素治疗可增强骨骼肌力量和功能， 并可能在更长时间内稳定骨骼肌力量和功能。
基因治疗：利用不直接引起人类疾病，免疫 原性较小的腺相关病毒（AAV）为载体，导 入人工剪裁的Dys基因。
康复治疗、矫形治疗、社会心理治疗等。
细胞遗传学检查 生物化学检查 基因诊断
染色体检查（Байду номын сангаас ,Y） X染色质检查 X染色质的检查可刮取口腔
粘膜、阴道粘膜脱落上皮细胞，亦可采用 绒毛或羊水中胎儿脱落细胞涂片，经硫堇 或甲苯胺蓝染色，在光镜下计数X染色质 数目。
Y染色质检查 Y染色质检查适用于具有一 个或一个以上Y染色体的个体或细胞群 。
（1）系谱中常常只有男性患者
（2）父母都无病时，女儿则不会发病，儿子可能 发病；
（3）由于交叉遗传，患者的同胞、舅舅、姨表兄 弟、外甥常常为本病患者；
（4）由于男性患者的子女都正常，故可见隔代遗 传；
（5）女性患者的父亲一定是患者,母亲一定是携带 者。
注：在XR病中，男性的致病基因只能从母亲传来， 将来只能传给女儿，不存在从男性向男性传递。即 父传女，母传子，称为交叉遗传
Dys 基因表达的缺乏会影响DAPC 的形成，使分子 桥中断，至少导致两个结果：第一，细胞膜变得 更脆弱在肌肉离心性收缩的时候会被机械力破坏； 第二，框架蛋白，尤其是对机械力敏感的离子通 道将会失调。这就是导致疾病的发生机制。
DMD 患者约3 0 % 为自发性突变，其余的 为X染色体隐性遗传。在各种类型突变中， 单个或多个外显子缺失突变患者占65% － 70%；无意义或框移造成的点突变占30%， 重复占5% － 15%：故DMD 突变类型主要为 缺失，其特点是Xp21 上外显子缺失的不均 一性。
杜氏肌营养不良症
杜氏肌营养不良(DMD)属于X 连锁隐性遗传病， 是男性中常见的遗传性疾病。发病率约为1/3 500 活男婴，女性多为致病基因携带者，发病者罕见， 且症状较轻。D M D 发病年龄偏小，起病隐袭， 病程长，在男患中症状较重，且病死率高，患者 常常以肌肉的进行性萎缩无力并伴有腓肠肌假性 肥大为特征，多在3,5岁发病，病程进展快，大多 在20岁左右死于心肺衰竭。患儿由卧到站立有特 殊的过程（Gower征），走路为鸭型步态。
1
联合概率 1/2×1/3 1/2
后概率
1/4
3/4
DMD家系图谱
产前诊断有2个时间窗口:首选10~12孕周采集绒毛;次选 为15~18孕周采集羊水。选择绒毛进行产前诊断的理 由有3条
:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突变为主,母源 污染将导致诊断错误,发生血性羊水时若不经培养则直 接导致诊断错误,而绒毛则可通过形态检查准确挑选。
D M D 由抗肌萎缩蛋白（Dys）基因突变 所致，属于进 行性肌营养不良症常见类型。 已证实人类抗肌萎缩蛋白基因定位于X 染色 体短臂上(Xp21.1 － 3)，基因全长约2 220kb， 含79 个外显子，cDNA 长14kb，是目前已知 的最大人类基因。
Dys 和抗肌萎缩蛋白聚糖等蛋白装配在一起形成 抗肌萎缩蛋白的结合蛋白复合物(DAPC)。DAPC 形成了一个穿过肌膜传递信号，连接细胞外基质 和细胞内肌动蛋白骨架的重要结构。
(2)早期诊断:如胎儿受累,处理比较方便(夫妇的知情选择 ),而且万一取材失败或分析中出现问题,还可在稍后时 间取羊水;采集羊水在孕中期,万一发生血性污染则需 进行羊水培养,回旋余地太小,重新取样时间上比较困 难。
(3)成功率高:绒毛提取的DNA质好量多,成功率高。
由于基因突变情况复杂,产前诊断前要进行先证者预分 析,以确定其基因突变细节及父母基因多态性标记是否 提供了杂合状态的信息,以确定在该家系中实行产前诊 断的途径和策略。
DMD为XR遗传病 女性携带者中约有1/3血清肌酐正常 Ⅱ—2为携带者，核型XAXa
假设
Ⅲ-1核型为 Ⅲ-1核型为
XAXa
XAXA
前概率
1/2
1/2
条件概率 1/3
首先应进行家系成员21号染色体上STR标记的分析。
该项检测具备的优点:一是检测21三体综合征,因为在 二次生育时孕妇年龄普遍偏大,生育21三体综合征患儿 的风险大为提高;二是判断是否有母源污染及污染程度 ,有时会出现“胎儿材料”完全是母源的情况;三是核 对所分析的DNA材料是否存在混乱。后两点是导致产 前诊断差错的主要原因。
它是目前用于缺失型DMD诊断最简便最有效的方法, 已成为D/BMD患者基因诊断及产前基因诊断的首选技 术,而且此技术可根据检出缺失外显子是整码还是移码 来判断患者的预后。
多重PCR方法可检测到缺失型男性患者,对女性携带者 及非缺失型突变患者无能为力。目前应用STR-PCR技 术进行连锁分析已成为非缺失型DMD家系连锁分析的 首选技术。
确定胎儿性别
如胎儿为男性,则应针对先证者的基因突变或多态 性标记进行分析,确定胎儿是否获得突变等位基因; 如为女性,则可停止基因诊断,因为女性杂合子通常 不患病。
多重PCR STR-PCR 探针连接多重扩增(MLPA) 变性高效液相色谱(DHPLC) 抗肌萎缩蛋白的免疫组化
DMD是以缺失型突变占基因的突变55%~65%,主要 分布5′端和中央2个缺失热点区,在对其缺失突变热点 区进行基因检测时,可检出至少一半患者。
生物化学诊断
可对血清酶和蛋白质进行定性和定量分析。血清肌
酸激酶（CK）含量在血清酶学检查中最有价值。
基因诊断
直接 诊断
间接 诊断
• 限制性内切酶片段长度多态性(RFLP) • 分子杂交：点印迹 (dot blot) • 斑点杂交(dot and slot hybridization) • 等位基因特异性寡核苷酸杂交(ASO ) • Southern印迹法(Southern blot) • Northern印迹法(Northern blot) • Western印迹法(Western blot) • 聚合酶链反应（PCR）
药物治疗：糖皮质激素治疗是目前唯一被循 证医学证实有效，可延缓DMD病程的药物。 短期口服激素治疗可增强骨骼肌力量和功能， 并可能在更长时间内稳定骨骼肌力量和功能。
基因治疗：利用不直接引起人类疾病，免疫 原性较小的腺相关病毒（AAV）为载体，导 入人工剪裁的Dys基因。
康复治疗、矫形治疗、社会心理治疗等。
细胞遗传学检查 生物化学检查 基因诊断
染色体检查（Байду номын сангаас ,Y） X染色质检查 X染色质的检查可刮取口腔
粘膜、阴道粘膜脱落上皮细胞，亦可采用 绒毛或羊水中胎儿脱落细胞涂片，经硫堇 或甲苯胺蓝染色，在光镜下计数X染色质 数目。
Y染色质检查 Y染色质检查适用于具有一 个或一个以上Y染色体的个体或细胞群 。
（1）系谱中常常只有男性患者
（2）父母都无病时，女儿则不会发病，儿子可能 发病；
（3）由于交叉遗传，患者的同胞、舅舅、姨表兄 弟、外甥常常为本病患者；
（4）由于男性患者的子女都正常，故可见隔代遗 传；
（5）女性患者的父亲一定是患者,母亲一定是携带 者。
注：在XR病中，男性的致病基因只能从母亲传来， 将来只能传给女儿，不存在从男性向男性传递。即 父传女，母传子，称为交叉遗传
Dys 基因表达的缺乏会影响DAPC 的形成，使分子 桥中断，至少导致两个结果：第一，细胞膜变得 更脆弱在肌肉离心性收缩的时候会被机械力破坏； 第二，框架蛋白，尤其是对机械力敏感的离子通 道将会失调。这就是导致疾病的发生机制。
DMD 患者约3 0 % 为自发性突变，其余的 为X染色体隐性遗传。在各种类型突变中， 单个或多个外显子缺失突变患者占65% － 70%；无意义或框移造成的点突变占30%， 重复占5% － 15%：故DMD 突变类型主要为 缺失，其特点是Xp21 上外显子缺失的不均 一性。
杜氏肌营养不良症
杜氏肌营养不良(DMD)属于X 连锁隐性遗传病， 是男性中常见的遗传性疾病。发病率约为1/3 500 活男婴，女性多为致病基因携带者，发病者罕见， 且症状较轻。D M D 发病年龄偏小，起病隐袭， 病程长，在男患中症状较重，且病死率高，患者 常常以肌肉的进行性萎缩无力并伴有腓肠肌假性 肥大为特征，多在3,5岁发病，病程进展快，大多 在20岁左右死于心肺衰竭。患儿由卧到站立有特 殊的过程（Gower征），走路为鸭型步态。
1
联合概率 1/2×1/3 1/2
后概率
1/4
3/4
DMD家系图谱
产前诊断有2个时间窗口:首选10~12孕周采集绒毛;次选 为15~18孕周采集羊水。选择绒毛进行产前诊断的理 由有3条
:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突变为主,母源 污染将导致诊断错误,发生血性羊水时若不经培养则直 接导致诊断错误,而绒毛则可通过形态检查准确挑选。
D M D 由抗肌萎缩蛋白（Dys）基因突变 所致，属于进 行性肌营养不良症常见类型。 已证实人类抗肌萎缩蛋白基因定位于X 染色 体短臂上(Xp21.1 － 3)，基因全长约2 220kb， 含79 个外显子，cDNA 长14kb，是目前已知 的最大人类基因。
Dys 和抗肌萎缩蛋白聚糖等蛋白装配在一起形成 抗肌萎缩蛋白的结合蛋白复合物(DAPC)。DAPC 形成了一个穿过肌膜传递信号，连接细胞外基质 和细胞内肌动蛋白骨架的重要结构。
(2)早期诊断:如胎儿受累,处理比较方便(夫妇的知情选择 ),而且万一取材失败或分析中出现问题,还可在稍后时 间取羊水;采集羊水在孕中期,万一发生血性污染则需 进行羊水培养,回旋余地太小,重新取样时间上比较困 难。
(3)成功率高:绒毛提取的DNA质好量多,成功率高。
由于基因突变情况复杂,产前诊断前要进行先证者预分 析,以确定其基因突变细节及父母基因多态性标记是否 提供了杂合状态的信息,以确定在该家系中实行产前诊 断的途径和策略。