微生物大小的测定及显微镜直接计数法

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实验六微生物大小测定

实验六微生物大小测定

长 宽
结果计算 长μm=平均格数×校正值 宽μm=平均格数×校正值 大小表示:宽μm×长μm
思考题
1、 P51: 思考题2(2) 2、 P113: 思考题1(1) 预习实验七:微生物的生理生化反应
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
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目镜测微尺外观
镜台测微尺外观
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1ml菌液中的总菌数=(5个方格中的总菌数/5)×16×104 稀释倍数

1ml菌液中的总菌数=平均每小格的菌数×400×104× 稀释倍数
本实验中暂规定:计上不计下,计左不计右 即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格 的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中 见图:即本格中计数细胞为3个。
显微镜计数
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显微镜直接计数法
• 利用血球计数板直接在显微镜下计数微生 物的细胞(或孢子)数目 • 优点:直观、快速、操作简便 • 缺点:不能区分死菌与活菌;不适于对运 动细菌的计数;需要相对高的细菌浓度; 个体小的细菌在显微镜下难以观察
计数公式
1ml菌液中的总菌数=(5个方格中的总菌数/5)×25×104× 稀释倍数
目 镜 测 微 尺 放 大
0
10
20
30
40
50
镜 台 测 微 尺 放 大
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目 镜 测 微 尺 的 标 定
目镜测微尺
0 10 20 30 40 50
微生物细胞
镜台测微尺
两条重合线间镜台测微尺的格数 目镜测微尺每格长度/μm = 两条重合线间目镜测微尺的格数 ×10
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
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装目镜测微尺 目镜测微尺的格数标定

微生物直接计数法及测微技术

微生物直接计数法及测微技术

微生物直接计数法及测微技术实验类型:基础学时:4(参考)内容:一、实验目的1.了解血球计数板计数原理,并掌握计数方法。

2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。

二、实验原理显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

因为计数板是一块特别的载玻片。

其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为九个大方格,一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44);另一种是一个大方格分成16个中方格,每个中方格又分成25个小方格,无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。

每一个大方格边长为0.1mm,所以计数室的容积为0.1mm3。

计数时,通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。

然后求出每个中方格的平均值,再乘上25或16,得出一个大方格中的总茵数,再换算成lml菌液中的总菌数。

若设5个中方格中总菌数为N,菌液稀释倍数为M,如果是25个中方格计数板,则计算方法为:lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N·M(个)微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小的测定,需要在显微镜下,借助于特殊的测量工具——测微尺,包括目镜测微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般是将1mm等分为100格,每格长0.01mm(即10pm)。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小,而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。

三、试剂与器材1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。

2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。

四、实验内容1.微生物直接计数法菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板2.微生物测微技术装目镜测微尺→校正→菌体大小测定五、关键步骤及注意事项1.防止加样空气泡产生。

微生物大小的测定报告

微生物大小的测定报告

微生物大小的测定报告微生物大小的测定报告微生物是生物界中一类非宏观、非个体、非生物和非细胞的微小生物的总称。

它们具有体积小、数量大、分布广、种类多、生命力旺盛等特点,与人类的生产、生活密切相关。

微生物大小的测定是微生物学研究中的一项基本技术,对于了解微生物的种类、生长和繁殖等方面具有重要意义。

本文将详细介绍微生物大小的测定方法、测定步骤以及结果分析等方面的内容。

一、测定方法微生物大小的测定方法有很多,如显微测量法、压滤法、离心法等。

其中,显微测量法是最常用的一种方法,其原理是利用显微镜对微生物的大小进行直接测量。

具体步骤如下:1.准备显微镜、血球计数板、盖玻片、吸管等实验器材。

2.用吸管吸取一定量的微生物培养液,轻轻滴在血球计数板上,然后盖上盖玻片。

3.在显微镜下观察并计数,记录每个视野中的微生物数量和大小。

4.重复以上步骤多次,求平均值,即可得到微生物的平均大小。

二、测定步骤1.准备试剂和器材(1)试剂:无菌水、生理盐水、无菌玻璃珠、无菌平皿等。

(2)器材:移液器、无菌吸管、无菌涂布器、无菌镊子、电子天平等。

2.制备菌悬液(1)用电子天平称取适量的细菌干粉,加入无菌生理盐水,摇匀。

(2)用移液器吸取上述菌悬液,加入无菌平皿中,加入无菌玻璃珠,摇匀。

(3)用无菌涂布器将上述菌悬液涂布到平皿表面,静置片刻,让细菌贴壁生长。

3.测定菌落大小(1)在上述平皿中加入无菌水,让水面覆盖平皿表面。

(2)用无菌镊子将平皿翻转,让细菌接种到无菌水表面,涂布均匀。

(3)静置约30分钟,让细菌形成单个菌落。

(4)用游标卡尺测量每个菌落的大小,记录数据。

4.数据处理和分析(1)对每个平皿中的菌落数量和大小进行统计,求出平均值。

(2)将平均值与对照组进行比较,判断细菌的生长情况。

三、结果分析通过上述测定步骤,我们得到了微生物的大小数据。

根据数据可以得出以下结论:1.同一时间内,不同微生物的大小有差异。

例如,细菌和原生动物的大小相差很大,这与它们的生物学特性有关。

微生物大小的测定及显微镜直接计数法

微生物大小的测定及显微镜直接计数法

微生物大小和数量的测定一、目的要求1.学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。

2.增强微生物细胞大小的感性认识。

3.了解血球计数板的构造、明确其计数原理。

4.学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。

二、基本原理l.显微测微尺显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小,包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。

目镜测微尺(图1)是一块可放入接目镜内的圆形小玻片,其中央有精确的等分刻度,有等分为50小格和100小格两种。

测量时,需将其放在接目镜中的隔板上,用以测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同,目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。

因此,用目镜测微尺测量微生物大小时,必须先用镜台测微尺进行校正,以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数,即可计算出细胞的实际大小。

镜台测微尺全长1mm,等分为100格,每格0.01mm。

用于校正目镜测微尺每小格的长度.目镜测微尺每格长度(μm)=两重合线间镜台测微尺格数×10两重合线间目镜测微尺格数2.表示方法球菌用直径来表示其大小;杆菌则用宽和长的范围来表示。

如金黄色葡萄球菌直径约为0.8µm,枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3µm。

图1:目镜测微尺和镜台测微尺3.显微直接计数法:将小量待测样品悬浮液置于计菌器上,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如酵母、细菌、霉菌孢子等。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板或Hawksley计数板。

三种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。

实验九 微生物的大小及数量测定

实验九    微生物的大小及数量测定
实验九 微生物的大小及数量测定
摘要
通过显微测微尺测量酿酒酵母的长和宽, 对其细胞体的大小有一个具体的了 解; 使用血球计数板对稀释 n 倍的酵母菌悬液进行细胞数量的测定,从而达到定 量了解微生物的生长繁殖情况。
关键词
目镜测微尺 物镜测微尺 血球计数板
前言
微生物细胞的大小, 是微生物重要的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之 一, 也让我们对微生物的实际大小有了一个感性的认识。微生物数量的测定在微 生物生长曲线中运用非常重要, 我们从微生物的数量上了解其生长状况,这也能 指导我们的工业生产。
用此法分别校正在物镜倍数为 10×,40×,100×下目镜测微尺每小格所代 表的长度。 注意事项 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同, 因此校正目镜测微尺必须针对特定 的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度)进行,而且只能在特定的情况 下重复使用, 当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每 一格所代表的长度。 B 酵母大小的测定 1) 制片:在载玻片中央滴一滴蒸馏水,用接种针在酵母菌悬液中蘸一下,涂 到蒸馏水中,干燥固定(自然干燥或在酒精灯上方来回移动载玻片),用孔 雀绿染液覆盖涂菌部位 1.5min—2min,自来水冲洗掉孔雀绿染液,对载玻片 进行干燥。 2)酵母大小测定:移去镜台测微尺,换上酵母菌装片,先在低倍镜下找到目的 物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长,宽各占几格(不 足一格的部分估计到小数点后一位数)。测出的格数乘上目镜测微尺每格的 校正值,即等于该菌的长和宽。 3)由于不同细胞之间存在个体差异, 在测定菌体细胞大小时随机选取三个细胞进 行测量,然后计算平均值。 4)同样的方法,分别在 40 倍物镜和油镜下测定酵母菌的大小。 注意事项 测量菌体大小时要在同一个标本片上测定 3 个大小相近的菌体, 求出平均值, 才能代表该菌的大小。而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。 测量完毕后取出目镜测微尺,将接目镜放回镜筒,再将目镜测微尺和镜台测 微尺分别用擦镜纸擦拭干净,放回盒内保存。 2、酵母菌数量测定 (1)取洁净的血球计数板一块,在计数室上盖上一块盖玻片。 (2)将酵母菌菌悬液充分摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽 内沿盖玻片的右上角滴入一小滴(不宜过多),使菌液沿两玻片之间自行渗入 计数室,勿使产生气泡,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。 (3)先在低倍镜下找到计数室后,再转换高倍镜观察计数。 (4)计数时用 25 中格的计数板,要取上、下、左、右、中的 5 个中格(即 80 小格) 的酵母菌数。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置,要在不同的焦距下 才能看到,因而观察时必须不断调节微调螺旋,方能数到全部菌体,防止遗 漏。 如菌体位于中格的双线上, 计数时则数上线不数下线, 数左线不数右线, 以减少误差。 (5)样品最好重复计数 2-3 次(每次数值不应差过大,否则应重新操作),取其平 均 值 , 按 下述 公 式 计算 出 每 毫 升菌 液 所 含酵 母 菌 细 胞数 ( 25 中 格 ) 。

微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定

微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
1.酵母菌细胞总数测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下,从低倍找到计数器位 置,不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀,用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让 其自行渗透,使室充满(不宜过多,也不可有气泡)。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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(3)静止3-5分钟,先在低倍镜观察,然后换成高倍 镜进行计数。样品不宜太浓或太稀,最好每小格 控制在5-10个菌体为宜,计数需要重复二次。取 平均值。先后二次误差太大,需再重复计数。
2.微生物大小测定
பைடு நூலகம்
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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三、器材
显微镜;血球计数板;手揿计数器;盖玻片; 目镜测微尺;镜台测微尺。
酵母菌菌悬液; 枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
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四、操作步骤
在计数时,通常以五个中方格总菌数(每个中方格中数四 个小方格)即20个小方格总菌数(求平均值)。
比如:设20个小方格中总菌数为A,悬液稀释度B,那么 大格(0.1立方毫米总菌数) A/20×400×B。
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
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六、思索题
1、依据你体会,用血球计数板误差主要来自 那些方面?应怎样防止误差,力争准确?
2、当接目镜不变,目镜测微尺也不变,只改 变接物镜,目镜测微尺每格所量镜台上物体 实际长度是否相同?为何?

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小测定一、实验目得了解目镜测微尺与镜台测微尺得构造与使用原理,掌握微生物细胞大小得测定方法. 二、实验原理微生物细胞得大小就是微生物重要得形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小得工具有目镜测微尺与镜台测微尺。

目镜测微尺(图-1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10 mm长度刻成100等分。

测量时,将其放在接目镜中得隔板上(此处正好与物镜放大得中间像重叠)来测量经显微镜放大后得细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合得放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示得长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上得镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表得相对长度.镜台测微尺(图20-2)就是中央部分刻有精确等分线得载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0、0lmm),就是专门用来校正目镜测微尺得.校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜得两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数得放大而放大,因此从镜台测微尺上得到得读数就就是细胞得真实大小,所以用镜台测微尺得已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表得长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好得目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草杆菌(Baccillussubtili s)染色标本片。

2。

器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。

四、实验方法1.目镜测微尺得校正把目镜得上透镜旋下,将目镜测微尺得刻度朝下轻轻地装入目镜得隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上.先用低倍镜观察,对准焦距,视野中瞧清镜台测微尺得刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺得刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺得“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合得刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺得格数与镜台测微尺得格数.因为镜台测微尺得刻度每格长l0μm,所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表得长度.例如目镜测微尺5小方格正好与镜台测微尺5小方格重叠,已知镜台测微尺每小方格为l0μm,则目镜测微尺上每小方格长度为=5×10μm/5=10μm用同法分别校正在高倍镜下与油镜下目镜测微尺每小方格所代表得长度。

实验1微生物细胞大小测定及显微镜直接计数法26页文档

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实验1微生物细胞大小测定及显微镜直
接计数法
21、没有人陪你走一辈子,所以你要 适应孤 独,没 有人会 帮你一 辈子, 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候,留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运,首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首,因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿. 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ,它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ,以便 让别一 只脚能 够再往 上登。

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺与镜台测微尺的构造与使用原理,掌握微生物细胞大小的测定方法。

二、实验原理微生物细胞的大小就是微生物重要的形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺与镜台测微尺。

目镜测微尺(图-1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10 mm长度刻成100等分。

测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。

镜台测微尺(图20-2)就是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0、0lmm),就是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜的两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就就是细胞的真实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草杆菌(Baccillus subtilis)染色标本片。

2.器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。

四、实验方法1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下,将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上。

先用低倍镜观察,对准焦距,视野中瞧清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数与镜台测微尺的格数。

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告篇一:显微镜直接计数法实验报告显微镜直接计数法一、实验目的1、明确血细胞计数板计数原理;2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理利用血细胞计数板在显微镜下直接计数,是一种常用的微生物计数方法。

此法的优点是直观、快速。

该计数板(构造如图1所示),是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间的大方格即为计数室,微生物的计数就在计数室中进行。

计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格。

所以无论是哪种规格的计数板,每一个大方格中的小方格数都是相同的即共有400个小格。

2每一个大方格边长为1㎜,则每一大方格的面积为1㎜,盖上盖玻片后,载玻片与盖3玻片之间的高度为㎜,所以计数室的容积为㎜。

其计算方法如下:设5个中方格中的总菌数为A,菌液稀释倍数为B 1.16×25的计数板计算公式细胞数/ml=×16×10000×B=32000AB 个2.25×16的计数板计算公式细胞数/ml=×25×10000×B=50000AB 个三、实验器材(1)菌悬液:酵母菌悬液(2)其他物品:血球计数板,显微镜,盖玻片,无菌毛细管等。

四、实验步骤1.稀释:将酵母菌悬液进行适当稀释,菌液如不浓,可不必稀释。

(一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜)2.镜检计数室:在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。

若有污物,则需清洗后才能进行计数。

3.加样品:将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,静置5—10分钟即可计数。

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造和使用原理,掌握微生物细胞大小的测定方法。

二、实验原理微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺(图-1)是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10 mm长度刻成100等分。

测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。

镜台测微尺(图20-2)是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0.0lmm),是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置,都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草杆菌(Baccillus subtilis)染色标本片。

2.器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。

四、实验方法1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下,将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上。

先用低倍镜观察,对准焦距,视野中看清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小的测定方法

微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造和使用原理,掌握微生物细胞大小的测定方法。

二、实验原理微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺(图-1)是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10mm长度刻成100等分。

测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。

镜台测微尺(图20-2)是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0.0lmm),是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置,都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、枯草杆菌(Baccillussubtilis)染色标本片。

2.器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。

四、实验方法1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下,将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上。

先用低倍镜观察,对准焦距,视野中看清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。

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微生物学实验报告
题目:微生物大小的测定及显微镜直接计数法
姓名:学号:年级班级:组别:
同组者:时间:
【目的要求】
1.学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。

2.了解血球计数板的构造、明确其计数原理。

3.学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。

【基本原理】
l.测微尺的构造:显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成目镜测微尺是一块圆形玻璃片,其中有精确的等分刻度,在5mm 刻尺上分50 份。

目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变,因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。

镜台测微尺为一专用的载玻片,中央有精确等分线将长为1mm 的直线等分成100 个小格,每格长10μm,专用于校正目镜测微尺。

2.球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示
图一:测微尺的校正
3.显微直接计数法:将小量待测样品悬浮液置于计菌器上,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如酵母、细菌、霉菌孢子等。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petrof Hausser)细菌计数板或Hawksley计数板。

三种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚,不能使用油镜,计数板下部的细菌不易看清。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间较宽的平台,被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格。

计数区由400个小方格组成。

每个大方格边长为1mm,其面积为lmm2,盖上盖玻片后,盖载玻片间的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3。

使用血球计数板计数时,通常测定五个中方格的微生物数量,求其平均值,再乘以25或16,就得到一个大方格的总菌数,然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。

设5个中方格中的总菌数为A,菌液稀释倍数B,则:
1mL菌液中的总菌数= A
5×25×10
4×B=5×104×A·B (25个中格)
= A
5×16×10
4×B=3.2×104×A·B(16个中格)
【实验器材】
1.菌种:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),枯草芽孢杆菌(Bacillus subitilis)
2.仪器、材料:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸、香柏油、血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、无菌滴管等。

【操作步骤】
1.微生物大小的测定。

(1)目镜测微尺的安装
把目镜的上透镜旋开,将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上,使有刻度的一面朝下。

旋上目镜透镜,再将目镜插入镜筒内。

(2)校正目镜测微尺
将镜台测微尺放在显微镜的载物台上,使有刻度的一面朝上。

先用低倍镜观察,调焦距,待看清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行,利用推进器移动镜台测微尺,使两尺在某一区域内两线完全重合,然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数(图一)。

用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正,分别测出在高倍镜和油镜下两重合线之间两尺分别所占的格数。

由于已知镜台测微尺每格长10μm,根据下列公式即可分别计算出在不同放大倍数下,目镜测微尺每格所代表的长度。

目镜测微尺每格长度(μm)= 两重合线间镜台测微尺格数×10两重合线间目镜测微尺格数
(3)菌体大小的测定
将镜台测微尺取下,换上细菌染色制片,先在低倍镜和高倍镜下找到目的物,然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。

先量出菌体的长和宽占目镜测微尺的格数,再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。

值得注意的是,和动植物一样,同一种群中的不同菌体细胞之间也存在个体差异,因此在测定每一种菌种细胞大小时应对多个细胞进行测量,然后计算取平均值。

2.显微镜计数。

(1)无菌生理盐水适当稀释制备酿酒酵母菌悬液。

(2)镜检血球计数板。

(3)加样品。

血球计数板盖上盖玻片,将酵母菌悬液摇匀,用无菌滴管吸取少许,从计数板平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一滴,利用表面张力沟槽中流出多余的菌悬液。

加样后静置5min,使细胞或孢子自然沉降。

(4)将加有样品的血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。

若发现菌液太浓或太稀,需重新调节稀释度后再计数。

一般样品稀释度要求每小格内有5~10个菌体为宜。

每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数。

若有菌体位于格线上,则计数原则为计上不计下,计左不计右。

如遇酵母出芽,芽体大小达到母细
胞的一半时,即作为两个菌体计数。

计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。

(5)清洗。

使用完毕后,将血球计数板及盖玻片进行清洗、干燥,放回盒中,以备下次使用。

【实验结果】
【思考题】
1.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?
答:因为在不同放大倍数的目镜或物镜下,目镜测微尺每格代表的长度会发生变化。

2.在不改变目镜和目镜测微尺,而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时,其测定结果是否相同?为什么?
答:相同。

因为用不同的物镜时都重新校正目镜测微尺,目镜测微尺每格代表的长度可按照重新校正的数据计算。

3.哪些因素会造成血球计数板的计数误差,应如何避免?
答:器材处理、使用不当,稀释不准确,细胞识别错误等因素所造成的误差;由于仪器(计数板、盖片、吸管等)不够准确与精密带来的误差;由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差。

前两者可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正;细胞分布误差可通过多次计数取平均值来减小。

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