动物细胞工程 知识点
动物细胞工程复习课
7.体细胞核移植技术还存在什么问题？ ①成功率非常低； ②绝大多数克隆动物还存在健康问题
9.过程：
取供体细胞 供体细胞培养 取卵母细胞 培养到 MⅡ中期
卵母细胞去核
5.原代培养与传代培养有何区别 ? 将动物组织消化后的初次培养就是原代培养。 当原代培养的细胞贴满瓶壁后，用胰蛋白酶处理， 制成细胞悬浮液后再次分瓶继续培养就是传代培养 6.动物体细胞培养技术能将一个分化的体细胞培养 成为一个动物体吗？为什么？ 不能，因为高度分化的动物细胞丧失了发育成动 物体的能力。 7.为什么要将组织分散成了单个细胞再进行培养？ 单个细胞容易和周围环境进行物质交换——获得 营养物质、氧气等，排出代谢废物；
治疗性克隆（P49） 需要胚胎移植吗？
克隆人与治疗性克隆的区别
属于个体水平，目的产生新个体，而治疗性克 隆则属于细胞（或组织、器官）水平，目的是 治疗疾病。
动物细胞融合技术
1.过程：
动物细胞 A 动物细胞 B 诱导方法 成功标志
诱导，融合 （膜融合、质融合） 2个完整的 杂交细胞AB 有丝分裂 （核融合）
2.单克隆抗体的应用：
单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高
１.作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质， 并与抗原特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速 2.用于 治疗疾病：主要用于癌症治疗 运载药物：制成“生物导弹” 优点:疗效高、毒副作用小
免疫 经过免疫的 注射抗原 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 ：
注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放 在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细 胞
(完整版)动物细胞工程知识点
动物细胞工程12月20日动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
2、原理：细胞增殖3、过程分散成单个细胞，制成细胞悬液注意：①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。
②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。
③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。
思考回答：⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。
⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?答：不需要。
因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。
⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答：主要是蛋白质，不行，因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2，当ＰＨ大于6时就会失去活性，多数动物细胞培养适宜PH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。
（胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2－8.4，胰蛋白酶活性较高）⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。
⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体4、重要概念①细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
动物细胞工程知识点总结
动物细胞工程知识点总结动物细胞工程是一门综合性的学科，主要研究分子生物学、细胞生物学、生物工程学等方面的知识，旨在利用现代生物技术，对动物细胞进行精细的操作和调控，实现生物制品的高效生产和治疗的有效手段。
动物细胞工程的主要内容包括：细胞培养、基因修饰、蛋白质表达、生物传感、干细胞研究、组织工程、基因治疗等等。
其中，细胞培养是动物细胞工程的基础和核心，是实现其他学科研究的前提和保障。
细胞培养技术涉及多种类型的细胞，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、鸟类细胞等。
常见的细胞培养方式有两种：悬浮培养和贴壁培养。
对于悬浮培养的细胞，需要在旋转式生物发酵罐或气泡式生物反应器中进行培养，而贴壁培养的细胞则需要一定的基础培养物和培养基来维持其生长和分化。
在细胞培养基础上，基因修饰技术可以通过外源DNA的导入或内源DNA的编辑，实现对目标细胞的基因表达的精准调控。
此外，蛋白质表达技术也是动物细胞工程的重要内容，可通过转染、转化或质粒转移等方式，将外源基因表达特定的蛋白质，实现蛋白质的高效合成和分泌。
生物传感技术是近年来兴起的一个领域，研究通过特定的生物材料或生物反应器件，实现对生物大分子的定量检测和分析，有望实现临床诊断的快速、准确、便捷化。
干细胞研究是动物细胞工程的前沿领域，主要研究人类和动物的干细胞的分化和再生能力，为组织工程、再生医学等领域提供基础和支持。
组织工程技术是一种将干细胞和生物材料结合起来，制作出复杂的组织器官或人工器官的新兴技术。
目前研究较为广泛的组织工程重要领域包括人工骨、人工关节、人工角膜等。
基因治疗技术则是动物细胞工程的又一重要领域，通过应用基因编辑、载体输送等技术，实现基因和细胞的治疗效果，是目前治疗癌症、糖尿病、血友病等疾病的新希望。
总之，动物细胞工程在医学、生物科学、生物工程等各个领域有着广泛的应用和重要作用，它的发展有助于图谱生命科学的未来，为人类的健康事业和生物科学的发展做出新的贡献。
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的概念与发展动物细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的遗传操作，以获得人们所需要的新的生物类型或细胞产品的一门综合性技术。
它的发展可以追溯到 20 世纪初，随着细胞培养技术的不断进步，动物细胞工程逐渐成为现代生物技术的重要组成部分。
从最初的简单细胞培养，到如今复杂的细胞融合、细胞核移植等技术，动物细胞工程在生物制药、医学、农业等领域都发挥着越来越重要的作用。
二、动物细胞工程的基本技术1、动物细胞培养这是动物细胞工程的基础技术。
细胞培养需要在无菌、适宜的温度、pH 值和营养条件下进行。
首先要获取动物组织或细胞，经过处理后接种到培养瓶或培养皿中，添加合适的培养基。
培养基中包含细胞生长所需的营养物质、生长因子等。
在培养过程中，要定期观察细胞的生长状态，及时更换培养基，以保证细胞的正常生长和分裂。
2、动物细胞融合通过物理、化学或生物的方法，使两个或多个动物细胞融合成一个杂种细胞。
常用的方法有电融合法、化学融合法和病毒介导融合法。
细胞融合技术可以打破物种之间的界限，创造出新的细胞类型，为生物制药和疾病治疗提供了新的途径。
3、细胞核移植将一个细胞的细胞核移植到另一个去核的细胞中，使其重新发育成一个完整的个体。
细胞核移植技术在克隆动物的培育中具有重要意义，例如著名的多利羊就是通过细胞核移植技术诞生的。
4、动物细胞克隆包括胚胎细胞克隆和体细胞克隆。
胚胎细胞克隆是指将早期胚胎的细胞分离出来，进行培养和克隆。
体细胞克隆则是将成年动物的体细胞进行核移植，培育出克隆个体。
三、动物细胞工程的应用1、生物制药利用动物细胞培养技术生产各种生物制品，如疫苗、抗体、蛋白质药物等。
例如，通过培养哺乳动物细胞来生产单克隆抗体，用于疾病的诊断和治疗。
2、医学领域在器官移植方面，通过细胞工程技术可以培育出人造器官或对器官进行修复和改造。
在疾病治疗方面，细胞免疫治疗是一种新兴的治疗方法，通过改造患者自身的免疫细胞来对抗肿瘤等疾病。
生物复习教案：专题考点二动物细胞工程
错误!基础点1 动物细胞培养：其他动物细胞工程技术的基础.（1）过程（2）条件①无菌、无毒的环境——无菌处理、加抗生素杀菌、定期更换培养液。
②营养—-葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐和微量元素＋血清或血浆等天然成分.③适宜的温度(36。
5±0。
5 ℃)和pH(7.2～7。
4）。
④气体环境——95%空气＋5％CO2(维持培养液的pH）。
（3）应用：生产细胞产品，如干扰素、疫苗、单克隆抗体;检测并判断某毒性物质毒性的大小;临床医学研究。
2 动物体细胞核移植（1）原理:动物细胞核具有全能性.（2)过程3 单克隆抗体制备（1)诱导动物细胞融合的方法:物理法——离心、振动、电激等；化学法--聚乙二醇；生物法——灭活的病毒.(2)单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。
(3)单克隆抗体的应用：作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物。
4 生物技术中的伦理问题(1）克隆人①分类a．生殖性克隆是指以繁殖个体为目的，即用于产生人类个体。
b．治疗性克隆是指利用核移植技术获得克隆人胚胎,然后从胚胎中提取干细胞进行医学研究,是利用克隆技术产生特定细胞和组织(皮肤、神经或肌肉等）用于治疗性移植.②中国政府态度：禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆.(2）试管婴儿与设计试管婴儿①试管婴儿：运用体外受精和胚胎移植技术繁殖个体，目的是解决不孕夫妇的生育问题.②设计试管婴儿：体外受精获得的胚胎在移植前进行遗传学诊断，以便筛选出符合特定要求的胚胎。
注意点生殖性克隆和治疗性克隆的比较项目生殖性克隆治疗性克隆区别目的用于生育、产生新个体治疗人类疾病水平个体水平细胞水平联系都属于无性生殖；产生新个体或新组织，遗传信息相同重难点1 动物细胞培养与动物体细胞核移植续表动物细胞培养动物体细胞核移植应用①生产生物制品②用于基因工程③检测有毒物质①加速家畜遗传改良进程，促进良种繁育②保护濒危物种③生产医用蛋白④提供克隆器官、组织等易错警示动物细胞培养和核移植技术的理解误区(1）动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶的作用不同：第一次用胰蛋白酶处理剪碎的组织使之分散成单个细胞，第二次使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来。
动物细胞工程知识整理
＿＿＿培养 ② 单个细胞 细胞悬液 培养 接触抑制 动物细胞 ① 细胞培养 供体 体细胞 ＿＿＿＿＿＿ 卵巢卵 母细胞 减 Ⅱ中 期 去核 无核卵母细胞 注 入 ＿＿＿＿＿＿ 发 育 胚 胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体遗传 物质相同的个体动物细胞工程要点梳理一、动物细胞培养1．概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成＿＿＿＿＿＿＿，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和＿＿＿＿＿。
2．过程：注：①②代表的是＿＿＿＿＿＿或胶原蛋白酶。
10～50代的细胞群叫细胞株。
50代以后的细胞群叫＿＿＿＿＿。
3．条件：（1）无菌、无毒的环境：培养液应进行＿＿＿＿＿处理。
（2）营养（合成培养基成分）：糖类、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素，通常需加入＿＿＿、血浆等。
（3）温度：适宜温度36.5±0.5 ℃；pH ＿＿＿＿。
（4）气体环境：空气95%，＿＿＿5%。
4．应用：如病毒疫苗、干扰素、＿＿＿＿＿。
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1．动物体细胞核移植：将一个动物细胞的＿＿＿＿＿移入一个去核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体。
2．种类：（1）体细胞核移植：难。
（2）＿＿＿＿＿移植：易。
3．过程：4．应用：（1）加速家畜＿＿＿＿改良进程，促进＿＿＿＿＿繁育。
（2）保护濒危物种。
（3）生产＿＿＿＿＿＿。
（4）作为异种移植的＿＿＿＿。
（5）用于组织器官的移植。
5．问题：克隆动物存在＿＿＿＿＿、生理缺陷、＿＿＿＿＿等。
三、动物细胞融合不同＿＿＿＿＿的两个细胞灭活的病毒PEG杂交细胞选择B淋巴细胞抗原刺激骨髓瘤细胞克隆检测＿＿＿＿＿浆细胞杂交瘤细胞单克隆抗体B－B细胞瘤－瘤细胞杂交瘤细胞体外培养1．概念：＿＿＿＿＿＿动物细胞结合形成一个细胞的过程，又叫细胞杂交。
2．结果：形成＿＿＿＿细胞。
3．过程：4．意义：克服了＿＿＿＿杂交的不亲和性。
四、单克隆抗体1．抗体的产生：＿＿＿＿＿＿产生的抗体具有特异性。
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的概念动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的操作，以获得人们所需要的生物产品或细胞本身。
它是现代生物技术的重要组成部分，涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植等多个方面。
二、动物细胞培养（一）基本原理细胞培养的基本原理是细胞的增殖。
细胞在适宜的环境中，能够吸收营养物质，进行新陈代谢，并通过分裂增加数量。
（二）培养条件1、无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还会添加一定量的抗生素，以防止培养过程中的污染。
2、营养物质：包括糖、氨基酸、无机盐、维生素等，这些物质要按照细胞所需的种类和量进行精确配置。
3、适宜的温度和 pH：哺乳动物细胞的培养温度一般在 365℃左右，pH 则在 72 74 之间。
4、气体环境：细胞培养所需的气体主要有氧气和二氧化碳，氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则用于维持培养液的 pH。
（三）培养过程1、取材：通常从动物的组织或器官中获取细胞，如从胚胎或幼龄动物的器官组织中获取细胞，其分裂能力更强。
2、原代培养：将取得的组织用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，然后制成细胞悬液，放入培养瓶中培养。
3、传代培养：当细胞贴满瓶壁时，需要用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱落下来，然后分瓶继续培养。
三、动物细胞融合（一）概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
（二）诱导融合的方法1、物理法：如电激融合法。
2、化学法：常用的诱导剂是聚乙二醇（PEG）。
3、生物法：如灭活的病毒。
（三）应用1、制备单克隆抗体：这是动物细胞融合技术最突出的应用。
2、用于基因定位和染色体转移等研究。
四、单克隆抗体（一）概念单克隆抗体是由单个 B 淋巴细胞经过无性繁殖形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
（二）制备过程1、给小鼠注射特定的抗原，使其发生免疫反应，产生能分泌特定抗体的 B 淋巴细胞。
动物细胞工程
动物细胞工程第一章动物细胞工程概论一、动物细胞工程的概念1.动物细胞工程的定义动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的技术方法对动物细胞进行各种操作并使其在体外生长、增殖、分化以生产有用产品或引向成体化（产生新型生物个体）的技术体系，是生物技术（生物工程）的重要组成部分。
狭义细胞工程指对细胞个体进行的各种操作，广义的细胞工程包括对细胞、组织、器官所进行的各种操作。
2.动物细胞工程研究的主要内容以狭义细胞工程为主，兼顾组织、器官工程等内容的研究。
(1)狭义细胞工程：研究体外分离、培养、增殖、分化动物细胞的条件以及保存、操作及利用动物细胞的工艺技术体系。
(2)组织工程：研究体外培养、增殖动物组织的条件以及保存、操作及利用动物组织的工艺技术体系。
(3)器官工程：研究体外培养、增殖器官的条件以及保存、操作及利用动物器官的工艺技术体系。
(4)动物胚胎工程：研究动物胚胎生产、保存、操作及移植的工艺技术体系。
3.动物细胞工程研究的意义(1)是动物繁殖的重要技术手段加快动物繁殖速度：A.体外受精生产胚胎 B.胚胎移植生产动物(2)是人类辅助生殖技术的重要组成部分体外受精—胚胎移植技术，可以克服雄性不育和雌性不孕；(3)是动物遗传育种的重要技术手段对精子或卵子进行遗传操作，或利用细胞融合、胚胎嵌合技术可以使若干个动物性状进行有机组合，产生新的生物个体；(4)生产药物直接培养细胞或组织，从细胞或组织代谢物中直接获得药物;对细胞进行遗传操作，生产转基因动物，利用转基因动物生产药物（生物反应器）；(5)保存珍惜动物资源由于动物克隆技术的成功，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生命个体，保存细胞、组织、胚胎，就意味着保存一个生物种群(6)提供人类器官移植的材料人类器官移植发展很快，目前可以进行心脏、肝、肾脏移植，可以进行皮肤、角膜、骨髓细胞移植。
三、动物细胞工程讲授的主要内容1.动物细胞、组织培养2.动物细胞融合3.动物细胞重组4.向细胞内引入高分子物质5.动物细胞冷冻保存6.动物胚胎工程四、动物细胞工程实验（实习）内容1.实验仪器设备的识别与使用2.动物细胞培养用液的制备3.动物胎儿成纤维细胞分离与培养4.动物细胞常规检查和生物学检测5.培养细胞的冻存与复苏五、动物细胞工程研究取得的重要进展1.精液采集、精液冷冻与人工授精技术的成熟和发展，为充分发挥利用雄性动物生殖潜力奠定了基础；2.雌性动物卵母细胞体外成熟培养技术的成功，使人们在体外完成动物生殖过程成为可能；3.体外受精与胚胎移植技术的成功，产生了试管婴儿，试管牛，试管猪，试管山羊，试管兔；4.细胞核移植技术的成功，使人们克隆高等哺乳动物的梦想得以实现体细胞核移植、胚胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植技术的成功，为克隆动物和转基因动物生产提供了技术支撑；5.胚胎干细胞与组织干细胞成功分离、体外扩增与诱导分化研究的成功，为人类医学发展提供了宝贵的材料；胚胎干细胞，胰腺干细胞，神经干细胞，骨髓干细胞，皮肤干细胞，角膜干细胞6.转基因细胞（细胞转染基因）技术的成功，为转基因动物的生产创造了条件；7.胚胎嵌合技术一种或两种动物胚胎共同生长发育形成一个生物个体的技术，即在一个生物体内，含有来源于两个不同胚胎的细胞和组织；8.细胞融合技术将两种或两种以上的细胞融合，形成一个具有新性状的细胞，这种技术称为细胞融合技术。
《动物细胞工程》 讲义
《动物细胞工程》讲义一、动物细胞工程的定义和范围动物细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，在细胞水平上进行的遗传操作以及细胞和组织培养技术，以改造细胞、创造新的生物品种或生产生物产品的一门综合性科学技术。
其范围涵盖了细胞培养、细胞融合、细胞核移植、胚胎移植、细胞重组、转基因动物等多个方面。
二、动物细胞培养技术（一）基本原理细胞培养是动物细胞工程的基础，其原理是细胞具有分裂和生长的能力。
在适宜的条件下，细胞可以不断增殖并保持一定的生理特性。
（二）培养条件1、无菌环境：防止微生物污染是细胞培养成功的关键。
2、合适的培养基：包含细胞生长所需的营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐等。
3、适宜的温度和 pH：一般来说，培养温度在 37℃左右，pH 在 72 74 之间。
4、气体环境：通常需要 95%的空气和 5%的二氧化碳，二氧化碳用于维持培养基的 pH 稳定。
（三）培养过程1、取材：从动物体内取出组织或器官，进行处理以获得单细胞。
2、原代培养：将获得的细胞直接培养，这是细胞培养的第一代。
3、传代培养：当原代培养的细胞生长到一定密度时，进行分瓶培养。
（四）应用1、生物制品的生产，如疫苗、抗体等。
2、细胞生物学和分子生物学的研究。
3、药物筛选和毒性测试。
三、细胞融合技术（一）原理细胞融合是指两个或多个细胞通过物理、化学或生物方法融合成一个杂种细胞的过程。
其原理基于细胞膜的流动性。
（二）方法1、病毒诱导融合：使用某些病毒，如仙台病毒，促使细胞膜融合。
2、化学诱导融合：常用的化学试剂有聚乙二醇（PEG）。
3、电融合：通过电场作用使细胞排列紧密接触，进而融合。
（三）应用1、单克隆抗体的制备：将免疫小鼠的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，分泌单克隆抗体。
2、细胞遗传和细胞免疫的研究。
四、细胞核移植技术（一）原理细胞核移植是将一个细胞的细胞核移植到另一个去核的细胞中，使其发育成一个新的个体。
这基于细胞核的全能性，即细胞核包含了生物体发育所需的全部遗传信息。
动物细胞工程学资料(整理)
基本概念部分动物细胞工程学：指以动物细胞或其组成成分为研究对象，以细胞生物学、发育生物学、生殖生物学和分子生物学的理论和技术为基础，结合工程学原理和技术，对细胞或其组分进行操作、加工或改造，使其按照所规定目的发生结构或功能等生物学特性的改变，获得人类所需的生物产品或创造新的动物品种的一门综合性技术科学。
原代培养：期也称为初代培养期，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1～3周。
传代培养：在瓶皿内生长的细胞增殖到一定密度后，需要重新悬浮在培养液中，经稀释后接种到新的瓶皿中培养，否则将影响细胞的继续生存的这一过程。
细胞培养：指单个细胞或离散的细胞群在体外生长增殖，并维持一定结构和功能的培养技术。
组织培养：指组织中不同类型的细胞在体外培养过程中相互依存，并维持一定结构和功能的培养技术。
器官培养：指将动物的某一器官或器官原基取出，在体外维持其生存状态和功能的培养技术。
转化：细胞在体外培养过程中发生与原代细胞形态、抗原、增殖或其他特性的可遗传的变化。
细胞系：初代培养细胞一经传代成功后便改称细胞系。
细胞株：细胞经过克隆培养后，来源于一个共同的祖细胞的后裔细胞群。
克隆形成率：是指细胞被制成分散的悬液，以低密度接种后，当细胞生长增殖并形成细胞小群（克隆）的比率。
细胞分裂指数：指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数目。
细胞融合：在自然或人为条件下，两个或两个以上的细胞相互接触，相继发生膜融合、胞质融合，最终发生核融合，从而形成融合细胞的现象。
细胞杂交：指不同类型的两个或两个以上细胞的融合。
克隆化：一般是指将抗体阳性孔进行克隆。
干细胞：是一群具有无限的或者永生的自我更新能力，至少能够产生一种高度分化的子代细胞的细胞，是个体生命过程中产生和存在的一个特殊细胞群体。
全能干细胞：它具有形成完整个体的分化潜能。
多能干细胞：具有分化出多种组织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。
定向祖细胞：多能干细胞继续向前分化则为此类细胞。
动物细胞工程 知识点汇总
专题2 细胞工程 2.3 动物细胞工程知识点汇总1. 动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。
（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
（4）动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。
此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。
通常需加入血清、血浆等天然成分。
③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。
④气体环境：95%空气+5%CO2。
O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。
（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。
（3）体细胞核移植的大致过程是：高产奶牛（提供体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）（注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达）；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛。
2.2 动物细胞工程
第2章细胞工程第2节动物细胞工程一、动物细胞培养1.概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
2.原理：细胞增殖3.地位：动物细胞工程的基础4.关键操作：原代培养和传代培养。
（一）动物细胞培养的条件1.营养（1）成分①已知成分将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
①未知成分使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分。
（2）培养基的物理性质培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。
2.无菌、无毒的环境①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；①在无菌环境下进行操作；①还需要定期更换培养液。
3.温度、pH和渗透压（1）适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5①为宜。
（2）适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。
（3）适宜的渗透压：维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。
4.气体环境（1）组成：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。
（2）气体作用：①O2：O2是细胞代谢所必需的；①CO2：CO2的主要作用维持培养液的pH。
（二）动物细胞培养的过程①原代培养：将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。
①传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养；①细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁；①接触抑制：当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
1.取动物组织（1）取材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
（2）取材原因：细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。
2.制成细胞悬液（1）制成细胞悬液的步骤：①将组织分散成单个细胞；①用培养液将细胞制成细胞悬液。
（2）将组织分散成单个细胞的原因：①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；①能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
细胞工程(动物部分)
绪论1.细胞培养与组织培养：属于体外培养，是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增值。
细胞的离体培养称为细胞培养，组织的离体培养称为组织培养。
2.细胞融合：又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。
3.细胞核移植：是利用显微镜操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂合细胞的过程。
4.干细胞：是动物体内具有分化潜能、并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。
5.转基因动物：是通过基因工程技术将外源的目的基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
第一章1.细胞工程实验室与其他一般实验室的区别：要求保持严格无菌环境、避免微生物及其他有害因素的影响。
2.细胞工程能进行的六方面工作：无菌操作、培养、制作、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
3.植物细胞工程实验室特殊的设置：光照条件的培养箱、试管苗需要温室和移植驯化室。
4.细胞工程实验室通用的仪器设备：超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、电热干燥箱、水纯化装置、低温装置、高压蒸汽消毒器。
5.实验室的生物安全分为p1，p2 ，p3 和p4四个生物安全等级，其中P4生物安全实验室等级最高。
第二章1.清洗的主要目的是清除培养器皿中的杂质和微生物等影响细胞生长的成分。
2.细胞培养过程中主要使用两类消毒方法:物理灭菌法法和化学消毒法。
物理法灭菌法：a.紫外线法适用于无菌室或超净工作台的台面等大面积消毒。
紫外线照射工作台面的距离不应超过1.5cm,照射时间以30min左右为宜。
（注意：紫外灯关闭5min后方可进入使用）b. 湿热消毒:适用于含有不耐热成分的培养基和试剂的消毒，为121.3℃，20min .（注意点：加足水、排尽气、气压降到0时才能打开盖）c.干热消毒法:适用于消毒玻璃仪器，160℃以上，并保持90~120min，以杀死细菌和芽孢 d.过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤,薄膜0.22~0.45um直径。
动物细胞工程专题复习
C
C
科学工作者用绿色和红色荧光材料，分别标记人和鼠的 细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后， 起初一半膜发出绿色荧光，另一半膜发出红色荧光，一段 时间后，两种颜色的荧光点均匀分布，如图所示。请分析 回答：
具有一定的流动性
该实验结果说明了细胞膜 ，这是因为 若在两个细胞融合成一个细胞后，将融合细胞置于0℃ 条件下再保持40min，则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧 光，另一半膜发红色荧光，这说明
纤维素酶和果胶酶
Байду номын сангаас
rrHH、RRhh
”
⑶设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂 种细胞，方法： ⑷将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础 是 。 II．若该过程是制备治疗“SARS”病毒的单克隆抗体，A为 人B淋巴细胞（染色体组成为2A＋XX=46），B为鼠骨髓瘤 细胞（染色体组成为2A＋XX=40） ⑸用单克隆抗体制成“生物导弹”主要利用了抗体 的 特性。 ⑹A细胞来自于 ，杂种细胞C共有 个 染色体组。 ⑺杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是 培养基要用 培养基。（物理状态），培养基中除 了添加必要的营养物质为还需加入 。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 原理：动物体细胞核的全能性。
1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。
取供体细胞 取卵母细胞 供体细胞培养 培养到 MⅡ中期 卵母细胞去核 重组胚胎 过程：
供体细胞注入去核的卵母细胞
C
B
下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是（ ） 用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组 织 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单 个细胞 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离， 制成悬浮液 动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰 老死亡
2025高考生物总复习动物细胞工程
第52讲动物细胞工程课标内容(1)阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。
动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
(2)阐明动物细胞核移植一般是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。
(3)阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
(4)概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。
(5)简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
考点一动物细胞培养1.动物细胞培养原理：细胞增殖(1)地位动物细胞工程常用的技术有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合等。
其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
(2)培养条件一般用液体培养基(3)培养过程(1)区分原代培养和传代培养的关键是看用胰蛋白酶处理的对象和是否分瓶。
①分瓶前，第一次用胰蛋白酶对动物组织进行处理后的培养是原代培养。
②第二次用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，分瓶后的细胞培养为传代培养。
(2)细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
2.干细胞培养及其应用(1)营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制。
(2023·海南卷，7A)(×)提示会发生接触抑制。
(2)进行动物细胞培养时，血清应经过高温处理后加入培养基。
(2022·湖北卷，7C)(×)提示高温会使血清含有的促进细胞生长和增殖所需要的营养物质失活，而使培养的动物细胞生长缓慢等。
(3)培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳。
(2022·江苏卷，14B)(√)动物细胞培养和植物组织培养的比较考向1结合动物细胞培养，考查社会观念1.(2024·西安高新一中质检)如图为实验小鼠皮肤组织进行细胞培养的过程，下列叙述正确的是()A.动物细胞培养体现了动物细胞的全能性B.乙过程对皮肤组织可用胃蛋白酶处理C.丙过程为原代培养，遗传物质一定不变D.丁过程中某些细胞可能会无限增殖答案 D解析动物细胞培养没有体现动物细胞的全能性，A错误；乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理，B错误；丙过程属于原代培养，此过程的细胞大部分能保持正常的二倍体核型，有些细胞的遗传物质也可能发生改变，C错误；丁过程属于传代培养，此过程少数细胞会发生突变，朝着癌细胞方向发展，可能会无限增殖，D正确。
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动物细胞工程12月20日
动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等,其中动物细胞培养技术就是其她动物细胞工程技术的基础。
一、动物细胞培养
1、定义:就就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,在适宜的培养基中,让这些细胞生长与增殖。
2、原理:细胞增殖
3、过程
分散成单个细胞,
制成细胞悬液
注意:
①10代以内细胞保持正常的二倍体核型,无突变发生,常用于实践或冷冻保存。
②超过50代,极少数细胞突破自然寿命极限,突变成癌细胞,具有无限增殖能力;若超过50代,细胞不再增殖,全部死亡,则说明细胞没有发生癌变。
③分瓶之前,称原代培养;出现接触抑制用胰蛋白酶处理,再分瓶培养为传代培养。
思考回答:
⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?
答:其细胞的分化程度低,增殖能力强,有丝分裂旺盛,容易培养。
⑵、动物细胞培养需要脱分化不?为什么?
答:不需要。
因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄,失去了发育成完整个体的能力,所以没有类似植物组织培养的脱分化过程,要想使培养的动物细胞定向分化,通常采用定向诱导动物干
细胞,使其分化成所需要的组织或器官。
⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要就是什么成分?用胃蛋白酶行不? 答:主要就是蛋白质,不行,因为胃蛋白酶作用的适宜PH约为2,当ＰＨ大于6时就会失去活性,多数动物细胞培养适宜PH为7、2－7、4,胃蛋白酶在此环境中没有活性。
(胰蛋白酶作用的适宜PH为7、2－8、4,胰蛋白酶活性较高)
⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉不?为什么?
答:胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质,长时间作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤,因此必须控制好消化时间。
⑸、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体
4、重要概念
①细胞贴壁:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
产生原因:培养贴附性细胞时,细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。
培养要求:培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒,易于贴附。
②细胞的接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
③原代培养:动物组织消化后的初次培养
④传代培养:原代培养的细胞由于接触抑制不再分裂,需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖,这种培养叫传代培养。
5、培养条件:
⑴无菌无毒环境:无菌——对培养液与所有培养用具进行无菌处理;在细胞培养液中添加一定量的抗生素。
;无毒——定期更换培养液,防止细胞代谢产物积累对自身造成危害。
⑵营养:
成分:所需营养物质与体内基本相同,例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等,还需加入血清、血浆等天然成分。
培养基类型:合成培养基(将细胞所需的营养物质按其种类与所需数量严格配制而成的培养基)
⑶温度与pH值:哺乳动物多以36、5±0.5℃为宜,多数细胞生存的适宜pH为7、2～7、4。
⑷气体环境:通常采用培养皿或松盖培养瓶,将其置于含95％空气加5％CO2的混合气体的培养箱中进行培养。
O2:就是细胞代谢所必需的CO2主要作用就是维持培养液的pH。
6、应用:生产有重要价值的生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。
基因工程中受体细胞的培养。
用于检测有毒物质,判断某种物质的毒性。
科学家培养正常或各种病变的细胞,用于生理、病理、药理等方面的研究,如用于筛选抗癌药物等,为治疗与预防癌症及其她疾病提供理论依据。
培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清
培养结果植物体细胞株、细胞系
培养目的快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物
二、动物细胞核移植技术
1.概念:将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
2、原理:动物细胞核的全能性
3、动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植与体细胞核移植。
体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。
原因:动物胚胎细胞分化程度低,恢复其全能性相对容易,动物体细胞分化程度高,恢复其全能性十分困难。
4、体细胞核移植过程:
(以克隆高产奶牛为例)
(一般选用传代10代以内的细胞)
将供体细胞注入去核卵母细胞
①通过电刺激使两细胞融合,供体核进入受
体卵母细胞。
②用物理或化学方法(如电脉冲、钙离子载
体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等)激活受体
细胞,使其完成细胞分裂与发育进程。
注意:
①细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不就是供体细胞核,而就是整个细胞,伴随着两细胞融合,体现细胞膜的结构特点:具有一定的流动性。
②受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞,此时在透明带内包含着第一极体,在去核的同时连同第一极体一并去掉。
③该技术形成重组细胞发育成一个新个体,体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
④用卵母细胞做受体细胞原因:a.卵母细胞体积大,便于操作;b.含有促使细胞核表达全能性的物质;c、营养物质丰富
⑤克隆属于无性繁殖,产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。
思考回答:
⑴、为什么不能直接利用动物细胞培育动物体？
动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能逐渐变弱。
因此,需要借助核移植来实现。
⑵、您认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,就是对体细胞供体动物进行了100％的复制不?为什么?
克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA即线粒体中的DNA来自于受体卵母细胞。
所以不就是供核动物完全相同的复制。
此外,即便动物的遗传基础完全相同,但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系,供核动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同,其形成的行为、习性也不可能与供核体动物完全相同。
另外,在个体发育过程中有可能发生基因突变,产生供体动物没有的性状。
基于上述三个方面的原因,克隆动物不会就是供体动物100％的复制。
5、应用:
⑴畜牧业:可以加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育
⑵保护濒危物种:可望利用体细胞核移植技术增加濒危动物的存活数量。
⑶医药卫生:转基因克隆动物可作为生物反应器,生产珍贵医用蛋白;转基因克隆动物细胞、组织与器官可作为异种移植的供体;人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化,形成相应的组织、器官后,可用于组织器官的移植。
⑷其她领域:研究克隆动物与克隆细胞可使人类深入了解胚胎发育及衰老过程;用克隆动物做疾病模型能使人们更好追踪研究疾病的发展过程与治疗疾病。
6、存在问题:成功率低,克隆技术的各个环节有待进一步改进。
绝大多数克隆动物还存在健康问题,许多克隆动物表现出遗传与生理缺陷,如体型过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等;对克隆动物食品的安全性问题也存有争议。