HIV实验室检测技术培训讲义

• ②标本运送：
• 运送血清或血浆标本应灭活（56 ℃ 30min 灭活），用带盖的试管严密封口， 试管上应标明样品的编号或受检者姓 名、种类和采集时间。随样品应附有 “送检单”和“生物样品检测委托 书”，送检单与生物样品检测委托书 应与标本分开。如果路程较远或气候 炎热，应在2-8℃条件下运送。用于抗 体检测的样品可在短期内（≤48小时） 室温递送。标本应专人用送。
前病毒
• HIV进入宿主靶细胞后，病毒RNA利用 自身的逆转录酶进行逆转录，合成病 毒基因组的双链DNA分子。在整合酶 的作用下（在细胞核内），双股DNA 整合入宿主细胞染色体DNA中，这种 整合的病毒双股DNA即称为前病毒。
抗-HIV初筛试验结果的解释和处理
抗-HIV阳性：极大可能为HIV感染，也可能属于非特异反应 抗-HIV弱阳性：存在真阳性和假阳性两种可能 抗-HIV阴性：极大可能无HIV感染，不排除阳性的可能（存在感染因 素下检测时机不合适）
艾滋病期：保持和发展AIDS早期症状，出现多种机 会性感染，神经细胞和功能损伤的表现，易发生 多种肿瘤
* AIDS的病程通常2年
关于检测抗-HIV的残余危险度
含义：在目前条件下，筛查后仍具感染性的机率 称为残余危险度。
影响因素： * 窗口期和检测时机的选择问题 * 实验室质控 * 个别人免疫功能低下，对HIV无反应 * 试剂质量和保存问题 * 是否在有效期内使用 * 试验操作错误：标本或结果登记的差错、仪器校准否、 错误的操作
窗口期的意义
窗口期：广义的讲，从病原体侵入机体到用现行 的实验室手段可以证明受到感染的期限称为窗口 期。
狭义的讲，HIV感染后至抗体检出前的一 段时间称为窗口期。检测HIV感染的实用方法是 检测抗-HIV，在免疫功能正常人群，其窗口期为 2-12周。 正确选择检测时机—通常在危险暴露后3个月检测， 把握度在95%以上 正确解释检测结果---阴性只能说明3个月以前没遭 受感染，不可以说“检测没事儿” “安全用血”—只是相对做到安全，因处于窗口 期的供血，检测不到抗-HIV。
HIV抵抗力--物理因素
HIV灭活：美国疾病控制中心证明，在干燥 环境中的HIV 浓度在几小时之内降低90～ 99% （即降低1～2 log ）。在室温（22～ 27℃）液体环境下HIV可存活15天以上；经 56℃处理30分钟，可使HIV在体外对人T淋 巴细胞失去感染性，但不能完全灭活血清 中的HIV；血清中HIV经过60℃3小时或 80℃30分钟作用后不能检出感染性HIV。目 前，世界卫生组织推荐的逆转录病毒灭活 方法是100℃20分钟。
HIV抵抗力
• HIV一旦离开宿主在外界环境中生存能 力便很快消失，HIV对环境中的物理因 素和化学因素抵抗力均较弱，比乙肝 病毒（HBV）的抵抗力低得多。因此， 对HBV有效的消毒和灭活方法均适用于 HIV。
HIV抵抗力--物理因素
HIV对热很敏感，对低温的耐受性 强于高温。因此，可以用高温灭活 HIV，在低温条件下保存HIV。 对紫外线不敏感：用紫外线、γ射 线不能灭活HIV。
二、实验室检测技术
HIV感染实验室诊断
HIV感染实验室检测方法： １、血清学检测 ２、 HIV核酸检测 ３、病毒分离 ４、CD4 T 淋巴 细胞计数等
目前最常用的方法为HIV特异性抗 体的检测。
检测标本
主要为血液，包括血清、血浆和全血 ； 此外还可用唾液检测HIV（Orasure，如
Salivacard），尿液检测HIV抗体 。
通常的抗-HIV检测结果的处理
结果 试剂1 试剂2
处理意见
A
＋＋
再次采样，做确证实验
B
± ±或 ＋ 再次采样，做确证实验
C
±－
报告抗-HIV阴性
D
－ 不必复检 报告抗-HIV阴性
疫情报告
* 责任疫情报告人：《中华人民共和国传染 病防治法》及其实施办法规定，执行职务 的医疗保健人员、卫生防疫人员是传染病 责任疫情报告人。 * 报告时限和方法：责任疫情报告人发现 AIDS患者、疑似AIDS患者或无症状HIV感染 者时，城镇于6小时内、农村于12小时内， 以最快的通讯方式向当地卫生防疫机构报 告，并同时报出传染病报告卡。
收样单位： 详细地址： 邮政编码： 联系人：
送样单位： 详细地址： 邮政编码： 联系人：
联系电话： 联系电话：
• 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应 在室温下1823℃运送。
标本的采集、运送和处理
①标本采集:用一次性注射器（或真空采血管） 抽取一定量静脉血，室温下自然放置12h，待 血液凝固、血块收缩后再用3、000r/min离心 15min，吸出血清备用。
用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器 抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反 复轻摇，分离血浆和血细胞备用。
用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在 48h内分离PBMC和血浆，否则应在2448h 内分离血浆和血细胞。
采集样品注意事项
• 采集样品原则上应按临床采 血技术规范操作。
• 采集样品时应注意安全，建 议采用真空采血管及蝶形针 具，以避免直接接触血液； 直接接触HIV感染者/艾滋病 （AIDS）病人血液/体液的操 作,应戴双层手套。
HIV抵抗力—化学因素
HIV耐碱不耐酸：在pH3.0条件下HIV滴 度在10分钟可下降4个对数级，而pH值 高达9.0时，HIV滴度下降甚微。 对含氯消毒剂敏感。0.5％次氯酸、2 ％戊二醛溶液、3％碘酒、6％过氧化 氢可在3～5分钟内灭活HIV。
实验Leabharlann Baidu用的消毒办法
高压蒸汽灭菌 (121℃ 20分钟) 干烤 170℃ 2小时 煮沸 20分钟 消毒剂浸泡30分钟，常用消毒剂为5％可用 氯(次氯酸钠、次氯酸钾、氯氨T)、6％过 氧化氢、2％戊二醛等。70%酒精1分钟可灭 活HIV。
HIV感染急性期（早期）：症状出现在感染后6周以 内，类似感冒，出现异常淋巴细胞升高
潜伏期：感染到AIDS发病前，数月-10年以上。抗HIV阳性、P24抗原或病毒分离在早期阳性，以后 不定或阴性，核酸检测由阳性到不确定到阳性
艾滋病早期：持续发热、持续淋巴结肿大、可以有 持续性腹泻；体重减轻，可以发生机会性感染