用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法

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血球样板计数实验报告

一、实验目的1. 掌握血球样板计数法的基本原理和操作步骤。

2. 学习利用血球样板计数法对微生物进行计数。

3. 提高对微生物计数结果的分析能力。

二、实验原理血球样板计数法是一种利用显微镜直接计数微生物数量的方法。

该方法适用于各种微生物的计数，如细菌、酵母、真菌等。

计数原理是将一定稀释度的微生物悬液滴加到血球样板计数室中，在显微镜下直接观察并计数。

血球样板计数室由一块特殊的载玻片构成，其上有四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。

每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格。

每个大方格分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。

每个大方格中的小方格总数为400个，每个大方格的边长为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。

计数时，通常只计数四个四周大方格内的细胞数。

然后求出每个大方格的平均值，即可得出一个大方格中的平均细胞数。

再根据菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。

三、实验材料1. 血球样板计数室2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液7. 稀释液8. 滤纸四、实验步骤1. 准备工作：将血球样板计数室及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

2. 制备细胞悬液：将细胞悬浮液吸取少许，注入试管中，加入适量的稀释液，搅拌均匀。

3. 稀释：根据细胞悬液的浓度，将细胞悬液进行适当的稀释，以便在计数时细胞数适中。

4. 计数：将稀释后的细胞悬液吸取少许，滴加到血球样板计数室的盖片边缘，使培养液自然渗透填满计数室。

等待一段时间，让细胞全部沉降到计数室底部。

5. 观察：将计数板放在显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在的位置，然后转换到高倍镜观察。

计数四个四周大方格内的细胞数，记录下来。

6. 计算结果：根据计数结果和菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过血球样板计数法，得到酵母菌的计数结果为N个细胞/ml。

血球计数板使用及相关计算

（参考答案： 16/0.4×103×10×50=2×107）
总结：2mm×2mm方格的计数
2mm×2mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数区的总体积为0.4mm3。计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，另一种是 25×16型。
1．16×25型的计ຫໍສະໝຸດ 公式为：推导：1mm×1mm方格的计数
1mm×1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。
1．16×25型的计数公式：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100
×400×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数公式：酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80
血球计数板使用及相关计算
计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。
16格×25格
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25格x16格
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血球计数板的使用方法步骤
1．镜检。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。 4．清洁。血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。

解惑血球计数板

解惑血球计数板“培养液中酵母菌种群数量的变化”是新课程标准增设的一个探究活动，旨在培养学生建构种群增长的数学模型，并用数学模型解释种群数量变化的能力，具有多方面的意义和价值。

但这项探究历时长，涉及的技术多而复杂，教科书通常仅作简要的提示，因此具体实施过程中需要教师提供或师生共同查阅相关资料，如血球计数板的使用就是学生学习中不容回避的障碍之一。

但不同版本的教科书、大学教材、网络资源及某些中学教辅书籍说法不一，甚至还不乏谬误，易给师生的教与学造成混乱，甚至误导。

笔者通过多方求证和实践，力图就血球计数板使用过程中经常遇到的一些困惑逐一探讨，以期达成共识并解除诸多疑惑。

1 规格之惑关于探究活动中血球计数板的选用，人教版、浙科版教材推荐使用2mm×2mm方格，苏教版推荐使用1mm×1mm方格。

后者在市场上较为常见，多数大学教材也多以此规格为例。

以上数据是指计数板计数平台上大方格的规格，也即计数室的边长。

由于方格网距盖玻片0.1mm，因此，这两种计数室的容积分别为0.4mm3(4×10-4mL)、0.1mm3(1×10-4mL)。

当镜检所选中格并计数完毕后，推算出整个计数室细胞总数，除以计数室容积就可获得所测培养液中酵母菌的种群密度。

2 公式之惑(以1mm×1mm规格计数板为例)每种规格的血球计数板的计数室通常与又有两种规格，一种是25×16型，即大方格中含25个中格，每个中格又分为16个小方格，因此每个大方格(计数室)中含有25×16个小方格；另一种为16×25型，即大方格中含16个中方格，每个中方格又分为25个小方格(2004年版河北少儿版教科书第82页示意图在表示方格划分方面存在失误)，每个大方格(计数室)中含的小方格数为16×25。

显然，尽管规格不同，但两类计数室均含有400个小方格(25×16或16×25)。

21酵母菌的计数

为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学
进行了如下操作。其中操作不正确的是： C
A.吸出培养液进行计数之前将试管轻轻震荡几次 B.用滤纸吸去血球计数板边缘多余的培养液 C.在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 D.待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台中央，在显微镜下观察
1. 了解血球计数板的构造和使用方法 2. 学会酵母菌的计数方法
一、酵母的应用和危害
偏酸性含糖环境
利用最早兼性厌氧
用途广
酵母的应用
酵母菌是人类应用比较早的微生物。在食品方面——酿酒、制作面包、生产调味品等。在医药方面——生产酵母片、核糖核酸、核黄素、细胞色素C、B族维生素、乳糖酶、脂肪酶、氨基酸等。在化工方面——使石油脱腊、以石油为原料生产柠檬酸等。在农业方面——生产饲料（例如单细胞蛋白SCP）。在生物工程方面——作为基因工程的受体菌。
酵母菌的危害
腐生性酵母菌能使食物、纺织品和其他原料腐败变质；少数耐高渗的酵母菌和鲁氏酵母、蜂蜜酵母可使蜂蜜和果酱等败坏；有的酵母菌是发酵工业的污染菌，影响发酵的产量和质量；某些酵母菌会引起人和植物的病害，例如白假丝酵母可引起皮肤、粘膜、呼吸道、消化道等多种疾病.
二检测原理
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm。
三操作步骤
4. 计数时，规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数。

利用血球计数板对酵母菌计数的

• 3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—10个酵母细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
• 4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
酵母菌的血球计数板计数技术
1 实验目的利用血球计数板对酵母菌数量进行液、吕氏碱性美蓝（亚甲蓝）染液） 2.2 器材和仪器：显微镜、血球计数板、镊子、厚盖玻片（血盖片）、移液枪、吸水纸、擦镜纸4
• 3 实验原理及方法
• 血球计数板计数是一种常用的细胞计数法
血球计数板的使用注意事项
结果记录：
• 微生物名称
总菌数
个/ml
第一个第二个第三个第四个第五个
第一次测定第二次测定
平均
中格
中格
中格
中格
中格
二、血球计数板的使用方法步骤
• 1．镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；
• 2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去；
• 1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。 zxxk细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数

关于酵母菌的计数若干问题解析

关于酵母菌的计数若干问题解析关于酵母菌的计数若干问题解析酵母菌的计数是近几次高频考点，血细胞计数板的规格和计数方式始终是个难点，需要进行总结。

有的学生担心教材中提到的计数计算，其实，需要搞清楚血细胞计数板的原理。

利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数法，计得的是活菌体和死菌体的总和。

计数的操作步骤关于计数室每个计数室分为九个大方格，每个大方格有2mm×2mm×0.1mm 或1mm×1mm×0.1mm，浙科版默认第一种，共有400小格。

中央的大方格用于酵母菌的计数。

两种规格的血细胞计数板大方格、中方格和小方格典例解析试题1：将获得的肿瘤细胞培养液稀释100倍后，用血细胞计数板（规格为2mm×2mm×0.1mm）计数，观察到的计数室中细胞分布如图。

问题：培养液中肿瘤细胞的密度是个/mL。

答案：3.6×107解析：通过统计四个角上的总肿瘤细胞数为9+9+10+8＝36个（统计按照教材上的要求），计算出大方格的总数为36×4＝144个，144/0.4mm3×103mL×100倍＝3.6×107个。

（个人认为，此题的肿瘤细胞数目偏少，值得商榷）例题2：酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3，由400个小方格组成。

现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先后再计数。

若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有个。

答案：稀释 2×108（5×400/0.1mm3×103×10mL）计数的操作1．稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓，可不必稀释。

2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。

若有污物，则需清洗后才能进行计数。

3．加样品：在清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。

广工酵母菌血球计数板计数实验报告

6.3 为什么细胞计数时，细胞悬液溢出凹槽外或有气泡时要重做?
如果存在气泡，会使盖玻片下有部分空间没有充满菌液，使待计数的菌液体积减少，结果偏小。应重新制片。
6.4 酵母菌的增殖是否会对实验造成影响？
如图 6.1，如果计数时间在酵母菌增殖的稳定期Ⅲ，即当酵母细胞的繁殖速度达到最高峰时，其细胞总数不会再增加，这是由于之前的调整期Ⅰ和对数期Ⅱ的糖类营养物质的消耗，代谢产物(特别是次级代谢产物)的积累以及培养基中 pH 的改变，对细胞产生了较大的抑制性。此时计数，酵母菌的增殖对计数量影响最小。
6.1 在取样计数前，为什么要将酵母菌培养液进行振荡摇匀？
这样可使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，减小培养液中的酵母菌数量误差。
6.2 如果先滴加菌液，再加盖玻片，容易出现什么误差？怎么处理？
如果先滴加菌液，再加盖玻片（压滴法），容易使菌液沾到计数平台两侧的支持柱表面，在支持柱表面形成一层水膜而使盖片不能完全落在支持柱上。盖玻片由于液滴的表面张力作用而未能严密地盖到计数板表面上，使计数室内的体积增大，计数结果将偏高。应将血球计数板和盖玻片洗净、烘干重做。
稀释方法：用 1 支干净的试管取 9mL 无菌水，然后立即将 1mL 培养液移入试管里充分混匀，此时原培养液被稀释 10 倍。
4.4 样品计数
在边线上的细胞，按“计上不计下，计左不计右”原则进行计数，即可计左边上边及其顶角；注意辩清不同深度和焦距的酵母菌细胞；活酵母有出芽生殖现象，对于带芽体的酵母，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为 2 个菌体计数，若芽
4 实验步骤及注意事项
4.1 实验检查
检查 3.2 中列举器材和仪器是否齐全检查显微镜检查电源、机械转动部分、载物台等调整反光镜（光源），调节聚光圈使镜内视野明亮，调节目镜和物镜，检查是否存在污物，若有污物，及时清理。检查血球计数板将盖玻片置于血球计数板上，放置在显微镜底下观察，检查血球计数板是否残留污物，若有，及时清理。

酵母计数实验报告

一、实验目的1. 掌握酵母菌计数的基本方法。

2. 了解血球计数板的使用原理和操作步骤。

3. 通过实验，观察酵母菌在不同条件下的生长情况，分析酵母菌的种群数量变化。

二、实验原理酵母菌是单细胞真核微生物，其生长繁殖过程中会形成菌落。

通过计数一定体积培养液中的酵母菌数量，可以了解酵母菌的种群密度。

血球计数板是一种常用的微生物计数工具，其原理是将计数区域划分为多个小方格，通过显微镜观察，计数每个小方格内的酵母菌数量，从而推算出整个计数区域的酵母菌数量。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母菌菌种、琼脂培养基、无菌水、血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等。

2. 实验试剂：无菌生理盐水、染色液（如龙胆紫）等。

四、实验步骤1. 菌种活化：将酵母菌菌种接种于琼脂培养基上，在适宜温度下培养24小时，得到活化菌种。

2. 制备酵母菌悬液：将活化菌种接种于无菌水中，振荡均匀，制成酵母菌悬液。

3. 酵母菌计数：将酵母菌悬液稀释至适当浓度，用血球计数板进行计数。

操作步骤如下：a. 将盖玻片放置于计数室上，用无菌滴管将酵母菌悬液滴于盖玻片边缘，让悬液自行渗入计数室。

b. 待悬液渗入计数室后，将盖玻片轻轻放置，避免产生气泡。

c. 将计数板置于显微镜载物台上，调整显微镜至适当倍数，观察计数室。

d. 计数每个小方格内的酵母菌数量，重复计数3次，求平均值。

4. 数据分析：根据计数结果，计算酵母菌的种群密度。

五、实验结果与分析1. 实验结果：在实验过程中，观察到酵母菌在适宜条件下生长良好，菌落呈白色，数量逐渐增多。

2. 数据分析：根据计数结果，计算出酵母菌的种群密度，并绘制酵母菌生长曲线。

六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了酵母菌计数的基本方法，了解了血球计数板的使用原理和操作步骤。

2. 实验结果表明，酵母菌在适宜条件下能够迅速繁殖，其种群数量随时间推移呈现增长趋势。

3. 本实验为后续研究酵母菌生长特性、发酵工艺等提供了基础数据。

七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。

实验：利用血细胞计数板(细菌计数板)对酵母菌进行计数

实验：利用血细胞计数板（细菌计数板）对酵母菌进行计数
1.取5克（活性干酵母）溶于95mL无菌水中，相当于稀释_______倍
2.显微镜下，低倍镜观察血球计数板，找到计数室，共_________大格
3.盖上盖玻片
4.取稀释到一定程度（5~10个酵母/小格）酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。

先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。

计数前观察酵母菌的形态
每1mL菌液所含酵母菌____________个
5克干酵母含酵母菌____________个
6.每次计数完毕，将血球计数板和盖玻片用清水冲洗干净，切勿用硬物刷洗，洗净后自然晾干（用纱布擦试）。

7.观察菌落中的酵母菌。

高中生物实验-观察培养液中酵母菌种群数量的变化_

高中生物实验:观察培养液中酵母菌种群数量的变化_1、通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，来研究一个种群的数量变化情况，尝试构建种群增长的数学模型。

2、通过使用血球计数板掌握单细胞生物的计数方法。

二、实验原理：1、酵母菌可以用液体培养基来培养，培养液中的酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、PH、温度等因素有关，我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌种群数量的变化情况。

2、利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法，这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目，所以一般用于单细胞微生物数量的测定，由于血球计数板上的计数室盖上盖玻片后的容积是一定的，所以可根据在显微镜下观察到的细胞数目来计算单位体积的细胞的总数目。

三、实验材料：酵母菌菌种，无菌马铃薯培养液或肉汤培养液。

四、实验用具：无菌水，试管，棉塞，恒温培养箱，显微镜，无菌滴管，无菌移液管，小烧杯或小试管，血球计数板(2mm 2mm)、纱布、滤纸、镊子、盖玻片。

五、方法步骤：1、取相同试管若干支，分别加入5ml肉汤培养液，塞上棉塞。

2、用高压锅进行高压蒸汽灭菌后冷却至室温，标记甲、乙、丙等。

3、将酵母菌母液分别加入试管各5ml，摇匀后用血球计数板计数起始酵母液个数，做好记录。

4、将各试管送进恒温箱，25℃下培养7天。

5、每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。

六、实验结论：培养液酵母菌种群数量随时间呈S型增长变化。

七、考点提示：1、以防培养液带上杂菌与酵母菌形成竞争关系，抑制酵母菌培养。

从试管中吸出培养液进行计数时，应将试管振荡几次，以便使酵母菌均匀分布，提高计数的代表性和准确性。

2、对于压在小方格界线上的酵母菌应计数同侧相邻两边上的菌体数，另两边不计数。

3、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？答：摇匀试管取1ml酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以 n 2.5 104 ，即为1ml 酵母菌原液中酵母菌个数。

酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法

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五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室平均
菌数
A
B
值（个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
）第一
室第二
室
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六、思考题能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可以，如何进行？如果不可以，请说明原因。
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式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、酿酒酵⺟菌液
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四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有机溶剂脱水干燥）。
4
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血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格。规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。

用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法

用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法血球计数板是一种用于计数细胞的装置，通常用于测定血液中各类细胞的数量。

然而，血球计数板也可以应用于计数其他类型的微生物，如酵母菌。

下面将详细介绍使用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法。

1.准备工作-准备血球计数板：将血球计数板放在平整、干净的工作台上。

-准备显微镜：确保显微镜的放大倍数适合酵母菌的观察。

2.制备样品-培养酵母菌：选择适用于酵母菌的培养基，并在温度适宜的条件下培养酵母菌至合适的生长阶段。

-稀释样品：取适量酵母菌培养物，并使用物理或化学方法将其稀释至适宜的浓度。

常规稀释范围为10^-1至10^-73.接种样品-将适量的稀释后的酵母菌样品吸入移液管中。

-用移液管加样品到血球计数板的一个大格中。

重复这个过程，直到填充至少3个大格。

-轻轻拍打血球计数板，以使酵母菌分布均匀。

4.观察和计数-将装有血球计数板的试管放置在显微镜下，以便于观察。

-调节显微镜的焦距，以清晰地观察酵母菌。

-随机选择一个大格开始计数。

对于每个大格，观察所有四个角以及中央的九个小格。

计数以一个有效酵母菌可见于格子线与其相交的点为依据。

-对于每个大格中酵母菌的计数结果，将计数值乘以10（表示小格数），然后累加得到总数。

例如，如果一个大格中计数到45个酵母菌，总数应为45x10=450。

-重复以上步骤，直到至少3个大格被计数。

如果计数结果在这些大格之间差异较大，则需要继续计数至一个统一的结果。

5.计算酵母菌的浓度-计算平均数：将各个大格的计数结果相加，并除以计数的大格数，得到平均数。

-计算总体浓度：将平均数乘以初始的稀释倍数。

例如，如果初始稀释倍数为10^-4且平均数为80，总体浓度应为80x10^4=800,000CFU/mL （菌落形成单位/毫升）。

-根据需要，可以根据大格的面积进行进一步的修正。

需要注意的是，血球计数板通常用于测量血液细胞的数量，而不是酵母菌等微生物。

因此，使用血球计数板计数酵母菌需要一些修正和适应。

实验—血球计数板的使用

一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。

血球计数板是常用的计菌器之一。

血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。

在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。

计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。

但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。

1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。

将每一中格放大，可见25个小格。

计数重复3次，取其平均值。

计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。

实验：应用血细胞计数板对酵母菌进行计数

④抱团的算一个
为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学
进行了如下操作。其中操作不正确的是： C
A.吸出培养液进行计数之前将试管轻轻震荡几次 B.用滤纸吸去血球计数板边缘多余的培养液 C.在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 D.待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台中央，在显微镜下观察
④需要做重复实验吗? 需要，可采取全班汇总的办法。
⑤怎样记录结果?记录表怎样设计? 时间、每个中格数量、中格平均班值、班级平均。。。
⑥如果一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应采取怎样的措施? 稀释培养液后再计数 ⑦对于压在小方格界线上的酵母菌,应当怎样计数?
应计上不计下，计左不计右的酵母菌
6、实验操作
次数
12345678
时间(天) 0 1 2 3 4 5 6 7
酵母菌 A 0.8 5.2 5.6 4.8 2 0.8 0.4 0.08
数
B 0.8 1.2 2 2.8 3.2 3.6 3.2 3
（106/m
l） C 0.8 0.4 0.1 0
0
0
0
0
1.请写出此小组研究的课题名称 _________________________。此实验组设计的变量是:___________________________。
随着营养消耗、pH变化？、代谢产物的积累，使条件恶化，使
酵母菌的死亡率增加。
两个计数室
中
格
个数每数个即中样格方酵数母
菌
数
第0天第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天
1212121212121212 1 2 3 4 5
5个中格中酵母总数
平均值

实验六酵母菌细胞总数的测定

实验六酵母菌细胞总数的测定实验六酵母菌细胞总数的测定一、实验目的通过实验掌握酵母菌细胞总数的测定方法，了解酵母菌在发酵过程中的生长繁殖情况。

二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，在适宜的条件下可以迅速生长繁殖。

通过测定酵母菌细胞的总数，可以了解其在发酵过程中的生长情况。

本实验采用血球计数板法进行酵母菌细胞总数的测定。

三、实验步骤1.准备实验材料：血球计数板、显微镜、酵母菌培养液、无菌棉签、离心管、离心机、滴管等。

2.将酵母菌培养液在离心机中离心10分钟，转速为1000转/分钟，弃去上清液，留下沉淀物。

3.用无菌棉签轻轻地将沉淀物涂抹在血球计数板的计数室底部，注意不要将沉淀物压破。

4.将血球计数板放置在显微镜下，找到计数室所在的位置，观察并计数酵母菌细胞的数量。

每个大方格内含有16个小方格，每个小方格内含有16个网格，每个网格内含有16个红细胞和白细胞或霉菌菌落等。

5.统计所有网格内的酵母菌细胞数量，并计算每毫升发酵液中所含的酵母菌细胞数。

公式如下：酵母菌细胞数/mL = （A×B×C×D×10000）/10000×W×V其中，A代表每个大方格内酵母菌细胞数，B代表每个小方格内酵母菌细胞数，C代表每个小方格内红细胞和白细胞或霉菌菌落数，D代表稀释倍数，W代表称取发酵液的质量（g），V代表发酵液的体积（mL）。

6.重复实验三次，求平均值。

四、实验结果与分析1.实验结果：在实验过程中，我们发现血球计数板的使用对于酵母菌细胞总数的测定非常重要。

通过血球计数板的统计和分析，我们得到了每毫升发酵液中酵母菌细胞的数量。

根据实验数据，我们可以得出以下表格：2.结果分析：从实验结果可以看出，三次实验的平均值为4.0×10^7个/mL。

这说明在发酵过程中，酵母菌的数量呈指数增长趋势，增长速度较快。

这也说明了酵母菌在适宜的条件下可以迅速生长繁殖。

同时，实验过程中需要注意无菌操作，避免杂菌污染对实验结果的影响。

微生物的计数——血球计数板法

微生物的计数——血球计数板法【摘要】测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。

分光光度法比拟简便，易操作，但是会使数据严重偏大。

而平板计数法那么会使实验数据严重偏小。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌那么采用彼得罗夫·霍泽〔Petrof Hausser〕细菌计数板。

两种计数板的原理和部件一样，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。

本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进展计数。

一、实验目的与要求1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。

2、了解血球计数板的构造和使用方法。

3、学会用血球计数板对酵母细胞进展计数。

二、根本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。

此法的优点是直观、快速。

将经过适当稀释的菌悬液〔或孢子悬液〕放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进展计数。

由于计数室的容积是一定的〔0.1mm2〕，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积的微生物总数目。

由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。

血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进展。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是一样的，即16×25=400小方格。

血球计数板计数法

推导：1mm×1mm方格的计数
1mm×1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。
1．16×25型的计数公式：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100
×400×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数公式：酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80
若多次重复计数后算得每个小方格中平均有5个酵母菌则10ml该培养液中酵母菌总数有例6在用血球计数板2mm2mm方格对某一稀释50倍样品进行计数时发现在一个计数室内盖玻片下的培养液厚度为01mm酵母菌平均数为16个据此估算10ml培养液中有酵母菌四操作过程1
显微镜血球计数板计数法
一、实验目的 1、明确显微镜计数的原理。 2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
4．显微镜计数将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用 16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
四、操作过程
1．稀释将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 2．镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置 5—10分钟即可计数。

探究酵母菌种群数量变化实验

探究培养液中酵母菌种群数量的变化一、实验目的：1．通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，尝试建构种群增长的数学模型。

2．用数学模型解释种群数量的变化。

3．学会使用血细胞计数板进行计数。

二、实验原理：1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。

2．等是影响种群数量持续增长的限制因素。

3．酵母菌计数方法：抽样检测法。

先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

多余培养液用滤纸吸去。

稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。

注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。

仪器介绍：血细胞计数板血细胞计数板的构造血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面，刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。

这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。

血细胞计数板的使用以计数酵母菌为例(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.(4)计数；计算公式：酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数注释：1. 1ml=1000mm3，每一大方格的体积为0.1mm3，即相当于1×104ml2. 培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。