柑橘皮中黄酮的提取及含量分析

表2 L9 ( 34 )正交设计表
NO.
A
B
C
D
吸光度 提取率%
1
1
1
1
1
0.480
4.88
2
1
2
2
2
0.505
5.14
3
1
3
3
3
0.552
5.63
4
2
1
2
3
0.521
5.31
5
2
2
3
1
0.532
5.43
6
2
3
1
2
0.490
4.99
7
3
1
3
2
0.526
5.36
8
3
2
1
3
0.498
5.07
9
3
3
2
1
0.534
关键词：微波萃取；分光光度法；黄酮
柑橘皮为芸香科植物桔树成熟果实的果 皮，在我国分布非常广泛，具有很好的药用价 值[1-4]。研究表明柑橘皮中黄酮类化合物的含 量尤为丰富，黄酮类化合物具有多种生理功 能，已经成为国内外研究的热点。
黄酮类化合物的主要提取方法有水提法、 溶剂提取法、碱提法等方法，但是提取率低、 杂质含量高。近年来，微波技术应用于食品、 环境等的提取，具有耗能低、效率高、不破坏 有效成分的特点。本文用微波法提取柑橘皮中 黄酮，以芦丁作为对照品，采用分光光度法对 柑橘皮中黄酮的含量进行分析，方法简便可 靠、快速、效率高、易操作。
中溶解，并定量转入 100 mL 容量瓶中，用 30%
称取供试品溶液1.0mL于25mL容量瓶中
乙醇定容，摇匀得浓度为 0. 555 g/L 标准溶液。 加入1.0mL0.5 mol/LAlCl3 溶液摇匀放置15分 准确吸取 0. 555g/L 芦丁标准溶液 1.0、2.0、 钟，再用pH6.0 的NaAc-HAc缓冲溶液定容混
4.0、6.0、8.0、10.0 mL 于 6 只 25mL 容量瓶 匀，放置5 min后以空白试剂为参比，用1cm 比
中分别加入 1.0mL 100g/L 氯化铝摇匀，摇匀 色皿在415 nm波长处测其吸光度，并计算样品
放置 15 min，再用 5.8 的 NaAc-HAc 缓冲溶液 溶液的浓度及黄酮含量。
1、实验方法
试剂：柑橘皮为市售新鲜柑橘皮，芦丁标 准品（中国药品生物制品检定所），甲醇，乙 醇，水，亚硝酸钠、氢氧化钠、氯化铝等市售 分析纯试剂。 1.2 实验方法 1.2.1 微波萃取法提取柑橘皮中黄酮
采用微波萃取法提取柑橘皮中黄酮，具 体实验步骤为：取市售新鲜柑桔，取皮，洗净， 切碎，烘干研成粉末，称取柑桔粉(过六号筛， > 100目) 3g，以乙醇为溶剂按一定料液比浸 润，将反应器置于微波仪中，提取数分钟，减 压抽滤，得柑橘皮中总黄酮提取物的供试品溶 液，定溶至50mL。
摘 要：柑橘皮中黄酮类化合物具有很高的药用价值，采用微波萃取法提取柑橘 皮中黄酮类化合物，以芦丁作为标准品，采用分光光度法对柑橘皮中黄酮的含量进行 分析，方法简便可靠、快速、效率高。通过正交实验，在 50%的乙醇提取液中，微波 400W 的功率下提取 25 分钟，柑橘皮中黄酮的含量达到 5.62%，实验的重复性好。
因微波萃取法提取柑橘皮中黄酮类化合
1.1 实验部分 仪器与试剂 仪器：LG微波炉，分光光度仪，恒温鼓 风干燥箱，空抽滤泵，电子天平等。
物，受到乙醇浓度、料液比、提取时间、提取 功率等几个重要因素的影响[5]，为此采用 L9 （34）正交表设计实验，见表 1。
表 1 因素水平表
因素
水平
A 乙醇浓度（%） B 料液比
5.44
k1
5.217
5.183
4.980
5.250
k2
5.243
5.213
5.297
5.163
k3
5.290
5.353
5.473
5.337
R
0.073
0.170
来自百度文库
0.493
0.174
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柑橘皮中黄酮的提取及含量分析
从表2可知，微波实验中黄酮的最大浓度 2.1.2 柑橘皮中黄酮含量分析
为0.1350g/l，因素影响力排序为: A >D>C> B，
[1]刘振南. 用正交法探讨山楂叶中黄酮类化合物的乙 醇提取工艺[J]. 广西民族学院学报:自然科学版, 1999, 5 (3) : 27.
[2]王立娟.微波辅助提取山楂叶总黄酮的条件研究[J]. 林产化学与工业，2007，26（9）:131.
[3]刘茜，焦庆才，刘铁兵.柑桔皮提取物防止雄性小鼠 生殖细胞损伤的研究[J].中药材，1998，21（2）： 88.
用。
偶极子旋转和离子传导两种方式同时加热, 产 参考文献：
生大量的热量使胞内温度迅速上升,液态水汽 化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破,形成微 小的孔洞,使胞外溶剂容易进入细胞内,溶解并 释放出胞内产物，使黄酮分子容易从药材内部 扩散到萃取溶剂中,大大缩短了加热时间,提高 了萃取效率[5]。
总的说来，本文在实验方法上简单易操 作，提取率高，实验的重复性好。如果能将这 些实验应用到生产实践中，使柑橘皮能够变废 为宝，具有一定的实际意义。但在实际应用中 还有许多实际问题，还需进一步扩大实验水平, 对工艺条件进一步细化优化,进一步提高提取 率，简化生产工艺，使得生活中的废物得以利
应，生成红色的络合物，在一定的波长下用分 光光度计读取吸光值，进行测定。对工作溶液
在波长从350～550 nm区间扫描，结果显示， 415nm处有最大吸收峰，故本实验选择415nm 作为测定波长。
1.2.3 芦丁标准曲线的绘制
准确称取经 105℃干燥至恒重的芦丁标准
图1 芦丁标准曲线
试剂 0. 0555 g，用 30%(体积比)乙醇于 60℃水浴 1.2.4 样品中黄酮含量的测定
2007 年第 3 期 总第五十三期
常州工程职业技术学院学报
JOURNAL OF CHANGZHOU INSTITUTE OF ENGINEERING TECHNOLOGY
Vol. 3 2007 November No.53
柑橘皮中黄酮的提取及含量分析
李智利
(常州工程职业技术学院 应用化学系，江苏 常州 213164)
定容混匀，用 1cm 比色皿在 415 nm 处测定其 吸光度，参比为空白标准溶液。以吸光度 A 对 芦丁浓度 C 作图，如图 1，得校准曲线，Y= 4.03715x+0.00677 R=0.9997。
线性范围为：芦丁质量浓度g/L。
2、结果与讨论
2.1 实验结果及数据分析 2.1.1 微波萃取法提取柑橘皮中黄酮含量的 条件实验结果，见表2。
C 微波功率（W）
D 微波时间（min）
1
40
1﹕5
200
5
2
60
1﹕10
300
15
3
80
1﹕15
400
25
收稿日期：2007-09-11 作者简介：李智利（1977-），女，汉族，湖南浏阳人，常州工程职业技术学院助讲，硕士，主要从事分析化学教 学研究工作。
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柑橘皮中黄酮的提取及含量分析
1.2.2 测定波长的确定 样品中的黄酮与足量的铝盐进行络合反
[4]敬璞，丁晓雯，苏晔.柑桔皮水提液在小鼠体内的抗 氧化作用研究[J].西南农业大学学报，2003，25（3）： 265.
[5]陈菁菁,李向荣.微波萃取法提取桑叶和桑白皮的黄 酮类成分[J]，中药材，2006，29（10）：1090.
40
酮提取液测定结果见表3。
表3 黄酮含量的平行实验
序号
吸光度
浓度/（g/L）
提取率%
平均值
相对平均偏差
1
0.552
0.1350
5.63
2
0.548
0.1341
5.59
3
0.553
0.1352
5.63
5.62
0.32%
4
0.550
0.1345
5.60
5
0.554
0.1355
5.64
2.2 讨论 微波萃取技术是物料吸收微波能后通过
本实验以芦丁配制标准溶液作标准曲线，
其 中 A 因 素 极 显 著 ， 最 佳 工 艺 条 件 为 ： 以芦丁为标样计算黄酮类化合物的总量，本实
A1B3C3D3 即 ： 50 % 乙 醇 浓 度 ， 微 波 时 间 验按此方法独立平行测定5次，得出柑橘皮黄
25min，微波功率为400W，料液比1∶15。