λDNA的限制酶切位点图
限制性内切酶酶切位点_方便搜索
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限制性酶酶切位点图谱ydl
FastDigest® BlpI (Bpu1102I) FastDigest® Bme1580I (BseSI) FastDigest® BmtI (BspOI) FastDigest® BplI* FastDigest® BpmI (GsuI) FastDigest® Bpu10I FastDigest® BsaAI (Ppu21I) FastDigest® BsaBI (BseJI) FastDigest® BsaHI (Hin1I) FastDigest® BsaJI (BseDI) FastDigest® BseGI FastDigest® BseNI FastDigest® BseXI FastDigest® Bsh1236I FastDigest® BsiEI (Bsh1285I) FastDigest® BsiWI (Pfl23II) FastDigest® BslI (BseLI) FastDigest® BsmBI (Esp3I)* FastDigest® BsmFI (FaqI)* FastDigest® Bsp119I FastDigest® Bsp120I FastDigest® Bsp1286I (SduI) FastDigest® Bsp1407I FastDigest® BspCNI (BseMII)* FastDigest® BspHI (PagI) FastDigest® BspMI (BveI)* FastDigest® BsrBI (MbiI) FastDigest® BsrDI (BseMI) FastDigest® BsrFI (Cfr10I) FastDigest® BssHII (PteI) FastDigest® Bsu36I (Eco81I) FastDigest® BstXI FastDigest® BstZ17I (Bst1107I) FastDigest® ClaI (Bsu15I) FastDigest® Csp6I FastDigest® DdeI (HpyF3I) FastDigest® DpnI FastDigest® DraI FastDigest DraIII (AdeI)
(完整版)常用限制性内切酶酶切位点汇总,推荐文档
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常见分子实验限制性内切酶酶切位点大全
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质粒DNA限制性酶切图谱分析
五、注意事项——DNA凝胶电泳
• 4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5μg的 DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的 数量和大小而定。当加样孔大时，样品上样量应相应加大， 否则会造成条带浅甚至辩认不清；反之则应适当减少加样量， 但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散， 对于较大的DNA此现象更明显。
样品：DNA5ul、6X点样液2 ul，电极缓冲液5ul pUC118、pEGFP、 pUC118/ EcoRI 、 pEGFP/ EcoRI 、细菌基因组DNA DNA Marker (2ul，6X点样液2 ul，电极缓冲液5ul )
实验结果：分析酶切图谱
五、注意事项——限制性内切酶酶切
１．内切酶： 不应混有其它杂蛋白特别是其它内切酶或外切酶的污染； 注意内切酶的识别位点及形成的粘性末端； 内切酶的用量：根据内切酶单位和ＤＮＡ用量而定，通常
五、注意事项——限制性内切酶酶切
２．ＤＮＡ：
作为内切酶底物，ＤＮＡ应该具备一定的纯度，其溶液中不 能含酚、氯仿、乙醚、SDS、EDTA、高盐浓度、酒精等，这 些因素的存在均不同程度影响限制性内切酶的活力。 这种抑制可通过：
增加酶作用单位数（10~20U/ug DNA）、 增大反应体积以稀释可能的抑制剂 或延长反应时间加以克服。
7. DNA不存在该酶识别顺序
1. 标准底物检测酶活性
2. 将DNA过柱纯化，乙醇沉淀DNA
3. 检查反应系统是否最佳
4. 换用对DNA甲基化不敏感的同裂 酶酶解，重新将质粒DNA转化至 dcm-，dam-基因型的细菌菌株
5. 换用不同切割非甲基化位点的同裂 酶消化DNA（如San3A I代替Dpn I)，重新将质粒转至dcm+ dam+菌 株中扩增
限制性内切酶酶切位点汇总
限制性内切酶酶切位点汇总限制性内切酶（Restriction Endonuclease）是一类存在于细菌体内的酶，它能够识别特定的酶切位点，并在该位点上切割DNA链。
限制性内切酶起源于细菌，原本作为细菌对抗噬菌体感染的防御机制，但现在被广泛应用于分子生物学和基因工程领域。
限制性内切酶的分类和命名依据它们发现的第一个类型的噬菌体。
如EcoRI是从大肠杆菌中分离出的内切酶，与T4噬菌体相关；HindIII是与T4噬菌体有关的内切酶等。
酶名中的缩写首字母通常是酶切位点的首字母，比如EcoRI是指E.coli的RY粘性末端的切点。
现在限制性内切酶已被发现有超过3000多个类型。
下面是一些常见的限制性内切酶的切割位点汇总：1. EcoRI：切割位点为G↓AATTC（↓表示切割位点），产生的切割后的两个DNA片段是G-AATTC和CTTAA-G。
2. HindIII：切割位点为A↓AGCTT，产生的切割后的两个DNA片段是A-AGCTT和TTCGA-A。
3. SmaI：切割位点为CCC↓GGG，产生的切割后的两个DNA片段是CCC-GGG和GGG-CCC。
4. BamHI：切割位点为G↓GATCC，产生的切割后的两个DNA片段是G-GATCC和CCTAG-G。
5. XhoI：切割位点为C↓TCGAG，产生的切割后的两个DNA片段是C-TCGAG和GAGCT-C。
6. NotI：切割位点为GC×GGCCGC，产生的切割后的两个DNA片段是GC-GGCCGC和CGC-GC。
7. EcoRV：切割位点为GAT↓ATC，产生的切割后的两个DNA片段是GAT-ATC和TAC-TAG。
8. KpnI：切割位点为GGTAC↓C，产生的切割后的两个DNA片段是GGTAC-C和CCATG-G。
9. SalI：切割位点为G↓TCGAC，产生的切割后的两个DNA片段是G-TCGAC和CAGCT-G。
10. PstI：切割位点为CTGCA↓G，产生的切割后的两个DNA片段是CTGC-AG和GACG-T。
λDNA的限制酶切位点图
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05 实验五 DNA的限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳(λ DNA,Hind III)(考核15%)
理和适用范围有什么异同？
如果用EcoR
I酶解λ DNA，电泳后的胶
图会如何？
解释限制性核酸内切酶专一性的机理。
器材
电泳仪（DYY-2C），水平电泳槽 微量加液器（10 uL），枪头（10 离心管0.5 mL，离心管架 恒温水浴
uL）
凝胶成像仪（Gel Logic
Gold
淹没胶孔。
制样
1号样：2 uL λ DNA + 18 uL 蒸馏水 + 5 uL 加样缓冲液，混匀，取10 uL点样。 2号样：20 uL λ DNA酶切液 + 5 uL加样
缓冲液，混匀，取10 uL点样。
点样
吸取10
uL样液；
将枪头贴近样孔上沿，略微插入样孔；
（注意：枪头不要戳破胶孔底部）
212 PRO）
view溶液
10×Buffer（100 mmol/L Tris-HCl，pH7.5，
100 mmol/L MgCl2，10 mmol/L 二硫苏糖醇， 500 mmol/L NaCl ）
试 剂
5×TBE缓冲液：Tris[111] 54
g，硼酸
[61.83] 27.5 g，20 mL 0.5 mol/L EDTA
0.5×TBE电泳缓冲液：用5×TBE液稀释 Gold
View：每100 mL琼脂糖胶加5 uL
试 剂
加样缓冲液（5×）（Loading dye）
溴酚蓝 （300 bp） 二甲苯腈蓝 （4000 bp） 蔗糖（甘油） Tris-HCl
思考题
加样缓冲液中各个组分的作用是什么？ 琼脂糖电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳的原
轻轻将样液一次连续注入样孔。
ｄｎａ的限制性酶切反应
ＤＮＡ的限制性酶切反应实验目的学习在实现DNA的体外重组过程中，正确选择合适的载体和限制性核酸内切酶，并利用限制性核酸内切酶对载体和目的DNA进行切割，产生利于连接的合适末端。
通过对DNA的酶切，学会设计构建重组DNA分子的基本方法，掌握载体和外源目的DNA酶切的操作技术。
实验原理核酸限制性内切酶是一类能识别双链ＤＮＡ中特定碱基顺序的核酸水解酶，这些酶都是从原核生物中发现，它们的功能犹似高等动物的免疫系统，用于抗击外来ＤＮＡ的侵袭。
限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生的ＤＮＡ片段５’端为Ｐ，３’端为ＯＨ。
根据限制酶的识别切割特性，催化条件及是否具有修饰酶活性可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。
Ⅰ类和Ⅲ类限制性内切酶，在同一蛋白分子中兼有甲基化作用及依赖ATP的限制性内切酶活性。
Ⅰ类限制性内切酶结合于特定识别位点，且没有特定的切割位点，酶对其识别位点进行随机切割，很难形成稳定的特异性切割末端。
Ⅲ类限制性内切酶在识别位点上切割，然后从底物上解离下来。
故Ⅰ类和Ⅲ类酶在基因工程中基本不用。
Ⅱ型酶就是通常指的ＤＮＡ限制性内切酶。
它们能识别双链ＤＮＡ的特异顺序，并在这个顺序内进行切割，产生特异的ＤＮＡ片段；Ⅱ型酶分子量较小，仅需Mg2+作为催化反应的辅助因子，识别顺序一般为４～６个碱基对的反转重复顺序；Ⅱ型内切酶切割双链ＤＮＡ产生３种不同的切口－－５’端突出；３’端突出和平末端。
体外构建重组DNA分子，首先要了解目的基因的酶切图谱，选用的限制性核酸内切酶都不能在目的基因内部有专一的识别位点，即当用一种或者两种限制性核酸内切酶切割外源供体DNA时，能够得到完整的目的基因。
其次，选择具有相应的单一酶切位点的质粒、噬菌体等载体分子作为克隆的载体。
常用的酶切方法有双酶切法和单酶切法两种。
本实验采用单酶切法，即只用一种限制性内切酶切割目的DNA片段，酶切后的片段两端将产生相同的黏性末端或平末端，再选用同样的限制性内切酶处理载体。
常用限制性内切酶酶切位点汇总情况
Acc65I识别位点AccI识别位点AciI识别位点AclI识别位点AcuI识别位点AfeI识别位点AflII识别位点AflIII识别位点AgeI识别位点AhdI识别位点AleI识别位点AluI识别位点AlwI识别位点AlwNI识别位点ApaI识别位点ApaLI识别位点ApeKI识别位点ApoI识别位点AscI识别位点AseI识别位点AsiSI识别位点AvaI识别位点AvaII识别位点AvrII识别位点BaeI识别位点BamHI 识别位点BanI识别位点BanII识别位点BbvCI识别位点BbvI识别位点BccI 识别位点BceAI 识别位点BcgI识别位点BciVI识别位点BclI识别位点BfaI识别位点BfuAI识别位点BglI识别位点BglII识别位点BlpI识别位点Bme1580I识别位点BmgBI识别位点BmrI识别位点BmtI识别位点BpmI识别位点Bpu10I识别位点BpuEI识别位点BsaAI识别位点BsaBI识别位点BsaHI识别位点BsaI识别位点BsaJI识别位点BsaWI识别位点BsaXI识别位点BseRI识别位点BseYI识别位点BsiEI识别位点BsiHKAI识别位点BsiWI识别位点BslI识别位点BsmAI识别位点BsmBI识别位点BsmFI识别位点BsmI识别位点BsoBI识别位点Bsp1286I识别位点BspCNI识别位点BspDI识别位点BspEI识别位点BspHI识别位点BspMI识别位点BspQI识别位点BsrBI识别位点BsrDI识别位点BsrFI识别位点BsrGI识别位点BsrI识别位点BssHII识别位点BssKI识别位点BssSI识别位点BstAPI识别位点BstBI识别位点BstEII识别位点BstNI识别位点BstXI识别位点BstYI识别位点BstZ17I识别位点Bsu36I识别位点BtgI识别位点BtgZI识别位点BtsCI识别位点BtsI识别位点Cac8I识别位点ClaI识别位点CspCI识别位点CviAII识别位点CviKI-1识别位点CviQI识别位点DdeI识别位点DpnI识别位点DpnII识别位点DraI识别位点DraIII识别位点DrdI识别位点EaeI识别位点EaeI识别位点EagI识别位点EarI识别位点EciI识别位点EcoNI识别位点EcoO109I识别位点EcoRI识别位点EcoRV识别位点FatI识别位点FauI识别位点Fnu4HI识别位点FokI识别位点FseI识别位点FspI识别位点HaeII识别位点HaeIIIHgaI识别位点HhaI识别位点HincII识别位点HindIII识别位点HinfI识别位点HinP1I识别位点HpaI识别位点HpaII识别位点HphI识别位点Hpy188I识别位点Hpy188III识别位点Hpy99I识别位点HpyAV识别位点HpyCH4III识别位点HpyCH4IV HpyCH4V识别位点KasI识别位点KpnI识别位点MboI识别位点MboII识别位点MfeI识别位点MluI识别位点MlyI识别位点MmeI识别位点MnlI识别位点MscI识别位点MseI识别位点MslI识别位点MspA1I识别位点MspI识别位点MwoI识别位点NaeI识别位点NarI识别位点NciI识别位点NdeI识别位点NgoMIV识别位点NheI识别位点NlaIII识别位点NlaIV识别位点NmeAIII识别位点NotI识别位点NruI识别位点NsiI识别位点NspI识别位点PacI识别位点PaeR7I识别位点PciI识别位点PflFI识别位点PflMI识别位点PhoI识别位点PleI识别位点PmeI识别位点PmlI识别位点PpuMI识别位点PshAI识别位点PsiI识别位点PspGI识别位点PspOMI识别位点PspXI识别位点PstI识别位点PvuI识别位点PvuII识别位点RsrII识别位点SacI识别位点SacII识别位点SalI识别位点SapI识别位点Sau3AI识别位点Sau96I识别位点SbfI识别位点ScaI识别位点ScrFI识别位点SexAI识别位点SfaNI识别位点SfcI识别位点SfiI识别位点SfoI识别位点SgrAI识别位点SmaI识别位点SmlI识别位点SnaBI识别位点SpeI识别位点SphI识别位点SspI识别位点StuI识别位点StyD4I识别位点StyI识别位点SwaI识别位点TaqαI识别位点TfiI识别位点TseI识别位点Tsp45I识别位点Tsp509I识别位点TspMI识别位点TspRI识别位点Tth111I识别位点XbaI识别位点XcmI识别位点XhoI识别位点XmaI识别位点XmnI识别位点ZraI识别位点。
限制性酶的酶切位点
各种限制性酶的酶切位点Enzyme Name SequenceAatI AGG!CCTAatII GACGT!CAccI GT!MKACAccII CG!CGAccIII T!CCGGAAcyI GR!CGYCAflI G!GWCCAflII C!TTAAGAflIII A!CRYGTAhaI CC!SGGAhaII GR!CGYCAhaIII TTT!AAAAluI AG!CT AlwI GGATCNNNN! AlwI !NNNNNGATCC AlwNI CAGNNN!CTGAocI CC!TNAGGAocII GDGCH!C AosI TGC!GCAAosII GR!CGYCApaI GGGCC!CApaLI G!TGCACApyI CC!WGGAquI C!YCGRGAseI AT!TAATAspI GAANN!NNTTCAspI G!GTACCAspI GACN!NNGTCAsuI G!GNCC AsuII TT!CGAAAvaI C!YCGRGAvaII G!GWCCAvaIII ATGCA!TAvrI !CYCGRGAvrII C!CTAGGAxyI CC!TNAGGBalI TGG!CCABamHI G!GATCCBanI G!GYRCCBanII GRGCY!CBanIII AT!CGATBbeI GGCGC!CBbiII/AcyI GR!CGYCBbvI GCAGCNNNNNNNN!BbvI !NNNNNNNNNNNNGCTGCBbvII GAAGACNN!BbvII !NNNNNNGTCTTCBcefI ACGGCNNNNNNNNNNNN!BcefI !NNNNNNNNNNNNNGCCGTBclI T!GATCABcnI CC!SGGBglI GCCNNNN!NGGCBglII A!GATCTBinI !NNNNNGATCC BinI GGATCNNNN! BsePI !GCGCGCBsmAI !GTCTCBsmAI !GAGACBsmI GAATGCN!BsmI G!CATTCBspI GDGCH!CBspHI T!CATGABspMI ACCTGCNNNN!BspMI !NNNNNNNNGCAGGTBspMII T!CCGGABsrI ACTGGN!BsrI C!CAGTBssHII G!CGCGCBstBI TT!CGAABstEII G!GTNACCBstI G!GATCCBstNI CC!WGGBstPI G!GTNACCBstUI CG!CGBstXI CCANNNNN!NTGGBstYI R!GATCYBsuI CC!TNAGGCcrI C!TCGAGCfoI GCG!CCfrI R!CCGGYCfrI G!GNCCCfrI Y!GGCCRClaI AT!CGATCviJI RG!CY CvnI CC!TNAGGDdeI C!TNAGDpnI GA!TC DraI TTT!AAADraII RG!GNCCYDraIII CACNNN!GTGDsaI C!CRYGGEaeI Y!GGCCREagI C!GGCCGEarI !CTCTTCEarI !GAAGAGEclXI C!GGCCGEcoI TAC!GTAEcoI GGTCTCN!EcoI !NNNNNGAGACCEcoI G!GWCCEcoIII AGC!GCTEcoI C!GGCCGEcoI !CTGAAGEcoI !CTTCAGEcoI CC!TNAGGEcoNI CCTNN!NNNAGGEcoOI RG!GNCCYEcoRI G!AATTCEcoRII !CCWGGEcoRV GAT!ATC EcoTI C!CWWGGEcoTI ATGCA!TEcoTI GRGCY!C EheI GGC!GCCEspI GC!TNAGCFinI !GTCCCFinI !GGGACFnuHI GC!NGCFokI GGATGNNNNNNNNN!FokI !NNNNNNNNNNNNNCATCCFspI TGC!GCAGdiII !NNNNNYGGCCGGdiII CGGCCRN!GsuI !CTCCAGGsuI !CTGGAGHaeI WGG!CCWHaeII RGCGC!YHaeIII GG!CC HapII C!CGGHgaI GACGCNNNNN!HgaI !NNNNNNNNNNGCGTCHgiAI GWGCW!CHgiEII !ACCNNNNNNGGTHhaI GCG!CHinI GR!CGYCHinPI G!CGCHincII GTY!RACHindIII A!AGCTT HinfI G!ANTCHpaI GTT!AACHpaII C!CGGHphI GGTGANNNNNNNN!HphI !NNNNNNNTCACCKpnI GGTAC!CKspI CTCTTCN!KspI !NNNNGAAGAGMaeI C!TAGMaeII A!CGTMaeIII !GTNACMboI !GATC MboII GAAGANNNNNNNN!MboII !NNNNNNNTCTTCMfeI !CAATTGMflI R!GATCYMluI A!CGCGTMmeI !TCCRACMmeI !GTYGGAMnlI CCTCNNNNNNN!MnlI !NNNNNNNGAGGMroI T!CCGGAMseI T!TAAMspI C!CGGMstI TGC!GCAMstII CC!TNAGGMvaI CC!WGGNaeI GCC!GGCNarI GG!CGCCNciI CC!SGGNcoI C!CATGGNdeI CA!TATGNdeII !GATCNheI G!CTAGCNlaIII CATG!NlaIV GGN!NCCNruI TCG!CGANsiI ATGCA!TNsp()I RCATG!YNsp()V TT!CGAANspBII CMG!CKGNspII GDGCH!CNspIII C!YCGRGNspIV G!GNCC NunII GG!CGCCPaeR C!TCGAGPalI GG!CCPflMI CCANNNN!NTGGPleI GAGTCNNNN!PleI !NNNNNGACTCPmaCI CAC!GTGPpuMI RG!GWCCYPstI CTGCA!GPvuI CGAT!CGPvuII CAG!CTGRsaI GT!ACRsrI G!AATTCSacI GAGCT!CSacII CCGC!GGSalI G!TCGACSauAI !GATCSauI G!GNCC SauI CC!TNAGGScaI AGT!ACTScrFI CC!NGGSduI GDGCH!CSecI C!CNNGGSexI !CTCGAGSfaNI GCATCNNNNN!SfaNI !NNNNNNNNNGATGCSfiI GGCCNNNN!NGGCCSinI G!GWCCSmaI CCC!GGGSnaBI TAC!GTASnaI !GTATACSpeI A!CTAGTSphI GCATG!CSplI C!GTACGSspI AAT!ATTSstI GAGCT!CSstII CCGC!GGSstIII !ACGTStuI AGG!CCTStyI C!CWWGGStySJI !GAGNNNNNNGTRCStySJI !GYACNNNNNNCTCTaqI T!CGATaqII GACCGANNNNNNNNNNN!TaqII !NNNNNNNNNTCGGTCTaqII CACCCANNNNNNNNNNN!TaqII !NNNNNNNNNTGGGTGThaI CG!CGTspI !GTSACTspEI !AATT TthI GACN!NNGTCTthII CAARCANNNNNNNNNNN!TthII !NNNNNNNNNTGYTTGTthHBI T!CGAVspI AT!TAATXbaI T!CTAGAXcyI C!CCGGGXhoI C!TCGAGXhoII R!GATCY XmaI C!CCGGGXmaIII C!GGCCGXmnI GAANN!NNTTCXorII CGAT!CG。
常用限制性内切酶酶切位点汇总之欧阳歌谷创作
AatII识别位点欧阳歌谷（2021.02.01）Acc65I 识别位点AccI 识别位点AciI 识别位点AclI 识别位点AcuI识别位点AfeI 识别位点AflII 识别位点AflIII 识别位点AgeI 识别位点AhdI识别位点AleI 识别位点AluI 识别位点AlwI 识别位点AlwNI识别位点ApaI 识别位点ApaLI 识别位点ApeKI 识别位点ApoI 识别位点AscI识别位点AseI 识别位点AsiSI 识别位点AvaI 识别位点AvaII 识别位点AvrII 识别位点BaeI识别位点BamHI 识别位点BanI 识别位点BanII 识别位点BbsI识别位点BbvCI识别位点BbvI 识别位点BccI 识别位点BceAI识别位点BcgI 识别位点BciVI 识别位点BclI 识别位点BfaI 识别位点BfuAI识别位点BglI 识别位点BglII 识别位点 BlpI 识别位点Bme1580I识别位点BmgBI 识别位点BmrI识别位点BmtI 识别位点BpmI识别位点Bpu10I 识别位点BpuEI 识别位点BsaAI 识别位点BsaBI识别位点BsaHI 识别位点BsaI识别位点BsaJI 识别位点 BsaWI 识别位点BsaXI 识别位点BseRI 识别位点BseYI 识别位点BsgI识别位点BsiEI 识别位点BsiHKAI识别位点BsiWI 识别位点BslI识别位点BsmAI识别位点BsmBI识别位点BsmFI识别位点BsmI 识别位点BsoBI 识别位点Bsp1286I识别位点BspCNI识别位点BspDI 识别位点BspEI 识别位点BspHI 识别位点BspMI识别位点BspQI识别位点BsrBI 识别位点BsrDI识别位点BsrFI 识别位点BsrGI 识别位点BsrI 识别位点BssHII识别位点BssKI 识别位点BssSI 识别位点BstAPI识别位点BstBI 识别位点BstEII识别位点BstNI 识别位点BstUI 识别位点BstXI识别位点BstYI 识别位点BstZ17I识别位点Bsu36I识别位点BtgI 识别位点BtgZI识别位点BtsCI识别位点BtsI识别位点Cac8I 识别位点ClaI 识别位点CspCI识别位点CviAII 识别位点CviKI-1识别位点CviQI 识别位点DdeI 识别位点DpnI识别位点DpnII 识别位点DraI 识别位点DraIII识别位点DrdI识别位点EaeI 识别位点EaeI 识别位点EagI 识别位点EarI 识别位点EciI识别位点EcoNI识别位点EcoO109I识别位点EcoP15I识别位点EcoRI 识别位点EcoRV 识别位点FatI 识别位点FauI识别位点Fnu4HI 识别位点FokI 识别位点FseI 识别位点FspI 识别位点HaeII 识别位点HaeIIIHgaI 识别位点HhaI 识别位点HincII 识别位点HindIII识别位点HinfI 识别位点HinP1I 识别位点HpaI 识别位点HpaII 识别位点HphI识别位点Hpy188I识别位点Hpy188III识别位点Hpy99I 识别位点HpyA V识别位点HpyCH4III识别位点HpyCH4IVHpyCH4V识别位点KasI 识别位点KpnI 识别位点MboI 识别位点MboII识别位点MfeI 识别位点MluI 识别位点MlyI 识别位点MmeI识别位点MnlI 识别位点MscI 识别位点MseI 识别位点MslI识别位点MspA1I识别位点MspI 识别位点MwoI识别位点NaeI 识别位点NarI 识别位点NciI 识别位点NcoI 识别位点NdeI 识别位点NgoMIV识别位点NheI 识别位点NlaIII 识别位点NlaIV 识别位点NmeAIII识别位点NotI识别位点NruI 识别位点NsiI 识别位点NspI 识别位点PacI 识别位点PaeR7I识别位点PciI 识别位点PflFI识别位点PflMI识别位点PhoI 识别位点PleI 识别位点PmeI识别位点PmlI 识别位点PpuMI识别位点PshAI识别位点PsiI 识别位点PspGI 识别位点PspOMI识别位点PspXI识别位点PstI 识别位点PvuI 识别位点 PvuII 识别位点 RsaI 识别位点RsrII 识别位点 SacI 识别位点 SacII 识别位点 SalI 识别位点SapI识别位点Sau3AI 识别位点 Sau96I 识别位点 SbfI 识别位点ScaI 识别位点ScrFI 识别位点SexAI识别位点SfaNI 识别位点SfcI 识别位点SfiI识别位点SfoI 识别位点SgrAI识别位点SmaI 识别位点SmlI 识别位点SnaBI 识别位点 SpeI 识别位点 SphI 识别位点 SspI 识别位点StuI 识别位点StyD4I 识别位点StyI 识别位点SwaI 识别位点Taq αI 识别位点TfiI 识别位点TliI 识别位点 TseI 识别位点Tsp45I 识别位点 Tsp509I 识别位点TspMI 识别位点TspRI识别位点Tth111I识别位点XbaI识别位点XcmI识别位点XhoI识别位点XmaI识别位点XmnI识别位点ZraI识别位点。
质粒DNA限制性酶切图谱分析
实验结果：分析D酶NA切M图ar谱ker (2ul，6X点样液2 ul，电极缓冲液
五、注意事项——限制性内切酶酶切
１．内切酶： 不应混有其它杂蛋白特别是其它内切酶或外切酶的污染； 注意内切酶的识别位点及形成的粘性末端； 内切酶的用量：根据内切酶单位和ＤＮＡ用量而定，通常
1u指在适当条件下，1小时内完全酶解１ug特定ＤＮＡ底物 所需要的限制性内切酶量，使用中一般以１ug DNA对２－ ３u酶短时间为宜。 同时内切酶体积不能超过反应体系１０％，因内切酶中含 ５０％甘油，体系中甘油超过５％会抑制内切酶活力； 内切酶操作应在低温下进行（冰上）；使用时防止操作中 对内切酶的污染。
六、限制性内切酶酶切常见问题分析 问题一：DNA完全没有被内切酶切割
原 因
1. 内切酶失活
2. DNA不纯，含有SDS，酚， EDTA等内切酶抑制因子
3. 条件不适（试剂、温度） 对
4.
DNA酶切位点上的碱基被甲 基化
策
5. DNA酶切位点上没有甲基化 （如Dpn I）
6. DNA位点上存在其它修饰 7. DNA不存在该酶识别顺序
6. 将DNA底物与λDAN混匀进行切割验 证
7. 换用其它的酶切割DNA或过量酶消 化进行验证
六、限制性内切酶酶切常见问题分析
问题二：DNA切割不完全
原
因
1. 内切酶活性下降
2. 内切酶稀释不正确
3. DNA不纯，反应条件不佳
4. 内切酶识别的DNA位点上的碱 基被甲基化或存在其它修饰
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