LB培养液的配制
LB配料
实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100 mg/ml)IPTG(24 mg/ml)X-Gal (20 mg/ml)LB 培养基■ 组份浓度100 mg/ml Ampicillin■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量5 g Ampicillin 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。
4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。
■ 组份浓度24 mg/ml IPTG■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1.2 g IPTG 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 用0.22 μm 滤器过滤除菌。
4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。
■ 组份浓度20 mg/ml X-Gal■ 配制量50 ml■ 配制方法 1. 称量1 g X-Gal 置于50 ml 离心管中。
2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml。
3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。
■ 组份浓度1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，1%（W/V）NaCl■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L 烧杯中。
Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH 值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
TB 培养基0.5%（W/V）Yeast Extract1%（W/V）NaCl0.1 mg/ml Ampicillin■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 称取下列试剂，置于1 L 烧杯中。
溶液配制
各操作步骤试剂与缓冲液的配制碱裂法提取质粒1、LB培养基（配制1）胰化蛋白胨1%酵母提取物0.5%NaCl 1%（pH7.0）方法：分别称取胰化蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、NaCl 10 g，溶于950 ml 去离子水中，加热直至溶质全部溶解。
用5 mol ·L-1 NaOH(约0.2ml)调pH至7.0。
用去离子水定容至1 L。
在0.1 M pa高温下蒸汽灭菌20 min。
(若制备固体培养基定容前加入2%的琼脂，加热使其溶解，调pH至7.0。
再用去离子水定容至1L。
在0.1 M pa高压下蒸汽灭菌20 min。
)2、碱裂解溶液Ⅰ(配制100 ml)葡萄糖50 mmol/LTris-Cl(pH 8.0) 25 mmol/LEDTA (pH 8.0) 10 mmol/L方法：分别称取0.9909 g 葡萄糖、0.3029 g Tris 、0.3722 g EDTA 置于100 ml 的烧杯中，加入80 ml的蒸馏水使之溶解，用浓盐酸调pH至8.0后转入容量瓶中定容至100 ml。
在0.1 M pa压力下灭菌15 min，装于棕色试剂瓶中保存于4℃。
3、碱裂解溶液Ⅱ(配制100 ml)0.005 mol/L NaOH1% (m/V) SDS方法：分别称取0.02 g NaOH 、1 g SDS置于100 ml的烧杯中，加入80 ml 蒸馏水使之溶解，转入容量瓶中定容至100 ml。
装于棕色试剂瓶中，室温保存。
注：碱裂解溶液Ⅱ要现用现配制，室温下使用。
4、碱裂解溶液Ⅲ(配制100 ml)5 mol/L 乙酸钾60.0 ml冰乙酸11.5 mlH2O 28.5 ml方法：用量筒分别量取5 mol/L 乙酸钾60.0 ml［5 mol/L乙酸钾的配制(100 ml)：称取29.4420 g乙酸钾置于100 ml的烧杯中，加入80 ml蒸馏水使之溶解，转入容量瓶中定容至100 ml。
］、11.5 ml冰乙酸于100 ml的容量瓶中，加蒸馏水定容至100 ml。
LB培养基
LB培养基：10 g牛肉膏蛋白胨，5 g酵母浸膏，2 g氯化钠(NaCl)，0.1 g 葡萄糖(C6H12O6)，5 g乳酸钠(C3H5NaO3)溶于1 L水，自然pH值；固体培养基中加入2.5%的琼脂。
取制得的土壤样品用于分离筛选重金属抗性菌株，称取10 g晒干的土壤样品于150 ml已灭菌的锥形瓶中，加入10 ml灭菌培养基，于30 ℃培养箱中培养4 d，在火焰旁放入装有100mL无菌水的锥形瓶中，震荡10min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，制成稀释度为10-1的土壤悬液。
另取6支装有9ml无菌水试管，用特种铅笔编写10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，放在试管架上。
让制好的10-1土壤悬液静止0.5min，取1支无菌移液管，从移液管包装纸上半段（近吸管口）撕口，将包装纸分成上下两段，去上段包装纸，左手持锥形瓶底，以右手掌及小指、无名指夹住锥形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞（棉塞夹在手上，不得放在桌面上），去下段包装纸，将移液管吸液端伸进锥形瓶内，吸取1ml土壤悬液（常用嘴巴吸取，也可用定量移液器或自动移液器吸取），右手将棉塞插回锥形瓶上，左手放下锥形瓶，换持编号为10-2的无菌水试管，在火焰旁拔出棉塞（试管塞），将移液管伸进无菌水试管内，放入土壤悬液，并在试管内反复吹吸3次，使之充分混匀，制成10-2土壤稀释液，取出移液管，插回棉塞（试管盖）。
接着换一支无菌移液管，按照前面的方法从编号为10-2的试管中吸取1mL稀释液，加入编号为10-3的无菌水试管中，混匀后制成10-3土壤稀释液。
继续上述操作，一次制成10-4、10-5、10-6土壤稀释液。
本次实验共取样6份，随机抽取两份土样，按照上述方法制备土壤稀释液Ⅰ组和Ⅱ组，待下面实验备用。
用移液枪从第Ⅰ组和第Ⅱ组的10-4、10-5和10-6稀释液中分别取0.1 ml 接种于含有重金属的LB固体培养基上(0，0.005,0.01,0.02,0.05,0.1g/L)，编号分别为A、B、C、D、E、F，轻轻转动平板，将菌液用三角棒涂布于培养基上，将平板倒置于30℃培养箱中培养5 d，观察菌落的形态，采用常规平板划线法分离纯化，并用相机拍照。
lb培养液的配制
如对您有帮助，请购买打赏，谢谢您！1．称量：准确称取各成分。
蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。
配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。
2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。
配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。
将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。
否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
三、灭菌和消毒1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。
3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
lb培养基配方
lb培养基配方LB培养基是一种常用的培养基，用于细菌的培养和研究。
它最早由英国微生物学家Luria和Bertani于1950年代开发而成，主要用于大肠杆菌的培养。
LB培养基无需添加任何氨基酸、维生素、需氧物质和辅酶，因此制备简单、成本较低，也适合于其他许多细菌的培养。
LB培养基的配方如下：1. 蛋白消化物：LB培养基的主要成分是蛋白质及其消化产物。
通常使用的是胨（peptone）和酵母提取物（yeast extract）。
胨是将蛋白质消化后得到的胨肽混合物，为细菌提供氮源；酵母提取物则含有丰富的维生素B族和其他重要的生长因子。
2. 水合工业砂：水合工业砂是一种常用的固体培养基凝胶剂，用于将液体培养基凝胶化，增加其黏度，方便细菌生长和扩散。
3. NaCl盐：用于提供适当的离子浓度和渗透压，促进细菌的正常生长。
4. 磷酸缓冲液：用于控制培养基的pH值，维持在适宜的范围。
一般使用磷酸盐缓冲液。
5. 蓖麻油：LB培养基中添加少量的蓖麻油，可以防止细菌在培养过程中产生的氧气。
6. 蒸馏水：用于制备培养基的溶液，保证其纯净无菌。
配制过程如下：1. 称取适量的胨和酵母提取物，按照一定的比例加入蒸馏水中。
2. 加入适量的溶液并搅拌均匀。
3. 调节pH值，通常为7.0左右。
可以使用酸或碱溶液进行调节。
4. 加热溶液至沸腾，搅拌使其充分溶解。
5. 将溶液倒入容器中，加入适量的水合工业砂。
6. 装瓶后密封并进行高温高压灭菌。
7. 置于合适的温度（通常为37°C）下储存。
在制备LB培养基时，需要注意以下几点：1. 严格按照配方比例称取各种成分，避免超量或不足。
2. 确保蒸馏水和其他物品的无菌性。
3. 倒入容器后，要尽快加入水合工业砂并搅拌均匀，以避免结块。
4. 灭菌条件要符合规范，确保培养基的无菌性。
总之，LB培养基是一种简单经济、易于制备的培养基，适用于细菌的一般生长和实验研究。
在实际操作中，需要严格按照配方比例和制备工艺进行，以保证培养基的质量和使用效果。
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方常用缓冲液及培养基配方LB液体培养基：Bacto-蛋白胨10g酵母抽提物5g氯化钠10g加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
LB固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。
SOB液体培养基Bacto-蛋白胨20g酵母抽提物5gNaCl 0.5g加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。
使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。
SOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。
麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。
NA固体培养基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨蔗糖琼脂粉5g 10g 15g加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。
TB培养基：将下列组分溶解在0.9L水中：Bacto-蛋白胨12g酵母抽提物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。
溶液Ⅰ葡萄糖2.25 g 50mmol/L1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。
溶液Ⅱ10 mol/L NaOH 2ml10% SDS 10ml用水定容至100 ml，现配现用。
溶液Ⅲ5 mol/L 醋酸钾60ml冰醋酸11.5ml水28.5ml高压灭菌后保存。
高盐TE缓冲液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB抽提液2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵)100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 *1.4mol/L NaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB/NaCl 溶液（10% CTAB/0.7mol/L NaCl）在80ml H2O中溶解4.1g NaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。
常用分子实验技术
LB液体培养基：酵母粉5 g/lC(0.5%)，胰蛋白胨10 g/l(1%)，NaCl 5 g/l(0.5%) 称取各组分，加入去离子水后用10 mol/l NaOH调pH至7.0，并用去离子水定容。
混匀后121°C 高压蒸气灭菌25 min。
LBS液体培养基：酵母粉5 g/l，胰蛋白胨10 g/l，NaCl 15 g/l(3%) 称取各组分，加入去离子水后用10 mol/l NaOH调pH至7.0，并用去离子水定容。
混匀后121°C高压蒸气灭菌25 min。
LB/LBS固体培养基：相应的液体培养基加入1.5%琼脂粉，倒入锥形瓶，混匀后121°C高压蒸气灭菌25 min，冷却后倒入平板即可。
AIX平板的配置：100ml 1%LB+100 μl Amp+100 μl IPTG+100 μl X-gal1% (W/V) Trytone0.5% (W/V) yeast extract1% (W/V) NaCl0.1mg/ml Amp0,024mg/ml IPTG0.04mg/ml X-Gal1.5%(W/V) agar100ml体积=1% LB+10mg Amp + 2.4 mg IPTG+4mg X-gal储存：Amp：100mg/mlIPTG：24mg/mlX-gal：20mg/mlLB/Amp培养基：0.1mg/ml AmpAmpicilin(1000×): 100mg/ml Ampicillin称5g Ampicilin溶于40ml去离子水中，定容至50ml，过滤灭菌，-25度保存。
100×：10mg/ml：1g Ampicillin+ 100ml H2OIPTG 24mg/ml：1.2g+50ml d H2O，定容，过滤灭均X-gal 20mg/ml：1g+40mlDMF(二甲基甲酰胺) 溶解后定容至50ml，分装，-25度冻存IPTG(238.3)终浓度0.1mM/ 1mM：称0.2383g（0.4766g）IPTG粉末，溶于去离子水中10ml（20ml），过滤灭菌，分装，得到100mM IPTG对于终浓度0.1mM 为1000×浓缩液对于终浓度1mM 为100×浓缩液M9培养及(基础盐培养基)配每升M9培养基，在750ml无菌去离子水中加入：5×M9盐溶液200ml适当碳源的20%溶液20ml ，如20% 葡萄糖溶液灭菌水补足5×M9盐溶液1L：NaHPO4.7H2O 64gKH2PO4 15gNaCl 2.5gNH4Cl 5.0g每200ml一份分装后，高温高压灭菌PBS缓冲液：137mmol/L NaCl2.7mmol/L KCL10mmol/L NaHPO42mmol/L KH2PO4用800ml dd H2O溶解：NaCl 8g，KCL 0.2g，NaHPO4 1.44g，KH2PO4 0.24g；用HCl调pH至7.4，加水至1L，灭菌。
液体培养基配制实验报告
一、实验目的1. 理解液体培养基的配制原理和方法。
2. 掌握液体培养基的配制步骤和注意事项。
3. 熟悉液体培养基的灭菌方法。
二、实验原理液体培养基是一种供微生物生长繁殖的营养物质混合物，主要由碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等组成。
根据微生物的种类和实验目的，可以配制不同类型的液体培养基。
本实验以LB液体培养基为例，介绍液体培养基的配制过程。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）胰蛋白胨：25g（2）酵母提取物：5g（3）氯化钠：5g（4）蒸馏水：1000mL（5）pH试纸（6）高压蒸汽灭菌锅2. 实验仪器：（1）分析天平（2）烧杯（3）玻璃棒（4）量筒（5）三角瓶（6）棉塞四、实验步骤1. 称量：准确称取25g胰蛋白胨、5g酵母提取物和5g氯化钠。
2. 溶解：将称取好的原料放入烧杯中，加入约500mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
3. 定容：将溶解好的培养基转移至三角瓶中，用蒸馏水定容至1000mL。
4. 调pH：用pH试纸检测培养基的pH值，若pH值不在6.8-7.2之间，可用1M的HCl或NaOH溶液进行调节。
5. 灭菌：将配制好的培养基分装到灭菌瓶中，用棉塞塞紧，放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌15min。
6. 冷却：待培养基冷却至室温，即可使用。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本实验成功配制了LB液体培养基，培养基颜色呈淡黄色，透明度良好。
2. 结果分析：（1）称量准确是保证培养基质量的关键，本实验称量误差控制在±0.1g以内。
（2）溶解过程中，玻璃棒搅拌可防止原料沉淀，确保培养基均匀。
（3）定容过程中，需注意量筒的读数，避免定容过量或不足。
（4）调节pH值时，应遵循“宁酸勿碱”的原则，避免过度调节。
（5）灭菌过程中，高压蒸汽灭菌锅的压力和温度对灭菌效果有重要影响，本实验灭菌效果良好。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了液体培养基的配制原理、方法和步骤，了解了液体培养基的灭菌过程。
LB培养基
LB培养基LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增,达到使用要求。
培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。
通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。
成分表(1L溶液中)：Tryptone(胰蛋白胨)：10gYeast Extract(酵母提取物)：5gNaCl(氯化钠)：10g若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)，切记琼脂直接加入瓶子中，因为它很黏很难冲洗下来。
若配制低盐培养基，则全部减半。
液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著）配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种 E.coli的生长）。
用去离子水定容至1L。
121℃高压灭菌20min。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 分装100mg/ml，使用浓度100μg/ml在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液）。
瓶盖用封口膜封好，4℃保存。
固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素 AMP 在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液），并且倒好培养皿（大约1/3高度）。
1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：121℃高压灭菌20min。
高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
3.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，紫外照射10-15分钟。
分子操作基本技术实验报告LB培养基的配制和大肠杆菌的培养
实验一LB培养基的配制和大肠杆菌的培养第一部分理论知识一．生物工程所需的微生物学原理基因工程主要采用革兰氏阴性细菌作为宿主细胞表达系统。
下面着重讲述大肠杆菌。
1.大肠杆菌的一般特性大肠杆菌（Escherichia coli，简写为E.coli）属于革兰氏阴性细菌，大肠杆菌不仅能液体培养，也能在固体培养基上很好地生长。
在细菌培养过程中，有两方面的因素影响它的纯度：1.其它细菌造成的细菌污染。
因此，用于培养的所有药品、器皿必须消毒，全部过程应在无菌条件下操作；2.遗传的异质性。
遗传上的异质性发生在培养过程中原有细菌株系遗传成分的变异，导致原有标记性状的改变。
其原因可能是天然突变的结果；或是在由质粒携带标记性状的情况下，异质性可能来自细胞分裂过程中质粒的丢失或质粒的分离。
据目前所知，许多质粒以相当高的频率在寄主细胞分裂时发生分离，从而引起所带性状的变化。
2. 抗生素抗性抗生素阻止细菌生长往往有抑菌和杀菌两种方式。
抑菌就是指药物仅仅使细菌生长受阻而未直接引起细胞死亡；而杀菌是指药物引起细胞裂解或死亡。
一种抗生素抑菌或杀菌效果取决于细菌接触药物的条件。
例如，大肠杆菌接触低水平的四环素将会通过四环素与核糖体结合，影响细菌蛋白质的合成而最终抑制细胞生长。
然而，结合着四环素的核糖体是可恢复的，因为受抑制的细胞被稀释到无药物的培养基上，将会重新恢复正常细胞的生长。
这种抑制的可恢复性表明四环素正以抑菌的方式发挥功能。
当四环素浓度加大，阻止细菌声中的另一种方式变得明显而不可逆，亦即在高浓度下，四环素以杀菌方式发挥功能。
细菌有三种抗生素抗性的机制：（1）抗生素在细菌中作用的目标位置发生了变化。
例如蛋白质合成抑制剂链霉素的抗性通常是由于细菌合成了一种变化了的核糖体蛋白质，这种蛋白质不再与链霉素相连，因此阻止了链霉素的抑制行为；（2）组织药物进入细胞。
如对四环素的抗性是由于细菌合成了阻止四环素进入细胞的膜蛋白，因而四环素的穿透性大为减低所致；（3）改变或钝化药物。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。
LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。
胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。
酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基配方(每升)酵母提取物5g胰化蛋白胨10g氯化钠10gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
LB固体培养基LB培养基1L琼脂粉15gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。
LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
LB固体培养基配制方法
LB 固体培养基配制方法
品牌
货号
批号
2. 仪器 天平： 灭菌锅 4℃冰箱 超净台
3. 配制方法 1) 组分浓度：
1%（w/v）胰蛋 白胨，0.5%（w/ v）酵母提取物，1 %（w/v ）氯化钠，1.5%（w/ v）琼脂 粉 2) 配制量：1L 3) 方法 a) 分别称取胰蛋白胨 10g、酵母提取物 5g 和 NaCl 10g，置于烧杯中； b) 加入 800mL 蒸馏水于烧杯中，用玻璃棒搅拌，使药品全部溶化； c) 用 1M NaOH 调 PH 至 7.2； d) 将溶液倒入量筒中，加入 15g 琼脂粉，补加蒸馏水至 1L； e) 高压蒸汽灭菌 20min； f) 待培养基温度降至 50℃时，在超净台上加入所需抗生素，摇匀； g) 铺板，90mm 直径的培养皿约需 20mL 培养基； h) 带培养基凝固（约 10 分钟）后，将平板倒置，
细菌培养常用溶液配制
1、大肠杆菌的液体培养基1)LB（Luria-Bertani）液体培养基：配制每升培养基，应在950mL去离子水中加入：胰化蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl 10g用5mol/L NaOH （约0.2mL）调pH至7.0，用去离子水定容至1L。
在15 psi（1.05 kg/cm2）高压下蒸汽灭菌20min。
注：1Mpa=145psi(pounds per square inch)=10.2kg/cm22)LB固体培养基：在LB液体培养基中加入1.5%的琼脂粉，在15 psi高压下蒸汽灭菌20min，室温保存。
3)氨苄青霉素（Amp）去离子水配成浓度为50mg/mL，0.22μm滤器过滤除菌，-20℃备用。
4)表达用LB液体培养基配制20%葡萄糖，15psi灭菌20min，添加至LB液体培养基中，使终浓度为0.2%。
5)表达用LB固体培养基待高压LB固体培养基温度降至50mL左右，取20%过滤灭菌的葡萄糖加入LB固体培养基中，终浓度为0.2%，加氨苄青霉素到100-120μg/mL浓度2、溶菌酶存贮液（10mg/mL）使用前用10mmol/L Tris-Cl（pH 8.0）即刻溶解溶菌酶，配制成10mg/mL浓度的贮存液。
（确保Tris-Cl的pH是8.0，低于该值，溶菌酶不能有效工作。
）3、某一特定pH的0.05mol/L的Tris-Cl缓冲液配制将50mL的0.1mol/L Tris碱溶液与下表所示相应体积的0.1mol/L的HCl混合，加水调整至100mL。
（10mmol/L和100mmol/L的Tris溶液pH值会相差0.1pH单位，溶液浓度越大，则其pH值越高。
）所需pH值所需0.1mol/L的HCl的体积（mL）7.8 34.57.98.0 8.1 8.2 32.0 29.2 26.2 22.94、透析袋处理液（500mL）1mM EDTA –Na 0.186g2% NaHCO310g定容至500mL处理方法：1)煮液煮沸10min2)冲洗透析袋内外壁3)置于dd水中煮沸10min4)冲洗内外壁5)放入新鲜dd水中于4℃保存。
实验室常用试剂配制方法
实验室常用试剂配制方法一、50×TAE：称242g Tris溶于800mL 双蒸水中，加入57.1mL 冰醋酸和18.6g（或100mL 0.5mol/L，pH=8.0）EDTA，再加水定容至1L，室温保存备用。
二、1×TAE：将50×TAE加双蒸水稀释至1×使用。
三、LB液体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）和10g NaCl，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，冷却至室温后4℃保存备用。
四、100mg/mL氨苄青霉素（Amp）：称取100mg粉末状氨苄青霉素（Amp）置于1.5mL 离心管中，加入800μL 无菌水使其完全溶解，定容至1mL，-20℃保存备用。
五、LA液体培养基：按照x mL培养基加入x μL的比例将100mg/mL的氨苄青霉素（Amp）加入LB液体培养基中，4℃保存备用。
六、LB固体培养基：称取10g蛋白胨（bacto-typtone）、5g 酵母提取物（bacto-yeast extract）、10g NaCl和15g琼脂粉，溶于950mL 双蒸水中，摇动至完全溶解，定容至1L，120℃湿热灭菌20min，稍冷却后按照x mL培养基加入x μL的比例加入100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），充分混匀后倒入培养皿中制成琼脂平板，4℃保存备用。
（1L培养基大约可以倒40个平板）七、200mg/mL IPTG：称取2g 粉末状IPTG溶于8mL 双蒸水中，再定容至10mL，配成200mg/mL 溶液，（用0.22μm滤膜过滤除菌，）分装为每份1mL，-20℃保存备用。
八、20mg/mL X-gal：将X-gal溶于二甲基甲酰胺，配成20mg/mL，分装后于-20℃避光保存。
九、DEPC水：将水加入干净玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（v/v），放置过夜，高压湿热灭菌，4℃保存备用。
常见植物培养基的配制配方
2015-4-16常见培养基的制备LB；G AUSE I;P AD培养基[]LB培养基LB（lysogeny broth）培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
LB培养基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g酵母提取物(yeast extract) 5g氯化钠(NaCl) 10g固体培养基另加琼脂粉(15-20)g加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。
配制方法：✓称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。
✓溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。
✓调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
✓定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积.✓加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
✓分装、加塞、包扎。
✓高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
培养细菌：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)天然培养基；Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂）成分：✓KNO3 1g✓Soluble starch（可溶性淀粉）20g✓K2HPO40.5g✓MgSO4 .7H2O 0.5g✓NaCl 0.5g✓FeSO40.01g✓Agar （琼脂）20g✓water （水） 1000ml✓pH 7.2-7.4方法：加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，121℃高压灭菌20分钟备用.。
性状：干燥粉末，易吸潮。
PDA培养基制作PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它属于固体培养基、半合成培养基。
PDA 培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。
LB培养基怎样配制
LB培养基怎样配制LB一般被解释为Luria-Bertani，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语lysogeny broth，即溶菌肉汤。
LB培养基是近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基之一。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称普通培养基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。
酵母提取物：酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等抽提，再经生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的淡黄色粉末，其中氨基酸含量30%以上，总蛋白50%以上，核苷酸10%以上，广泛用作生物培养基和食品调味品制造原料。
胰化蛋白胨：一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的白色粉末，含有丰富的氮源、氨基酸等。
酵母提取物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐、生长因子、维生素等;蛋白胨主要提供氮源;NaCl主要提供微生物生长环境(如渗透压)，其次是提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或垫以石棉网直接煮沸溶化。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
LB培养基配方(每升)酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化钠 10gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
LB固体培养基LB培养基 1L琼脂粉 15gNaOH调pH至7.0，121℃、20min高压灭菌。
有时需在培养基中添加抗生素，琼脂凝固点为40℃，所以添加抗生素最好在50～55℃。
LB培养基用途：用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
LB培养基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;葡萄糖提供碳源;琼脂是培养基的凝固剂。
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1．称量：准确称取各成分。
蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50ml。
配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。
2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。
配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。
将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。
否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
三、灭菌和消毒
1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。
3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
4．比较消毒和灭菌：
5．注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。
灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸；③在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；⑤接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；⑥接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落了。