第六章-免疫比浊分析范文.ppt
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（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确
不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
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二、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光
疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测
定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联
系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅
1～2min即可完成。
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抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
复合物产 产生速率 生总量
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一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统
1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的
一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，
与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质
的浓度。
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2.仪器基本组成 系统由分析仪、计算机、条码读取器、打 印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分， 包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和 比色杯装置。
在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关， 而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的 量呈函数关系。
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8
抗原抗体反应曲线
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（二）操作方法
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品） 与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体 反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
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(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角
度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
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(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动
态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
第六章 免疫比浊分析
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❖ 免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应 与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
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第一节 免疫比浊的原理 一、透射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化免疫比浊分析
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3
第一节 免疫浊度分析原理
当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前
向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。
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其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗 原抗体复合物的大小和多少密切相关。
当固定检测角度与发射光的波长时，散射 光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗 原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。
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当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。
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（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。 • 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗
体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散
射光。
悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大
小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素
密切相关。
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不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时， 散射光的强度在各个方向的分布均匀一致
，称Rayleighae散射。
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分 子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等） 的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表 示。
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第一节 免疫浊度分析原理
在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合 物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增 大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
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BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
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（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。 速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
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免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
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一、免疫透射比浊法
（一）原理：
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶 液时，由于溶液中的免疫复合物微粒对光线的吸收、 反射和折射而使透射光减少，可用吸光度表示。
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 （一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗 粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ， 使透射光和散射光即出现显著变化。
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
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第二节 自动化免疫比浊分析
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技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。 此外，要保证待测样本血清的性状符合要 求，如严重脂血等即为不合格样本。
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(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确
不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
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二、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光
疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测
定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联
系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅
1～2min即可完成。
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抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
复合物产 产生速率 生总量
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一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统
1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的
一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，
与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质
的浓度。
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2.仪器基本组成 系统由分析仪、计算机、条码读取器、打 印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分， 包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和 比色杯装置。
在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关， 而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的 量呈函数关系。
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抗原抗体反应曲线
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（二）操作方法
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品） 与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体 反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
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(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角
度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
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(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动
态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
第六章 免疫比浊分析
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❖ 免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应 与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
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第一节 免疫比浊的原理 一、透射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化免疫比浊分析
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第一节 免疫浊度分析原理
当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前
向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。
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其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗 原抗体复合物的大小和多少密切相关。
当固定检测角度与发射光的波长时，散射 光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗 原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。
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当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。
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（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。 • 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗
体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散
射光。
悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大
小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素
密切相关。
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不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时， 散射光的强度在各个方向的分布均匀一致
，称Rayleighae散射。
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分 子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等） 的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表 示。
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第一节 免疫浊度分析原理
在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合 物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增 大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
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（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。 速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
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免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
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一、免疫透射比浊法
（一）原理：
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶 液时，由于溶液中的免疫复合物微粒对光线的吸收、 反射和折射而使透射光减少，可用吸光度表示。
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 （一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗 粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ， 使透射光和散射光即出现显著变化。
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
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第二节 自动化免疫比浊分析
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技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。 此外，要保证待测样本血清的性状符合要 求，如严重脂血等即为不合格样本。
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(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。