第六章-免疫比浊分析范文.ppt
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免疫比浊检验技术原理与进展 ppt课件
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26
3、免疫学检测技术
凝集放射性核素标记 酶标记、荧光标记和胶 体金标记 化学发光物标记或偶联 化学发光反应
27
标记免疫检测技术
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二、免疫沉淀
凝集：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质 参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为凝集反应 （agglutination）是最经典的免疫学检测技术。
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8
半抗原 +
载体
完全抗原
B B B
B Th
Th
抗体
半抗原—载体效应示意图
PPT课件 半抗原 + 蛋白质（载体） ＝ 完全抗原 9
1、抗原与抗体
抗原决定簇：抗原分子存在的能TCR/BCR或抗体Fab片 段特异性结合的特殊化学基团，是免疫应答特异性的 物质基础。 构象决定簇 ：构象决定簇（conformational determinant） 由空间构象形成的决定簇，序列上不连续。 顺序决定簇：顺序决定簇（sequence determinant），又 称线性决定簇（linear determinant），序列相连续的 氨基酸肽片段构成的决定簇。 抗原结合价：抗原结合价（antigenic valence）是指能够 与抗体分子结合的决定簇数目。
免疫比浊分析技术原理与进展
PPT课件
1
免疫比浊检验技术原理与进展
一、免疫学基本原理 二、免疫沉淀 三、免疫比浊技术原理
PPT课件
2
一、免疫学基本原理
1、抗原与抗体 2、抗原抗体的结合——免疫学反应 3、免疫学反应的检测技术
PPT课件
3
1、抗原与抗体
抗原（Antigen, Ag）是刺激机体产生免疫应 答的物质。 “应” 是指抗原刺激机体产生免疫应答产物-抗体或免疫效应细胞 “答” 是指相应抗原与免疫应答产物结合并 将其排除体外） 抗原的免疫原性和免疫反应性 完全抗原与半抗原 抗原表位与抗原结合价位
自动化分析-(免疫比浊)
自动化免疫比浊
➢免疫比浊分析技术发展
两测定Biblioteka 原抗体形成后的阶段 个 测定抗原抗体结合的峰值
散射(终点)比浊
阶
段
速率散射比浊
散射比浊法:
当一束光
在光源的光路方向（50-960）
免 疫 比 浊
线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个
角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
法
因素的影
➢对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。
平光线
散射光θ
透射光
检测器 检测器
光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
❖ 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) ❖ 溶液中形成的复合物分子要足够多 ❖ 控制抗原抗体反应的温度和时间 ❖ 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 ❖ 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 ❖ 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量 呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反 比。
在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积， 减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因素， 均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
《免疫比浊分析》课件
案例三
总结词
辅助诊断、判断病情
详细描述
自身免疫性疾病是一类复杂的疾病，免疫比 浊分析可以检测出自身抗体，辅助医生进行 诊断和判断病情。通过检测自身抗体水平， 有助于了解疾病的活动度和治疗效果。
THANKS
感谢观看
06
案例分享：免疫比浊分析在疾病 诊断中的应用
案例一
总结词
准确、快速、敏感
详细描述
免疫比浊分析在乙肝病毒检测中表现出高准确性和高敏感性，能够快速检测出乙肝病毒 的抗原和抗体，为乙肝的诊断和治疗提供了有力支持。
案例二
总结词
早期发现、监测病情
VS
详细描述
免疫比浊分析用于检测肿瘤标志物，有助 于肿瘤的早期发现和病情监测。通过定期 检测肿瘤标志物水平，可以及时发现肿瘤 复发或转移，为制定治疗方案提供依据。
结果解读
根据实验结果，结合专业知识，对结果进行解读 和解释，为临床诊断和治疗提供依据。
03
免疫比浊分析的仪器与试剂
仪器介绍
仪器类型
介绍免疫比浊分析中常用的仪器 类型，如分光光度计、全自动生 化分析仪等。
工作原理
阐述仪器的工作原理，如光线通 过溶液时发生散射、吸收等现象 ，用于测量物质浓度。
仪器参数
研究进展与展望
• 自动化程度提高：仪器设备的自 动化程度不断提高，减少了人为 误差和操作时间。
研究进展与展望
标准化和规范化
建立统一的检测标准和方法，提高不同仪器 和试剂间的可比性。
智能化发展
结合人工智能、大数据等技术，实现检测结 果的自动分析和解读。
应用拓展
拓展免疫比浊分析在临床诊断、生物医药等 领域的应用范围。
实验注意事项
仪器维护
散射免疫比浊法
第六章 免疫比浊分析
目
录
第一节 免疫比浊技术原理 第二节 自动化免疫比浊分析
第三节 小结
第一节
免疫比浊技术原理
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
一、透射免疫比浊法
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
（二）技术要求
速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及 纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试 剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求， 如严重脂血等即为不合格样本。
（三）方法学评也小，因此结果稳定、可靠， 特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器 设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪 或散射比浊仪均可使用。
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第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
（三）方法学评价
该法具有快速、敏感度及精密度高的特点， 其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体 达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测 标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/ 升水平。
四、免疫胶乳比浊法
（一）基本原理 将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时， 发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗
抗原抗体反应曲线
二、散射免疫比浊法
（一）基本原理
散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，
目
录
第一节 免疫比浊技术原理 第二节 自动化免疫比浊分析
第三节 小结
第一节
免疫比浊技术原理
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
一、透射免疫比浊法
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
（二）技术要求
速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及 纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试 剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求， 如严重脂血等即为不合格样本。
（三）方法学评也小，因此结果稳定、可靠， 特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器 设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪 或散射比浊仪均可使用。
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第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
（三）方法学评价
该法具有快速、敏感度及精密度高的特点， 其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体 达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测 标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/ 升水平。
四、免疫胶乳比浊法
（一）基本原理 将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时， 发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗
抗原抗体反应曲线
二、散射免疫比浊法
（一）基本原理
散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，
《免疫比浊分析》课件
免疫比浊试剂的制备
2
便进行免疫比浊分析实验。
根据实验需求，制备相应的免疫比浊试
剂，确保其质量和稳定性。
3
试管法免疫比浊分析的步骤
按照一定的程序和条件，在试管中进行Βιβλιοθήκη 微量比浊仪法免疫比浊分析的步
4
免疫比浊分析实验。
骤
使用微量比浊仪进行免疫比浊分析，准 确测定样品的蛋白质含量。
3. 数据分析
- 免疫比浊试剂的标准曲线 - 样品测定的结果计算 - 数据分析的示例
《免疫比浊分析》PPT课 件
免疫比浊分析是一种常用的实验方法，用于测定血液或生化样品中的特定蛋 白质含量。本课件将介绍免疫比浊分析的概述、实验步骤、数据分析、实验 注意事项、结论与展望等内容。
1. 概述
- 免疫比浊分析简介 - 免疫比浊分析的应用领域
2. 实验步骤
1
样品和抗原的制备
准备样品和抗原的浓度合适的溶液，以
4. 实验注意事项
样品处理的注意事项
保证样品质量和纯度，避免 样品污染或降解。
免疫比浊试剂的保存和 使用
妥善保存免疫比浊试剂，避 免受到温度、光照等因素的 影响。
实验过程中的注意事项
注意操作规范，避免误差的 产生。
5. 结论与展望
- 结论总结 - 免疫比浊分析的发展前景
6. 参考文献
- 相关研究文献 - 参考书目
免疫比浊法PPT
在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如34％的聚乙二醇等，利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠 近反应，但如浓度不适合，高了会影响其它溶质或产生非特
异性聚集影响结果。
免疫比浊法的特点：
实验原理
优点
稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、 准确。
快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约 大量人力物力，利于大批量样品的处理。
空白管
+蒸馏水 （10mL）
校准管 +IgX试剂 37℃ （1mL） 5min
+校准品 （10mL）
混匀 37℃,10min
OD340
样本管
+样品血清 （10mL）
结果计算方法：
实验结果
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）×= Ig校准浓度（g/L）
校准管吸光度 IgA：1.72 g/L IgG：9.77 g/L IgM，除非放置较长时间 。
如要形成较大的的复合物，抗原抗体量应较大。
实验材料
1.免疫球蛋白A,M,G（IgA, IgM, IgG）测定试剂 2.免疫球蛋白A,M,G （IgA, IgM, IgG）校准品，蒸馏水，
血清样本 3.微量加样枪、试管 4.分光光度仪、水浴箱
实验方法
实验 免疫比浊法检 测免疫球蛋白
免疫系
1
实验原理
2
材料和方法
3
实验结果
实验原理
免疫球蛋白（Ig）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的 球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免疫 应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细 菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、 肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系统性红斑狼疮 患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见；在类风湿关节炎 中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液 免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损
异性聚集影响结果。
免疫比浊法的特点：
实验原理
优点
稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、 准确。
快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约 大量人力物力，利于大批量样品的处理。
空白管
+蒸馏水 （10mL）
校准管 +IgX试剂 37℃ （1mL） 5min
+校准品 （10mL）
混匀 37℃,10min
OD340
样本管
+样品血清 （10mL）
结果计算方法：
实验结果
样本管吸光度 Ig浓度（g/L）×= Ig校准浓度（g/L）
校准管吸光度 IgA：1.72 g/L IgG：9.77 g/L IgM，除非放置较长时间 。
如要形成较大的的复合物，抗原抗体量应较大。
实验材料
1.免疫球蛋白A,M,G（IgA, IgM, IgG）测定试剂 2.免疫球蛋白A,M,G （IgA, IgM, IgG）校准品，蒸馏水，
血清样本 3.微量加样枪、试管 4.分光光度仪、水浴箱
实验方法
实验 免疫比浊法检 测免疫球蛋白
免疫系
1
实验原理
2
材料和方法
3
实验结果
实验原理
免疫球蛋白（Ig）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性的 球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免疫 应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性细 菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、 肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系统性红斑狼疮 患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见；在类风湿关节炎 中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液 免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损
免疫比浊法ppt
-
实验原理
聚乙二醇即PEG是中性、无毒且具有独特理化性质和良 好的生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇具有高度的亲水 性，在水溶液中有较大的水动力学体积，并且没有免疫原性。
在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如34％的聚乙二醇等，利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠 近反应，但如浓度不适合，高了会影响其它溶质或产生非特 异性聚集影响结果。
免疫比浊法的特点：
-
实验原理
优点
稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高，干扰因素少，结果判断更加客观、 准确。
快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约 大量人力物力，利于大批量样品的处理。
能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。
可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析 项目，血清用量少，具有明显的应用优势。
实验 免疫比浊法检 测免疫球蛋白
-
免疫系
-
1
实验原理
2
材料和方法
3
实验结果
-
实验原理
免疫球蛋白（Ig）是指一类具有抗体样结构或具有抗体活性 的球蛋白，能与诱导其产生的抗原发生特异性结合，是体液免 疫应答的主要效应分子。免疫球蛋白水平增高常见于各种慢性 细菌感染，如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿等。在多种自身免疫病、 肝脏疾病患者中可有IgG、IgA、IgM升高：在系统性红斑狼疮 患者中以IgG、IgA或IgG 、IgM升高较多见；在类风湿关节炎 中则以IgM升高为主。免疫球蛋白水平降低多见于先天性体液 免疫缺乏病、肾病综合症、吸收不良综合症、淋巴瘤、放射损 伤和免疫抑制剂治疗后等情况。
混匀
37℃,10min
结果计算方法：
免疫比浊分析
（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
• 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
1．抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 诊断试剂应尽可能 溶液中免
颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝
聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的 一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二、免疫散射比浊法
(一) 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时，
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry） 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动 态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
优选免疫比浊法检测免疫球蛋白Pptppt(共23张PPT)
样品 光电计
滤光片 光源
透射比浊法的缺陷：
(1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分
增浊剂浓度和反应时间掌握不当；
— 是测定抗原子抗体太结合小反应则的动阻态过挡程。不了光线的通过。
不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的周期较长。
快在速光(源不的(必2光达路)平溶方衡向）（液00）中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果
100 % 0%
时间
速率散射比浊法
（一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成
复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的
速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时
间内形成速率下降时，
即出现速率峰，该峰
值的高低，即代表所
读数以吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。 增浊剂浓度和反应时间掌握不当；
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 免疫比浊法检测免疫球蛋白
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量 2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。
值复的合高 物低的，速即度代。2表.所免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水
2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其 缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
免疫浊度法测定中应注意的问题
1、伪浊度的影响 伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性
的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间掌握不 当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变质；器材 尤其是比色杯等不够清洁等因素。 2、非特异性散射光的影响
免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这些 非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗体组 分在3％以下，散射比浊法需保证在 ％以下。
滤光片 光源
透射比浊法的缺陷：
(1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分
增浊剂浓度和反应时间掌握不当；
— 是测定抗原子抗体太结合小反应则的动阻态过挡程。不了光线的通过。
不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的周期较长。
快在速光(源不的(必2光达路)平溶方衡向）（液00）中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果
100 % 0%
时间
速率散射比浊法
（一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成
复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的
速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时
间内形成速率下降时，
即出现速率峰，该峰
值的高低，即代表所
读数以吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。 增浊剂浓度和反应时间掌握不当；
1.免疫球蛋白试剂A,M,G 免疫比浊法检测免疫球蛋白
光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能数量 2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。
值复的合高 物低的，速即度代。2表.所免疫球蛋白试剂A,M,G校准品，蒸馏水
2、散射比浊的优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其 缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
免疫浊度法测定中应注意的问题
1、伪浊度的影响 伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性
的交叉反应性杂抗体成分；增浊剂浓度和反应时间掌握不 当；样品本身的浊度处理不当；试剂的污染和变质；器材 尤其是比色杯等不够清洁等因素。 2、非特异性散射光的影响
免疫浊度法经常受内源性光散射的干扰，为避免这些 非特异性光散射的影响，应用透射比浊法时需保证抗体组 分在3％以下，散射比浊法需保证在 ％以下。
第六章-免疫比浊分析PPT课件
BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。
速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
2.仪器基本组成
ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印 机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液 系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试 剂转盘、软盘驱动器等组成。
•41
• 4.单向琼脂扩散法可用于
• A.抗体定性 B.抗体定量
• C.抗原定性 D.抗原定量
• 5.双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全 相同时，沉淀线出现
• A.二条直线相交叉 C.二条弧线部分融合
B.二条弧线完全融合 D.二条直线不连接
• 6.火箭免疫电泳达到终点时应
• A.火箭峰呈云雾状 B.火箭峰呈圆形
抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间 复合物产 产生速率 生总量
5
8
—
10
13
5
15
25
12
20
60
35
25
150
90
30
230
80
35
300
70
40
360
60
45
415
55
50
450
45
55
480
30
60
500
20
•18
当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
06第六章 免疫比浊分析
化分析仪或散射比浊仪均可使用。
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人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
改良。以发光二极管作为光源，检测前向角
13～24度的散射光，然后利用硅化光电二极 管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标 准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓 度。
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性 状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。
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人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比 浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与 入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗 原的量，这种方法称为透射比浊法 。
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
透射免疫比浊法光路图
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
影响检测结果，因此需要选择均匀一致的
胶乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提
高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质 微粒的干扰。
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（三）方法学评价 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复 合物对结果影响也小，因此结果稳定、可 靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊
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人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
改良。以发光二极管作为光源，检测前向角
13～24度的散射光，然后利用硅化光电二极 管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标 准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓 度。
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性 状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。
4
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比 浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与 入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗 原的量，这种方法称为透射比浊法 。
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
透射免疫比浊法光路图
人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
（二）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
影响检测结果，因此需要选择均匀一致的
胶乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提
高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质 微粒的干扰。
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第六章
免疫比浊分析
（三）方法学评价 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复 合物对结果影响也小，因此结果稳定、可 靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊
免疫浊度测定及其临床应用课件
Analyte Antibody Other stuff
Scatter Signal Versus Time
Nephelometry
Scatter
3 Adding antibody causes a large increase in light scattering
2
1
Adding sample increases scatter slightly
Fluid in the cell has causes little scatter
Time
1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition
免疫浊度测定分类2
终点 法 速率 法
终点 法 固定时间法
速率散射浊度法
速率峰的测定
150mmol氯化钠 0.1 g/l 叠氮钠
Ag * Ab
测定范围
抗体 过剩
抗原 过剩
抗原浓度
技术特性
并行的检测系统:
•Rate NIPIA •Rate Nephelometry
NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析
Benefits Ability to expand the menu into high sensitivity assays including: Ferritin, Digoxin, and IgE.
免疫浊度测定及其临床应用
1
免疫测定分类
免疫浊度测定 标记免疫测定
g ~ ng ng ~ pg
免疫浊度测定
免疫沉淀反应
海德堡曲线 Heidelberg’s Curve
Ag * Ab
测定范围
抗体 过剩
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当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前
向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。
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14
发射光的波长和抗 原抗体复合物的大小和多少密切相关。
当固定检测角度与发射光的波长时，散射 光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗 原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。
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BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
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（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。 速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分 子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等） 的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表 示。
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4
第一节 免疫浊度分析原理
在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合 物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增 大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测
定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联
系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅
1～2min即可完成。
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18
抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
复合物产 产生速率 生总量
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23
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 （一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗 粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ， 使透射光和散射光即出现显著变化。
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
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25
第二节 自动化免疫比浊分析
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（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确
不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
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12
二、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光
在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关， 而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的 量呈函数关系。
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8
抗原抗体反应曲线
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（二）操作方法
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品） 与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体 反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
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(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角
度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
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(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动
态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
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技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。 此外，要保证待测样本血清的性状符合要 求，如严重脂血等即为不合格样本。
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(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
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450
45
480
30
500
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当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。
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10
（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。 • 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗
体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
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一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统
1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的
一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，
与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质
的浓度。
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2.仪器基本组成 系统由分析仪、计算机、条码读取器、打 印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分， 包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和 比色杯装置。
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5
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
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7
一、免疫透射比浊法
（一）原理：
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶 液时，由于溶液中的免疫复合物微粒对光线的吸收、 反射和折射而使透射光减少，可用吸光度表示。
第六章 免疫比浊分析
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1
❖ 免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应 与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
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第一节 免疫比浊的原理 一、透射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化免疫比浊分析
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3
第一节 免疫浊度分析原理
线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散
射光。
悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大
小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素
密切相关。
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13
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时， 散射光的强度在各个方向的分布均匀一致
，称Rayleighae散射。
向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。
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发射光的波长和抗 原抗体复合物的大小和多少密切相关。
当固定检测角度与发射光的波长时，散射 光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗 原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。
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BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
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（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。 速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分 子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等） 的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表 示。
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第一节 免疫浊度分析原理
在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合 物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增 大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测
定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联
系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅
1～2min即可完成。
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抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
复合物产 产生速率 生总量
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒 （一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗 粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ， 使透射光和散射光即出现显著变化。
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三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
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（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确
不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
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二、免疫散射比浊法
(一) 原理
粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光
在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关， 而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的 量呈函数关系。
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抗原抗体反应曲线
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（二）操作方法
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品） 与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体 反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
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(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角
度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
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(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动
态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
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技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。 此外，要保证待测样本血清的性状符合要 求，如严重脂血等即为不合格样本。
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(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
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当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。
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（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。 • 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗
体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
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一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统
1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的
一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，
与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质
的浓度。
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2.仪器基本组成 系统由分析仪、计算机、条码读取器、打 印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分， 包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和 比色杯装置。
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免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
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一、免疫透射比浊法
（一）原理：
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶 液时，由于溶液中的免疫复合物微粒对光线的吸收、 反射和折射而使透射光减少，可用吸光度表示。
第六章 免疫比浊分析
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❖ 免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应 与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
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第一节 免疫比浊的原理 一、透射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化免疫比浊分析
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第一节 免疫浊度分析原理
线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散
射光。
悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大
小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素
密切相关。
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不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时， 散射光的强度在各个方向的分布均匀一致
，称Rayleighae散射。