电泳技术及临床应用

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血清蛋白成分简介—γ区


IgG:抗体组分之一,分子量16万,等电点6~7.3,半寿期 24天。 肝硬化时IgG弥散性增高,风湿病IgG可见增高, 而选择性蛋白质丢失和妊娠期及高雌激素血症时IgG略有 降低。 IgA:抗体组分之一,分子量17万,半寿期6天。肝硬化和 风湿病时表IgA明显升高。 IgM:抗体组分之一,分子量90万,半寿期5天。选择性蛋 白丢失时IgM增加,风湿病及肝病初期IgM可增加 C-反应蛋白(CRP):分子量12万,等电点6.2。是急性时 反应蛋白的敏感指标,血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、 创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润时迅速显著增高, 可达正常水平的2000倍。结合临床病史,有助于随访病程。 特别在炎症过程中,随访风湿病、系统性红斑狼疮、白血 病等。
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异常血清蛋白电泳-肾病型

主要特征: Alb明显降低,α 1-球蛋白轻度增加,α 2-球蛋白明显 增加,γ -球蛋白降低、正常或增高。 小儿类脂样肾病时,γ -球蛋白可降低,有时可降低至零; 成人肾病综合症时,γ -球蛋白通常增加,特别是狼疮性肾病。
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蛋白电泳技术的临床应用
蛋白电泳技术和多发性骨髓瘤简介
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使用范围

电泳技术就是利用在 电场作用下,由于待 分离样本中各种分子 带电性质以及分子的 大小,形状等性质的 差异,使带电分子产 生不同的迁移速度, 从而对样本进行分离、 鉴定和提纯的技术。

在生化检测中常用于 分离各种蛋白质!
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操作步骤-点样
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操作步骤-选择电泳类型
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操作步骤-烘干染色
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操作步骤-扫描
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电泳结果
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2.血清蛋白电泳看的是什么?


含量的变化 : 条带中蛋白含量增或减


低白蛋白血症,可见于:
合成减低:急、慢性肝病。 营养不良或吸收不良。 遗传性缺陷:无白蛋白血症。 组织损伤(手术或创伤)或炎 症(感染性疾病)引起的白蛋 白分解增加。 异常丢失:如肾病综合征、慢 性肾小球肾炎、糖尿病、系统 性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、 肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。 分布异常:如门脉高压时,大 量蛋白质从血管内渗入腹腔。
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异常血清蛋白电泳-M蛋白

主要特征:M蛋白又叫异常免疫球蛋白,其区带宽度与 Alb带大致相等或较其狭窄,常分布在α2至慢γ-G部位
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血清蛋白电泳图谱
白蛋白 α1球蛋白区 α2球蛋白区 Β球蛋白区 Γ球蛋白区
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血清蛋白电泳图谱—正常sebia质控
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异常血清蛋白电泳图谱-双白蛋白

特点是出现双的白带白的区带,一般认为是遗传因素 (现已经发现若干个家族显性遗传)和大剂量抗生素
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血清蛋白成分简介— α2区



此区主要是α 2-巨球蛋 白和结合珠蛋白 α 2-巨球蛋白增高见于 肾病综合征和急性炎症, 减低见于肝病导致的丢 失、类风湿性关节炎和 骨髓瘤 结合珠蛋白增高见于急 慢性炎症、外科手术、 心肌梗死。减低见于溶 血性贫血和肝病等
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血清蛋白异常成分简介—M蛋白

M蛋白疾病是由于 单一克隆浆细胞无 线增值产生的均一 单克隆蛋白 (Monoclonalpeoteins)所导致 的一种疾病。


M蛋白疾病的M的意义 是Myeloma、 Macroglobulinemia、 Malignat Lymphoma、 Monoclonal Gammapathies均以”M” 开头。 M蛋白在电泳上表现的 为高而狭窄的峰。
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血清蛋白成分简介—白蛋白


白蛋白(Alb)由肝实质细胞 合成,分子量6.64万,等电 点4~5.8,半寿期(15~19 天,占血浆总蛋白的40%~60。 血浆白蛋白浓度可以受饮食 中蛋白质摄入的影响,在一 定程度上可以作为个体营养 状态的评价指标,有较广泛 的载体功能。正常参考值: 35~50g/L。 血浆白蛋白增高较少见,在 严重失水时,对监测血浓缩 有诊断意义。
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血清蛋白成分简介— β2区



纤维蛋白原:分子量34万,半寿期2.5天,等电 点5.5,。纤维蛋白的前身参与凝血。也是急性 时相蛋白之一,当机体处于炎症或损伤状态时纤 维蛋白原可见增加。 C3:补体系统,属急性时相蛋白。分子量18万。 急性炎症时可见上升,肝脏疾病时由于肝细胞损 害而偏低。 β 2-微球蛋白(BMG)分子量1.18万。在肾功能 衰竭、炎症及肿瘤时,血浆中浓度可升高。在白 血病和淋巴瘤有神经系统浸润时,脑脊液中BMG 可增高。
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血清蛋白成分简介— α2区

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结合珠蛋白(HP)在血浆中与游离的血红蛋白结合,是一种急性时 相反应蛋白,分子量8.5~40万,等电点4.1,半寿期2天,电泳位于 α 2区带。急性时相反应中血浆HP增加,当烧伤和肾病综合症引起大 量白蛋白丢失的情况下亦可见增加。血管内溶血和溶血性贫血、输 血反应、疟疾时HP含量明显下降。此外,严重肝病患者HP的合成降 低。 α 2-巨球蛋白(AMG)是血浆中分子量最大的蛋白质,是由肝细胞与 单核吞噬细胞系统中合成,分子量为62.5~80万,等电点5.4,半寿 期5天,但当与蛋白水解酶结合为复合物后其清除率加速。在低蛋白 血症时α 2MG含量可增高,可能系一种代偿机制以保持血浆胶体渗透 压。妊娠及口服避孕药时血浓度增高,机制不明。 铜蓝蛋白(CER)是一种含铜的α 2糖蛋白,分子量12~16万,等电 点4.4,半寿期4.5天,CER也属于一种急性时相反应蛋白。在感染、 创伤和肿瘤时血浆CER增加,在营养不良、严重肝病及肾病综合症时 CER往往下降。妊娠期、口服避孕药时其含量有明显增加。该蛋白最 特殊作用在于协助Wilson病的诊断,既患者血浆CER含量明显下降, 而拌有血浆可透析的铜含量增加。
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血清蛋白电泳简介

血清蛋白电泳可以对血清或 其他体液中的异常蛋白质进 行筛选 。 血清蛋白质在碱性条件下主 要根据其所带电荷数将其分 离成五种片段:白蛋白,α1球 蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、 γ球蛋白、每一区带含有一种 或多种血清蛋白质。
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血清蛋白电泳简介
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异常血清蛋白电泳-原发性肝癌


主要特征: 在Alb与α1球蛋白之间 出现一小的 区带,称为 甲胎蛋白带。 本项目试验 精确地的限 制这个AFP 区带很难分 清,需要用 高分辨染色
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异常血清蛋白电泳—宽幅γ球蛋白血症

主要特征: γ-G的宽度明显增加,呈宽幅高峰。
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发展历史和常用 类型




1809年俄国科学家列伊斯 发现电泳现象 1937年瑞典Tiselius建立界 面电泳技术,首次证明血 清是由白带白和球蛋白组 成,1948年获得诺贝尔化 学奖 1950年后,区带电泳发展 到成熟 1980年以来,毛细管电泳 逐渐被重视
滤纸电泳 醋酸纤维膜电泳 凝胶电泳 1、琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶 电泳 毛细血管电泳
异常血清蛋白电泳-弥漫性肝损伤型

主要特征: Alb明显降低, α1-球蛋白在轻度时可略增加,但肝细胞破 坏严重时,则α1、α2和β球蛋白通常均降低,在胆汁郁积性肝炎时, α2和β球蛋白可增高,γ-球蛋白轻度或中度增高。
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异常血清蛋白电泳-肝硬化型
主要特征: Alb均有不同程度的降低,α1、α2和β球蛋白正 常或降低,γ-G明显增高且宽度增加,可见β-γ桥。
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异常血清蛋白电泳图谱-无白蛋白

特点是白带白的区带明显减少,血清含量低于1%,一般 患者无症状
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异常血清蛋白电泳-急性炎症或应激

主要特征: Alb减少或 正常,α1、 α2-球蛋白增 高,γ-球蛋 白增高不明 显,当炎症 转为慢性时, 可明显增加。
基于蛋白含量的变化, 有助于我们对以下疾病的筛 查 :炎症 、营养不良、肺气肿等


性质的变化 :异常条带的出现
对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:骨髓 瘤、巨球蛋白血症、细菌和病毒感染等

*在这些情况下, 必须要做其他辅助测试, 比如说免
疫固定, 使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检 测. (对于后期治疗有很重要的指导意义)
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血清蛋白成分简介— α1区




α 1-抗胰蛋白酶(AAT)是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应 蛋白,分子量为5.5万,等电点4.8,半寿期4天,电泳中位与α 1区 带,是这一区带的主要组分。低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘迫综 合症,AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。 α 1-酸性糖蛋白(AAG)早期称之为乳清类粘蛋白,分子量4万,等 电点2.7~3.5,半寿期5天,电泳位于α 1区带。AAG是主要的急性时 相反应蛋白,在急性炎症时增高,在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死 患者亦常增高,在营养不良、严重肝损害等情况下降低。 α 1-脂蛋白 分子量20万。在严重肝病如肝硬化时明显降低,妊娠及 高雌激素血症时可轻度增加。 甲胎蛋白(AFP)主要在胎儿肝脏中合成,分子量6.9万,电泳位于 α 1区带。在成人AFP可以在大约80%的肝癌患者血清中升高,在生殖 细胞肿瘤出现AFP阳性率为50%,在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌 及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。
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血清蛋白成分简介— α1区


此区显色的条带主要是: α 1-抗 胰蛋白酶 在一些肺病是情况下,α 1-抗胰 蛋白酶下降,有的时候缺如 在某些严重创伤后,此区可出现 明显高峰,同时α 1-抗胰蛋白酶 也增高 注意: 1. α 1-抗胰蛋白酶偶尔出现双峰, 它预示着既有单克隆抗体成分又 有α 1-抗胰蛋白酶的改变。 2.一些罕见的病例中,此区带会 出现另一个较宽的峰,它其实可 能有甲胎蛋白的出现
1.什么情况下必须进行电泳检测?


总蛋白异常升高或异常下降 A/G比例变化 血液沉降速度发生异常变化 出现恶性疾病征兆 在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋白 出现大量异常增加
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操作步骤-仪器和电泳胶片准备
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操作步骤-挂缓冲条和电泳胶片

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电泳技术 在临床中应用

急、慢性疾病


造血系统疾病:多发 性骨髓瘤、巨球蛋白 血症 肝脏疾病 肾脏疾病
中枢神经系统疾病: 多发性硬化症

遗传性疾病:地中海 贫血 代谢性疾病:糖尿病 心血管疾病:心梗、 动脉硬化 恶性肿瘤 。。。。。。。

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血清蛋白成分简介— β1区




转铁蛋白(TRF)是血浆中主要的含铁蛋白质,分子量7.7万,等电 点5.7,半寿期7天,点泳位于β 1区带。血浆中TRF水平可用于贫血 的诊断和对治疗的监测。TRF在急性时相反应中往往降低。因此在炎 症恶性病变时常随着白蛋白和前白蛋白同时下降,在慢性肝病及营 养不良时亦下降,可作为营养状态的一项指标。妊娠及口服避孕药 或雌激素注射可使血浆TRF升高。 血红素结合蛋白(Hpx)分子量为5.7万。和游离血红素有特异结合 能力,可配合结合珠蛋白对血红蛋白进行处理。当广泛溶血时,血 浆结合珠蛋白耗竭,循环中游离的血红可降解为珠蛋白和血红素两 部分,Hp可与血红素可逆结合,而在血循环中反复利用,这是机体 有效地保存铁的又一种方式。 β -脂蛋白:分子量300万。主要功能脂类的运输。肾病患者或某些 肠道疾病患者,常见导致血浆蛋白丢失,由于肝细胞补偿性的合成 增加,β -脂蛋白可有增加。 C4:补体成分,分子量20.6,属急性时相反应蛋白之一,在炎症、 创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下可见升高。
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