食用菌母种制作-实验一
食用菌母种制作的两种简易方法
食用菌母种制作的两种简易方法
一、灰树花母种制作
1. 收集准备
选择新鲜的床树花，将彩色的花芯拆开，将母种和母粉分离出来，然后收集并保存在干燥的玻璃杯中。
2.加工加工
将母粉放入清水中浸泡2~3小时，然后用手轻轻挤压，将母粉中的器官质质因子都细化拌和均匀，待水质变得透明后即可取出。
3.蒸煮蒸煮
将母粉放入不锈钢锅中，将水添加到母粉的一半位置，然后加入适量盐及其他调料，浓度不应过于浓稠，并将温度调节到90~100℃，蒸煮数小时，直到母粉颜色发生变色，再加入适量的植物油使其更加香，即熟母粉即可回收。
二、松露母种制作
1.收集准备
选择新鲜的松露，将其细切粉末，并加入少量水混合成浆，导出松露的母种。
2.提取精粹
将提取的母种放在碗里，过滤掉母粒状的淤泥，然后将其加入少量水重复搅拌，分离母粉与母粒，然后用一滤纸将母粉过滤至精粹完成。
3.蒸煮母粉
将精粹放入不锈钢锅中，然后加入水、盐、酱油等调料，并加入植物油以香，将温度控制在90~100℃，不时的翻动内容物蒸煮30分钟，再加入少量冷水即可取出。
做出的母粉可直接拌入食物中食用。
食用菌实验-母种原种扩大培养
实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。
三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先灭菌20分钟。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。
⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
原种30天左右长满。
作业：归纳原种和试管种的接种全过程。
实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
工作报告之食用菌实验报告
食用菌实验报告【篇一：食用菌组织分离法实验报告】食用菌母种的制作——组织分离法实验报告实验目的：学习和掌握食用菌的组织分离法；一、实验原理：食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
二、实验器材：1. 食用菌：香菇、平菇。
2. 培养基：pda培养基斜面。
3. 仪器或其他用具： 75%酒精棉球、接种针记号笔等。
三、实验方法：1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；2. 种菇消毒：取1张菇片，用 70%的酒精轻擦表面进行消毒；3.菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于pda试管斜面上； 4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；五、注意事项1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2.要等刀片冷却后再切取组织块。
六、实验结果与记录第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基结果分析：本次实验全班只有一人成功，大部分都被杂菌污染，最有可能的原因就是制作的pda培养杂菌没有菌落产生基本身受到污染，但是又有培养基根本没有菌落产生，那么一方面可以看做是空白对照，得到培养基本身没有问题而是我们操作都有问题，没有做到避免污染，规范的无菌操作，另一方面也有可能是在接种过程，接种针，试验刀酒精灯上灼烧后未冷却直接接触种菇，使待接种的菌块高温致死。
第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察实验基本成功，试管下端有少部分红棕色杂菌无杂菌，也无目的菌落实验成功，无杂菌，斜面上均为雪白的菌丝结果分析：培养基本身无污染，接种香菇菌块的过程中可能由于接种针和实验刀未完全冷却导致目的菌块高温致死，培养基上无菌落产生。
接种双孢菇菌块过程中基本做到了无菌操作，实验较为成功。
实验感想：本实验原理目的简单，操作过程方法在微生物学中也有接触，但是容易杂菌污染，第一次实验结果几乎全军覆没，几乎所有培养基都受到了污染，第二次实验在总结前一次的基础上，大部分做到了无菌操作，看到了培养基中雪白的菌落。
一般食用菌母种(一级种)制作
一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。
(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。
培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。
第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。
如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。
第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。
第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。
这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。
这一点必须在配制时就考虑到。
这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。
一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。
高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。
目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。
此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。
1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。
(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
食用菌栽培实验报告
食用菌栽培实验报告一、实验目的1.学习和掌握食用菌的组织分离法制作食用菌母种；2.掌握食用菌培养基的配置原理；3.通过平菇、秀珍菇、金针菇、鸡腿菇、香菇、榆黄菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。
二、实验原理（一）食用菌母种的制作食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
（二）平菇、秀珍菇、金针菇、鸡腿菇、香菇、榆黄菇的栽培实验1.食用菌的营养物质食用菌在生活时需要多种多样的营养物质，除水和氧气外，还要碳、氮、钾、磷、硫、镁、铁等大量元素和一些微量元素。
各种食用菌对营养物质的要求各不相同，有的要求不严格，有的要求严格。
[1]碳源：能利用自单糖到纤维素等各种复杂的碳水化合物，如：纤维素、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、糊精、淀粉、半纤维素、木质素、有机酸、某些醇类等。
[2]氮素：是食用菌合成蛋白质和核酸必不可少的主要原料。
主要有蛋白质、氨基酸、尿素、氨、铵盐和硝酸盐等。
蛋白质必须经蛋白酶分解成氨基酸后才能被吸收；其他小分子氮素化合物菌丝体可直接吸收。
[3]碳氮比:一般认为食用菌在营养生长阶段碳氮比（C/N）以20 : 1为好，而在生殖生长阶段碳氮比以30 : 1～40 : 1为好。
[4]无机盐类，如：磷酸二氢钾、硫酸钙、硫酸镁、氯化钠、硫酸锌、氯化锰等。
这些无机盐中的金属元素磷、钾、镁为最重要，适宜浓度是每升培养基加100—500毫克，而铁、钴、锰、锌、钼等微量元素，每升培养基只需1／4毫克。
这些金属元素在普通水（河水、自来水）中都有，一般培养料不再添加。
[5]各种维生素和生长素，量很微，但必不可少。
[6]栽培原料:广泛采用棉籽壳。
棉籽壳含粗蛋白73％，粗脂肪3.45％，粗纤维36.99％，无氮浸出物73.99%。
其物理性能良好，能使水分和空气的矛盾得到解决，以满足菌丝生长的要求，棉籽壳的表面密布的一层棉纤维，在合适的水分、空气和温度的条件下首先分解，加之壳内残存的棉籽碎屑，也易分解利用；经过试验，1斤干棉籽壳能产1斤左右的鲜平菇，最高达4斤左右。
9食用菌实验
保持90%左右的湿度，调节好其他环境因子，待子实体成熟后 采收。
2.发酵料栽培
将培养料发酵6天后，可装袋栽培金顶侧耳、鸡腿菇。
接种、培养及出菇管理与观察与熟料栽培相同。
实验五 食用菌实验观察（2学时）
一、目的要求
1.比较不同食用菌的菌丝的形态和生长速度； 2.学会判断不同杂菌的污染情况； 3.了解不同食用菌的姑房管理方法。 二、时间安排
将原种接入瓶装或袋装的木屑、麦粒或粪草等培养基内所得 到的菌种称为栽培种。 由于食用菌的种类及代谢的多样性，因而培养食用菌栽培种 的培养基种类也很多，但棉籽壳培养基、木屑培养基和麦粒培养 基是最常用的培养基。
栽培种培养基的配置方法大致相同，包括拌料、装袋、灭 菌、接种、培养等环节。
三、实验材料
1. 菌种 灵芝、金顶侧耳、金针菇、鸡腿菇、黄伞等。 2. 药品 75%酒精、来苏耳、高锰酸钾、葡萄糖、碳酸钙、石膏等。 3. 材料
2 .接种
（1）菌种表面消毒； （2）将菌种斜面分成5等份； （3）将菌种接到瓶或袋装培养基的顶部中心处；
（4）1支试管种可接原种培养基5瓶左右。
3. 培养 避光，保持50%~70的湿度，25℃恒温培养。 4. 实验观察与管理 挑出污染菌种，比较不同食用菌的菌丝颜色、形态和密度。
实验四
一、实验目的
2 .接种
（1）菌种 表面消毒；
（2）将菌种切割成2×4×2mm的小块；
（3）将菌种接到斜面中心略偏试管底部处；
（4）1支试管种可接斜面30支左右。
3. 培养
避光，保持50%~70的湿度，25℃恒温培养。 4. 实验观察与管理 挑出污染菌种，比较不同食用菌的菌丝颜色、形态和密度。
实验三 食用菌原种制作技术（8学时）
平菇母种的制作
平菇母种的制作一.平菇母种的制作平菇母种配方：土豆200克、白糖20克、琼脂20克、水1000毫升、蛋白胨3克、硫酸镁2克、维生素2克。
按配方精确称取，先将土豆去皮切片放入1000毫升水中，用文火煮沸20分钟左右。
然后过滤，加水再加热，先将琼脂、白糖、硫酸镁、维生素煮至全部溶化，用量杯量一下是否还够1000毫升，如不足，用开水补足。
趁热分装试管中，每管装12毫升，1000毫升可分装80---100支试管。
分装时要用长管漏斗，不要使培养基沾到试管口上，以免沾湿棉塞污染杂菌。
塞棉塞要用普通棉花，塞入试管要松紧合适。
然后，每10支试管用皮套捆成一小捆，每5小捆再捆成一大捆，棉塞用牛皮纸包好，放入高压锅中1.2公斤压力，灭菌30分钟，停火。
等压力表回零才能排气开锅，取出试管倾斜排放在桌面上，斜面试管有两种：原母种试管-----斜面长度应为管长的1/3，生产母种试管的斜面应为管长的1/2，冷却凝固后，取一些试管放入恒温箱中27--30度空白培养5天，经无菌观察，确认无杂菌，才能大量用于分离制种或转接生产母种。
接种要在严格的无菌条件下进行可以使用甲醛加高锰酸钾消毒法，接种后放入25度的恒温箱中培养7---10天，长满试管确认无任何杂菌，就可用于转接二级原种了。
二.平菇原种制作配方1：阔叶木锯沫80斤、玉米面25斤、克霉灵1两、白糖1斤、硫酸镁5两、磷酸二氢钾3两、石膏1斤、碳酸钙1斤。
含水量65%。
配方2：玉米芯80斤、稻糠15斤、夫子10斤、克霉灵1两、白糖1斤、硫酸镁5两、磷酸二氢钾2两、尿素3两、石灰2斤。
含水量65%。
配方3：阔叶木锯沫40斤、玉米芯40斤、豆饼粉10斤、玉米面10斤、白糖1斤、克霉灵1两、硫酸镁5两、菇丰素15克、二氢钾3两、碳酸钙1斤、石灰1斤。
含水量65%.配方4：玉米100斤，磷酸二氢钾0。
5斤，硫酸镁0。
5斤，白糖1斤，碳酸钙2斤，629消毒剂1瓶。
拌料：先将主料和夫子或玉米面、石膏、白灰干拌均匀。
平菇母种制作方法试验
铝锅 内加水 煮沸 ３ｍｉ， 起后用 ４层纱 布过 滤 ， ０ ｎ捞 取 汁 。然后 将琼脂 加人 汁 内， 加热边 搅拌 ， 琼脂 充 边 使 分溶 化 ， 加 入蔗糖 等 ， 再 煮几 分 钟后 ， 同样 用 ４层 纱
布过滤 ， 其汁液 。 汁液 趁热装 入玻璃 试管 内 。 取 将 装 至管长 的 Ｉ ，管 口用棉 花 塞 紧 。然后 置 于 高压锅 ／ ５ 内， 在一定 的压力 下灭 菌 ３ ｒ ｎ左右 。 ０ｉ ａ 灭菌后 及 时取
通过 上述方 法得到 的菌 丝 ， 不一 定都是 优质 的 ， 还需 要选育 提纯 。 因此 ， 在菌丝 萌发后 ， 要认 真观察 ，
挑选 色泽纯 、 健壮 、 长势 正常 、 间断 的菌丝 ， 无 在接种
１ｇ ２ ｇ 水 １０ ｍ 、 Ｈ ．。 ５ － ０ 、 ０ ０ ｌｐ ６５
先将 马铃薯 洗净 去皮 ， 切成 薄 片 ， 于 置
工作 台上 ，用 镊子从 获得 的母种 试管 中夹取适 量菌 丝 接种 到 同样 的斜 面培养 基上 ， 置于 ２ ５度恒温 箱 中
株距 １． ｅ ｘ ６ ５ｒ， 密度 ２ ￣ ０ ＇ ６ ｍ ， ９ ８ ｍ １ ． ｅ 栽培 ９ ６ ａ ． １４￣６ ７ １ ７／ ｋ 每
加（ １ Ａ ）高度也随着增高 ， Ａ 到 ２， 但氮肥量到一定程
度 （ ３氮肥 过量 ）高 度下 降 。Ａ 、 、 ３株高 分别 Ａ， ， ２Ａ１Ａ 为 ９ ． ｒ，５１ｍ，５ ｃ 随氮 肥 用 量 的增 加 （ ８ ｅ ９．ｃ ９ ． ｍ。 ０ａ ０ Ａ１ 到Ａ ） ３ ；千粒 重则 随氮 肥用 量 增 加 略有 下 降 趋 势 ，
箱 内用尖端 分离 钩取菌 丝 ，接 人另备 的试管 培养基 上 。 ２ ５ 在 ３ ２℃的恒温条 件下 ， 培养 ７ １ｄ待 菌丝长 ～０ ， 满管后 ， 仔细 观察 ， 中择优取用 ， 从 即为 “ 母代 ” 种 。 母
实验7食用菌母种的制作与转管技术
结果讨论
本实验成功制作出食用菌母种，为后 续的栽培和生产提供了优质的种源。
本实验中严格的无菌操作对于防止杂 菌污染起到了关键作用，在实际生产 中也需要高度重视无菌操作，以确保 食用菌的纯度和质量。
在实验过程中，我们发现适宜的温度 和湿度条件对母种菌丝的生长具有重 要影响，这为实际生产中控制食用菌 生长环境提供了理论依据。
无菌操作
在实验过程中，要始终保持无 菌操作，避免杂菌污染。
温度控制
不同食用菌对温度的要求不同 ，要保持恒定的温度以利于菌
丝生长。
湿度控制
保持适宜的湿度，避免培养基 过度干燥或湿度过高导致杂菌
滋生。
定期检查
在培养过程中要定期检查菌丝 生长情况，发现异常及时处理
。
04
实验结果与分析
实验结果
实验成功制作出食用菌母种，菌 丝洁白、浓密、健壮，生长旺盛。
05
结论与建议
结论
实验7成功地展示了食用菌母种的制作和转管技术，确保了菌种的纯度和活性。
在实验过程中，我们观察到菌种的生长速度和形态特征，为后续的实验和研究提供 了基础数据。
通过实验，我们验证了母种培养基的配方和制备方法，为食用菌的规模化生产提供 了技术支持。
建议
01
为了进一步提高菌种的产量和质量，建议优化母种培养基的配 方，添加适量的营养成分或生长因子。
保障食品安全
培养创新型人才
实验能够培养学生的创新思维和实践 能力，为培养具备创新精神和实践能 力的人才提供有力支持。
通过实验，学生将了解食用菌母种的 质量控制和安全管理，这对于保障食 品安全和消费者权益具有积极作用。
02
实验材料与设备
实验材料
01
食用菌的实验
食用菌的实验实验一母种培养基的制作一、本次实验的目的和要求学会母种培养基的配制方法，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。
二、实验内容或原理母种培养基配制。
工艺流程：培养基配方培养基的配制分装试管理灭菌摆斜面三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管。
试剂：、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。
四、实验步骤1.培养基配方以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。
为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg。
2.培养基配制首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。
用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。
再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。
3.分装试管培养基配制后应趁热分装。
装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。
装管后塞上棉塞。
棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。
然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。
4.灭菌灭菌前将水加至锅内水位标记高度。
将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min，关闭放气阀。
当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时（灭菌所需压强）开始计时，继续维持该压强30min。
灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。
注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。
5、摆斜面当培养基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。
母种培养基制作实验
实验三食用菌母种培养基制作一、实验目的掌握食用菌母种培养基制作原理和方法。
二、实验原理根据食用菌菌丝生长对碳、氮等营养物质的需求，将原料按照一定比例配制成适合食用菌生长的母种培养基。
采用高压灭菌杀灭培养基中的杂菌和孢子，使培养基保持无菌状态。
利用琼脂的特性，制作成斜面培养基。
三、操作步骤（一）培养基配方马铃薯、蔗糖、琼脂培养基（PSA培养基）：马铃薯（去皮）200克，蔗糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
（二）称量按照培养基配方，根据配制培养基的数量，计算所需各种营养物质的数量，准确称取各种物质。
（三）土豆汁液制取选取无芽土豆，如已发芽剜去芽眼，削皮，切薄片。
称取切成薄片的去皮马铃薯200g放在加有1000毫升水的搪瓷缸内，煮沸20分钟至熟而不烂的程度，用四层纱布滤去马铃薯，注意勿用手挤。
（四）加琼脂和蔗糖将滤液放入缸内，加入适量水使其达到1000毫升，将琼脂放入加热，用玻璃棒不断搅动使其完全融化，然后加入蔗糖。
补足水分至1000毫升。
（五）分装使用15×150毫米的试管。
每组（8人）装50支试管。
将制好的培养基分装入试管内，装液量为试管的1/5（约3厘米）。
注意不要使培养基沾在管口上以免浸湿棉塞，引起污染。
多余的培养基装入三角瓶中，装量以不超过其容积的1/3为宜。
（六）塞胶塞试管装好后用胶塞塞住试管口。
（七）灭菌试管塞好后，装入布袋中，交到203。
在0.103兆帕（121o C）灭菌30分钟。
（八）摆斜面地下放1厘米厚的木板，将灭过菌的试管摆放其上，冷却后即成斜面培养基。
（九）灭菌效果检验将灭过菌的培养基置于37 o C下放置3天以上，如没有杂菌菌落说明培养基灭菌彻底。
确保斜面培养基无菌时再进行接种。
与实验室老师沟通一下，15×150毫米的试管需要装多少毫升培养基，以便实验时计算制作培养基的量。
制作试管数量要比原来多，因为还有一个组织分离实验，需要使用斜面培养基。
实验7 食用菌母种的制作与转管技术
食用菌母种制作与转管技术
实验目 的
掌握了解食用菌组织分离的方法和实际操 作技术；
明确食用菌组织分离在食用菌生产中的重 要性。
实验原理
母种
原种
栽培种
实验原理
1.组织分离法：用子实体的某一部 分来分离菌种的方法。
优势：方法简便，后代不易发生变 异，是食用菌栽培中防止品性退化， 保持优良品种特性常用的一种手段。
121℃高压灭菌15min。
实 验 步骤
2.种菇的选择 选择无病虫害、典型、八成成熟的食用菌子实体。
3. 环境和种菇消毒 在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇
体。 或选用的子实体用0.1％开汞水或70％酒精表面消毒，
用无菌水冲洗并用无菌纱布擦去表面水分。
实 验 步骤
4.取接组织 将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒
应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专 业户必须掌握的一种方法。
实验原理
2.钩悬法 是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离
法。
实验原理
3.孢子印分离法 取成熟子实体经表面消毒
后，切去菌柄，在20～ 24℃静置一天，大量孢子 落下形成孢子印。 接种环沾少量孢子在试管 培养基上划线培养。
母种转管视频
实验注意事项
（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金 针菇等不太适宜。 （2） 此法应严格遵循无菌操作。 （3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 （4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分 别用于菌种保藏或繁衍原种。 （5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、 质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产 使用。
食用菌母种制作方法
食用菌母种制作方法一、食用菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。
二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。
三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。
方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。
当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。
四、菌种分离主要采用组织分离法。
通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。
1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。
2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。
3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。
菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。
菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。
对子实体较大、质地结实的多孔菌类，应取子实体外缘菌肉组织块。
组织分离法制备母种
1.菌丝未萌发
• ①组织块太小； • ②烫伤严重； • ③培养条件，如温度不适宜。
2.有杂菌污染
① 培养基灭菌不彻底； ② 培养基成分适宜杂菌生长； ③ 环境、用具消毒不严格； ④ 菇体耳体消毒不严格； ⑤ 接种操作控制不当，要无菌操作。
常见的杂菌观察
• 常见的杂菌主要有细菌、放线菌；
青霉、黑曲霉
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
白灵菇：Pleurotus eryngii
白灵菇：Pleurotus eryngii
红菇：Russula lepida
子囊菌纲食用菌
羊肚菌
羊肚菌
Morchella esculenta
子囊菌纲食用菌
冬虫夏草
冬虫夏草
冬虫夏草的蛹、成虫、虫卵 冬虫夏草的蛹
冬虫夏草的虫卵
三、PDA培养基制作及灭菌
PDA培养基配方：
马铃薯 葡萄糖或蔗糖 琼脂 水 pH 30 g 3 g 2.7-3 g 150 ml 自然
每组150ml。每人分装1支试管。 包扎。灭菌
灰树花
担子菌纲食用菌
长根菇
牛肝菌
担子菌纲食用菌
茶新菇
茶树菇
茶树菇 Agrocybe aegerita
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata
食用菌母种制作-实验一
实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。
①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
食用菌母种制作技术
食用菌母种制作技术在食用菌生产中，母种的培养是至关重要的一环。
母种质量的优劣，直接影响到食用菌产量的高低和栽培的成败。
下面小编给大家分享了食用菌母种制作技术，一起来了解一下吧!食用菌母种制作技术制作培养基先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。
然后在马铃薯煮汁中加琼脂20克和蔗糖20克煮溶，后补足水至1000毫升，调节pH值在5.5～6。
调好pH值后进行分装，一般将培养基装至试管的1/4处，而后加盖棉塞，再用牛皮纸将试管每10支捆成一捆。
分装时，注意培养基不可沾在近试管口的壁上，以免日后生霉菌。
分装后要立即进行高压灭菌，不可过夜。
高压灭菌将用牛皮纸捆好的试管(棉塞朝上)竖直放入高压锅内进行灭菌。
在0.11兆帕压力下维持30分钟，即可达到灭菌目的。
灭菌时，放汽要充分，否则影响灭菌效果。
开锅取出试管后趁热摆放，使培养基成斜面。
试管的斜面以距棉塞3厘米为宜，斜面摆成后，不宜再摆动。
一级菌种扩管扩管要在无菌条件下进行，先将扩管工具、培养基及菌种放到扩管箱内，然后按每立方米用高锰酸钾5克、40%的甲醛溶液10毫升的量进行熏蒸消毒30分钟。
扩管方法：先将扩管铲在酒精灯火焰上灼烧消毒，然后拔掉母种管上的棉塞，铲一块米粒大的母种，在酒精灯火焰无菌区内迅速送入菌种试管内。
扩管后的母种培育10~15天即可投入生产。
食用菌母种怎么制作母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。
一母种培养基配制及棉塞制作
三、实验准备 1.材料：空白斜面培养基（无菌检验 ）、母 种等 2.器具：酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、 酒精棉球、大镊子、接种箱、超净工作台、 高锰酸钾、37％甲醛溶液、紫外灯、2%来 苏水、标签纸等。 四、实验内容 1、 接种环境的处理 2、母种的转管技术
五、方法步骤 1.接种环境的处理 （1）接种箱的熏蒸： 先用2%来苏清洁接种 箱内外，放入接种所需的物品，用甲醛熏 蒸。每立方米空 间 一般用甲醛10ml，加 半量高锰酸钾（5~7g）使甲醛氧化挥发。 先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中，再 注入甲醛，立即产生强烈刺激的甲醛气体。 熏蒸25--30min。
实验一母种培养基配制及棉塞制作
一.实验目的 1、 掌握食用菌固化培养基的配制。 2、学会棉塞 的制作方法。 二、基本原理 食用菌母种分离、移接和斜面保存菌种都必须 要制作相应的培养基，以备食用菌的培养、分离 和保存之用。 培养基是根据各种食用菌在生长繁殖过程中对 营养物质需求制成的，它可供给食用菌的C源、N 源、水分、各种无机盐及生长物质等。 培养基的种类很多，本实验学习斜面培养基 （PDA）制作。
母种转管过程
六、作业 1、何谓无菌操作、消毒？消毒分哪几种类型？
2、同学相互评比接种结果 分析自己接种成败的原因。
实验三、食用菌母种制作分离技术 一、目的要求 1、明确食用菌无菌操作技术要点。 2、掌握食用 菌母种分离技术。 二、基本原理：食用菌母种分离方法较多，但主要 采用组织和孢子分离，所不同的是前者取子实体 某块组织，后者取子实体的孢子经过培养形成的 纯菌丝体（纯种）。 三、实验准备 1.材料：空白斜面培养基(空白培养无菌).食用菌子 实体等 2.器具： 酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉 球、大镊子、接种箱、超净工作台、高锰酸钾 37％甲醛溶液、紫外灯、2%来苏水、标签纸等。
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实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。
①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
四、实验结果每人制作平菇母种一支。
记录母种菌丝的生长情况。
五、作业1.食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？2.组织分离法制作母种成功的关键是什么？在操作中如何避免母种制作失败？实验二食用及药用菌原种制作技术目的要求：1、了解原种培养基的配制原理及过程；2、掌握玉米粒原种的制作方法。
重点与难点:重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作; 食用菌组织分离法制作菌种.难点: 食用菌组织分离法制作菌种.教学方法与手段:本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。
实验内容:1、按比例计算、称取各组分；2、添加、混合均匀各组分；3、培养料水分、pH调节、装袋；4、原种培养基灭菌；5、转接、培养原种。
6、原种质量检查主要仪器设备药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。
实验步骤一．原种培养基的制备1.选定配方。
玉米97%，碳酸钙2%，石膏粉1%，PH6.5-7.0。
2.培养基配制。
选择无病虫害的的玉米粒，用清水冲洗干净，浸泡40小时左右。
加水超过玉米粒表面，煮开锅后，小火再煮5-30分钟，使玉米粒充分煮透（胀而不破，切开后无白心）。
用清水冲洗冷却，淋去谷粒表面水份。
加入碳酸钙和石膏粉，充分搅拌均匀备用。
3.装瓶封口。
将配制好的培养基装入原种瓶中。
将玉米粒培养基装至低于瓶肩处。
做到培养基均匀一致，松紧适度，料面平整，擦净瓶口内外壁。
塞上棉塞，外面用一层牛皮纸包好。
4.灭菌。
分装好的原种瓶在当天灭菌，避免培养基发霉变质。
采用高压蒸汽灭菌。
灭菌压力1.4-1.5Kg/cm2。
灭菌时间为1.5-2小时。
冷却至30℃以下待用。
二．接种1.超净工作台消毒灭菌。
将灭菌后的原种瓶及接种用的所有用具（酒精灯，接种铲等）放入接种场所，进行消毒灭菌。
2.接种。
将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工作台中。
点燃酒精灯，用酒精棉球再次对试管外壁表面消毒，特别是管口处，去下棉塞后，试管口在火焰上烤一下，然后用经火焰灭菌并已冰凉的接种铲将母种斜面分成4-6份，将其固定在接种架上，注意管口始终在酒精灯火焰形成的无菌区内（管口离火焰1-2厘米）。
然后左手持原种瓶，右手取下棉塞，瓶口在火焰上烤一下，用接种铲取一份母种迅速准确的放入料瓶内的接种穴处，棉塞过火后塞好，包上包头纸。
如此反复，每支母种可扩接原种4-6瓶。
三．培养。
将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养，培养温度为25℃。
定期检查杂菌发生情况，从培养3-5天开始每天检查一次，当菌丝封住料面并向下深入1-2厘米时，可改为每周检查一次，发现污染的瓶立即淘汰，并隔离污染源。
四．原种质量检查无论麦粒原种还是棉籽壳原种，接种后在25℃左右培养20-40天，菌种即可长满瓶。
品质优良的原种，菌丝洁白、纯净、有食用菌特有的香味。
若出现黄、绿、黑等颜色的毛状物或菌瓶内有酸臭味道。
不能使用，应将其灭菌后远离培养场地处深埋。
作业1.食用菌原种培养基主要有哪些？2.制作原种过程中应该注意哪些问题？实验三食用及药用菌栽培种制作技术目的要求：1、了解栽培种培养基的配制原理及过程；2、理解好的栽培种培养基对生产的重要性；3、掌握水在配料中的作用；4、掌握栽培种制作技术。
重点与难点:重点: 栽培种培养基的配制原理及过程; 栽培种制作技术.难点: 水份含量的掌握.教学方法与手段:本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。
实验内容:1、按比例计算、称取各组分；2、添加、混合均匀各组分；3、培养料水分、pH调节、装袋；4、栽培种培养基灭菌；5、转接、培养原种;6、栽培种质量检查.主要仪器设备药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、盆、聚丙烯塑料袋、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。
实验内容与方法一．培养基的制作1.配方。
棉籽壳78%，麦麸20%，石膏1%。
糖1%（料：水=1：（1.2-1.3））。
2.拌料。
根据制种需要，按各种营养成分的配比称量各种原料。
然后将棉籽壳和麦麸先混合一起。
石膏和蔗糖混溶在拌料的水中，搅拌均匀后，泼洒到棉籽壳上再搅拌均匀。
3.测培养料含水量。
培养料拌好后，用手抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量合适，为60%-62%，若含水量不足，可再加少量的谁，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。
4.装袋。
将拌好的培养料装入聚丙烯塑料袋中，边装边压实，一直装到塑料袋容积的3／5左右。
5.打孔。
装好培炎养料后，从袋中央用锥形木棒打一孔，孔深距袋底部2-3厘米。
6.封袋口。
将塑料颈圈或无棉塞盖体的环套在塑料袋口上，然后将袋口外翻，塞上棉塞或盖上无棉盖体的盖子。
棉塞的外面还要包一层牛皮纸，用线绳扎好。
擦净塑料袋外面所粘附的培养料。
二．灭菌由于栽培种数量大，小型灭菌锅不合适，应使用大型立式或高压蒸汽灭菌锅。
栽培种由于装量较多且较实，一般要求1.4-1.5Kg/cm2灭菌1.5-2小时。
灭菌结束后，培养料冷却至30℃以下待用。
!Undefined Bookmark, 三．接种和培养1.接种。
将接种袋放入通过甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒的接种室或紫外灯灭菌的无菌操作台。
两人合作接种时，一人以无菌操作方法用接种铲或大镊子取一小块原种菌丝，另一人在酒精灯火焰旁打开栽培种袋口（袋口应倾斜在火焰旁，切勿直立），迅速将原种接到袋中，塞上棉塞或无棉盖体的盖子即可。
2.培养。
接种完毕，将栽培袋搬到培养室培养，培养室的温度应该比这种食用菌菌丝的最适温度低2-3℃。
四．栽培种质量检测栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时处理掉，不得与好的菌种袋放在一起。
经30-40天的培养，菌丝长满菌袋后即可使用。
若菌袋内长出原基，说明菌种已老化，若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已污染，不可使用。
作业1.菌种制作的关键技术是什么？2.综述母种、原种、栽培种在生产上的作用。
实验四平菇栽培技术目的要求：1、了解平菇栽培的人工环境条件；2、了解生料栽培的基本方法；3、掌握平菇栽培过程及各生长期的管理要点。
重点与难点:重点: 生料栽培的基本方法; 平菇栽培过程及各生长期的管理.难点: 平菇栽培过程及各生长期的管理.教学方法与手段:本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。
实验内容:1、培养料备料、装袋、灭菌；2、转接生产种；3、发菌管理；4、出菇管理；5、采收。
主要仪器设备药品材料：鸡腿菇栽培种、栽培料、接种铲、喷壶、灭菌锅、酒精灯、接种铲、盆、铁锨、聚丙烯塑料袋、塑料环、细棉绳、橡皮筋、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、脱脂棉。
内容与方法1.配料。
棉籽壳99%，石膏1%，多菌灵0.1-0.2%，培养料混合均匀后的含水量为60%-62%。
2.拌料。
拌料时先称好棉籽壳，倒在已消毒好的水泥地面或桌面上，再把称好的多菌灵用水溶解，搅拌均匀，然后倒入棉籽壳中，边拌料边加水，直到均匀为止。
3.测含水量。
培养料拌好后，用手抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量合适，为60%-62%，若含水量不足，可再加少量的谁，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。
4.装袋接种。
采用宽25-30厘米，长40-50的聚乙烯塑料薄膜袋。
一端用透气塞封口，先装入一层已掰成蚕豆粒大小的栽培种，再装入一层厚约5厘米的栽培料（边装边压实），再加一薄层栽培种，如此重复，直到快装满塑料袋时，最后在袋口放一层，加入一透气塞后将袋口扎紧，也可仅在塑料袋两端和中间部位放菌种。
袋口直接扎紧后打孔透气。
栽培种的用量一般为培养料的15%-20%。
5.培养。
将接完种的菌袋运到培养室中平放在培养架上培养。
需要码放时，不要堆的太高。
培养室要求室内卫生，清洁，通风良好。
在较低的室温（15℃左右）条件下培养，能显著降低污染率。
袋筒培养一段时间，应进行翻袋。
目的在于让菌袋各部分发菌一致，并在发菌的同时挑出污染袋。
经30-40天菌丝可长满全袋。
6.出菇管理。
当菇筒内菌丝生长好后应立即搬到出菇室进行出菇。
出菇室要求清洁卫生，通风透光，保温保湿性能好。
出菇室的地面以水泥地面或砖面为好。
（1）原基形成期：光线和变温刺激有助于原基分化，此时菇房应该有散射光照射，菇房温度以10-15℃为宜。
菌袋在这样的条件下继续培养3-7天，菌丝开始扭结形成原基（菌袋两端开始出现米粒状的纠结物）。
此时应该将菌袋两端透气塞拔掉，使袋筒通风换气，响室内空间喷雾状水，保持室内相对湿度80%-85%；（2）菇蕾形成期：原基得到空气和水份后生长很快，形成黄豆粒大小的菇蕾，这时应将应将袋筒两端多余的袋边卷起，使菇蕾两边的栽培料露出袋筒。