黄芪种子中总黄酮、总蛋白质和氨基酸的含量测定
黄芪中总黄酮的含量测定
哈尔滨商业大学毕业设计(论文)黄芪中总黄酮的含量测定学生姓名胡莉华指导教师杨波专业药学学院药学院2012年06月1日Graduation Project (Thesis)Harbin University of Commerce Determination of total flavon content inradix astragaliStudent Hu Li HuaSupervisor Yang BoSpecialty PharmaceuticsSchool College of Pharmacy2012-6-1毕业设计(论文)任务书毕业设计(论文)审阅评语毕业设计(论文)审阅评语毕业设计(论文)答辩评语摘要目的:通过采用紫外分光光度法测定药材黄芪种总黄酮含量。
方法:采用超声提取法从药材黄芪中对总黄酮进行提取,采用紫外分光光度法以芦丁为对品对总黄酮成分进行含量测定。
结果:采用紫外分光光度法,以芦丁为标准品采用标准曲线法测定黄芪中总黄酮类成分的总量为0.1605%。
芦丁在8~48 μg/ml 具有良好的线性关系, 回归方程为A=0.03950C - 0.01820( r=0.9999)。
结论:该方法简便可靠, 重现性好, 可用来作为药材黄芪中总黄酮含量的测定方法。
关键词:黄芪;总黄酮;紫外分光光度法AbstractObjective: ultraviolet spectrophotometry was used to determine the content of total flavone medicinal Astragalus species.Methods: the ultrasound extraction from Chinese milkvetch on total flavonoids extracted, by Ultraviolet Spectrophotometry with rutin as control sample on Determination of the content of total flavone composition.Results: The ultraviolet spectrophotometry with rutin as standard sample, using standard curve method for determination of total flavonoids in Radix Astragali total 0.1605%. Rutin in 8 ~48 g / ml has good linear relationship, the regression equation was A =0.03950C+ 0.01820( r = 0.9999).Conclusion: this method is simple, reliable, reproducible, and can be used as medicine Astragalus and content determination of total flavone.Key words: Astragalus; total flavone; UV spectrophotometry.目录摘要 (I)Abstract (II)1 绪论 (4)1.1 本论文研究的目的及意义 (4)1.2 黄芪的国内外研究现状 (4)1.2.1中医药对黄芪的认识 (4)1.2.2现代药理研究对黄芪的认识 (6)1.3黄芪概述 (8)1.3.1化学成分 (8)1.3.2 药理作用 (9)1.3.3 临床应用 (11)1.4 中药鉴定方法 (13)1.4.1 性状鉴定 (13)1.4.2 显微鉴定 (13)2 仪器与药品 (14)2.1 实验药材 (14)2.2药品与试剂 (14)2.3仪器 (14)3 实验部分 (15)3.1黄芪的鉴别 (15)3.1.1 性状鉴别 (15)3.1.2理化鉴别 (15)3.2 乙醇超声提取总黄酮 (16)3.3 紫外分光光度法测定黄芪中总黄酮的含量 (16)3.3.1 实验原理 (16)3.3.2 实验操作及结果 (16)3.3.3 方法学考察 (18)4 结论 (20)讨论 (21)参考文献 (22)致谢 (25)1 绪论1.1本论文研究的目的及意义黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membr anaceus( Fisch. ) Bg e. var. monghol i cus ( Bge. )Hsiao 或膜荚黄芪A str agalus membranaceus( Fisch. ) Bg e. 的干燥根, 具有补气固表、利尿托毒、敛疮生肌等功效。
黄芪的研究概况
黄芪的研究概况作者:王艳芳、鲍建材、郑友兰、张崇禧摘要:目的:从黄芪的资源分布、栽培技术、化学成分、药理作用及质量评价等几方面论述了我国黄芪的研究概况。
方法:分析并总结近年有关黄芪的国内外文献。
结果:通过分析总结对黄芪有了一个更加全面的认识,为黄芪的进一步开发和应用奠定了基础。
结论:黄芪在抗病毒和提高机体免疫力等方面具有广阔的开发前景。
关键词:黄芪研究概况黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus.membranaceus.(Fisch)Bge.Var.Monghoicus(Bge)Hisao 或膜荚黄芪Astragalus.membranaceus(Fisch)Bge.的干燥根,我国黄芪资源分布广泛,品种繁多。
其化学成分众多,主要含有皂苷、黄酮、多糖以及氨基酸等几类成分。
传统中医学认为,黄芪具有补气升阳、固表止汗、托毒排脓、利水消肿、敛疮生肌的功效。
现代药理研究表明,黄芪具有增强机体免疫功能,强心降压、降血糖、利尿、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒、镇静、镇痛等作用。
1、资源分布黄芪主要分布于山西、内蒙古、吉林。
黑龙江。
辽宁、河北、甘肃;新疆、西藏、四川。
陕西、宁夏。
青海、河南、山东、江苏等亦有分布。
主产于山西浑源、应县、繁峙。
代县、广灵、平顺、娄烦、奇岚、平陆、万荣、朔州市平鲁区;内蒙古库伦、武川、额尔古纳右、莫力达瓦。
鄂伦春、牙克石、阿荣旗。
阿巴嘎、多伦、扎兰屯、额尔古纳左、太仆寺。
正兰旗。
满什哩、克什克腾、阿鲁科尔沁、锡林浩特、察哈尔右翼中、兴和、固阳、土默特右、达拉特、呼和浩特、赤峰;河北沽源、丰宁、围场、赞皇、崇礼、平山、定州、安国、安平、张北、完县、行唐、赵县、宣化、玉田、迁安、阜平、望都;黑龙江林口。
穆棱、宁安。
萝北、东宁;吉林和龙、汪清、伊通、东丰。
龙井、东辽、梅河口、柳河、烨甸、敦化、珲春。
安图、延吉;辽宁抚顺、新宾、清原;宁夏隆德、径源、西吉;青海玉树、贵德、门源、兴海;山东青州、文登、寿光、昌乐、淄博。
【word】浅谈黄芪中主要成分的含量测定方法
浅谈黄芪中主要成分的含量测定方法中国健康月刊2011年第3O卷第9期JChinaHealthMonthly2011,V ol30.No.9月期间收治的ll2例心血管病高危患者,其中男性有62例,女性有5O 例,年龄在40~81岁之间,平均年龄为53.2岁.本组人选的都是高危患者并且都是拟行冠状动脉造影者.高危定义是既往发生过心脑血管疾病如缺血性脑卒中,短暂性脑缺血,冠心病等疾病或者是具有两个以上心血管危险因素.心血管危险因素主要包括吸烟,酗酒,肥胖,糖尿病,高血压,高血脂及年龄在5O以上等因素.人选患者中排除严重心功能不全及其他原因不愿接受检查者.1.2检查方法1.2.1仪器:本组研究中使用的颈动脉检查仪器是由飞利浦公司生产的IE33型超声显像仪.探头频率为7~10MHz.颈动脉检测的指标主要包括几项:搏动指数(PI),收缩期峰值流速(SPV),舒张末期流速(EDV),阻力指数(RI),其中几项指标的关系为Rj:(SPV—EDV)/SPV.1.2.2临床血液生化指标:调查所收治患者的既往心血管发病史,统计发生的次数和数目.检查患者的身体指标包括身高,体重,并测量患者的动脉血压和心率.另外在清晨空腹检查患者的血常规.1.23颈动脉超声检查:颈动脉检查时先纵向检查颈总动脉近心端沿血管的部位,之后在检查颈内动脉和颈外动脉.检查时患者应处于平卧位,而且在颈后垫上一个低枕,头部向后方仰.之后将头部转9O度,进行横向检查.在血管收缩期检查得到的IMT值是最厚的部位,了解内中膜情况,如此评价测量3次,之后取其平均值.对于有斑块的患者要观察其斑块的性状和大小,并准确的测最最大的斑块长度.依照IMT,颈总动脉,颈动脉分叉部和颈内动脉粥样化等情况将所有的患者分为4组,A组是IMT 小于1.0mm者,B组中IMT为1.1~1.5ram之间的患者;C组中长度为小于2cm且颈动脉斑块不大于2个的患者;D组斑块长度大于2cm或者是颈动脉斑块多于2个的患者.1.2.4冠状动脉造影:给患者做常规的股动脉和桡动脉穿刺进行造影检查,分析左右冠状动脉的造影结果.观察患者的造影情况,正常或者狭窄小于5O%者为造影阴性;狭窄大于5O%为造影异常.1.3统计学处理:本组研究中的数据通过SPSS13.0的统计学的软件包进行统计学处理,计量资料用料采用均数±标准差表示,组伺差异进行t检验,计数资料用卡方检验,有显着的统计学差异表示为P<O.05. 2结果4组患者的超声检查中显示c组和D组患者的危险因素和心血管发生数目明显的高于A组患者,D组患者的收缩压高于其他的三组,四组患者的心率,舒张压和BMI情况也存在有统计学差异(P<0.05).四组患者的血液生化指标比较也有显着的统计学差异(P<O.05).表1四组患者的情况比较3讨论心血管患者发生动脉粥样硬化是长期发展而形成的.近年来随着社会压力和生活节奏的加快,心脑血管的发病率也在逐年的升高,成为危害人们健康的重要因素之~,因此临床中对于心脑血管疾病的检查和治疗有重要的意义.有研究表明,经总动脉的IMT与年龄有线性正相关,其随着年龄的增加而增厚,尤其是对于六旬以上的老年人增厚差异较为明显.本组研究中心血管危险因素的判定标准:吸烟指患者在现在或者是以往有过吸烟;肥胖是按照中华医学会在2004年糖尿病分会的代谢综合征的诊断标准;高血压是根据美国JNC7和2003年ESH/ESC欧洲高血压指南标准;糖尿病主要是根据1999年WHO的糖尿病诊断标准.高血脂症的标准是要符合下列条件之一:(1)总胆固醇C)高于5.20mmol/L;(2)低密度脂蛋白胆固醇(LDL—c)高于3.12mmol/L;(3)高密度脂蛋白胆固醇(HDL---e)低于1.04mmol/L;(4)三酰甘油G)高于1.7mmol/L.总之,通过本组对我院心血管患者的分析表明,超声技术可以为临床中诊治提供一定的依据.参考文献【1】富华颖,周长钰,李广平,刘彤,郑成环,尹力.心血管病高危人群颈动脉超声的临床应用fJ1.天津医药,2010,38(8):663—667.【2]陈虞,胡大一,杨进刚.心血管病高危人群臂踝脉搏波速床应用Ⅲ.中国康复理论与实践,2007,13(3):275—278[3】王吉耀,廖二元,胡品津.内科学【M】北京:人民卫生出版社,2005:247.~]NewmanAB,NaydeckBL,NesDG,eta1.Coronaryarterycalcium,carotid arterywallthickness,andcardiovasculardiseaseoutcomesinaduhs70to99yearsol dfJ].AmJCardiol,2008,101(2):186—192.浅谈黄芪中主要成分的含量测定方法崔桂英(安徽淮南卫校附属医院,安徽淮南232007)【摘要】目的本文的研究主要为了对中药黄芪质量评价提~,-q-靠的方法和指导临床合理用药提供依据.方法线性关系考察,精密度试验,供试品溶液稳定性试验和重现性试验.结果蒙古黄芪与膜荚黄芪中含有化合物3,1,13,12,5和6的比值为O.50,o.70…111.89,o.59和1.13,化合物13和6的d/X<15%.没有显着性差异;化合物,3,12和5的d/X>15%~有显着性差异.结论膜荚黄芪中的化合物5,3,1均高于蒙古黄芪,蒙古黄芪的化合物12高于膜荚黄芪.【关键词】黄芪主要成分含量测定一中图分类号:R282.5文献标识码:B文章编号:1005—0515(2011)9-333-02中国传统医院强调中药的整体效果,多环节,多靶点,多成分的协同但是结果无法得到纯品.黄芪甲苷粗品进一步用反相硅胶C-18常压色作用才能够使中药机理发生作用.因此,我们从多个黄芪中主要化合物人谱柱分离,60%甲醇洗脱,得到黄芪甲苷纯品13.4mg,HPLC-ELS检测纯手,多方面的对黄芪的质量做出评价.度符合药典标准.运用硅胶柱色谱和活性炭色谱分离手段,从黄芪粉末醇1实验药材,对照品,试剂和仪器提物的正丁醇萃取部分分离出黄芪甲苷的纯品,纯度符合药典标准.分析1.1实验药材及试剂纯甲醇:HCRC国药集团试剂有限公司;分析乙腈:Sigma.蒙古黄芪与膜荚黄芪(购自淮南市药材批发市场),对照品本均来自本1.2仪器实验组从黄芪中分离得到的化合物(1,3,5,6,12和13);从黄芪中分离得HPLC:Waters2695;检测器:uVwaters2996,ELSDwaters2420到的化合物,主要有皂苷类,黄酮类,黄烷类,联苯衍生物,多糖,另外还有2实验条件的选择氨基酸,谷甾醇,胡萝苷等,其中以皂苷类,黄酮类最为重要.影响甲苷色谱柱:SUNFIREC18(5urn4.8*150mm);流动相:甲醇.水一乙腈;流提取率的因素有很多,根据文献用正交试验法对各因素试验结果的影响速:hnl/min.进行分析,顺序为乙醇的体积分数)PH值)乙醇用量,其中乙醇的体积分2.1黄酮(苷)数对黄芪甲苷的提取率有显着性的影响(p<O.05),PH值对黄芪甲苷的提表1梯度洗脱条件取率也有显着性影响(P<O.05),而乙醇用量的影响甚小(P>O.1).另外,与水提法相比,用醇回流提取法的提取率更高,且液体用量更少,便于以后进一步的分离.因此确定最佳提取条件为:乙醇体积分数为60%,乙醇用量6倍于黄芪质量,温度为60’E时.有文献报导,用正丁醇萃取后用氨试液洗涤提取液,弃去氨试液,正丁醇液蒸干,用0.451xm微孑L滤膜滤过,检测器:HPLC.PDAD;检测波长:250nm.2.2皂苷333?中国健康月刊2011年第3O卷第9期JChinaHealthMonthly2011,V o130.No.9表2梯度洗脱条件检测器:ELSD;氮气压力25.0psi,增益100,喷雾加热器级别60%,漂移管温度50℃.3对照品的制备精密称取黄芪甲苷(5)标准品21mg,黄芪皂苷IIO)26mg,紫檀烷型黄酮.3.葡萄糖苷(1)13rag,3’一羟基一5’一甲氧基异黄酮一7—0一D一毗喃葡萄糖苷(3)14mg,7~羟基一4,~甲氧基异黄酮(12)18mg,7,3’一羟基一5’甲氧基异黄酮(13)12mg,分别精确配成O.42mg/ml,1.3rag/rid,0.13u~ml,4.64ug/ml,0.01medml,0.024mg/ml的溶液.摇匀,分别经O.45urn微L滤膜过滤,备用.4供试品的制备分别取蒙古黄芪,膜荚黄芪各20%,分别用1500nil甲醇浸泡过夜回流提取3次(2h,2h,1.5h),得蒙古黄芪粗提物68.27g,膜荚黄芪粗提物48.55g.分别取蒙古黄芪粗提物68.8mg,膜荚黄芪粗提物55.1mg,均配成10rag/ml溶液作为黄酮(苷元)的供试品;分别取蒙古黄芪粗提物5g,膜荚黄芪粗提物59,甲醇溶解,309硅胶柱色谱纯化,二氯甲烷甲醇10:1f200mE)和4:l(400mL)洗脱,4:1部分蒸干后溶于50ml甲醇,作为皂苷的供试品.分别取蒙古黄芪粗提物1g,膜荚黄芪粗提物1g,溶于1OraL 甲醇中,取lmL稀释至10mL,作为黄酮的供试品.5方法学考察5.1线性关系考察表3线性关系考察表5.2精密度试验取已配好的对照品化合物l,3,5,6,12和13溶液重复进样6次,其中1,3,l2和13每次进10ul,5和6每次进5ul,记录各峰面积,计算RSD 值分别为2.6%,3-8%,O.8%,19%,O.4%和0_3%,表明本实验方法精密度符合要求.5-3供试品溶液稳定性试验取蒙古黄芪和膜荚黄芪的粗提物溶解,分别在O,4,8,12,24,48小时测定,进样40ul,测得蒙古黄芪的RSD值5和6分别为0.263%,O.215%, l,3,12和13分别为0.105%,0.082%,0297%,0.099%;膜英黄芪的RSD 值分别为5和60.395%,1.407%,1,3,12和13分别为O.155%,0.025%, 0.325%,0.101%.结果表明化合物1,3,5,6,12和13在48小时内稳定性良好.5.4重现性试验取蒙古黄芪提取物各6份,按供试品的制备方法平行处理,测定蒙古黄芪中的黄酮化合物1,3,12和l3及皂苷化合物5和6的峰面积,计算RSD为2.2.黄酮的加样回收率:取蒙古黄芪粗提物1.009,分别加30mg,lmg,2.35rag,3mg,甲醇溶解,过滤,蒸干,溶于10Oral色谱甲醇中,微孔过滤,进样lOul.重复6次,取峰面积的平均值,数据如下:表5,化合物3的加样回收率.6样品含量测定蒙古黄芪皂苷的供试品进样40uL测化合物5和6的含量,膜荚黄芪皂苷的供试品进样20uL测化合物5和6的含量.表6黄芪中黄酮的含量表7黄芪中皂苷的含量7讨论论文中分别考察了6种主要成份在蒙古黄芪和膜英黄芪中的含量差异,结果蒙古黄芪与膜荚黄芪中含有化合物3,1,l3,12,5和6的比值为0.50,0.70…111.89,0.59和1.13,化合物l3和6的d/X<I5%,没有显着性差异;化合物,3,12和5的d/X>15%均有显着性差异.由此得出结论,膜荚黄芪中的化合物5,3,l均高于蒙古黄芪,蒙古黄芪的化合物12 高于膜荚黄芪.8结束语黄芪的生物活性的全貌不能够通过单一活性成分的含量所反映出来.本文的研究主要为了对中药黄芪质量评价提供可靠的方法和指导临床合理用药提供依据.我们对黄芪中的主要活性成分进行制备,并以其作为对照品进行多活性组分含量测定.参考文献[1】胡伦香,张建,罗春,傅晓钟9一【2一酰基甲氧基)乙基】腺嘌呤的合成工艺研究,贵阳医学院2008,5,23(5).[2]张云峰,魏东等,大花罗布麻化学成分研究,天然产物研究与开发, 200618.954--957.[3]Agzarn0va,M.A.,Khim.Prir.S0edin.,1986,22,l17:pd. (En91.Trans1.),1986,22,ll5.超声在女性盆腔结核诊断中的应用霍雅清李畅刘晶鑫(吉林省结核病医院,吉林九台130500)【摘要】目的分析超声在女性盆腔结核诊断及鉴别诊断中的应用,为临床提供可靠的依据.方法对40例盆腔结核患者进行跟踪随访,穿刺活检,手术病理对照.研究每个病例声像图特征并进行分类总结.结果超声诊断盆腔结核病理符合率达92.5%左右.结论超声可以判断盆腔结核病变波及的范围,与周围组织及血管的关系,具有G4,I性,无痛性,安全性,可重复性等优点.334?。
比色法辅助下紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量
试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
准确称取芦丁标准品 5mg,烘干后置于容量瓶(50mL)中, 加 50%乙醇水浴加热溶解并定容,即得芦丁标准溶液(0.1mg/ mL),放入冰柜备用。
第 14期
陈凌霆等:比色法辅助下紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量
·75·ห้องสมุดไป่ตู้
比色法辅助下紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量
陈凌霆1,2,赵娅敏,2,齐燕姣1,2,罗兴平1,2,康淑荷1,2,张丽丽1,2,俞布仁3,杨文亮1,2
(1.西北民族大学化工学院,甘肃 兰州 730000;2.西北民族大学甘肃省高校环境友好复合 材料及生物质利用省级重点实验室,甘肃 兰州 730000;3.西北民族大学电气工程学院,甘肃 兰州 730000)
DeterminationofTotalFlavonoidsinScutellariaBaicalensisby UltravioletSpectrophotometryAssistedbyColorimetry
ChenLingting1,2,ZhaoYamin1,2,QiYanjiao1,2,LuoXingping1,2, KangShuhe1,2,ZhangLili1,2,YuBuren3,YangWenliang1,2
摘要:目的:建立一种简单、快速、有效的方法测定黄芪中总黄酮含量。方法:在 NaNO3 -Al(NO3)3 -NaOH比色法辅助下,用紫外分光 光度法测定黄芪中总黄酮的含量。结果:显色法最佳条件为 5%NaNO3-8%Al(NO3)3-5%NaOH,最大吸收波长为 512nm,吸光度 A与 芦丁在 0.015~0.6mg/mL范围内呈良好的线性关系(R2=0.9995),线性方程为 A=0.0741c+0.0005,总黄酮的回收率为 97.6%,相对 偏差(RSD)为 2.47%。结论:该法简单准确,易操作,回收率高,可作为黄芪总黄酮含量测定的一种方法。 关键词:黄芪;总黄酮;比色法;紫外分光光度法 中图分类号:O657.32 文献标识码:A 文章编号:1008-021X(2018)14-0075-03
黄芪中总黄酮的含量测定方法
黄芩中总黄酮的含量测定To determine the content of total flavonoids inRadix Scutellariae班级 08级2班专业药学姓名崔立靖同组人陆晓娅关雪李娟张栋材摘要目的:黄芩中总黄酮含量的测定。
方法:采用紫外分光光度法测定黄芩中总黄酮的含量。
结果:黄芩中总黄酮含量是0.034mg/ml。
Abstract Objective:To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae.Methods :Ultraviolet spectrophotometry was used to To determine the content of total flavonoids content.Results :Total flavonoids content of Radix Scutellariae reached 0.034mg/ml。
关键词黄芩;总黄酮;紫外分光光度法Key World Radix Scutellariae;Total flavonoids ; uv-spectrophotometry目录摘要 (1)Abstract (1)关键词 (1)Key World (1)目录 (2)1 绪论 (3)2 黄芩中总黄酮含量测 (6)2.1仪器与试剂 (6)2.1.1实验仪器 (6)2.1.2实验药品 (6)2.2试验方法 (6)2.2.1总黄酮成分提取 (6)2.2.2定量实验总黄酮的含量测定 (6)2.2.2.1线性关系考察 (6)2.2.2.2提取物含量的测定 (7)2.3方法学检验 (7)2.3.1精密度实验 (7)2.3.2稳定性考察 (7)2.4黄芩根及粉末的显微图像 (7)2.4.1黄芩根的显微图像 (7)2.4.2黄芩粉末的纤维图像 (7)3 参考文献 (8)1 绪论【英文名】Radix Scutellariae【别名】山茶根、黄芩茶、土金茶根【来源】本品为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。
紫外分光光度法测定不同产地黄芪总黄酮的含量
紫外分光光度法测定不同产地黄芪总黄酮的含量程研;闵会;何厚洪;胡江宁;吴健;王小东;王如伟【摘要】目的:建立黄芪中总黄酮的含量测定方法,比较不同产地黄芪药材总黄酮的含量。
方法:以毛蕊异黄酮苷为对照品,采用紫外分光光度法,测定波长为260 nm,对不同产地黄芪药材总黄酮的含量进行测定。
结果:毛蕊异黄酮苷在4-20μg/m L呈现良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.96%,RSD%为1.53%;不同产地黄芪药材,总黄酮含量在0.234%-0.383%范围内。
结论:本实验建立的方法适用于测定黄芪药材中总黄酮的含量;不同产地黄芪中总黄酮含量以毛蕊异黄酮苷计由高到低依次为大兴安岭、甘肃、山西、内蒙古。
【期刊名称】《江西中医药大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P58-60)【关键词】紫外分光光度法;毛蕊异黄酮苷;总黄酮;含量测定【作者】程研;闵会;何厚洪;胡江宁;吴健;王小东;王如伟【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】R284.1黄芪为豆科植物蒙古黄芪AstragaLus membranaceus(F isch.)B g e.v a r.m on g ho L icus(B g e.)H si a o或阳、利水消肿之功效[5]。
现代药理研究表明,黄酮类成分为黄芪抗肿瘤的有效成分之一[6],王光忠[7]、陈鑫[8]、李春红[9]等分别以芦丁为对照,对黄芪中总黄酮的含量进行了测定。
郭帅等[10]在研究黄酮纯化工艺时则以毛蕊异黄酮苷为对照,对总黄酮进行测定。
但通过杨范莉[11]、冯祖飞[12]、梁瑾[13]等对黄芪药材中黄酮类成分的研究表明,其黄酮类成分中以毛蕊异黄酮苷的含量最高。
因此作者选择以毛蕊异黄酮苷为对照,对黄芪药材中总黄酮含量测定方法进行系统研究,测定结果真实、可靠,可以为黄芪药材中黄酮类成分深入研究提供理论依据。
1.1 仪器 UV-2450型紫外分光光度计(日本岛津);AgiLent1200高效液相色谱仪(AgiLent公司);BS210S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);AX205电子天平(瑞士梅特勒?托利多公司);HWS26型恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司)。
中药黄芪的含量测定及药理作用综述
中药黄芪的含量测定及药理作用综述谢加力(药学系,药学0601班,200309010007)摘要:本文通过对黄芪的概述,包括植物来源、形态、形状、有效成分、鉴别等方面,重点分析通过薄层色谱法和质量分析方法对黄芪进行含量测定。
此外,黄芪可提高和促进免疫功能,有保肾利尿、抗菌抗病毒、提高机体应激能力等药理作用。
随着医药学界不断的深入研究,现代医学发现其药理作用甚广,除能增强机体免疫功能、增强细胞代谢、调节DNA 复制及RNA和蛋白质的合成外,还有固肾降压、保肝抗炎的功能。
黄芪对免疫功能低下不仅有增强作用,还有双向调节作用。
本文对黄芪的免疫调节作用进行了重点分析.关键词:黄芪甲甙、质量分析、免疫调节、黄芪多糖。
The Chinese native medicine Radix Astragali content determination and the pharmacologicalaction summarizeXie Jiali(Pharmacy of department, pharmacy 0601 classes,200309010007)Abstract: This article through to the Radix Astragali outline, includes theplant originates, aspect and so on shape, shape, effective component, distinction, the key analysis to Radix Astragali carries on the content through the thin layer chromatography and the quality analysis method determines.In addition, Radix Astragali may enhance and promote the immunity function, has guarantees the kidney diuresis, the antibacterial anti-virus, enhances pharmacological action and so on organism strength.Along with the medicine educational world unceasing thorough research, the modern medicine discovers its pharmacological action is really broad, except can strengthen the organism immunity function, the enhancement cell metabolism, adjusts the DNA duplication and RNA and outside the proteinarchery target synthesis, but also has the solid kidney falls presses, guarantees the liver anti- inflammation the function. Radix Astragali is low to the immunity function not only has the enhancement function, but also has the bidirectional control action. This article carried on the key analysis to the Radix Astragali immunity control action.Key word: Radix Astragali armor glucoside, quality analysis,immunity adjustment, Radix Astragali polysaccharide.黄芪,为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongho licus (Bge.)Hsiao 或膜荚黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根。
黄芪的分布及主要化学成分检测方法研究进展
法难以获得理想的染色体观测效果。
本试验材料为组培苗,其根系柔软、肥壮且易于取材和压片观察,同时与其他细胞分裂旺盛的组织或器官相比,根尖分生区细胞分裂更旺盛、细胞壁也较薄[5]。
通过筛选预处理、解离和染色环节的条件,得出了一套适合大理长叶兰制片的体系。
最佳预处理方案为:0.005mol/L 的8-羟基喹啉溶液处理试验材料6h ;最佳的解离方案为:37%HCl ∶45%冰醋酸=1∶1的解离液解离5min ;最佳的染色方案为:卡宝品红染色15min+复染5min 。
在制片的染色环节,如果染色的时间过长,染液易干燥沉淀,在镜检时细胞中会出现杂质,干扰染色体数目的统计。
采用卡宝品红染色15min ,压片后复染5min ,此法有效避免了因染色时间过长而产生杂质干扰,也可以排除在压片过程中产生的气泡,得到材料的细胞质、细胞壁与染色体着色效果对比较明显,易于观测。
一般认为,如果材料的染色体小且数目多,则需要至少统计30个细胞,而且只有当所统计的所有细胞材料中有85%以上的细胞具有相同的染色体数目时,才能确定该植物的染色体数目[6]。
试验共统计40个长叶兰根尖细胞的染色体,符合染色体数目统计的要求。
邓樱等[7]对“素心黄”兰花的染色体数目进行了分析,表明其染色体数目是2n=2x=40;费昭雪等[8]对2个中国兰花类群春兰()和蕙兰()进行了染色体数目的统计,染色体数目均为2n=2x=40。
本研究中大理长叶兰染色体数目与上述研究结果相同。
试验发现,即使是同科同属的近缘种之间,染色体的压片技术也有很大的差别,所以对植物细胞染色体制片技术的研究和优化,不能一味地借鉴,对于植物细胞染色体制片技术的研究,值得人们投入更多的关注和进行更多的探讨。
(收稿:2022-10-28)参考文献:[1]中国植物志编委会.中国植物志[M].北京:科学出版社,1999,18:201.[2]张嘎,李林凤,娜仁图娜拉,等.染色体分析技术及其意义[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(46):9179-9182.[3]张迪,朱根发,叶庆生,等.50份蝴蝶兰种质的染色体数目与倍性分析[J].热带作物学报,2013,34(10):1871-1876.[4]李国珍.染色体及其研究方法[M].北京:科学出版社,1981.[5]丁鸿,邱东萍,陈少雄.植物染色体标本的制备和染色体核型分析研究进展[J].南方农业学报,2012,43(12):1958-1962.[6]刘永安,冯海生,陈志国,等.植物染色体核型分析常用方法概述[J].贵州农业科学,2006,34(1):98-102.[7]邓樱,周晔,陈继敏.秋水仙素诱导兰属‘素心黄’多倍体的方法研究[J].亚热带植物科学,2008(2):38-40.[8]费昭雪,雷珊,崔苗苗,等.秦岭野生春兰和蕙兰染色体核型分析[J].林业科技通讯,2020,(5):24-27.黄芪的分布及主要化学成分检测方法研究进展孙秀菊1,刘鑫1*,何建东1,王建军1,郭琳2,李剑宇3,田荣伟2,黄国艳3(1包头市农畜产品质量安全中心,内蒙古包头014000;2包头市农牧科学技术研究所,内蒙古包头014000;3包头市农村牧区经营管理和信息服务中心,内蒙古包头014000)摘要:通过全面查阅和梳理近几年相关文献,对黄芪的分布情况及黄芪主要化学成分的检测方法进行综述,为今后进一步研究和开发利用黄芪提供技术参考。
黄芪化学成分及药理作用概述
黄芪化学成分及药理作用概述张霞【期刊名称】《实用中医药杂志》【年(卷),期】2013(029)007【总页数】2页(P608-609)【作者】张霞【作者单位】四川省攀枝花市中西医结合医院,四川攀枝花617000【正文语种】中文【中图分类】R285.5黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根,味甘、性温、归脾、肺经,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌的作用[1]。
黄芪主要有膜荚黄芪,主产于黑龙江、吉林、辽宁、陕西、甘肃、山西等地;内蒙古黄芪(棉芪),主产于内蒙古、吉林、辽宁、河北、山西等地。
1.1 黄芪多糖黄芪多糖[2]主要有葡聚糖和杂多糖,其中葡聚糖又有水溶性葡聚糖和水不溶性葡聚糖,黄芪中所含的杂多糖多为水溶性酸性杂多糖,主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖组成,糖醛酸含量少,由半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸组成,而有些杂多糖仅由葡萄糖和阿拉伯糖组成。
黄芪多糖的研究已取得一定进展,其多糖含量处于中上水平。
国内学者从黄芪中分离纯化得到白色粉末状多糖,分子量37ku,鉴定为a-糖苷健结构,多糖水解后检出葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,摩尔比为1:0.95:0.70。
采用酚-硫酸比色法测定了内蒙黄芪地下与地上部分黄芪多糖的含量,测得根部含量最高,茎叶次之,种子最低。
由于茎叶产量大,易采收,是很好的黄芪多糖药源。
用分光光度法测定不同来源的黄芪药材多糖的含量,结果发现文登和新泰黄芪基地所产黄芪的黄芪多糖含量分别为8.62%和14.15%,表明了黄芪药材多糖含量的差异性。
应用比色法测定不同生长年限黄芪的多糖含量,结果发现生长年限为1、2、3年的黄芪多糖含量分别为32、12、23、42、16、68mg/g,表明随着生长年限的增加,黄芪中多糖的含量逐年降低。
1.2 皂苷类成分皂苷类为黄芪中重要的有效成分,目前从黄芪及其同属近缘植物中已分离出40多种皂苷,主要有黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ异黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及大豆皂苷Ⅰ等。
HPLC_MS测定黄芪药材中3种成分的含量
HP LC 2M S 测定黄芪药材中3种成分的含量李 翔1,朱臻宇1,王 彬2,娄子洋1,柴逸峰13(1.第二军医大学药学院,上海200433;2.东方肝胆外科医院药剂科,上海200438)关键词:高效液相色谱2质谱联用;黄芪药材;毛蕊异黄酮苷;黄芪甲苷;芒柄花素中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0513-4870(2006)08-0793-04收稿日期:2005210217.基金项目:上海市科委科技攻关项目(02419125);上海市科委重大项目(2403DZ19548).3通讯作者 Tel:86-21-25070373,E 2mail:yfchai@s mmu .edu .cnDeter m i n ati on of three constituents i n Radi x Astragali by HP LC 2M SL I Xiang 1,ZHU Zhen 2yu 1,WANG B in 2,LOU Zi 2yang 1,CHA I Yi 2feng13(1.School of Phar m acy,Second M ilitary M edical U niversity,Shanghai 200433,China;2.D epart m ent of Phar m acy,Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital,Shanghai 200438,China )Abstract:A i m To deter m ine calycosin 272O 2β2D 2glucoside,astragal oside I V and f or mononetin inRadix A stragali and other relative sa mp les by HP LC 2MS .M ethods HP LC was carried out with Agilent 1100LC /MS D ,equi pped with Agilent Z orbax S B C 18colu mn (250mm ×416mm I D ,5μm )and mass s pectru m detect or .The mobile phase (CH 3CN 2H 2O )was eluted in gradient mode .Results Thecalibrati on curves of calycosin 272O 2β2D 2glucoside,astragal oside I V and f or mononetin were linear in the range of 0103-1121μg ・mL -1,0135-13186μg ・mL -1and 0138-15122μg ・mL -1,res pectively .These recoveries of sa mp les were fr om 95%t o 105%with RS D less than 115%.Conclusi on The method was e mp l oyed t o analyse 25sa mp les of Radix A stragali and other relative sa mp les,including Radix A stragali slice,Radix A stragali Preparata,Hedysarum polybotrys Hand .2Mazz,A straga lus ernestii Comb .The contents of three constituents vary greatly because of the s pecies,p lace of collecti on and seas on of harvesting .This method could app ly t o evaluate the quality of Radix A stragali and it is si m p le,sensitive and reliable .Key words:HP LC 2MS;Radix A stragali;calycosin 272O 2β2D 2glucoside;astragal oside I V ;f or mononetin 黄芪为豆科植物蒙古黄芪A stragalus m e m brana 2ceus (Fisch .)Bge .var .m ongholicus (Bge .)H siao 或膜荚黄芪A stragalus m e m branaceus (Fisch .)Bge .的干燥根,具有补气固表、利尿脱毒、敛疮生肌等功效[1]。
HPLC法同时测定黄芪药材中10种黄酮类成分的含量
性 范围分别为 O . 0 3 0 2 9 ~1 . 5 1 4 5 g ( r =O . 9 9 9 4 ) 、 O . 0 1 5 0 O ~0 . 7 5 0 0 g ( r —O . 9 9 9 5 ) 、 O . 0 0 7 3 9 ~0 . 3 6 9 5 g g ( r =O . 9 9 9 1 ) 、 0 . 1 2 0 1 1 ~
f o r Mo d e m En gi n e e r i ng a n d Te c h no l o g y o f Hui Me d i c i ne,Ni ng x i a Me d i c a l Uni v e r s i t y,Yi n c h ua n 7 5 0 00 1 ,Ch i — n a;2. Ni ng x i a Ke y La b o f Hui Me d i c i n e Mo d e ni r z a t i o n, M i n i s t r y of Edu c a t i o n, Ni ng x i a M e d i c a l Un i ve r s i t y,
1 0 0 . 3 6% ( RS D= 1 . 2 7 %, n=6)、 9 9 . 7 3 %~ 1 0 0 . 1 3% ( RS D=0 . 1 8% , =6 )、 9 9 . 7 O% ~ 1 0 0 . 3 0 %( RS D一0 . 2 2 %, =6 )、 9 9 . 6 7 % ~ 1 O 3 . 2 7 %( RS D= 1 . 3 7 %. "一6) 、 9 8 . 1 3% ~ 1 0 4 . 4 1 %( RS D=2 . 3 7 %, =6 )、 9 6 . 3 5 % ~1 0 0 . 0 6 %( RS D= 1 . 4 6 %, =6 )、 9 9 . 4 7 % 甲酸 溶 液 ( 梯度洗脱 ) , 流速 为 1 . 0 mL / mi n , 检 测波长 为 2 5 4 n m, 柱温 为 3 5℃ , 进样 量为 1 0 。结果 : 毛 蕊 异 黄
HPLC-MS法测定黄芪中黄酮类成分的含量
第48卷第17期2020年9月广㊀州㊀化㊀工Guangzhou Chemical IndustryVol.48No.17Sep.2020HPLC -MS 法测定黄芪中黄酮类成分的含量陈春茗1,龚㊀姗1,陈㊀蕾1,马丹凤2(1湖南中医药大学第一附属医院,湖南㊀长沙㊀410007;2湖南省儿童医院,湖南㊀长沙㊀410007)摘㊀要:采用Acclaim 120C 18色谱柱,以乙腈-0.3%甲酸溶液为流动相,流速为1.0mL /min,以离子监测(SIM)为扫描模式测定黄芪药材中黄酮类成分含量㊂研究发现毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素检测的线性范围分别为0.0084~2.217mg /mL(r =0.9991)㊁0.0049~1.287mg /mL(r =0.9995)㊁0.0027~0.6847mg /mL(r =0.9994)㊁0.00194~0.482mg /mL(r =0.9998);精密度试验㊁稳定性试验㊁重复性试验RSD 均<2.0%;平均加样回收率(n =6)分别为100.31%㊁99.85%㊁100.45%㊁100.72%㊂该方法简便,可靠,准确,可用于黄芪药材质量控制㊂关键词:黄芪药材;黄酮类成分;高效液相色谱-串联质谱;含量测定㊀中图分类号:R917㊀文献标志码:B文章编号:1001-9677(2020)17-0074-03㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第一作者:陈春茗,主管药师㊂Determination of the Content of Flavonoids in AstragalusMembranaceus by HPLC -MSCHEN Chun -ming 1,GONG Shan 1,CHEN Lei 1,MA Dan -feng 2(1The First Affitiated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Hunan Changsha 410007;2Hunan Children s Hospital,Hunan Changsha 410007,China)Abstract :The Acclaim 120C 18chromatographic column was used with acetonitrile -0.3%formic acid solution as the mobile phase and the flow rate was 1.0mL /min.The ion monitoring (SIM)was used as the scanning mode to determine the content of flavonoids in Astragalus medicinal materials.The study found that the linear range for the detection of verbasin glycosides,formononetin,verbasin,formononetin was 0.0084~2.217mg /mL (r =0.9991),0.0049~1.287mg /mL (r =0.9995),0.0027~0.6847mg /mL (r =0.9994),0.00194~0.482mg /mL (r =0.9998);precision test,stability test,repeatability test RSD were all <2.0%;average sample recovery (n =6)was 100.31%,99.85%,100.45%,100.72%,respectively.The method is simple,reliable and accurate,and can be used for quality control of Astragalus medicinal materials.Key words :Astragalus membranaceus;flavonoids;high performance liquid chromatography -tandem mass spectrometry;determination of the content黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根,具有补气固表㊁利尿消肿㊁敛疮生肌等功效,在表虚自汗㊁阴虚盗汗㊁阳气虚弱㊁肺气虚㊁中气下陷㊁食少便溏㊁子宫脱垂等症上有较高药用价值[1-2]㊂现代药理研究表明,黄芪含有皂苷类㊁黄酮及多糖类成分,具有增强免疫功能㊁调节血压㊁抗菌㊁抗病毒㊁清除氧自由基㊁保护血管内皮功能㊁保肝㊁抗心肌缺血等多种药理作用[3-4]㊂黄芪药材中可分离出几十余种黄酮类成分,常见的有槲皮素㊁毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素㊁染料木苷等[5-6]㊂本研究采用HPLC -MS 法测定了黄芪药材中毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素等4种含量较高的黄酮类成分含量,以期为黄芪药材质量控制提供科学依据㊂1㊀仪器与试药1.1㊀仪㊀器API4000型三重四级杆质谱,美国应用生物系统;1100型液相色谱仪,美国安捷伦公司;AL204型电子分析天平,瑞士梅特勒-托利多公司;DL -360D 超声波清洗器,上海之信仪器有限公司㊂1.2㊀试㊀药毛蕊异黄酮苷对照品(批号:15111012)㊁芒柄花苷对照品(批号:15041223)㊁毛蕊异黄酮对照品(批号:15090324)㊁芒柄花素(批号:15080717)均购买自广州牌牌生物科技有限公司,纯度均>98%;乙腈㊁甲醇㊁甲酸均为色谱纯,购自美国迈瑞达科技有限公司;水为去离子水㊂8批黄芪药材来源于不同产地,经笔者鉴定均为蒙古黄芪,见表1㊂第48卷第17期陈春茗,等:HPLC -MS 法测定黄芪中黄酮类成分的含量75㊀表1㊀黄芪药材来源与品种Table 1㊀Sources and varieties of Astragalus medicinal materials样品编号来源品种1内蒙包头蒙古黄芪2内蒙赤峰蒙古黄芪3山西应县蒙古黄芪4山西浑源蒙古黄芪5宁夏县蒙古黄芪6宁夏泾源蒙古黄芪7甘肃岷县蒙古黄芪8河南蒙古黄芪2㊀实验方法2.1㊀色谱条件色谱柱:Acclaim 120C 18,戴安公司,2.1ˑ100mm,5μm;流动相:乙腈(A)-0.3%甲酸溶液(B),梯度洗脱(0~10min,18%~20%A;10~35min,20%~24%A;35~52min,24%~27%A;52~60min,27%~34%A;60~65min,34%~40%A;65~70min,40%~50%A);流速:1.0mL /min;柱温:检测波长254nm,进样量:20μL,柱温25ħ㊂HPLC 图谱如图1所示㊂2.2㊀质谱条件离子模式:电喷雾离子源(ESI);喷雾电压:241kV;离子源温度:350ħ;以氮气为干燥气,流速为1.5L /min㊂扫描模式为选择离子监测(SIM),定量分析监测离子有毛蕊异黄酮苷m /z 445.11[M -H]-㊁芒柄花苷m /z 429.12[M -H]-㊁毛蕊异黄酮m /z 283.06[M -H]-㊁芒柄花素m /z 267.07[M -H]-㊂2.3㊀溶液的制备2.3.1㊀混合对照品溶液精密称定各待测成分对照品适量,加甲醇溶解,摇匀,制成混合对照品溶液,毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素质量浓度分别为0.22㊁0.13㊁0.07㊁0.05mg /mL㊂2.3.2㊀供试品溶液取样品适量,粉碎(过4号筛),精密称定1.0g,加甲醇100mL,回流提取1.5h,减压浓缩,转移至5mL 量瓶,以甲醇定容至刻度,充分摇匀,再用0.22μm 微孔滤膜滤过,即得㊂3㊀结果与讨论3.1㊀系统适用性实验取 2.3.1 项下配制混合对照品溶液适量,进样测定(按 2.1 项色谱条件),得到HPLC 图谱,见图1㊂结果显示,毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素保留时间分别为9.24min㊁26.08min㊁38.56min㊁65.73min,各成分均达到基线分离,峰形良好,理论板数均>1.5㊂图1㊀混合对照品(A)和供试品(B)的HPLC 图谱Fig.1㊀HPLC profile of the mixed reference substance (A)and test substance (B)3.2㊀线性关系考察分别精密量取 2.3.1 项下混合对照品溶液1㊁5㊁10㊁50μL,进样测定(按 2.1 项色谱条件),记录峰面积㊂以待测成分质量浓度(x,mg /mL)为横坐标,以峰面积(y)为纵坐标,做线性回归,得回归方程㊁线性范围,见2㊂表2㊀回归方程及线性范围Table 2㊀Regression equation and linear range待测成分回归方程r 线性范围/(mg /mL)毛蕊异黄酮苷y =9.39ˑ105x +1.34ˑ1040.99910.0084~2.217芒柄花苷y =9.27ˑ105x +1.53ˑ1040.99950.0049~1.287毛蕊异黄酮y =1.28ˑ106x +4.79ˑ1040.99940.0027~0.6847芒柄花素y =1.84ˑ106x +1.34ˑ1040.99980.00194~0.4823.3㊀精密度实验取 2.3.1 项下配置的混合对照品溶液适量,进样测定(按 2.1 项色谱条件),连续进行6次测定,记录峰面积并分析,结果显示,毛蕊异黄酮苷RSD 为0.23%,芒柄花苷RSD 为0.56%,毛蕊异黄酮RSD 为0.37%,芒柄花素RSD 为0.18%,说明该方法具有良好精密度㊂3.4㊀稳定性实验取 2.3.2 项下配制的供试品溶液适量,室温下放置,并分别于0㊁4㊁8㊁12㊁18㊁24h 进行测定(按 2.1 项色谱条件),分析峰面积并分析,结果显示,毛蕊异黄酮苷RSD 为0.15%,芒柄花苷RSD 为0.27%,毛蕊异黄酮RSD 为0.41%,芒柄花素RSD 为0.22%,说明供试品溶液在室温下放置24h 具有良好稳定性㊂3.5㊀重复性实验配制供试品溶液(按 2.3.2 项相关方法),共制备6份,进样测定,色谱条件按 2.1 项,记录峰面积并进行含量测定㊂结果显示,毛蕊异黄酮苷含量为0.4212%,RSD 为0.0842%;芒柄花苷含量为0.5187%,RSD 为0.7923%;毛蕊异黄酮含量为0.2269%,RSD 为0.0768%;芒柄花素含量为0.6582%,RSD 为0.9228%;说明该方法具有良好重复性㊂3.6㊀加样回收率实验取已知含量的样品约0.5g,共6份,并分别加入一定量待测成分对照品,配制供试品溶液(按 2.3.2 项下方法),进样测定(按 2.1 项下色谱条件),计算加样回收率,见表3㊂76㊀广㊀州㊀化㊀工2020年9月表3㊀加样回收率试验(%)Table3㊀Sample recovery test(%)待测成分加样回收率平均加样回收率RSD 毛蕊异黄酮苷99.54~100.78100.310.43芒柄花苷99.62~100.6399.850.58毛蕊异黄酮99.51~100.79100.45 1.06芒柄花素100.08~100.84100.720.34 3.7㊀样品测定8批黄芪药材,各取适量,配制供试品溶液(按 2.3.2 项下方法),进行测定(按 2.1 项下色谱条件),记录峰面积,计算各黄酮成分含量㊂见表4㊂表4㊀黄芪药材中黄酮成分含量测定结果(n=3,mg/g) Table4㊀Determination results of flavonoids in Astragalus medicinalmaterials(n=3,mg/g)样品编号毛蕊异黄酮苷芒柄花苷毛蕊异黄酮芒柄花素1 1.42580.70580.91200.14622 2.5402 1.5793 1.44980.11543 1.64940.5921 1.4728 1.10134 2.27320.97360.75360.062150.64780.40320.43310.074460.38420.35550.42090.16127 2.9741 1.4423 1.88090.05118 2.9736 1.4412 1.87540.0503 3.8㊀检测方法选择在前期条件摸索过程中,尝试以HPLC-DAD法测定黄芪中黄酮类成分含量,发现黄芪中芒柄花苷与毛蕊异黄酮等成分相互干扰不能实现完全分离㊂而HPLC-MS法选择性及灵敏度均较好,同时不要求待测成分达到完全分离,这对分析含有多种有效成分的中药有着明显优势[7],因此选择HPLC-MS法测定黄芪药材中黄酮成分含量㊂本研究应用的SIM模式较多反应监测模式专属性要低,使得一些待测成分在获取的离子流图中可出现多个色谱峰㊂对此,试验中测定了成分色谱峰的保留时间,以解决这一不足㊂3.9㊀质谱条件优化在待测成分的质谱条件选择优化过程中发现,毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素等负离子检测模式下响应较好,故而选择负离子模式对黄芪中药中上述四种黄酮成分含量进行测定㊂3.10㊀流动相考察黄芪中黄酮类成分多呈弱酸性,因此应选择酸性缓冲系统[8],本研究分别对乙腈-磷酸㊁乙腈-甲酸系统进行了考察,发现抑制剂选用甲酸,黄酮各成分能够得到较好分离㊂同时还评估多种梯度流动相配比,结果发现,以乙腈(A)-0.3%甲酸溶液(B)为流动相系统,梯度洗脱(0~10min,18%~20%A; 10~35min,20%~24%A;35~52min,24%~27%A;52~ 60min,27%~34%A;60~65min,34%~40%A;65~70min,40%~50%A)时4种黄酮类成分分离效果最好,色谱峰间分离度均在1.5以上,因而选择乙腈-0.3%甲酸溶液为流动相㊂3.11㊀提取方法选择有报道指出,在黄芪总黄酮提取上,连续回流提取法较超声法有着节省溶剂㊁操作迅速㊁获取有效成分高等多种优势[9]㊂本研究观察评估了超声法㊁冷浸法㊁回流法等三种提取方法,发现回流提取明显优于其他两种提取方法㊂此外,本研究还就不同提取时间进行了考察,发现回流1.5h后,随着回流继续进行,毛蕊异黄酮㊁芒柄花素的峰面积逐渐减小,提示上述两种黄酮成分可能具有热不稳定性㊂故选择回流提取1.5h 进行黄芪中黄酮成分的提取㊂3.12㊀检测波长选择有研究显示,毛蕊异黄酮苷与毛蕊异黄酮的最大吸收波长为258nm,而肩缝处于288nm波长;芒柄花苷㊁芒柄花素最大吸收波长为248nm,而肩峰处于290nm[10-11]㊂采用二极管阵列检测器全波长对供试品溶液进行扫描,获取指纹图谱,以尽可能涵盖所有吸收峰为原则,发现各黄酮类成分在254nm 时,峰形及峰面积较好,因此选择254nm为检测波长㊂4㊀结㊀论本研究建立HPLC-MS法同时测定黄芪中毛蕊异黄酮苷㊁芒柄花苷㊁毛蕊异黄酮㊁芒柄花素等黄酮类成分,具有较高的精密度㊁稳定性㊁重复性,且该法操作简便㊁迅速,可作为黄芪药材中黄酮类成分含量测定的质控手段㊂参考文献[1]㊀赵海鹰,高丽华,邢秀玲,等.黄芪注射液在肾脏疾病中的临床应用进展[J].临床误诊误治,2017,30(8):113-116.[2]㊀王璐,胡耀群,邵先笋,等.夏永良运用补中益气汤验案6则[J].江苏中医药,2015,47(1):50-52.[3]㊀辛博,马生军,谢景,等.生长年限对黄芪药材中黄酮及皂苷类成分含量积累的影响[J].中药材,2015,38(7):1366-1369. [4]㊀苗洋,孙明月,陈水龄,等.黄芪对血管舒缩状态的双向调节作用[J].中西医结合心脑血管病杂志,2017,15(7):809-812. [5]㊀刘德旺,龚苏晓,朱雪瑜,等.蒙古黄芪药材生饮片及其炮制品质量差异性研究[J].中草药,2016,47(6):905-910.[6]㊀李林,季琳,程雪,等.多指标综合优选黄芪药材硫磺熏蒸替代技术研究[J].中国中药杂志,2016,41(14):2581-2586. [7]㊀凌海燕,汤燕,朱宁,等.HPLC-Q-TOF-MS/MS法检测降压类中成药中非法添加的24种化学物质[J].中国药房,2016,27(33):4712-4715.[8]㊀刘小花,崔方,张梦婷,等.HPLC法同时测定黄芪中的5种黄酮类成分的含量 一种新的应用于药学实验分析方法[J].实验技术与管理,2016,33(2):24-27.[9]㊀王波,周围,刘小花,等.基于超高效合相色谱对黄芪中5种主要黄酮类化合物的快速检测[J].分析化学,2016,44(5):731-739. [10]王知斌,马振平,刘秀,等.HPLC法同时测定黄芪饮片中4个异黄酮类成分的含量[J].中医药学报,2014,42(5):58-61. [11]李婷婷,舒志恒,于良,等.不同产地黄芪HPLC/DAD指纹图谱及主要黄酮成分含量测定[J].中国医院药学杂志,2015,35(13): 1182-1187.。
黄芪的质量分析实验报告
黄芪的质量分析实验报告实验报告:黄芪的质量分析实验一、实验目的本实验旨在通过对黄芪的质量分析,了解其化学成分,并进行质量评价,为其药用和质量控制提供参考。
二、实验原理1. 外观质量评价:通过观察黄芪的外观色泽、形状和杂质等外观特征,进行初步质量评价。
2. 水分含量测定:采用干燥法测定黄芪的水分含量,了解其含水量。
3. 灰分含量测定:采用灼烧法测定黄芪的灰分含量,了解其无机非挥发物含量。
4. 总黄酮含量测定:采用亚硫酸钠-铝试剂显色法测定黄芪的总黄酮含量,了解其有效成分含量。
5. 含量测定:采用高效液相色谱法(HPLC)测定黄芪中特定化学成分的含量,进一步认定其质量,并进行成分指纹图谱分析。
三、实验步骤1. 外观质量评价:(1)观察样品的外观色泽是否鲜艳,有无杂质;(2)观察样品的形状是否完整,有无断裂或变形现象。
2. 水分含量测定:(1)准确称取黄芪样品,称重并记录质量;(2)将样品置于烘箱中,温度设定为105℃,并连续干燥至质量稳定;(3)取出样品,再次称重并记录质量;(4)计算水分含量百分数(W%)=(初次质量- 干燥后质量)/ 初次质量× 100%。
3. 灰分含量测定:(1)准确称取黄芪样品,称重并记录质量;(2)将样品置于烘箱中,温度设定为550℃,以灼烧至完全燃尽;(3)取出样品,冷却至室温;(4)称取灰渣质量,并记录;(5)计算灰分含量百分数(W%)= 灰渣质量/ 初始质量× 100%。
4. 总黄酮含量测定:(1)准备适量的黄芪样品,并研磨成粉末;(2)称取0.5 g 黄芪粉末,加入50 mL 95% 乙醇溶液中;(3)加热回流提取1小时,过滤;(4)取0.5 mL 过滤液,加入试管中,加入亚硫酸钠-铝试剂,并充分混合;(5)放置于水浴中保温反应30分钟;(6)冷却后,加入2 mL 95% 乙醇,稀释;(7)记录试管液体吸光度(A);(8)使用标准曲线,计算黄芪样品中总黄酮含量。
紫外分光光度法测定黄芪总黄酮的含量
紫外分光光度法测定黄芪总黄酮的含量
李春红;田吉;何兵;肖顺汉
【期刊名称】《重庆医科大学学报》
【年(卷),期】2011(36)8
【摘要】目的:建立黄芪总黄酮的含量测定方法。
方法:采用紫外分光光度法测定黄芪总黄酮。
结果:总黄酮在0.025~0.5 mg范围内具有良好的线性关系(R=0.999 9),回收率为98.27%,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为0.27%。
结论:该方法操作简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为黄芪总黄酮含量的测定方法。
【总页数】3页(P954-956)
【关键词】黄芪;总黄酮;紫外分光光度法
【作者】李春红;田吉;何兵;肖顺汉
【作者单位】泸州医学院药物及功能性食品研究中心;泸州医学院药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R917
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紫外分光光度法测定蒙古黄芪中总黄酮的含量
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmem-branaceus(Fisch・)Bge・var・mongholicus(Bge・)Hsiao或膜荚黄芪A・membranaceus(Fisch・)Bge・的干燥根[1],具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效[2],其化学成分主要有黄酮类、皂苷类和多糖等[3],迄今从黄芪中分离得到的黄酮类化合物有黄酮、异黄酮、异黄烷和紫檀烷四大类[4]。
目前报道的测定黄芪中总黄酮含量的方法主要是可见光分光光度法[5],本研究采用紫外光分光光度法测定黄芪中总黄酮含量[6],拟建立一种准确而简便的测定黄芪中总黄酮含量的方法。
1仪器与试药1.1仪器:Cary-50可见紫外分光光度计(美国var-ian公司);cp3245型万分之一天平(德国赛多利斯公司);KQ-5200B型超声波清洗器(江苏昆山超声仪器有限公司);LG10-2・4A离心机(北京医用离心机厂)。
1.2试药:芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:100080-200306),黄芪药材采集于山西浑源县,经山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍老师鉴定为蒙古黄芪(粉碎至60目粉末);亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇均为分析纯。
2方法与结果2.1对照品溶液的制备准确称取于120℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品10mg,置于25ml容量瓶中,加甲醇15ml,超声使之溶解,冷却至室温,并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.40mg/ml的芦丁对照品溶液,冷藏,备用。
2.2供试品溶液的制备准确称取黄芪药材(山西省浑源县3年生)2.0g,置于100ml磨口锥形瓶中,加80%乙醇30ml,浸泡2h,超声提取40min,过滤,残渣再重复提取1次,2次滤液合并,挥干,置于2ml容量瓶中,甲醇定容。
2.3定性鉴别反应2.3.1氨水反应:取供试品溶液点于滤纸上,将滤纸在氨水上方熏15min,立即置于紫外光下观察(254nm),呈黄绿色荧光斑点。
紫外分光光度法测定蒙古黄芪中总黄酮的含量
黄 芪 为豆 科 植 物 蒙 古 黄 芪 A t glsm n— s aa e r u
ba ae s ( i h・ B e v rmo g o c s ( g ・ rn cu Fs ) g ・a ・ n h l u B e ) c i
定 为 蒙古 黄 芪 ( 碎 至 6 粉 O目粉末 )亚 硝酸 钠 、 氧 ; 氢 化钠 、 酸铝 、 硝 乙醇 均 为分析 纯 。
Me i ie,1 i E 0 0 l .Ch n dc n "r册 3 0 2 a 0 ia
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中国药物 与I 2 0 临床 0 7年 1 2月第 7卷第 1 期 C ieeR m de & CiisD cm e 0 7V l7N .2 2 hns e e is l c , ee b r 0 ,o ,o1 n 2
・89 ・ 9
紫外分 光光度 法测定 蒙古黄芪 中总黄酮 的含量
e u t n w sA= .3 3 一 .1 0 (= .9 6 ) T ea ea ere v r aewa 8 1 % wi h eaie s n ad q ai a 00 9 2 C 00 9 r 09 9 6. h v rg e o eyrt s9 .4 o 2 t terlt t d r h v a
不同生长年限黄芪药材中总多糖和总黄酮含量的测定
研 究[ J ] . 中药 材 , 2 0 1 0 , 3 3 ( 2 ) : 1 9 6 2—1 9 6 温 度 为 2 0  ̄ C和 5 0 ℃时 与其 他 超 声 时 间 的 总黄 酮 量 差 异 具 有 统计 学 意 义 。综 合 其 他 文 献 在 此 选 择 超 声 温 度 为
3 结论
通过 单 因 素 实验 , 考 察 了超声 温 度 , 超声时间 , 醇 浓度 , 液料 比等 四个 指标 对 总黄酮 提取 工艺 的影 响 , 经 方 差 分析 , 最终 选取 超声 温度 、 醇浓 度 、 液料 比 , 作 为 响 应 面的设 计 因 素 。其 中 8 0 % 浓 度 的 乙醇 实 验 结 果 较
摘 要 : 目的 : 测 定不 同生 长年 限黄 芪 药材 中总 多糖 及 总黄 酮 的含 量 , 为 确 立 药材 的 最佳 采 收年 限提 供 理论 依据 。方法 : 采 用紫外 分光 光度 法测 定不 同生 长年 限黄 芪药材 中多糖和 总黄 酮 的含 量 。 结果 : 不同 生长年 限黄 芪 药 材 中 多糖 及 总 黄 酮 含 量 差 异 较 大 , 其 中 1年 生 黄 芪 药 材 中 多糖 平 均 含 量 最 高 , 为
1 4 7 m g / g ; 7年 生黄 芪药材 中总黄 酮 平均含 量 最 高 , 为1 0 . 5 3 mg / g 。结论 : 随 着 生 长年 限 的增加 , 黄 芪药
材 中 多糖 的含 量逐 年 降低 , 而 总黄 酮含 量逐 年升 高。 关键 词 : 黄芪; 生 长年 限 ; 多糖 ; 总黄 酮 ; 紫外分 光光度 法 中 图分类 号 : R 2 8 文 献标 识码 : A 文章 编号 : 1 0 0 2— 2 4 0 6 ( 2 0 1 5 ) 0 5— 0 0 3 1 — 0 4
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含量为 5 18m g 总蛋白质 的含量为 4 .8 ; .6 g・ ~, 1 7 % 黄芪种子 中含有 l 6种不 同的氨基 酸, 分别是 天冬 氨酸 、 氨酸 、 苏 丝氨酸 、 谷氨酸 、 脯氨酸 、 甘氨酸 、 丙氨酸 、 胱氨酸 、 缬氨酸 、 异亮氨酸 、 亮氨酸 、 酪氨酸 、 苯 丙氨酸 、 赖氨酸 、 组氨酸 、 精氨酸 , 总含量为 3 .5 其 6 1 %。结论
W ANG Yo g—h i L U T a n u , I in—t n, i GAO L , a i CHAIZ i Z h , HOU R n a
( h n i o e eo T a io a C iee M dc e T iu nS a x 0 O 2 ) S a x C l g f rd i l hn s e ii , a a h n i 3 0 4 l tn n y
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2 ・ 8
世 界 中西医 结合 杂 志 21 0 2年第 7卷 第 1 期
WodJunl f nert rdinl n s r dc e 0 2 V 17 N . r ora o Itga dTaioa adWet nMein 2 1 , o , o1 l e t e i .
对照 品浓度( j m 吸光度 ( A)
黄芪 的传统用药部位仅是根部, 黄芪 的其他部
位, 如黄 芪种子 、 叶 等部 位 , 阶段 尚未 被 有 效利 茎 现 用 。因此 , 实 验 对 黄 芪 种 子 中 所 含 的 总 黄 酮 、 本 总 蛋 白质及 氨基 酸 的含量 进 行 了研究 , 以期 为 开 发利 用 黄芪种 子资 源提供 一些 实验依 据 。
含量较高 , 具有 良好 的开发利用前景。
黄芪种子 中总 黄酮 、 白质及 氨基 酸 蛋
【 关键词 】 黄芪种子 ; 总黄酮 ; 白质 ; 蛋 氨基酸 ; 含量测 定
【 中图分类号】 24 1 【 R 8. 文献标识码】A 【 文章编号】17 61(02 o — 08 0 63— 632 1)1 02 — 3
c ne to oa rt i n a ta a u e d a ee mi e . c o d n h t n lSa d r f h e p e o tn f tl oen i sr g l ss e sw s d tr n d A c r i g t t e Nai a tn a d o e P o l t p o o t
v lp nta d u i z to . eo me n tl ai n i
【 e od】 At g u SesTt l oo sPo i;mn c sCn n D tmntn K y rs w sa l e ;o l a ni ;re A i A i ;ot t e ri i ra s d aF v d tn o d e e ao
・2 ・ 9
芪资源 已十分 少 见 , 芪 已被 国家 确 定 为 国家 三 级 黄 保 护植 物 。近年来 , 内外 市 场每 年 对 黄芪 的需 求 国 量 已达 23万 吨左 右 , 日益增 长 的市 场需 求 形 成 . 与 鲜 明对 照 的是 , 质 黄 芪 年 产 量 仅 数 千 吨 , 远 不 优 远
能 满足 市场需 求 。
于 50nl 测定其 吸光 度 , 绘制 浓度 ( 一 吸 光 1 I处 i 并 C) 度 ( 标 准 曲线 , 果 见 表 1 其 回 归 方 程 为 A= A) 结 ,
1 . 9 C一0 0 72( =0. 9 ) 335 .4 r 9 96 。
表1
【 btat Obet e odtr n fh o t t fo l aoo st a po i n mn c s A s c】 r jc v T ee eo ecne t vni , t rt nada ioai i mi t n otaf l d ol e d
i sr g l s s e s S s t r vd h ee e c v d n e f rt e d v lp n n t iai n o sr g ls n a ta au e d O a o p o ie te rf r n e e i e c o h e e o me ta d ui z t f a t au l o a s e s M e h d A e k mme t r p ra u t f er lu eh r t k n 0 ed. to s t f rs i d wi a p o e mo n toe m t e .a i g8 % eh n l st e e t c h op t a o h xr — a a t n s le t S x l t xr cin meh d w sa o td t xr c oa a o od r m a t g l ss e s Ru i s i ov n , o h e t t t o a d pe oe t t t l v n isfo s a au e d . t wa o e a o a t l f r n s lce st e c nr 1 C l r t s a p id f rt e d tr n t n o e c n e t ftt l a o od n a — ee td a h o t . o oi r wa p l o ee mi ai f h o t n a f v n i si s o me y e h o t o o l
t glssesA crigtteN t nl t dr fh epes eu l f hn ( B 0 95—2 1 ) te r a ed . codn aoa Sa ad ePol pbi o i G 50 . a u oh i n ot R c C a 00 , h
De e m i to o h n e fTo a a o i s, t lPr t i nd Am i t r na i n ft e Co t nto t lFl v no d To a o e n a no
Acdsi t a a us S e i n Asr g l e ds
SRe u l fC ia G / 5 0 . 2 p bi o hn ( B T 0 9 1 4—2 0 c 0 3). ev r t sa d c ne to mioa isi srglsse s t ai i n o tn fa n cd n ataau e d h ee
・Hale Waihona Puke 药物研究 ・ 黄 芪 种子 中总黄酮 、 总蛋 白质 和 氨基 酸 的 含 量测 定
王永辉 刘甜甜 高丽 柴智 周 然
【 摘要 】 目的
提供依 据。方法
检测黄芪种子中总黄酮 、 总蛋 白质及氨基 酸 的含量 , 为开发利用 黄芪种子 资源
将黄芪种子用适量石 油醚脱脂 后 , 8 % 的 乙醇 为提取溶剂 , 以 0 采用 索 氏提取 法从
黄芪 是著 名 的滋补 中药 材 , 国 家规 定 的可 药 是
芪 具有 调 节 机 体 免 疫 功 能 , 心 降 压 、 血 糖 、 强 降 利
食两用的中药材品种之一 , 始载于《 神农本草 经》 , 临床应用 已有 20 00多年的历史 , 其性 温, 味甘 , 归 肺、 脾经 , 具有补气升 阳、 固表止汗 、 托毒排脓 、 利水 消肿 、 敛疮 生 肌 的功 效 。现 代 药 理研 究 表 明 E , 1 黄 ]
黄芪种子中提取 总黄 酮 , 以芦丁为对照品 , 采用 比色法测定黄 芪种子 中总黄 酮的含量 ; 照中华人 民 按 共和 国国家标准( B 0 95—2 1 ) G 50 . 00 法测定 黄芪种子 中总蛋 白质含量 ; 按照 中华人 民共和国 国家标准 ( B T 09 14— 0 3 法狈 定黄芪种子 中所含氨基 酸 的种类 及含量 。结果 G / 50 .2 2 0 ) 4 黄芪种子 中总黄酮 的
尿、 抗衰老、 抗疲劳 、 肿瘤等作用 , 抗 特别 是 由于黄
芪良好的抗病毒及免疫调 节作用 、 抗氧化 、 清除氧
自由基能力 、 正性 肌力作用等作用 , 因而其在多种 疾病中的应用价值也越来越受关 注。因此 , 黄芪药
材 是一 味 中 医 临床 极 为常 用 和用 量 非 常 大 的 中药
w r e emie . s ls T e c n e t fttlf v n is w s5 1 8 mg ・g a d t a fttlp oe n wa e e d tr n d Re u t h o t n a l o od a . 6 o o a 一 n h to oa r ti s 4 . 8 i sr g l s s e s T e ewe e 1 i d f mi o a i si s a au e d , cu i ga p  ̄ c a i 1 7 % n a t au e d . h r r 6 kn so n c d n a t g l ss e s i l dn s a i cd, a a r n tr o i e s r e gu a c a i , rl e g y i e aa i e c s n , ai e ioe cn ,e cn ,y o i e p e y — h e n n , e i , l tmi cd p oi , l cn , ln n , y f e v l ,s l u i e lu i e tr s , h n l n n i n n aa i e 1 s e h si ie a d a gn n :h oa o t n s3 . 5 . n i so As a a u e d o ti l n n .y i , i d n n ri i e t e tt l n e t n t c wa 6 1 % Co cu i n t g l s s e s c n an r t e q i i h c n e t fttlf v n i s ttlp o en a d a n cd ,n iai g a g o r s e t fte d — h u t h g o tn a a o od , a r t i n mi o a is i d c t o d p o p c o e e o o l o n h