单元设计-秦皮中香豆素的提取与分离-20190517
第五章苯丙素类化合物
第五章 苯丙素类化合物一、填空题1．苯丙素类化合物在生物合成上均来源于苯丙氨酸，生物合成的关键前体是（ ）。
2．香豆素因具有内酯结构，可溶于碱液中，因此可以用（ ）法提取，小分子香豆素因具有（ ），可用水蒸气蒸馏法提取。
3．广义的苯丙素类成分包含（ ）、（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。
4．天然香豆素类化合物一般在（ ）具有羟基，因此，（ ）可以认为是天然香豆素化合物的母体。
5．天然香豆素可分为（ ）类、（ ）类、（ ）类、（ ）类。
6．香豆素类具有（ ）结构，可以发生异羟肟酸铁反应而显（ ）色。
7．香豆素类化合物结构中α-吡喃酮在红外光谱上的吸收信号主要有（ ）、（ ）、（ ）。
8．桂皮的主要成分之一是（ ），当归的主要成分之一是（ ）。
10．秦皮的主要化学成分是（ ）和（ ），具有（ ）和（ ）的作用。
16．可用Labat 反应来检查木脂素类化合物中（ ）的存在与否。
二、选择题（一）A 型题： 每题有5个备选答案，备选答案中只有一个最佳答案。
1．可与异羟肟酸铁反应生成紫红色的异羟肟酸铁的是Ａ．羟基蒽醌类 Ｂ．查耳酮类 Ｃ．香豆素类 Ｄ．二氢黄酮类 E ．生物碱 2．判断香豆素6位是否有取代基团可用的反应是Ａ．异羟肟酸铁反应 Ｂ．Gibb’s 反应 Ｃ．三氯化铁反应 Ｄ．盐酸-镁粉反应E ． Labat 反应3．香豆素类母核中H-3、H-4在1H —NMR 是AB 型偶合，其偶合常数为Ａ．2~3Hz Ｂ．7~8 Hz Ｃ．8~9 Hz Ｄ．9~10 Hz Ｅ．4~6 Hz 12．Labat 反应的试剂组成是A ．香草醛-浓硫酸B ．茴香醛-浓硫酸C ．浓硫酸-没食子酸D ．浓硫酸-变色酸E ．浓硫酸-铬酸 三、简答题（一）名词解释1．苯丙素 2．香豆素 4．木脂素 （三）比较下列化合物碱水解的速度 1．香豆素2．7-羟基香豆素 3．7-甲氧基香豆素。
（五）完成下列化学反应1．OH 长时间加热（ ） （ ）2．( ) + ( )（六）用指定的方法区别下列各组化合物 1．化学方法 （4）B四、分析题（一） 工艺流程题1．秦皮主要含有七叶内酯、七叶苷等香豆素，请设计一方法从秦皮中提取、分离二者。
秦皮成分提取实验报告
一、实验目的1. 了解秦皮的基本成分及药理作用。
2. 掌握从秦皮中提取香豆素类成分的方法。
3. 学习并掌握提取分离和鉴定香豆素类成分的实验技术。
二、实验原理秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树（Fraxinus rhynchophylla Hance）的干燥枝皮或干皮，具有清热燥湿、清肝明目、止痢等功效。
秦皮中含有丰富的香豆素类成分，如秦皮甲素、秦皮乙素等，具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用。
本实验通过提取分离和鉴定，旨在获得秦皮中的香豆素类成分。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：秦皮、乙醇、乙醚、氯仿、正己烷、无水硫酸钠、无水碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、硅胶、硝酸银、盐酸、硫酸、苯酚、氨水等。
2. 实验仪器：分析天平、旋转蒸发仪、磁力搅拌器、离心机、真空泵、紫外-可见分光光度计、高效液相色谱仪、薄层色谱仪等。
四、实验方法1. 秦皮提取：将秦皮粉碎，用95%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至适当浓度，加入适量水，调节pH值至7.0，静置过夜，滤过，滤液用正己烷萃取，合并正己烷层，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得浸膏。
2. 香豆素类成分分离：将浸膏用氯仿-甲醇（体积比1:1）溶液溶解，加入适量硅胶，搅拌，静置，过滤，滤饼用氯仿-甲醇（体积比1:1）溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得香豆素类成分。
3. 香豆素类成分鉴定：采用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）进行鉴定。
（1）TLC鉴定：将分离得到的香豆素类成分进行TLC分析，以秦皮甲素、秦皮乙素为对照品，观察斑点颜色和Rf值。
（2）HPLC鉴定：将分离得到的香豆素类成分进行HPLC分析，以秦皮甲素、秦皮乙素为对照品，测定峰面积和保留时间。
五、实验结果1. 秦皮提取：经过3次回流提取，得到秦皮浸膏，浸膏得率为5.0%。
2. 香豆素类成分分离：经过硅胶柱层析，分离得到香豆素类成分，总得率为 2.0%。
3. 香豆素类成分鉴定：TLC分析结果显示，分离得到的香豆素类成分与秦皮甲素、秦皮乙素的斑点颜色和Rf值一致。
第五章苯丙素类化合物
第五章 苯丙素类化合物一、填空题1．苯丙素类化合物在生物合成上均来源于苯丙氨酸，生物合成的关键前体是（ ）。
2．香豆素因具有内酯结构，可溶于碱液中，因此可以用（ ）法提取，小分子香豆素因具有（ ），可用水蒸气蒸馏法提取。
3．广义的苯丙素类成分包含（ ）、（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。
4．天然香豆素类化合物一般在（ ）具有羟基，因此，（ ）可以认为是天然香豆素化合物的母体。
5．天然香豆素可分为（ ）类、（ ）类、（ ）类、（ ）类。
6．香豆素类具有（ ）结构，可以发生异羟肟酸铁反应而显（ ）色。
7．香豆素类化合物结构中α-吡喃酮在红外光谱上的吸收信号主要有（ ）、（ ）、（ ）。
8．桂皮的主要成分之一是（ ），当归的主要成分之一是（ ）。
10．秦皮的主要化学成分是（ ）和（ ），具有（ ）和（ ）的作用。
16．可用Labat 反应来检查木脂素类化合物中（ ）的存在与否。
二、选择题（一）A 型题： 每题有5个备选答案，备选答案中只有一个最佳答案。
1．可与异羟肟酸铁反应生成紫红色的异羟肟酸铁的是Ａ．羟基蒽醌类 Ｂ．查耳酮类 Ｃ．香豆素类 Ｄ．二氢黄酮类 E ．生物碱 2．判断香豆素6位是否有取代基团可用的反应是Ａ．异羟肟酸铁反应 Ｂ．Gibb’s 反应 Ｃ．三氯化铁反应 Ｄ．盐酸-镁粉反应E ． Labat 反应3．香豆素类母核中H-3、H-4在1H —NMR 是AB 型偶合，其偶合常数为Ａ．2~3Hz Ｂ．7~8 Hz Ｃ．8~9 Hz Ｄ．9~10 Hz Ｅ．4~6 Hz 12．Labat 反应的试剂组成是A ．香草醛-浓硫酸B ．茴香醛-浓硫酸C ．浓硫酸-没食子酸D ．浓硫酸-变色酸E ．浓硫酸-铬酸 三、简答题（一）名词解释1．苯丙素 2．香豆素 4．木脂素 （三）比较下列化合物碱水解的速度 1．香豆素2．7-羟基香豆素 3．7-甲氧基香豆素。
（五）完成下列化学反应1．OH 长时间加热（ ） （ ）2．( ) + ( )（六）用指定的方法区别下列各组化合物 1．化学方法 （4）B四、分析题（一） 工艺流程题1．秦皮主要含有七叶内酯、七叶苷等香豆素，请设计一方法从秦皮中提取、分离二者。
秦皮提取物中香豆素类成分含量测定方法研究
秦皮提取物中香豆素类成分含量测定方法研究目的分别建立秦皮提取物总香豆素和4种主要香豆素成分紫外分光光度法（UV）和高效液相色谱法（HPLC）含量测定方法。
方法采用UV，以秦皮甲素为对照品，在334 nm测定秦皮提取物总香豆素的含量；采用HPLC，用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.01%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，在334 nm测定秦皮提取物中秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素4种主要香豆素成分的含量。
结果秦皮甲素的质量浓度在 5.76～23.04 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为100.6%（RSD=1.8%）；4种香豆素成分秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素的质量分别在0.055 0～3.850 0 μg（r=0.999 7）、0.053 9～3.773 0 μg（r=0.999 8）、0.060 0～0.660 0 μg（r=0.999 9）、0.056 2～0.618 2 μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均回收率分别为96.97%（RSD=1.26%）、100.80%（RSD=2.22%）、99.04%（RSD=2.47%）、98.77% （RSD=1.94%）。
结论2种含量测定方法简便、准确、可靠，可用于秦皮提取物总香豆素和主要香豆素成分的质量控制。
Abstract：Objective To establish a UV spectrophotometry method and an HPLC method respectively for the determination of the total content of coumarin and contents of four main constituents of coumarin in Fraxini Cortex extract. Methods UV spectrophotometry was used for the determination of the content of total coumarin in Fraxini Cortex extract. The reference substance was Aesculin，and the maximum ultraviolet absorption wavelength was 334 nm. The HPLC method was used to determine the contents of Aesculin，Fraxin，Aesculetin and Fraxetin in Fraxini Cortex extract，using gradient elution with acetonitrile-phosphate solution （0.01%）as mobile phase on Agilent ZORBAX SB-C18 chromatographic column （4.6 mm ×250 mm，5 μm）at room temperature. Results For the UV method，the linear range of the mass concentration of Aesculin was 5.76-23.04 μg/mL （r=0.999 9），and the average recovery was 100.6% （RSD=1.8%）. For the HPLC method，the linear ranges of the mass of Aesculin，Fraxin，Aesculetin and Fraxetin were 0.055 0-3.850 0 μg （r=0.9997），0.053 9-3.773 0 μg （r=0.999 8），0.060 0-0.660 0 μg （r=0.999 9），and 0.056 2-0.618 2 μg （r=0.999 9），respectively，and the average recoveries were 96.97% （RSD=1.26%），100.80% （RSD=2.22%），99.04% （RSD=2.47%），and 98.77% （RSD=1.94%），respectively. Conclusion Both of the two methods are simple，accurate and reliable，and can be used for the quality control of total coumarin and the main constituents of coumarin in Fraxini Cortex extract.Key words：Fraxini Cortex extract；coumarin；UV spectrophotometry；HPLC；content determination秦皮，《神农本草经》将其列为上品。
秦皮香豆素类成分的提制和鉴定
秦皮香豆素类成分的提制和鉴定秦皮，系木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh或宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh的干燥枝皮或干皮。
又名梣皮。
尖叶梣分布于黄河、长江流域各省，习称陕西秦皮；大叶梣分布于东北、河北、江西、河南等地；白蜡树分布于南、北各省区，商品药材习称四川秦皮。
有清热燥湿、收涩、明目的功效，用于肠炎、痢疾、白带、慢性气管炎、急性结膜炎，外用治牛皮廯。
一、主要化学成分的结构和物理性质1.七叶树苷（Esculin，又名七叶灵、七叶苷、秦皮甲素）针状体（热水），mp.204-206℃，为倍半水合物。
难溶于冷水，溶于沸水、热乙醇、甲醇、吡啶、乙酸乙酯和醋酸。
2.七叶树内酯（Esculetin，又名七叶苷元、秦皮乙素）3.棱状结晶（冰醋酸），叶状结晶（真空升华得），mp.268-270℃。
溶于稀碱显蓝色荧光，尚溶于热乙醇及冰醋酸，几乎不溶于乙醚和沸水。
3.秦皮苷（Fraxin，又名白蜡树苷、梣皮苷）水合物为黄色针状结晶，无水物为白色粉末，mp.206℃，（165℃软化）微溶于水，易溶于热水及热乙醇，不溶于乙醚。
4.秦皮素（Fraxetin，又名秦皮亭、白蜡树内酯、Fraxetol）片状结晶（乙醇水溶液），mp.227-228℃（230-232℃）。
溶于乙醇，微溶于乙醚及沸水。
二、实验目的1.掌握回流提取秦皮香豆素类成分的方法。
2.学习脂溶性成分和水溶性成分的分离方法。
3.了解香豆素类成分的一般性质和鉴别反应。
4.学习各种实验技能:提取：回流提取分离纯化：萃取鉴识：色谱法、化学法三、实验原理因为七叶苷和七叶内酯均为香豆素类化合物，能在乙醇中溶解，故采用乙醇提取。
再利用七叶苷极性大于七叶内酯极性，用乙酸乙酯分离。
乙醇提出的脂溶性杂质，可用三氯甲烷萃取除去。
秦皮中香豆素实验报告心得
秦皮中香豆素实验报告心得简介香豆素是一种常见的天然化合物，广泛存在于植物中。
秦皮，即常见的代表性中药材柴胡的根皮，据研究表明含有香豆素。
本次实验旨在通过提取秦皮中的香豆素，并通过色谱法进行定性分析。
通过本次实验，我对香豆素的提取和分析方法有了更深的了解，也加深了我对实验操作的熟练度。
实验方法本次实验分为两个步骤：提取秦皮中的香豆素和色谱法分析。
首先是提取步骤。
我们先将秦皮样品研磨成粉末，然后用乙醇对其进行提取。
接下来是色谱法分析。
我们将提取得到的香豆素样品进行柱层析分离，然后通过紫外检测器检测样品的吸收峰。
结果与讨论通过本次实验，我们成功提取到了秦皮中的香豆素，并通过色谱法进行了定性分析。
在柱层析过程中，我们观察到了香豆素在柱层析时的吸收峰，并根据峰的位置和形状判断了我们提取到的物质的香豆素。
实验结果显示，秦皮中香豆素的含量相对较低，这可能是因为我们选择的样品中含量较少或者提取过程中存在一定的损失。
此外，我们也发现，在柱层析分析中，香豆素的吸收峰在特定波长下有良好的分离度，这为定性分析提供了可靠的依据。
通过本次实验，我深刻认识到了提取和分析过程中的一些关键因素对实验结果的影响。
例如，在提取过程中，选择合适的溶剂和提取时间对提取效果有重要作用。
在色谱法分析中，选择合适的柱和检测器以及优化流动相的组成可以有效提高分离和检测效果。
实验心得本次实验让我更加了解了香豆素的提取和分析方法。
通过亲身操作，我对实验过程中的注意事项和操作技巧有了更深入的了解。
我发现实验中的每一个步骤都至关重要，任何一个环节出现差错都会导致实验结果的不准确。
同时，通过本次实验，我也学到了很多技术操作上的细节。
例如，在制备工作液的过程中，要准确称量试剂和加溶剂时要注意量筒的容量线和滴定管的放置角度；在柱层析分析过程中，要注意样品的进样量和流动相的流速等。
这些小细节对于实验结果的准确性和重复性起着重要的作用。
此外，本次实验也锻炼了我的团队合作和沟通能力。
各类化学成分的提取、分离与检识技术—香豆素类(中药化学课件)
系统溶剂提取法
药材粗粉
石油醚回流提取
回收至小体积
石油醚液
残渣 乙醚回流提取
浓缩液 放置、析晶
乙醚液
粗晶
回收分离
冷石油醚洗 单体
结晶（可能时混和物） （亲脂性较弱香
进一步分离
豆素）
残渣 乙醇提取
乙醇液 回收分离
香豆素苷类
单体
（亲脂性香豆素）
1.提取方法——水蒸气蒸馏法
某些小分子的香豆素类化合物具有挥发性，可用水蒸气 蒸馏法与不挥发性成分分离。
香豆素类化合物的检识技术
2.化学检识技术 酚羟基的检识
①三氯化铁反应：具有酚羟基取代的香豆素类在水溶液中可 与Fe3+络合而产生绿色至墨绿色沉淀。 ②重氮化反应：若酚羟基的邻对位无取代时，可与重氮化 试剂反应产生红色至紫红色。 ③Gibb’s反应：若C6位无取代基，在碱性条件（pH 9～ 10）与2，6－二氯苯醌氯亚胺（Gibb’s试剂）反应显蓝 色 ④。Emerson反应：若C6位无取代基，内酯环在在碱性条件 开 环与4－氨基安替比林和铁氰化（Emerson试剂）显红色。
2.分离方法
溶剂萃取法
利用香豆素苷类 和苷元类极性强 弱不同的特性， 用极性强弱不同 的溶剂顺次萃取， 分为不同极性的 部分。
成分A
成分F
成分B
香豆素类
成分E
成分C
成分D
色谱分离法
结构相似的香 豆素类成分采 用硅胶柱色谱 法进行分离纯 化
香豆素类化合物 -检识技术
香豆素类化合物的检识技术
1.荧光检识
香豆素类化合物的检识技术
3.色谱检识技术
薄层色谱检识
吸附剂：硅胶、纤维素或氧化铝薄层色谱。 展开剂：中等极性的混合溶剂或偏酸性的
2019年中药中香豆素类化合物的提取分离技术.ppt
O
O O O
O
O
异补骨脂
茴芹内酯
吡喃香豆素
由香豆素苯环上异戊烯基和邻位羟基环合形成2， 2-二甲基α-吡喃环结构。同呋喃香豆素类似，也 分成线型（6，7-吡喃香豆素）和角型（7，8-吡 喃香豆素）两种类型[根据酬和位置分]。
O
O
O
O
O
O
花椒内酯
邪蒿内酯
其他香豆素
主要包括指在α-吡喃酮环上有取代的一类香豆素（多在C3 或C4上，例如calanolide A）；双香豆素类（双七叶内脂）； 异香豆素类（茵陈内脂）。
掌握中药中香豆素 类化学成分的提取 分离原理及操作技 术。
学习目标
知识要求
能力要求
教学内容
学习 提示
香豆素类化学成分的结构、性 质及提取分离知识
任务一
秦皮中香豆素类化合物的提取 分离技术
实训
秦皮中香豆素类成分的的提取 分离及鉴定
学习提示
一
香豆素的结构与特点 香豆素的理化性质及检识
二
三
香豆素类化学成分的提取分离
内酯环的水解
【注】如果与碱液长时间加热，水解产物 顺邻羟桂皮酸衍生物则转变为反邻羟基桂 皮酸的衍生物，再经酸化也不能环合成内 酯，故颜色反应
“异羟肟酸铁反应” 在碱性条件下，内酯开环， 与盐酸羟胺中的羟基缩合生成异羟肟酸，然后 在酸性条件下再与三价铁盐络合而显红色。
O
O
O OH O O
O O
O
HO HO O O
CH2
CCH3
OH
OH
calanolide A
紫苜蓿酚
茵陈内酯
游离香豆素多为结晶性物质，有一 定熔点，多有芳香气味。分子量小 的有挥发性，能随水蒸气蒸出，并 能升华。 香豆素苷多数无香味和挥 发性，也不能升华。
秦皮总香豆素不同提取工艺对比研究
秦皮总香豆素不同提取工艺对比研究目的考察不同提取工艺对秦皮总香豆素提取率及主要香豆素活性成分含量的影响，以确定其适宜的提取工艺。
方法采用正交设计法，以综合指标秦皮总香豆素提取率为考察指标，分别以水和醇作为溶剂，对秦皮提取工艺进行优选。
结果秦皮水提取最佳工艺：秦皮饮片加9倍量水，煎煮3次，每次煎煮1.5 h。
水提取秦皮出膏率为28.87%，总香豆素含量为19.26%、提取率为5.56%，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素总含量为13.47%。
秦皮醇提取最佳工艺：秦皮饮片用8倍量75%乙醇回流2次，每次2 h。
醇提取秦皮出膏率为30.47%，总香豆素含量为21.72%、提取率为6.62%，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素总含量为15.29%。
2种工艺对比，醇提取比水提取出膏率提高了5.54%，总香豆素含量提高了12.77%、提取率提高了19.06%，4种香豆素成分总含量提高了13.51%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
结论醇提取工艺各考察指标均优于水提取工艺，故应采用75%乙醇提取秦皮总香豆素，且工艺稳定。
Abstract：Objective To study the effects of different extraction processes on extraction rate of cortex fraxini total coumarin and active constitute percentage of major coumarin；To establish a proper extraction process. Methods Orthogonal design method was applied to set comprehensive index cortex fraxini total coumarin extraction rate as inspecting index. Water and alcohol were used as solvent respectively to optimize the extraction process of cortex fraxini. Results Optimal water extraction process：cortex fraxini decoction pieces mixed with nine times of water，decocted for three times，90 mins each time. The pasty fluid generating rate of cortex fraxini was 28.87%，total coumarin percentage was 19.26%，extraction rate was 5.56%，total percentage of Aesculin，Aesculetin，Fraxin，Fraxetin was 13.47%，when water was used as solvent. Optimal alcohol extraction process：cortex fraxini decoction pieces mixed with eight times of 75% ethyl alcohol，refluxed twice，two hours each time. The pasty fluid generating rate of cortex fraxini was 30.47%，total coumarin percentage was 21.72%，extraction rate was 6.62%，total percentage of Aesculin，Aesculetin，Fraxin，Fraxetin was 15.29%，when alcohol was used as solvent. It was found that using alcohol as solvent had a 5.54% higher pasty fluid generating rate，a 12.77% higher total coumarion percentage，a 19.06% higher total coumarin extraction rate，and a 13.51% higher percentage of total four coumarin constitutes than using water，with statistical significance. Conclusion Extraction process by using alcohol as solvent is better than using water. So the optimal and stable extraction process of cortex fraxini total coumarin is using 75% alcohol as solvent.Key words：cortex fraxini；extraction process；total coumarin；extraction rate秦皮产于我国东北、华北、华中、华西等地区[1-3]，有野生和栽培品种，资源相对充足，对于秦皮总香豆素的活性研究不断有新的发现，秦皮的开发利用大有潜力。
中药化学香豆素类化学成分的提取分离技术
一、提取 1、水蒸气蒸馏法 2、碱溶酸沉法 3、溶剂提取法
二、分离 1、酸碱分离法 2、色谱法
（一）香豆素的提取
溶剂提取法：
香豆素类 成分的极性不 同，各种溶剂 都有提出该成 分的可能。当 利用极性由小 到大的溶剂顺 次萃取时，各 萃取液浓缩后 都有可能获得 结晶，再结合 其他分离方法 进行分离。
（一）性状 游离苷元：无色至淡黄色结晶，具有芳香性和挥发性； 苷类：粉末状，多数无香味和挥发性。 （二）溶解性 游离苷元：溶于沸水，但不溶于冷水。溶于氯仿、乙醚、
醋酸乙酯、丙酮、甲/乙醇等有机溶剂。 苷：易溶于甲/乙醇，可溶于水，难溶于乙醚、氯仿、醋 酸乙酯等有机溶剂。
（三）内酯性质和碱水解反应
1、香豆素的α-吡喃酮环具有α，β-不饱和内酯性质，
三、检识方法
香豆素类分子中均具有内酯结构，通常还具有酚羟基或
内酯水解后产生的酚羟基，通过这些基团的显色反应，能 为检识与鉴别香豆素成分提供参考。
1、异羟肟酸铁试验（内酯的颜色反应） 具有内酯结构，在碱性条件下内酯开环，与盐
酸羟胺缩合成异羟肟酸，在酸性条件下再与Fe3+络 合生成异羟肟酸铁显红色。 2、酚羟基反应
• A.升华性
B.香味
• C.两者均无
D.两者均有
多项选择题
1、含有香豆素的中药有
A.秦皮
B.厚朴
D.补骨脂
E.大黄
2、游离的小分子香豆素提取可用
A.碱溶酸沉淀法 B.水蒸气蒸馏法
D.升华法
E.有机溶剂法
3、提取游离香豆素的方法有
香豆素的分离方法
9 8 8' 9'
β β′
3
2
1 7α
7' 1'
2'
3'
4
6
5
6'
4'
5'
9'
9
β′ 8'
8
β
7'
3
2 1 7α
2'
1' 6'
4
6 3'
5'
5
4'
1型（8-8′）
2型（8-8′，7-2′）
4、组成木脂素的单体有四种
① 桂皮酸 （偶为桂皮醛）
COOH
CHO
② 桂皮醇 ③ 丙烯苯 ④ 烯丙苯
5、早期木脂素的定义
进行水解
碱液
NaOH / H2O 酚 性成分
加 Et2O 提出不水解的成分
碱液 加 H+中和 加Et2O 萃取
Et2O
H2O
Et2O
香豆素类内酯成分
2. 色谱方法
① 吸附剂 —— 硅胶、中性氧化铝 ② 洗脱剂 —— 已烷和乙醚、乙醚和
乙酸乙酯等混合溶剂 ③ 显 色 —— 可观察荧光
四、香豆素波谱学特征
损伤并导致癌变。其结构中呋喃环上的双键与 不饱和内酯环是其毒性的必要部分，如其双键 与不饱和内酯环被打开则毒性大大降低。
第三节 木脂素
概述： 1、木脂素（lignans）：
一类由苯丙素氧化聚合而成的天然产物。 通常指其二聚物，少数为三聚物和四聚物。 2、二聚物碳架的形成： 多数是由侧链β-C原子（8-8′）连接而成
（六）质谱
1.有强的分子离子峰； 2.基峰是失去CO的苯骈呋喃离子； 3.主要裂解途径是：先失去CO，再产生其他碎 片离子。 4.如香豆素环上存在异戊烯基，则可失去甲基 而形成高度共轭的碎片离子。
秦皮实验
秦皮中香豆素类成分的提取与分离秦皮为木樨科苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla、白蜡树Fraxinus chinensis、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana、宿柱白蜡树Fraxinus stylosa的干燥枝皮或干皮。
功能清热燥湿善治湿热泄泻及痢疾对湿热痹症亦有清湿热、宣痹止痛之效。
现代研究证明秦皮具有抗炎镇痛和降低血尿酸的作用，用于治疗痛风疗效甚佳，其有效成分为秦皮甲素（Esculin）、秦皮乙素（Esculetin）等香豆素类成分。
一、已知成分物理性质1.秦皮甲素（Esculin，又名七叶苷）：白色针状结晶，熔点:204℃-206℃,溶于甲醇，乙醇和乙酸，可溶于沸水。
也易溶于稀碱液，并显蓝色荧光。
2.秦皮乙素（Esculetin，又名七叶内酯）：淡黄色针状晶体(稀醇)或黄色叶状结晶(真空升华)，熔点：271-273°C，易溶于甲醇,乙醇和冰醋酸，可溶于丙酮，不溶于乙醚和水。
也易溶于稀碱液，并显蓝色荧光。
二、实验目的1、掌握香豆素与木质素的结构特点与理化性质。
2、掌握蒸馏法、萃取法和结晶法的操作方法及注意事项。
3、熟悉荧光实验与异羟肟酸铁实验鉴别七叶苷与七叶内酯的原理。
4、熟悉薄层色谱的操作流程。
三、实验原理七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，用氯仿洗涤去除脂溶性杂质，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。
四、实验流程五、实验方法1.乙醇总提取物的制备方法一：取秦皮粗粉150g，用95%乙醇回流提取三次（500ml回流1h ,200ml回流两次，每次1h）。
合并乙醇液，抽滤，减压回收乙醇至浸膏状（乙醇回收至无醇味）。
方法二：取秦皮粗粉150g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
2、香豆素成分的分离（一）七叶内酯的分离与纯化在上述浸膏中加40ml水加热溶之。
移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干。
秦皮中香豆素的提取分离与鉴定实验报告
秦皮中香豆素的提取分离与鉴定实验报告实验目的：1.了解秦皮中香豆素的化学性质；2.学习提取分离秦皮中香豆素的方法；3.通过对香豆素的鉴定，验证提取分离的成果。
实验原理：香豆素（Cumarin）是一种有香气的天然有机化合物，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤和抗氧化等多种生物活性。
秦皮是一种药用植物，据报道其根部中含有香豆素。
本实验通过常规的提取分离方法将秦皮中的香豆素提取出来，并通过紫外光谱鉴定提取物中的香豆素。
实验步骤：1.称取一定质量的秦皮样品，研磨成细末，并过筛备用；2.取一定量的秦皮粉末，用乙醇浸泡，反复搅拌，使其充分浸润，并在温暖的环境中静置一段时间；3.将浸泡过的秦皮浸液过滤，过滤液收集备用；4.将收集到的过滤液转移到蒸馏仪中，将乙醇蒸馏掉，得到香豆素提取物；5.将提取物溶于适量的乙醇，得到稀溶液；6.取适量的稀溶液用紫外-可见光谱仪进行测试，测定其紫外吸收曲线，并与标准品对比分析。
实验结果：1.经提取分离后，得到了秦皮中香豆素的提取物；2.通过紫外-可见光谱仪测定，提取物在250 nm处显示出明显的吸收峰。
实验讨论：1.秦皮中的香豆素成功被提取出来，并通过紫外光谱鉴定实验证明；2.该提取方法的效果相对较好，但提取率还有待进一步提高；3.通过进一步对提取物进行其他分析方法的鉴定，可以对提取物中的香豆素进行更准确的定量和鉴定。
实验结论：本实验成功地提取分离了秦皮中香豆素的提取物，并通过紫外光谱鉴定验证了提取物的成分。
香豆素作为一种天然的有机化合物，在多个领域具有广泛的应用前景。
本实验为后续对香豆素的进一步研究提供了基础和参考。
单元设计-秦皮中香豆素的提取与分离-20190517
（2）加入40ml氯仿，进行萃取，去除树 题，指导。
脂等脂溶性杂质。
提问萃取注
意事项。
注意事项
萃剂原液互不溶，质 溶程度不相同。充分 振荡再静置，下放上 倒切分明。
14
重结晶
学生
（1）将挥去氯仿的水层加入乙酸 乙酯进行萃取。 （2）乙酸乙酯萃取液蒸干，加入 甲醇重结晶，得黄色针状晶体七叶 内酯。 （3）水液加入甲醇重结晶，得微 黄色针晶七叶苷。
秦皮粗粉
12
滤过-浓缩
学生
（1）将滤纸叠成4折后，置于漏斗 中，滤纸边缘应低于漏斗边缘 （2）将圆底烧瓶中溶液倾倒入漏 斗中，进行过滤至小锥形瓶中 （3）减压蒸馏，浓缩
教师
学生易犯错误
观察发 过滤时做不到三 现问题， 低；使用减压蒸 指导。 馏装置时水泵与
加热的顺序颠倒
13
氯仿萃取
学生
教师
（1）将浓缩物加入40ml蒸馏水，并加热。 观察发现问
95%EtOH200ml,回流1小时，药渣再重复两次
乙醇提取液
减压蒸馏浓缩至无醇味
浓缩物
加蒸馏水40ml,加热溶解，滤过
水溶液
加等体积CHCl3萃取
CHCl3
水层
（树脂等脂溶性杂质） 挥去CHCl3，用等体积EtOAc萃取三次
EtOAc萃取液
加适量无水硫酸钠
残留物
温热甲醇，浓缩至适 量，放置析晶，滤过
知识支撑
香豆素类与异羟 肟酸铁的反应原 理
17
薄层色谱
学生
教师
（1）将样品与对照品分别用毛细 血管吸取适量点于硅胶GF254板的适 当位置，将板置于色谱缸中。 （2）准确量取三氯甲烷-甲醇-甲酸 （6:1:0.5)并置于干燥洁净的具塞量 筒中混合后，加入色谱缸中进行展 开。 （3）展开结束时，取出色谱板， 标记溶剂前沿，挥干溶剂后，置于 紫外灯下观察，记录荧光斑点，得 出结论。
中药中香豆素类化学成分的提取分离技术
二、理化性质
（一）性状
游离苷元：无色至淡黄色结晶，具有芳香性和挥发性；
苷类：粉末状，多数无香味和挥发性。 （二）溶解性 游离苷元：溶于沸水，但不溶于冷水。溶于氯仿、乙醚、 醋酸乙酯、丙酮、甲/乙醇等有机溶剂。
苷：易溶于甲/乙醇，可溶于水，难溶于乙醚、氯仿、醋 酸乙酯等有机溶剂。
（三）内酯性质和碱水解反应
一、结构与分类
1、基本母核：苯骈α -吡喃酮（色原酮的异构体）
（邻羟桂皮酸内酯）
一、结构与分类
2、分布
香豆素类在动植物及微生物中均有分 布，如致癌成分黄曲霉素类及发光真菌中 的亮菌素类均属于香豆素类。这类成分分 布得最广的还是高等植物中，其中芸香科 和伞形科中分布最多。它们在植物体内以 游离状态或与糖结合成苷的形式存在，苷 酶解可环合成游离的内酯状态。
酯（七叶素）、秦皮苷、秦皮素、紫丁香苷等。
知识链接
以95%乙醇为溶剂提 取； 浓缩液加热后用氯仿 洗涤，除去脂溶性杂 质； 利用七叶苷和七叶素 在醋酸乙酯中的溶解 度不同而分离。
思考题
1、香豆素类化合物具有哪些理化性质？ 2、简述薄层色谱中展开剂的PH值对弱酸性香豆素Rf的影 响。
3、通过提取分离秦皮中的七叶素和七叶苷，试述两相溶 剂萃取法的原理是什么？操作时要注意哪些问题？萃 取操作中若已发生乳化应如何处理？
一、结构与分类
3、香豆素的结构类型
香豆素母核的苯环或α-吡喃酮环上常有羟基、烷氧 基、苯基、异戊烯基等取代，其中异戊烯基的活泼双 键又可与邻位酚羟基环合成呋喃或吡喃环结构，根据 其取代基及连接方式不同，把香豆素分成几类：
（一）简单香豆素类
苯环上 指只有在苯环上有取代基的香豆素类。如 白蜡树枝皮 有取 代基
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知识支撑
香豆素类与异羟 肟酸铁的反应原 理
17
薄层色谱
学生
教师
（1）将样品与对照品分别用毛细 血管吸取适量点于硅胶GF254板的适 当位置，将板置于色谱缸中。 （2）准确量取三氯甲烷-甲醇-甲酸 （6:1:0.5)并置于干燥洁净的具塞量 筒中混合后，加入色谱缸中进行展 开。 （3）展开结束时，取出色谱板， 标记溶剂前沿，挥干溶剂后，置于 紫外灯下观察，记录荧光斑点，得 出结论。
《天然药物提取技术》之三
秦皮中香豆素的提取分离与鉴定
医学院 闫金红
单元位置
2
香豆素（Coumarin）
《天然药物提取技术》 64 学时 第3单元
苦杏仁中苦 杏仁苷提取 与分离
秦皮中香 豆素的提 取分离与 鉴定
(4 学时)
大黄中游 离蒽醌的 提取分离 与鉴定
单元目标 能力目标
知识目标
素质目标
1.能够运用蒸馏法、萃 取法和结晶法的操作技 术对秦皮中的七叶内酯 和七叶苷进行提取分离 2.运用薄层色谱法和化 学法鉴定七叶内酯和七 叶苷
性状
溶解性
香豆素母核本身无荧光，但羟基 香豆素类化合物在紫外光下大多 显蓝色或蓝绿色荧光，在碱液中 更加显著。香豆素的荧光性质可 用于香豆素成分的检识鉴别。
19
显色2.纸色谱法
游离香豆素能溶于沸水， 易溶于甲（乙）醇、氯 仿、乙醚等，可溶于石 油醚。 香豆素苷类能溶 于水、甲醇、乙醇，而 难溶于乙醚、苯等极性 小的有机溶剂。
学生易犯错误
电子天平使用 不规范，甲醇 量取时视线与 刻度线不保持 水平
11
回流
学生
教师
涉及知识
（1）正确安装回流装置：铁架台、 观察发现
固定夹子的安装，冷凝水的调节 问题，指
（2）加热1h与计时正确
导。提问
（3）回流结束的操作顺序正确 溶剂的选
择原因。
香豆素的溶解 性
学生易犯错误
（1）进水管与 出水管接反（2） 先停水再停止 加热
3
1.掌握香豆素与木质素的 结构特点与理化性质 2.掌握蒸馏法、萃取法和 结晶法的操作方法及注意 事项 3.熟悉荧光实验与异羟肟 酸铁实验鉴别七叶苷与七 叶内酯的原理 4.熟悉薄层色谱的操作流 程
1. 培养学生严谨、认真 的工作态度和强烈的责 任心
2. 培养学生的合作能力
单元设计
课程导入 检查预习情况 （10分钟)
黄色针晶
用甲醇反复结晶
七叶内酯
10
水液 七叶苷
任务二 秦皮中香豆素类成分的提取分离——90分钟 操作准备
学生
（1）个人着装等，实验室台面符合要 求 （2）准备回流装置并检验仪器是否干 燥、洁净，若不符合要求，清洗后干 燥。 （3）称取药材粉末150g （4）量取乙醇200ml
教师
观察发现 问题，指 导。
95%EtOH200ml,回流1小时，药渣再重复两次
乙醇提取液
减压蒸馏浓缩至无醇味
浓缩物
加蒸馏水40ml,加热溶解，滤过
水溶液
加等体积CHCl3萃取
CHCl3
水层
（树脂等脂溶性杂质） 挥去CHCl3，用等体积EtOAc萃取三次
EtOAc萃取液
加适量无水硫酸钠
残留物
温热甲醇，浓缩至适 量，放置析晶，滤过
理化性质
溶解性 与碱反应 荧光性
游离香豆素可溶于醇和亲脂性溶剂，香豆素苷可溶于 醇与水
香豆素具有内酯环，在稀碱溶液中水解开环溶于水， 加酸环合难溶于水
香豆素具有蓝色或紫色荧光，可用于鉴别。7-羟基香 豆素蓝色荧光最强，加碱后荧光更强。
提取分离
异羟肟酸铁反应用于鉴别内酯环；三氯化铁鉴别酚羟基，
显色反应 Emerson试剂、重氮化反应用于鉴别酚羟基及对位
主治：清热燥湿、 清肝明目、平喘 止咳。用于热毒 泻痢、目赤肿痛、 目生翳障
5
预习任务二：秦皮中主要有效成分香豆素的结构、性质、提取分离鉴定方法
香 豆 素
6
含义 结构类型
具有苯并α-吡喃酮基本母核的天然药物的总称
简单香豆素，呋喃香豆素、吡喃香豆素、异香豆素、双香豆素
性状
游离香豆素具有香味，无色或浅黄色结晶，有挥发 性，香豆素苷无香味，无挥发性和升华性。
成果 展示
60%
过程性 考核
Thank you for your attention !
任务一
制定秦皮中七叶内 酯和七叶苷的提取 分离操作流程 （25分钟)
单元总结 知识梳理 （5分钟)
4
任务三
七叶苷与七叶内 酯的鉴定 （50分钟)
任务二
秦皮中香豆素类 成分的提取分离 （90分钟)
单元导入——10 分钟 回顾上单元内容
检查预习任务的完成情况
预习任务一：分组查阅并讨论秦皮的来 源，性质，有效成分；
提取：溶剂提取法、碱溶酸沉法。 分离与鉴定：色谱法
布置单元任务
某制药厂中药提取车间实习，其所在的生产小组接到一个任务，要在 一个月内，从秦皮中提取中提取七叶内酯1吨。
生产车间——班级 工艺指导——授课教师 生产小组——课堂分组 (每组5人，共8组，五名同学担任组长）
表一 生产任务通知单
任务下发部门：质量部
学生
各小组参照任务单，教材，实验 指导及预习资料，制定秦皮中香 豆素提取分离简单工艺流程。 分小组展示工艺流程。 修改并掌握秦皮中香豆素提取分 离制备工艺流程
教师
指导老师结合学生展示 进行工艺流程，提问选 择提取方法的原因。
涉及理论知识
溶剂提取法、碱溶 酸沉法，碱溶酸沉 法的原理。
9
最佳工艺流程
秦皮粗粉150g
知识支撑
香豆素类与碱的 反应
16
异羟肟酸铁实验
学生
（1）取七叶内酯与七叶苷分别置 于试管中，加入盐酸羟胺甲醇溶液 2~3滴，再加1%的氢氧化钠溶液 2~3滴，在水浴中加热数分钟，至 反应完全，冷却。 （2）再用盐酸调pH 3~4,加 1%FeCl3试剂1~2滴，溶液变红~紫 红色。
教师
观察发现 问题，提 问学生发 生变化的 原因
产品名称：七叶苷、七叶内酯 生产数量：1000kg 开始时间：2019-05-15
任务接收部门：生产部 结束时间：2019-06-15
7
单元任务
任务一：制定秦皮中七叶内酯和七叶苷的提取分离操作流程 任务二：秦皮中香豆素类成分的提取分离 任务三：七叶苷与七叶内酯的鉴定
8
任务一 制定提取分离工艺流程——25分钟
教师
监督，强 调安全
学生易犯错误
重结晶时加入的 甲醇量过多或过 少
15
任务三 七叶苷与七叶内酯的鉴定——50分钟 荧光实验
学生
（1）取七叶内酯与七叶苷的甲醇 溶液分别低于滤纸上，在紫外灯下 观察荧光的颜色。 （2）在原斑点上滴加一滴氢氧化 钠观察荧光的变化。
教师
观察发现 问题，提 问学生发 生变化的 原因
秦皮粗粉
12
滤过-浓缩
学生
（1）将滤纸叠成4折后，置于漏斗 中，滤纸边缘应低于漏斗边缘 （2）将圆底烧瓶中溶液倾倒入漏 斗中，进行过滤至小锥形瓶中 （3）减压蒸馏，浓缩
教师
学生易犯错误
观察发 过滤时做不到三 现问题， 低；使用减压蒸 指导。 馏装置时水泵与
加热的顺序颠倒
13
氯仿萃取
学生
教师
（1）将浓缩物加入40ml蒸馏水，并加热。 观察发现问
观察发现 问题，提 问学生发 生此现象 的原因。
知识支撑
七叶苷与七叶内 酯的分子结构， 极性。
18
单元总结——
知识梳理
α、β-不饱和内酯 环在稀碱液的条件 下，可被水解开环， 生成顺邻羟基桂皮 酸盐，该盐经酸化 即闭环恢复成原来 的内酯结构，该性 质可用于提取分离。
内酯环 的水解
游离香豆素多为结晶性物质，有一定 熔点，多有芳香气味。分子量小的有 挥发性，能随水蒸气蒸出，并能升华。 香豆素苷多数无香味和挥发性，也不 能升华。
（2）加入40ml氯仿，进行萃取，去除树 题，指导。
脂等脂溶性杂质。
提问萃取注
意事项。
注意事项
萃剂原液互不溶，质 溶程度不相同。充分 振荡再静置，下放上 倒切分明。
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重结晶
学生
（1）将挥去氯仿的水层加入乙酸 乙酯进行萃取。 （2）乙酸乙酯萃取液蒸干，加入 甲醇重结晶，得黄色针状晶体七叶 内酯。 （3）水液加入甲醇重结晶，得微 黄色针晶七叶苷。
1.内酯的颜色反应（异羟 肟酸铁反应 ） 2.酚羟基的颜色反应 3.Gibb’s反应 4.Emerson反应
单元总结 技能提升
2 1
回流 减压蒸馏
萃取 重结晶
3
薄层色谱
20
单元总结——5分钟 考核与评价
？？
1.小组合作时 每个同学的考 核标准
2.每个小组的 考核标准
3.课堂提问的 考核？
21
40%