用酶联免疫吸附试验对猪瘟免疫及抗体效价监测的效果分析
猪瘟免疫抗体监测分析
关键词 猪瘟 抗体检 测 酶联 免疫吸附试验 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ ０ ７ ． １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ５ ． ０ ０ ０ ６ 。 ０ ２ ３ 讨论 ３ ． １ 影响免 疫效 果的免疫 效果 按照 国家规定要 求 ，猪
疫 结束 后 ，全 区农 村 散养 生 猪 的 猪 瘟免 疫 抗 体 检 测 结
果 ，现整 理 、分析得 到 的一些数 据 和经验 ，对 掌握全 区
猪 的群体 免疫水 平 ，给今后 指导 和制 定猪瘟 防控 措施 提
供参考依据 。
１ 材 料与方法 １ ． １ 材 料 （１ ）全 区１ ０ 个 乡镇 生猪散 养户 中随机抽 取 ３ ９ ０ 份猪血 清 。（ ２）奥地 ￣ ｌ Ｊ Ａｎ ｔ ｈ ｏ ｓ ２ ０ １ ０ 酶标仪 ；猪瘟抗 体
关键 措施 之一 。 因此 ，本 次监测 数据 是春 季动物 强制 免
瘟免疫密度 常年 维持在９ ０ ％以上 ，其中应免生猪 的免疫密
度要达 １ ０ ０ ％。从本 次检测结果看 ，在抽取 的３ ９ ０ 份猪血 清
样 品中 ，猪 瘟免 疫抗体 的合 格率 为８ ２ ． ８ ２ ％，达到 了农业
３ ． ３ 应采取 的对 策 （１ ） 加 强领导 ，健全制度 。提 高猪 瘟 的免 疫 密度 和免 疫 效价 是 一 项 长 期 系统 的工 作 ，各 级 、各 有关部 门应 加强领 导 ，提高认 识 ，建立健 全各项 规 章制度 ，加 强村级 动物 防疫 员队伍 建设 ，不 断提高 专 业 人员 的业务 技能 和工作 责任 心。（ ２）制 定科 学合理 的 免 疫程序 ，有 效提 高猪 只的免 疫率 。对 于育肥猪 ，要 坚 持 行之 有效 的首免 、春秋 防疫 、常 年补针 ；对 于种猪 ， 每 年春秋 应各做 一次 预 防接 种 。（ ３）争取 经费 ，按村大 小 设定 防疫员 ，在认 真做 好春 秋免疫 的前 提下 ，逐步 实 行 月月补免 的免 疫程序 ，最大限度消 除免疫空 白和死角 。 （ ４）积极 开展猪 只抗体监 测工作 。充分 发挥 区（ 县） 级兽 医实验 室的作 用 ，逐 步加 大抗体 监测 力度 ，为猪 瘟 的综 合 防治提供科 学依据 。在 春秋两次集 中防疫高 峰后 的１ 个 月 内 ，随机采 取猪 血清做 抗体 检测 ，评估 总保 护率 。根 据 抗体 的分布 情况 、免疫 保护 率高低 等 ，具体 分析 防疫 工作是否 到位 ，免疫 效果 是否确实 。
检验猪场免疫效果的方法
效率。
以验证。哨兵猪是易感者，在免疫 相抗原受检抗体复合物，再用酶标
1 临床观察和生产成绩比较
猪群中 1 周乃至数周没有相应疾病 二抗（针对受检抗体的抗体）与固
这是最为经典和朴素的疫苗效 的临床症状，则说明疫苗免疫减少 相免疫复合物中的抗体结合，形成
果检验方法。猪场疫苗免疫后 1 月、 或消除了猪群病毒血症，猪群不再 固相抗原 - 受检抗体 - 酶标二抗复合
果检验结果的支持。猪群接种后 疫苗效果并决定是否选择应用这个
其原理是将抗原 ( 或抗体 ) 包被
必 须 及 时 了 解 免 疫 是 否 合 格， 免 疫苗。很多疫苗企业在新产品上市 于红细胞表面，成为致敏的载体，然
疫 的 时 机 是 否 准 确， 免 疫 的 次 数 后，会动员猪场做平行对比试验， 后与相应的抗体 ( 或抗原 ) 结合，从
修正做出决策。这需要从临床、生 效抗体，免疫保护率是多少，有效 价≥ 1 ∶ 128 为免疫合格。该方法也
产到实验室数据的有效监控，正确 抗体能持续多久，对比试验依然不 可以用于猪细小病毒抗体和猪流感
检验、评估疫苗免疫效果。免疫效 能明确回答这些问题。
病毒抗体的测定和检验。
果需要利用多种方法综合检验评估 3 哨兵猪试验
和 间 隔 是 否 合 适， 产 生 的 免 疫 应 免疫猪群与同等年龄和同样环境下 而使红细胞拉聚在一起，出现可见
答 抗 体 是 否 足 以 抵 抗 外 来 病 原 微 的未免疫猪群比较，以此来证明疫 的凝集反应。目前已有商用试剂盒，
生 物 的 侵 害。 如 果 这 些 问 题 都 不 苗的有效性。如果免疫猪群相对于 可以按说明书操作。猪瘟、猪口蹄疫
疫苗免疫后，猪群是否存在病 毒血症或菌血症，唾液、鼻分泌物、 尿液、粪便等分泌和排泄物是否有 病原，排毒持续多久，这也是评估 疫苗免疫效果的方法之一。 5.1 PCR（聚合酶链式反应）方法
猪瘟强毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验对猪瘟血清抗体的检测
血凝 阳性 教 血凝 阴性 教
的 转 变 界 线 难 以丹 清 。莲 子 芯 昧 苦 性 寒 ， 心 、 、 三 经 一 清 ＾ 肺 肾 有 心 、 热 血 、 精 的作 用 。莲 子 芯 含 多 种 生 物碱 和 黄 酮 类 等 去 止 涩
治疗 组 ８
关 键 词 ：猪 瘟 ；Ｅ ＩＡ； 测 ＬＳ 鞋
中 图分 类 号 ： ５ ．ｓ Ｓ８ ２ ６ １
文献标识码 ： Ｂ
文 章 编 号 ： ０ ０ ４ （０ ２ ０ ０ １ — ２ １ ０ —６１ ２ ０ ） １ ０ ０ ９ ９ 乐都 、 平安 、 中 、 湟 大通 县 采 集 的 猪 血 样 进 行 了 猪 瘟 强 毒 感 染 血 清抗体的检测 。
江 苏 科 学 拄术 出版 社 ， ９ ３ １ １ ｉ ９． ０ ．
青 霉 索 钠
（ Ｕｉ ） Ｉ ｍＬ
（／ ） ｇ ｍＬ
０ ５ ． ０ ０ ５ ．２
２ ０ ｃ
＿ ］ 周 邦靖 ．常 用 中 药 的 抗菌 作 用 及其 测 定 方 法 ［ ］ ５ Ｍ ．重 庆 ：
大 脑 埃 希 氏 菌
作 用如 何 ， 待 于 以后 进 一 步 研 究 观 察 。 有
往：） １ 表示 试 验 组 与 对 照组 比较 Ｐ＜ ０ ０ ２ 表 示 Ｐ ０ ０ １ ） ＜ ５
２ ３ 押 茵 作 用结 果 ．
莲 子芯 水 煎剂 对 供 试 的大 肠 埃 希 氏菌 、 无
参 考 文献 ： ［ ］ 江 西新 医学 院 ．中药 大 辞 典 ［ ．下 册 ．上 海 ： 海 科 学 １ Ｍ］ 上
（．青 海省 畜牧 兽医 总 站 ， 海 西 宁 １ 青 ８ ００ ； ．青 海 省 畜 牧 兽 医科 学 院 ， 海 西 宁 １０ ｌ ２ 青 ８０ ０ ） １０ ３
猪瘟抗体检测方法
猪瘟抗体检测方法猪瘟，即猪繁殖与呼吸综合征，是由猪瘟病毒引起的一种严重的传染病，对猪群健康和养殖业产生了重大影响。
为了及时控制疫情和保护养殖业的发展，猪瘟抗体检测方法非常重要。
猪瘟抗体检测方法主要包括传统血清学法和分子生物学法。
传统血清学法主要是利用抗原-抗体反应原理进行检测，分子生物学法则是通过检测猪瘟病毒核酸进行诊断。
下面我将详细介绍这两种方法。
传统血清学法中最常用的方法是血清病毒中和试验。
该方法通过将待检血清与猪瘟病毒进行反应，观察病毒和抗体的相互作用。
这种方法的优点是简单、经济、可靠，适用于大规模的抗体检测。
但是存在一些局限性，如需要对待测血清和病毒进行配对，病毒株的选择和制备需要一定的经验和技术，且过程较为繁琐。
另一种传统血清学方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）。
该方法利用特异性的酶标记抗体来检测待测血清中的猪瘟病毒抗体。
ELISA具有操作简单、灵敏度高、多重样品同时检测等优势。
此外，还可以通过改变试剂盒中抗原的性质，进一步检测不同类型的抗体，如IgM和IgG。
但是，该方法需要进行酶标仪等专门设备的检测，成本较高。
分子生物学法主要是通过检测猪瘟病毒核酸来进行诊断。
常用的方法包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）。
PCR是一种高度敏感且特异的检测方法，通过扩增待检样品中的病毒核酸，可以快速检测出病毒的存在。
RT-qPCR则能实时监测PCR反应的过程，具有更高的精确性和灵敏度。
此外，PCR还可以进行基因测序，用于病毒株的分型和溯源研究。
然而，分子生物学法虽然灵敏度高，但仍存在一些局限性。
首先，该方法对设备和技术要求较高，需要专业的实验室和操作人员。
其次，由于病毒基因组的变异性较大，需要选择合适的引物和探针，以确保检测的准确性。
此外，病毒核酸在环境中的稳定性较差，易受到污染和降解的影响，可能导致假阴性结果。
综上所述，猪瘟抗体检测方法在疫情监测、疫苗评估和动物检疫等方面具有重要作用。
应用IHA与竞争ELISA方法检测猪瘟免疫抗体的比较与分析
抗 体检测 。采 用 Ｉ Ｈ Ａ方 法 ，以抗 体效 价 ≥２ 为合格标 准 时 ，其抗 体合 格率为 ９ ５ ． ３ ％ ；采用 竞争 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法 ，以 阻断率 ≤５ ０ Ｚ 为 阳性标准时 ，其抗体 阳性率为 ９ ３ ． ６ ％ ，两种检 测方法总体一致符合 率 ９ ３． Ｏ ％ ，经 Ｘ 检验 ，两者差异不显著 ，说明
１ 材 料 与 方法
１ ． １ 免 疫 疫 苗种 类
猪 瘟 传 代 细 胞 苗 ，哈 药 集 团 生 物 疫 苗 有 限 公 司 生
产 ，批 号 ：２ ０ １ ４ ０ ２～２ ０ １ ４ ０ ５ 。
Ｔ Ｅ ＣＡＮ公 司 酶标 仪 ，型号 为 Ｉ ｎ ｆ ｉ ｎ ｉ ｔ ｅ Ｍ２ ０ ０ Ｐ Ｒ Ｏ。
１ ． ２ 被检血清
样 品来 源 于 福 建 省 漳 州 市 各 县 （ 市 、区 ）抽 检 的
收稿 日期 ：２ ０ １ ５ — ０ ５ — ２ ２
（ 第 ４孔 ） ，呈现 “ ＋ ＋ ”凝 集 为 免疫 合格 ；按 （ （ ２ ０ １ ４年
福建省动物疫病监 测与流行病学调查计划》 的通知文件
两种 检测 方 法 之 间存 在 的 关 系 ，减 少 因检 测 方法 不 同 而
１ ． ３ 诊 断试 剂
猪 瘟 间接 血 凝抗 体 检 测试 剂 盒 （ 配 套 有抗 原 、阳 性 血 清 、 阴性 血清 及 稀释 液 ）购 自 中国农 业 农科 院 兰 州 兽
医 研 究 所 诊 断 中 心 ，批 号 ：２ ０ １ ４ １ １ ２ １ ０ ５ ；猪 瘟 抗 体 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检 测诊 断试 剂盒 购 自法 国 Ｉ Ｄ ． Ｖ Ｅ Ｔ公 司 ，Ｌ Ｏ Ｔ ：
６ ２６
育肥猪猪瘟免疫抗体监测及分析
在免 疫 疫苗 前 后 数 日内 ．禁 止 使用 免 疫 抑 制 性药物． 减 少药 物对 免疫 效果 的影 响 。
差， 免 疫抗 体 效 价低 ． 免疫 过 晚有 免 疫 空 白期 易 发
表２ ２ ０ １ ５ ￣ ２ ０ １ ６年 ６ 家猪瘟免疫抗体监测结果
（ 注： 待检样品 Ｏ Ｄ值＜ Ｃ ｍ０ 值十 空白 Ｏ Ｄ值， 结果判阴性； 待检样品 Ｏ Ｄ值≥Ｃ ｕ ｔ ０ 值＋ 空白Ｏ Ｄ值 ， 结果判阳性）
猪瘟 活疫 苗 （ 细胞 源 ） ５ ～ ６头 份两 次免 疫 。 免疫 程 序
行 了免疫抗 体监测 ， 现将 监测 结果 报告 如下 ：
１材料 与方 法
１ ． １实 验 动 物 及 备 检 样 品 的 采 集
间． 各 个养 殖场 之 间猪瘟免 疫抗 体效 价悬 殊较 大
Ａ养 殖场存 栏 量 １ ５ ０ ０头 ．使用 Ｇ场 传代 细胞
２ ０ １ ５年 １ ０月 ２ ０ １ ６年 １月分别 对衡 水市 ６家 不 同规模养 猪场 的猪瘟 免疫 猪进 行血 样 采集 ． 共 采 集１ ０ ０ １ ５ ０日龄育 肥猪 血清 ６ ４份 ．按 常规方 法 分 离血 清 ． 置一 ２ ０ ℃保存 备检 。 各场 免疫采 样情 况见 表
较大 。
３分析 与讨 论
疫 苗 从 出厂 到 养 殖 户 要 经 过 省 、 市、 县、 乡 疫 苗 供应 或 经 销单 位 ． 经 过 很多 环 节 ． 在 某 个环 节 冷
藏 或 冷冻 保 管 不 当 ． 都 会 影 响疫 苗 抗 原效 价 ． 因此 养 殖 户在 做 疫 苗 时适 当加 大 剂量 ．必 要 时 加 到数 倍。
生． 进而 影 响免疫 效果 。
卢氏县猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析
兽医研究；不同规格移液器和多道移液器均购自于德国艾德本
股份公司，振荡器购自于杭州瑞诚仪器有限公司。 （+）检测方法 检测方法与步骤、判断标准等均严格参考试剂盒提供说明
书进行。 "、调查结果源自（!）卢氏县地区猪群猪瘟抗体检测结果 通过对卢氏县地区 !'"" 份猪血清样品进行猪瘟抗体水平
养殖技术
Yangzhijishu
卢氏县猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析
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"
王玉民 杨爱霞 王一冰
猪瘟为重要的猪传染病，对我国养猪业危害巨大。为了解卢 氏县部分地区猪群猪瘟免疫情况，"#!$%"#!& 年在卢氏县 "$ 个 猪场共采集 !'"" 份血清样品，应用正向间接血凝试验对血清样 品中猪瘟抗体进行检测。结果表明：该地区猪瘟血清抗体平均合 格率为 $()!'*（!"#+,!'""），高于国家农业部规定的最低要求 （$#)#*），其中 "#!$ 年和 "#!& 年猪瘟抗体合格率分别为 $")-&*（-#+,'.+）和 $-)+(*（$##,.".）；散养场猪瘟抗体合格率 较小型和大型规模化猪场低，分别为 '+)"!*（'$,!#'）、$')#'* （(".,-'(）和 $()"'*（$#$,.-"）。卢氏县部分散养场猪群存在猪 瘟感染风险，养殖场相关人员应及时制定合理的免疫程序。
胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ： Ｔｏ ｓ ｔ ｕ ｄｙ ｔ ｈ ｅ ｓ ｐｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ａ ｎｄ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｃ ｏ ｌ ｌ ｏｉ ｄ ａ ｌ ｇｏ ｌ ｄ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ， ｗｅ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｔ ｈｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖｅ ｃ ｏ ｉ ｎ ｃ ｉ ｄ ｅ ｎｃ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ
用胶 体金 法 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法平行 检测 受检 猪 血 清 标本 猪 瘟 抗 体 滴 度 。结 果表 明 ， 胶 体 金 法和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ
法检 测 猪 瘟 抗 体 的 结 果 符 合 率 为 ８ ６ ． ６ ， 胶 体 金 法 较 ＥＬ Ｉ Ｓ Ａ 法敏 感度 、 特异度低 ， 用胶 体 金 法检
６ ，ｃ ｏ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ ａ ｌ ｇ ｏ ｌ ｄ ｈ ａ ｄ ｍｉ ｓ ｓ ｉ ｎ ｇ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｍｉ ｓ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｅ（ ｆ ａ ｌ ｓ ｅ ｎ ｅ ｇ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ，ｆ ａ ｌ ｓ ｅ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ） ． Ｃｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ＥＬＩ Ｓ Ａ ，ｃ ｏ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ ａ ｌ
ｇ ｏ ｌ ｄ ｈ ａ ｓ ｌ ｏ ｗｌ ｙ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ａ ｎｄ ｓ ｅ ｎｓ ｉ ｔ ｉ ｖｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｔ ｈｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｏｆ Ａｎｔ ｉ — ＣＳＦＶ ｔ ｉ ｔ ｅ ｒ ｈａ ｓ ｍｉ ｓ ｓ ｉ ｎｇ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｍｉ ｓ ｄｉ ａ ｇｎ ｏｓ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ，
ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ ａ １ ｓ ｗｉ ｎ ｅ ｆ ｅ ｖ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ （ Ａｎ ｔ ｉ — ＣＳ ＦＶ） ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｌ ｌ ｏ ｉ ｄ ａ ｌ ｇ ｏ ｌ ｄ ａ ｎ ｄ ＥＬＩ Ｓ Ａ． Ｔｈ ｅ Ａｎ ｔ ｉ — ＣＳ Ｆ Ｖ ｔ ｉ ｔ ｅ ｒ ｏ ｆ ｓ ｗｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ
实验报告
实验一猪瘟病毒抗体检测试剂配制一、基本原理酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是一类在固相载体上进行免疫酶染色的免疫酶技术，既可检测抗原，又可检测抗体。
其基本原理是，抗原或抗体吸附到固相载体表面后，仍保持其免疫活性，可与相应的酶标记抗体（或抗原）结合形成免疫复合物。
这一复合物仍保持其免疫活性和酶的催化活性，在遇到相应的底物时，可催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色物质，因颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，故可借助于颜色反应的深浅来定量抗体或抗原。
该技术具有敏感性高、特异性强、简便、易于大规模检测的特点。
二、仪器pH仪；96孔聚苯乙烯微量反应板；移液枪；离心管；离心机，酶标仪。
三、方法步骤1．待检血清样品：取免疫猪瘟疫苗的动物血清样品，用样品稀释液倍比稀释。
1:10、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600用1.5ml离心管分装，4℃保存备用。
（含新城疫病毒的鸡胚尿囊液）、抗新城疫病毒鸡免疫球蛋白、抗新城疫病毒兔血清（用新城疫病毒抗原免疫家兔制备）、市售酶标羊抗兔IgG（HRP－羊抗兔IgG）。
2．包被液配制 0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液。
3．洗涤液 0.02mol/L pH7.4 PBS（含0.15 mol/L NaCl、0.05％吐温－20）。
分装。
4．稀释液 0.02mol/L pH7.4PBS中含有0.15 mol/L NaCl、0.05％吐温-20、10％犊牛血清或1％牛血清白蛋白。
5．底物溶液 0.1mol/L pH5.0磷酸盐（Na2HPO4）－柠檬酸缓冲液100mL（含40毫克邻苯二胺、0.15mL 30％ H2O2）。
6． 2mol/L H2SO4（浓H2SO4 22.2 mL加水177.8mL）。
7．抗原包被用0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液将猪瘟病毒抗原稀释到所需浓度，然后加于聚苯乙烯微量反应板孔中，每孔200μL，4℃包被过夜。
2015-2017年甘肃省猪瘟抗体监测及免疫效果分析
2015－2017年甘肃省猪瘟抗体监测及免疫效果分析陈冬梅 ，李晓霞 2，孙剑峰3，文立波3*(1. 甘肃省农牧厅机关后勤服务中心，甘肃 兰州 730000；2. 甘肃省金昌市金川区动物疫病预防控制中心，甘肃 金昌 737100；3. 甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃 兰州 730046)猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种急性、高热性、高传染性、高致死性疾病，对养猪业的危害极大，本病遍布全世界，世界动物卫生组织将此病列为A 类传染病，是影响养猪业的头号传染病。
就目前养猪生产条件和动物疫病控制水平看，猪瘟仍然是我国生猪生产的主要难题，猪瘟防治效果决定养猪的成败。
免疫接种是防治猪瘟的主要措施。
因此，通过对免疫猪群进行抗体水平检测，及时掌握猪群的免疫水平，了解免疫状况，建立科学的免疫程序，将对控制猪瘟的防控起着至关重要的作用。
1 材料方法1.1 材料1.1.1 被检血清样本2015－2017年三年间从甘肃全省3 207个采样点(种猪场51个、商品代猪场1 661个、散养户1 354个、其他场点141个)共采集样本23 051份。
1.1.2 试剂猪瘟病毒抗体检测试剂盒(CSFV-AB)，由北京爱德士元亨生物科技有限公司提供。
1.2 检测方法1.2.1 检测原理及方法利用阻断酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA)原理来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体，如果被检样本中存在猪瘟病毒抗体，它们就会阻断辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRPO)标记的抗猪瘟病毒的单克隆抗体。
单克隆抗体与猪瘟病毒抗原的结合可以通过辣根过氧化物酶与底物的显色程度进行判定，即用酶标仪在单波长450 nm 或双中图分类号：S858.28 文献标志码：A 文章编号：1001-0769(2018)04-0067-04摘 要：为评估甘肃省猪瘟免疫效果，对2015－2017年甘肃省猪瘟免疫抗体水平进行了监测，三年中分别在甘肃各地州市种猪场、规模养猪场、散养户和其他场地采集样本共23 051份，采用阻断酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA)方法进行监测。
猪瘟实验室检测与预防免疫
猪瘟实验室检测与预防免疫猪瘟是一种高致死性疾病，对养猪业造成了很大的经济损失。
猪瘟的传播非常容易，对于猪场来说是一个严峻的挑战。
因此，开展猪瘟实验室检测和预防免疫非常重要。
猪只如果患有猪瘟，就需要进行猪瘟实验室检测。
目前，常用的检测手段有抗体检测和病毒检测。
1. 抗体检测抗体检测是指检测猪血清中是否存在抗猪瘟病毒的抗体，从而判断猪是否感染了猪瘟病毒。
抗体检测不仅可以检测病猪，还可以检测潜伏猪和康复猪是否存在抗体，以确定猪群中的疫情情况。
抗体检测方法有很多种，比较常用的是酶联免疫吸附试验（ELISA）和血凝抑制试验（HI）。
其中，ELISA技术灵敏度更高，也更广泛应用。
抗体检测的优点是操作简单、适用性强、成本低且检测结果可以互相验证。
2. 病毒检测病毒检测是指对病猪的组织样本、血清或粪便等样本进行病毒检测，以确定猪是否感染猪瘟病毒。
病毒检测主要有病毒分离、PCR（聚合酶链式反应）和荧光抗体法等方法。
病毒分离是指将病毒分离出来并在培养基中增殖，然后进行鉴定。
这种方法需要专业实验室条件和技术人员，操作难度较大。
PCR技术是基于病毒RNA或DNA在人工扩增的原理，可以检测非常低浓度的病毒。
这种方法具有高灵敏度、高特异性、快速检测等优点。
但同时也存在比较高的假阳性和假阴性率。
荧光抗体法是利用荧光抗体对病毒感染的组织进行检测，这种方法操作简单，准确度高，但对病情严重的病猪组织分解速度较快，不利于检测。
二、猪瘟预防免疫猪瘟的预防免疫是非常重要的，免疫可以有效提高猪只的免疫力，降低患病率。
预防免疫有两种方法：被动免疫和主动免疫。
1. 被动免疫被动免疫是指通过将富含抗体的血清注入幼猪体内，以免疫幼猪。
这种方法主要用于疫情比较严重的猪场，可以迅速提高猪群中的抗体水平，防止猪群暴发病情。
主动免疫是指通过给猪注射疫苗，促使其产生病毒抗体，从而达到免疫效果。
疫苗种类有活疫苗和灭活疫苗。
活疫苗是指使用弱毒株、温和毒株或者减毒株制成的疫苗。
大理某猪场猪瘟、蓝耳病抗体检测报告分析
猪瘟（classical swine fever ，CSF ）和蓝耳病（porcine repro-ductive and respiratory syndrome ，PRRS ）属于烈性传染病，不仅在我国乃至在全世界范围内广泛传播，严重影响养猪业的发展。
蓝耳病已被世界卫生组织列为需要通报的传染病之一；猪瘟已被国际兽医局列为成员国必须报告的动物疫病之一；两种疾病也是国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）优先防治的国内16种动物疫病中的一类动物疫病[1,2]。
目前，疫苗免疫仍是有效预防和控制这2种疾病的主要方法。
为了解大理猪瘟、蓝耳病的群体免疫状况，于2020年6月对大理某规模化猪场进行抽血采样，血清检测抗体，并对其免疫情况进行分析。
1材料与方法1.1猪场概况本次调查点选自大理某规模化养殖场，该场属于自繁自养二元母猪场，现母猪存栏212头，公猪6头，产房仔猪存栏386头，保育舍仔猪存栏702头，育成舍仔猪存栏916头。
1.2免疫程序本猪场猪瘟和蓝耳免疫都采用普免方式进行免疫。
猪瘟疫苗选用的是青岛易邦猪瘟脾苗，种公猪接种4次/年，剂量2头份肌注；经产母猪4次/年，剂量2头份肌注；仔猪21日龄接种一次，剂量1头份，55日龄加强免疫一次，剂量1头份。
蓝耳疫苗选用的是青岛易邦易蓝净（F92株），种公猪2次/年普免，剂量1头份肌注；经产母猪免疫2次/年，于秋冬两季进行免疫，剂量1头份肌注；仔猪28日龄免疫蓝耳疫苗一次，剂量1头份肌注，55日龄加强免疫一次，与猪瘟疫苗分点注射。
1.3血样采集随机抽取公猪6头、1～2胎次母猪9头、3～5胎次母猪7头、6胎以上的母猪6头、3周龄仔猪5头、7周龄仔猪6头，进行猪前腔静脉采血3～5mL ，按3,000rpm/min 离心10min ，分离血清。
1.4检测方法采用酶联免疫吸附测定试剂盒方法检测抗体，操作方法和结果判定标准均参照试剂盒说明书（猪瘟病毒抗体检测试剂盒厂家：美国IDEXX ；蓝耳病病毒抗体检测试剂盒厂家：美国IDEXX ）。
非洲猪瘟防控技术要点
非洲猪瘟防控技术要点摘要：非洲猪瘟（AfricanSwineFever，ASF）是由非洲猪瘟病毒引起的一种热性、急性、高度接触性传染病，可感染不同品种和年龄段的野猪和家猪，病死率趋于100%。
自1921年发现非洲猪瘟以来，该病毒已席卷全球畜牧业。
给养殖户造成了巨大的经济损失，尽管经过多年的研究，对非洲猪瘟尚无行之有效的疫苗预防和治疗方案，目前仍以及时诊断疫情、隔离扑杀为主要的疾病控制手段。
因此，开发快速、灵敏、准确的检测方法，对非洲猪瘟的防控具有非常重要的意义。
关键词：非洲猪瘟；防控技术；要点引言非洲猪瘟是一种以动物性循环方式为主的传染性疾病。
该病的主要特征是急性、发热、接触性传染、各类器官衰竭、死亡率较高等，因此，一旦发生传染将对养殖业产生不可估量的影响。
这种传染性疾病主要是由于免疫循环系统被破坏而产生的，截至目前，没有有效的疫苗作为防范手段，因此，该类病毒被我国列为一类动物传染病。
近年来，随着经济和对外贸易的不断发展，防范病毒传染面临巨大的措施，为了降低这类传染病的传播范围，需要掌握该病毒的病原学、特征、诊断方式以及检测方式，从而降低该类病毒传播风险。
1非洲猪瘟的特点非洲猪瘟既能在家猪中传播，也能在野猪中传播，但是以家猪为主。
非洲猪瘟能以各种方式进行传播，如通过口腔、呼吸道、蜱虫、未消毒注射针头、一次性针头未替换等方式。
通常非洲猪瘟有4~19天的潜伏期，而康复后的患病猪只仍会携带病毒持续数周或数月。
当非洲猪瘟出现时，应立即隔离扑杀，病毒还会存活在粪便或腐败组织里一段时间，在血液中存活时间可长达18个月之久，因此还应及时对猪舍进行清理和全面消杀。
非洲猪瘟的死亡率较高、持续时间较长、传播速度较快，且很难清除，因此，一旦发现有非洲猪瘟的病例，需要将养殖场内全部猪只进行扑杀，以防止疫情扩散，威胁到周边的养殖户。
对于非洲猪瘟的防控具有很大的难度，主要因为该病传播速度较快、传播范围很广，在一定程度上给疫情防控人员和兽医造成较大压力。
酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用
摘要：酶联免疫吸附法是畜产品质量安全检测常用的快检方法之一，能快速、准确、高效地对相关产品进行检测。
伴随着行业的高速发展，人们对畜产品的需求数量及质量要求也在逐步上升，畜产品的食品安全问题越来越受到重视。
但近年来，畜产品中存在着动物疫病、兽药残留及产品非法添加物等相关问题。
因此，使用快速、准确的检测方法筛查畜产品的质量安全至关重要。
本文以酶联免疫吸附法为主要技术导向，深入剖析其原理，同时对该技术在畜产品快检中的应用情况分层介绍，以期为行业相关研究人员提供依据。
关键词：酶联免疫吸附法；畜产品；检测技术；应用酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用程俊嘉，陈源，刘冬梅（昌吉州畜产品质量检测中心新疆昌吉831100）收稿日期：2023-06-29作者简介：程俊嘉（1990.06—），男，陕西人，畜牧师，硕士研究生，从事畜产品质量检测工作。
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.05.056科研动态中国是畜产品的生产及消费大国，随着世界经济的全球化发展，标有“中国造”的畜产品对外出口比例逐年上升。
但近年来，随着禽流感病毒、非洲猪瘟病毒等疾病的不断肆虐，动物感染疫病的概率也不断增加，畜产品源头安全无法得到保障。
无独有偶，随着生活环境中外源性化学物质的日益增长，包括畜产品在内的日常消费食品也经常被查出含有违禁的化学药物，如瘦肉精、抗生素、雌雄激素类、抗病毒类药物等[1]，这些化学药物在食品中的滥用会导致兽药残留并引发严重的食品安全问题，对消费者的身心健康也具有较大的影响。
国家食品药品监督管理总局也多次发文要求严厉打击畜产品中滥用药物的问题，因此，对畜产品建立快检方法具有重要意义。
1快速检测技术概述畜产品安全快速检测技术是保障畜产品安全的重要技术，主要特点便是操作简易、速度快、成本低廉，能提高检测效率及工作效率，使得监管机构及相关人员能迅速处理突发事件。
同时，使安全的畜产品及时投入市场，使有害的畜产品中断市场流通并快速召回，以防止给人体和环境带来潜在危害。
非洲猪瘟病原学检测方法
《非洲猪瘟病原学检测方法》非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）是一种严重危害全球养猪业的烈性传染病，给世界各国的生猪养殖业带来了巨大的经济损失和社会影响。
及时、准确地检测非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）对于疫情的防控、诊断和扑灭至关重要。
本文将对目前常用的非洲猪瘟病原学检测方法进行详细的介绍和分析，以期为相关领域的研究和实践提供参考。
一、病毒分离培养病毒分离培养是非洲猪瘟病原学检测的经典方法，也是确诊 ASFV 的金标准。
该方法通过将疑似感染组织样本接种到适宜的细胞培养体系中，在特定的培养条件下培养，观察细胞病变效应（Cytopathic Effect，CPE）以及进行病毒的鉴定和分离。
病毒分离培养的优点是具有高度的特异性和敏感性，能够直接检测到病毒的存在和增殖。
然而，该方法也存在一些局限性。
病毒分离培养需要较长的时间周期，通常需要数天到数周甚至更长时间才能观察到结果，不利于疫情的快速诊断和及时防控。
病毒分离培养对实验条件和技术要求较高，需要专业的实验室设备和熟练的技术人员，操作较为复杂且成本较高。
一些弱毒株或变异毒株可能在细胞培养中难以分离和鉴定，从而影响检测的准确性。
二、实时荧光定量 PCR 技术实时荧光定量 PCR（Real-time Fluorescence Quantitative PCR）技术是目前非洲猪瘟病原学检测中应用最为广泛、最具发展潜力的方法之一。
该技术基于 PCR 原理，通过特异性引物和荧光探针，在 PCR 反应体系中实时监测荧光信号的变化，从而定量检测 ASFV 的核酸。
实时荧光定量 PCR 技术具有以下显著优点。
检测速度快，一般几个小时内即可获得结果，大大缩短了检测周期，能够满足疫情快速响应和处置的需求。
灵敏度高，可以检测到极低浓度的病毒核酸，提高了检测的准确性和可靠性。
特异性强，能够特异性地识别 ASFV 核酸，避免与其他病毒的交叉干扰。
猪瘟CSF抗体酶联免疫分析ELISA
猪瘟（CSF）抗体酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中猪瘟（CSF）抗体含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪瘟（CSF）抗体水平。
用纯化的猪瘟（CSF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入猪瘟（CSF），再与HRP标记的猪瘟（CSF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的猪瘟（CSF）抗体呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪瘟（CSF）抗体浓度。
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：225ng/L ×1瓶×1瓶2-8℃保存标准品稀释液×1瓶×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液20ml×1瓶(20倍) 20ml×1瓶（30倍）2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
用酶联免疫吸附试验对猪瘟免疫及抗体效价监测的效果分析
用酶联免疫吸附试验对猪瘟免疫及抗体效价监测的效果分析罗毅
【期刊名称】《畜牧市场》
【年(卷),期】2005(000)008
【摘要】为切实了解、掌握个体规模养猪场猪瘟免疫情况,使猪瘟等动物重大疾病得到更好控制,2003年8月,我们就两个个体养猪场随机抽取了90头猪血清,用酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并对有关情况进行了进一步的分析.结果表明,两个猪场猪瘟免疫结果不够理想,还需进一步加大力度,采取切实有效措施,提高猪只的有效免疫率,确保养猪业健康发展.
【总页数】3页(P139-141)
【作者】罗毅
【作者单位】潼南县畜牧局
【正文语种】中文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟抗体发现隐性猪瘟 [J], 周广森
2.应用单抗酶联免疫吸附试验对仔猪猪瘟超前免疫抗体的监测 [J], 张厚芝;裴严军
3.用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟抗体发现隐性猪瘟 [J], 周广森;王学玲;苗志兰;孙丽娟
4.用ELISA对猪瘟免疫抗体效价监测的效果分析 [J], 尹杰;李洁萍
5.应用单抗酶联免疫吸附试验监测猪瘟兔化弱毒细胞苗免疫抗体的试验观察 [J], 靳兴军
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用酶联免疫吸附试验技术检疫猪瘟1700字
用酶联免疫吸附试验技术检疫猪瘟1700字摘要：采用酶联免疫吸附试验，确诊甘肃天水一起疫情引起发病的原因为猪瘟病毒。
并从猪瘟的流行病学调查、检验诊断等方面进行了系统的论述。
作文/关键词：猪瘟；检疫；病因1病例2011年5月23日，本人及其他小组成员在天水市益康生猪定点屠宰厂在宰前检疫时发现生猪贩运户崔某承运的8头生猪，其临床症状表现为：患猪精神高度沉郁，发烧，寒战。
体温达41℃以上稽留不退，背拱起，有些可见全身性痉挛现象。
但某个别猪没有明显临床症状就死亡，根据其症状初步诊断为猪瘟，为了调查传染源和控制疫情的进一步蔓延，经我小组研究决定，严格按照《重大动物应急条例》的有关条款，先封锁屠宰场，再上报疫情，并对崔某做了笔录。
2流行调查经调查：由于气温变化较大，该养猪场有11头猪发病，猪群受传染后，先几头发病并呈急性死亡，病猪不断增加，3周达到了流行高峰。
8头猪因治疗无效而贩卖给崔某，周围其他的养殖户不少的猪也有相同的症状。
所以及时采取了8头病猪血液，以待实验室检验。
3酶联免疫吸附试验（ELISA）3.1实验材料酶标SPＦ、待检血清、猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清、0.01 mol/L PBS、封闭液2 mol/L H2SO4溶液、3%H2O2、pH9.6碳酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、OPD、酶标板、酶联检测仪、微量加样器、tip头。
3.2实验内容及操作程序包被：用碳酸盐缓冲溶液稀释猪瘟病毒抗原至1 ug/ml，以微量加样器每孔加样100 uL,置湿盒内37℃包被2～3 h。
1）洗涤：以含0.05%吐温的PBS冲洗酶标板，共洗涤5次，每次3 min。
封闭：以微量加样器在每孔内加1%PBS封闭液200ul,置湿盒内37℃封闭3 h。
2）洗涤：以含0.05%吐温的PBS冲洗酶标板，共洗涤5次，每次3 min。
加待血清：以微量加样器在每孔内加100uLPBS，然后在酶标板的第1孔加100 uL待检血清，以微量加样器吸几次混匀后，吸100uL加至第二孔，依次倍比稀释至第10孔，剩余的100 uL弃去，置湿盒内37℃作用2 h。