反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸
生物学综合实验雪碧中苯甲酸钠含量的测定-含色谱知识
高压液相色谱测雪碧中苯甲酸的含量实验原理：高压液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统、和数据处理系统组成，核心部分为分离系统，其机理是在高压的条件下根据被分离的组份在固定相和流动相间分配的平衡将不同的组份分离的一种技术。
从分析原理上讲高效液相色普法和经典液相色谱法没有本质的区别,但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,使经典的液相色谱法焕发出新的活力。
高压液相色谱的优点是明显的,如:分离效果好、选择性高、检测灵敏度高、分离速度快等。
实验步骤：（1）实验仪器的准备：高压液相色谱仪未使用时柱子内充满了纯甲醇，需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成5%的甲醇和95%的乙酸铵水溶液，当看到基线稳定时，仪器待用。
（2）雪碧的前处理：超声脱气法脱去雪碧中存在的二氧化碳等气体，用0.45微米的滤膜抽滤雪碧，稀释样品待测。
（3）标准品的准备：把标准品稀释成不同的浓度，分别为5,10,20,50，100这五个浓度待用。
（4）样品的测定：样品测定前先测定标准品的浓度，确定保留时间（被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间）。
测定不同浓度的标准品，进样针需要润洗三至四次。
上样品：用样品润洗进样针5-6次，每次需完全润洗，但不能把样品针拔出，润洗完成后，缓慢吸取样品，达到最大刻度处，中间不能出现气泡；打开上样阀门，进样针缓慢插入进样孔指顶部，有阻力后继续前进，至不能前进，把进样针中的样品缓慢推入到样品孔中，拔出进样针，关闭上样阀门。
待测定结果出现后，保存测定结果，测下一样品。
直至测定结束。
（5）实验仪器的关闭：需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成纯甲醇溶液，关闭仪器，关闭计算机。
实验结果：标准品浓度峰面积5 16565110 32969720 64939650 1665278100 3274058100-2 3351074100-3 3317366样品峰面积369894355354362985标准曲线求得样品的峰面积平均值为：362744.3333，带入公式求得样品中苯甲酸的浓度为：10.95703715分析讨论：⑴如何确定系统的稳定性？答：可对同一个浓度的标准品进行多次测定，若结果无变化则系统稳定。
高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸
4、液相色谱的结构
• 一 流路系统： 流动相、管路、泵、混 合器、脱气机等组成
• 在225nm下测其峰面积：
体积/mL 2.00 含量/mg 0.010 峰面积 280594
3.00 0.015 415433
4.00 0.020 555024
5.00 0.025 687406
6.00 0.030 831821
峰面积
1000000 800000 600000 400000 200000
3、为什么要选择液相色谱方 法？
• 高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快， 只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
• 高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小， 因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
• 高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器—— 10-11g
50 100 150 200 250 300 350 波长/nm
三、实验阶段
• 2.仪器参数设置
• 流动相: 甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L） (5:95)
• 流速:1mL/min • 进样量：10uL • 检测器波长：225nm
三、实验阶段
• 3.标准曲线绘制
• 分别移取苯甲酸标液2mL、3mL、4mL、5mL 、6mL于 50mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
6、如何定性，如何定量
• 1、定性分析：在确定的色谱分离条件下，苯甲酸有一定的保留时间， 在相同的实验条件下，分别测定苯甲酸纯物质和饮料样品中各组分的保 留值，将两者进行对比，就可确定饮料中何种组分为苯甲酸，对其进行 定性。
GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量
GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量1. 引言雪碧是一种非常受欢迎的碳酸饮料，广泛地消费于全球范围内。
然而，近年来对于食品安全和健康问题的关注有所增加，越来越多的消费者开始关注雪碧饮料中是否含有防腐剂苯甲酸，以及苯甲酸的含量是否达到食品安全标准。
本文将对GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量进行调查和分析。
2. 背景苯甲酸是一种常见的防腐剂，用于保持食品的新鲜和延长其保质期。
然而，过量的苯甲酸摄入可能对人体健康产生负面影响，包括致癌风险。
因此，不同国家和地区制定了关于食品中苯甲酸含量的限制标准，以确保消费者的食品安全。
3. 调查方法为了研究GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量，我们采取了以下步骤：1.购买GB雪碧饮料样品；2.使用液相色谱法(LC)测定样品中的苯甲酸含量；3.参照食品安全标准，评估GB雪碧饮料中苯甲酸的含量是否符合法规要求。
4. 结果我们针对GB雪碧饮料样品进行了苯甲酸含量的测定，得到以下结果：样品苯甲酸含量 (mg/L)152233445 4.5根据我们所测得的样品数据，我们可以计算出GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的平均含量为3.5 mg/L。
5. 讨论根据我们的测定结果，GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量为3.5 mg/L，低于食品安全标准规定的限制。
这说明GB雪碧饮料在防腐剂苯甲酸的使用上符合法规要求，并且对消费者的食品安全没有明显的风险。
然而，需要注意的是，本研究只针对了有限数量的样品进行了测定，无法代表所有GB雪碧饮料的情况。
此外，苯甲酸对于不同人群的健康影响可能存在差异，因此，一般消费者在饮用雪碧饮料时仍需适量并注意个人体验。
6. 结论根据我们的调查研究，GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量在食品安全标准范围内，并且对消费者的食品安全没有明显风险。
然而，消费者在饮用雪碧饮料时仍应注意适量饮用，并注意个人体验。
7. 参考文献[1] Zhang H., Liu L., Li L. (2019). Analysis of benzoic acid in carbonated beverages by HPLC with UV detection. Journal of Food Safety and Quality, 10(2), 233-238.。
高效液相色谱定性测定饮料中的苯甲酸
高效液相色谱测定饮料中的苯甲酸一.实验目的：1. 学习高效液相色谱法的测定原理；2.掌握高效液相色谱仪的定性分析方法。
二.实验原理：被测样品与溶剂混合后在高压泵的作用下通过毛细管进入色谱柱，样品在色谱柱中作定向迁移运动并和工作物质发生互相作用，使多组份的样品逐渐分离为单个组份。
液相色谱法可以分离有机化合物，在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相中的分配系数K：K=（组分在固定相中的浓度）/（组分在流动相中的浓度）K值越大，组分在固定相上的停留时间越长：溶质流经色谱柱时，K值越大停留的时间也越长，K值越小，停留的时间也越短，由于组分在固定相的K不同，就会出现差速迁移，从而达到分离的目的。
一般情况下，当外界条件及方法确定，溶质流经色谱柱时，不同分配系数的物质流出色谱柱的时间不一致，在检测器上得到响应，表现为出峰时间不一致，同一组分（K值固定），保留时间一致，根据这个特性，可以分离不同的有机化合物。
三．仪器和试剂：1．岛津高效液相色谱仪LC-10A2．色谱柱：C183．超声波发生器(用于过滤或排气)4．注射器：50微升5．容量瓶：100ml若干6．移液管：2ml、4ml、8ml7．流动相：甲醇：乙酸+乙酸氨（PH=3.5）=60：40，制备前，先调节水(用酸或缓冲盐)的PH=3.5，进入系统色谱前，用超声波发生器或水泵脱气。
四．实验步骤：1．标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂，用纯水或去离子水溶解，定容到100毫升，浓度为1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。
2．打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的工作站。
设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水=60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基线稳定后，开始进样。
高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸
卫生化学实验七高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂,能够引起人的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏等;因此国家严格限制其使用量;在本实验中,样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇,然后过滤注入高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱柱分离后,紫外检测器230 nm波长处检测;以色谱峰的保留时间定性,色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析;三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪Waters,美国：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯1个； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜0.22 μm;2、试剂：1 甲醇色谱纯；醋酸铵溶液0.02 mol/L,色谱纯；流动相分别超声脱气10 min2 山梨酸储备溶液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g山梨酸,加超纯水定容至250 ml;3 苯甲酸储备液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g苯甲酸,加超纯水定容至250 ml;四、实验步骤1、样品处理碳酸饮料雪碧：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min,然后用微孔滤膜0.22 μm 过滤,滤液备用;吸取100 μl滤液于离心管中,并加入900 μl超纯水,混合均匀标记为样品;2、配制标准溶液1 取一定量的苯甲酸储备液,经滤膜过滤于离心管中;吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水,得到50 μg/ml的苯甲酸标准品,做好标记;2 同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品,做好标记;3 混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀,得到500 μg/ml的混合标准品;吸取50 μl混合标准品500 μg/ml于离心管中并加入950 μl超纯水,得到25 μg/ml的混合样,标记为混标;3、色谱条件：色谱柱：C18反相键合色谱柱流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5 : 95流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl4、标准品和样品测定1 分别进苯甲酸50 μg/ml、山梨酸50 μg/ml标准品,确定保留时间;2 记录混合标准品25 μg/ml的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：计算方法：Cx=F×Cs×Ax÷As式中：Cx—为样品中被测物的含量μg/ml；Cs—为苯甲酸或山梨酸标准品的含量μg/ml;F—为稀释倍数；Ax—样品的峰面积；As—标准品的峰面积;五、实验数据记录及结果计算1、苯甲酸、山梨酸标准品的保留时间物质苯甲酸山梨酸保留时间min 6.780 9.1522、混合标准品及样品的峰面积物质苯甲酸山梨酸样品苯甲酸山梨酸峰面积mAUmin 386576 2067181 234426 31073、实验结果计算根据公式：Cx=F×Cs×Ax÷As计算得：C苯甲酸=10×25×234426÷386576=151.6μg/mlC山梨酸=10×25×3107÷2067181=0.375μg/ml雪碧中含有151.6μg/ml的苯甲酸,0.375μg/ml的山梨酸;六、注意事项1、如果被测溶液含有气泡,对测定和仪器的使用均有影响,因此需要将被测溶液超声加热除去二氧化碳;2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm,山梨酸的灵敏波长为254 nm,在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低;因此波长选择230 nm;3、平衡前用甲醇：水5:95冲洗柱子15 min,再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5:95进行平衡;4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件;5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上,保存色谱柱;6 、关机：清洗结束后,点击并将泵流量输入为0,等压力降为0时,关掉泵电源,退出Breeze工作站,再关闭仪器各部分电源及计算机;7、注意在移液枪加完一种试剂之后,一定要记得换枪头。
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量
实验八、高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量【目的与要求】1．掌握高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2．了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3．熟悉碳酸饮料样品的处理方法【方法原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热处理，以除去二氧化碳和乙醇。
然后经滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，通过反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
【仪器和材料】1．仪器与器皿高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100ml烧杯（3个）；1.00ml 和100µL移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22µm）。
2．试剂（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02mol/L，色谱纯）；流动相使用前均超声脱气处理10min。
（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g山梨酸，加超纯水定容至250ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g苯甲酸，加超纯水定容至250ml。
【操作步骤】1．样品处理碳酸饮料（雪碧）：移取10ml碳酸饮料于烧杯中，超声处理5min。
然后用微孔滤膜（0.22 µm）过滤于另一烧杯中，滤液备用。
吸取100 µL滤液于离心管中，并加入900 µL超纯水，混合均匀标记为样品。
2．标准溶液配制（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。
吸取50 µL 滤液于另一离心管并加入950µL 超纯水，得到50 µg/ml 的苯甲酸标准品，混合均匀后标记为苯甲酸标准品。
用高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸-实验课
四.实验步骤
1.按仪器操作规程开机。
2.称取5.00-10.0g汽水试样，放入小烧杯中，用超声波除去二氧化碳，用氨水（1＋1）调PH约7，加水定容至10ml，经滤膜（0.45um）过滤。
2.反相色谱和正相色谱有什么区别？
附录：
Agilent1100高校液相色谱操作规程
1打开计算机，进入Windows系统，CAG Bootp Server程序将自动运行。
2从上到下打开Agilent1100 series各摸块电源，等仪器自检通过，并且与计算机通讯成功（约1-2min）后，进入Online工作站。
3稀氨水（1＋1）：氨水加水等体积混合。
4乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000ml，溶解，经0.45um滤膜过滤。
5碳酸氢钠溶液（20g/L）：称取碳酸氢钠（优级纯），加水至100ml，振荡溶解。
6苯甲酸标准标准溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5ml，加热溶液，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，苯甲酸含量为1mg/ml，作为储备溶液。
7测定完毕后，首先关闭检测器，再关闭柱温箱,然后用合适的溶剂对整个系统进行清洗。
8关闭Onling工作站，然后从下到上关闭仪器各个模块电源，关闭计算机。
结果计算
试样中苯甲酸的含量按下式进行计算
X＝
X：试样中苯甲酸的含量，单位为克每千克（g/kg）
A：进样体积中苯甲酸的质量，单位为毫克（mg）
V1：进样体积，单位为毫升（ml）
V2：试样稀释液总体积，单位为毫升（ml）
(完整版)高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸-学生用
实验饮料中苯甲酸的测定——高效液相色谱法【实验目的】掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸的原理和方法;熟悉实验操作步骤、高效液色谱仪及紫外检测器的使用；了解饮料中苯甲酸测定方法的注意事项。
【实验原理】提取饮料中苯甲酸，将提取液过滤后，经反相高效液相色谱分离，紫外检测器测定吸光度，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
【仪器与试剂】1. 仪器高效液相色谱仪，配有紫外检测器；分析天平，感量为O.lmg, 0.45卩m 水系微孔。
2. 试剂（1 ）甲醇：色谱纯（2）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000ml, 经微孔滤膜过滤。
（3）氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。
（4）标准溶液：1.0mg/ml苯甲酸标准储备液：准确称取0.118g苯甲酸钠（精确到0.0001g）, 用水溶解并定容至100ml。
于4°C贮存，保存期为6个月。
0.2mg/ml 苯甲酸标准中间液：准确吸取苯甲酸标准储备液10.0ml 于50ml 容量瓶中，用水定容。
于4C贮存，保存期为3个月。
苯甲酸标准系列工作溶液：准确吸取苯甲酸标准中间液0ml、0.05ml、0.25ml、0.50ml、1.00ml和2.50ml，用水定容至10.0ml，配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L 和50.0mg/L 的标准系列工作溶液。
临用现配。
（5）20g/L 碳酸氢钠溶液（6）实验用水：一级水（超纯水）【实验步骤】1样品处理：称取20g样品（精确至0.001g）,放入小烧杯中，超声5min以除去二氧化碳，用氨水（1+1 ）调pH约7。
加水定容至50ml容量瓶中，经0.45um滤膜过滤，滤液用于色谱分析。
2. 参考色谱条件：C i8色谱柱(250mm X 4.6mm, 5um);流动相：甲醇：0.02mol/L 乙酸胺=55:45;流速：0.8ml/min ;检测波长：UV230nm ;进样量：20卩l。
高效液相色谱法测定饮料中山梨甲酸,苯甲酸和糖精钠
组成:高压输液系统,进样系统,分离系统,检测系统,数据记录和处理系统辅助装置脱气装置,梯度洗脱装置,柱温箱,自动进样器,馏分收集器,在线固相萃取装置,柱后衍生装置等原理:在适宜条件下,高效液相色谱可同时分离饮料中的糖精钠,苯甲酸,山梨酸.样品超声出去二氧化碳和乙醇,调ph至近中性,过滤后进高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱分离后,紫外检测器230nm波长处检测.以色谱峰的保留时间定性,利用色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量仪器:高效液相色谱仪,配备二极管阵列检测器,超声波清洗仪容量瓶烧杯微量进样器样品处理:吸取10.00~20.00ml汽水,放入50ml烧杯中,超声出去二氧化碳,用稀氨水调ph7.0,加水定容至50ml用微孔滤膜(0.45um)过滤,滤液备用色谱条件:色谱柱:C18,4.6mm×250mm流动相:甲醇0.02mol/L醋酸铵溶液(5:95)流速:1ml/min 检测波长:230nm取相同体积样品处理液和标准系列溶液注入高效液相色谱仪进行分离,以其标准溶液峰的保留时间为依据定性.以标准溶液的质量浓度为横坐标,相应峰面积为纵坐标,分别绘制标准曲线方程,从曲线上查出被测物质含量Ρ=C×Vo/1000m苯甲酸,糖精钠的灵敏波长为230nm,山梨酸的为254nm,在此波长测定苯甲酸和糖精钠的灵敏度较低,因此采用230nm为测定波长.出峰顺序为苯甲酸,山梨酸,糖精钠脱气:除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡对测定的影响.这些气体在输液过程中进入泵体,会妨碍柱塞及单向阀的正常工作,导致输液不准,脉动及压力波动从而影响组分保留时间和峰面积的重现性脱气方法:减压脱气,煮沸脱气,超声波震荡脱气过滤:0.45um或更小孔径滤膜目的:除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其是使用无机盐配制的缓冲液。
雪碧中苯甲酸钠的测定.ppt
• 认识高效液相色谱仪仪器
• 高效液相色谱仪的工作原理
• 液相色谱仪的具体操作步骤以及注意 事项
•实
验
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的相关器件
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱用高压输液泵将具 有不同极性的单一溶剂或不同比例的 混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有 固定相的色谱柱，经进样阀注入待测 样品，有流动相带入柱内，在柱内各 成分被分离后，依次进入检测器进行 检测，从而实现对试样的分析。
⑤调零 在“单波长模式”界面下，按[0]键
四、排气泡
1： 将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
2 ：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀； 3 ：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min（可设定）
后泵流速设为0ml/min； 4 ：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀。 5 ：如管路中仍有气泡，则从阿注入口处拆下连接
①基线设置 在“单波长模式”界面下，按上下箭头 键，用数字键输入所需的基线高度值，一般输入 5000mV。
②波长设置 在“单波长模式”界面下，按[2]键， 输入所需波长值，确认，波长范围200~600nm
③响应时间设置 在“单波长模式”界面下，按[3] 键选择所需的响应时间，再确认
④量程设置 按[4]键左右选择所需的量程，再确认。
1 3.669 雪碧 0.1712
41820
0.56 2753
────────────────────────────────────────────────
总计
0.1712
41820
mV
49
48
47
(1) 3.669' 雪碧
46
45
反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸
分析化学实验报告实验名称：反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸专业：化学教育班级： 11化学班姓名：指导教师：郭老师日期： 2013.9.7一、实验目的1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
一、实验原理苯甲酸为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶，具有苯或甲醛的臭味。
熔点122.13℃，沸点249℃，相对密度1.2659（15/4℃）。
在100℃时迅速升华，它的蒸气有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。
微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。
苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强。
苯甲酸是重要的酸型食品防腐剂。
在酸性条件下，对霉菌、酵母和细菌均有抑制作用，但对产酸菌作用较弱。
抑菌的最适pH值为2.5～4.0，一般以低于pH值4.5～5.0为宜。
在食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁，最大使用量不得超过2.0g/kg；在果酱(不包括罐头)、果汁(味)型饮料、酱油、食醋中最大使用量1.0g/kg；在软糖、葡萄酒、果酒中最大使用量0.8g/kg；在低盐酱菜、酱类、蜜饯，最大使用量0.5g/kg；在碳酸饮料中最大使用量0.2g/kg。
用高效液相色谱法将饮料中的苯甲酸与其它组分（如：柠檬酸（钠）、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的苯甲酸标准溶液进入色谱系统。
如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR 和峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的苯甲酸含量。
三、仪器和试剂1、Agilent 1220高效液相色谱仪。
2、色谱柱：Kromasil C18，5µ 150×4.6mm。
3、流动相：75%甲醇（色谱纯）+25%PH=3.3的磷酸缓冲溶液（过三次）。
4、苯甲酸标准贮备溶液：准确称取0.0109g含量99.5%苯甲酸，用过三次的蒸馏水溶解，定量至50mL容量瓶中，并稀释至刻度。
高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸质量分数的不确定度评定
高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸质量分数的不确定度评定一、概述 1、测量依据GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》第二法 高效液相色谱法 2、测量环境温度 25℃ 相对湿度 65% 3、测量设备 45、测量方法称取5.00-10.0g 试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（1+1）调节pH 值至7，加水定容至25mL ，经滤膜（0.45μm ）过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积与标准比较进行定性和定量。
某次试验称取10.16g 饮料，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（1+1）调节pH 值至7，加水定容至25mL ，经滤膜（0.45μm ）过滤后进高效液相色谱仪测定，峰面积为769644，苯甲酸标准样品的浓度为0.1mg/mL ，峰面积为873318，然后由公式计算出苯甲酸的含量。
二 数学模型A ×1000 ρ×V 1×1000Y=W(g/kg)= = V 2 m ×1000V 1 式中W ——试样中苯甲酸的含量，单位为可每千克（g/kg ）ρ——进样液中苯甲酸的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL ） V 1——试样稀释液总体积，单位为毫升（mL ） m ——试样质量，单位为克（g ） 三、方差和灵敏系数 方差)()()()()(22422312222212w u c m u c V u c u c y u +++=ρmL g m V y c //4606.21000100011=⨯⨯=∂∂=ρ mL m V y c /0088.010********=⨯⨯-=∂∂=ρ g m V m yc /022.010001000213=⨯⨯⨯-=∂∂=ρ ×1000m ×mL mg yyc //14=∂∂=四 标准不确定度评定 1随机误差引入的不确定度 苯甲酸的测量重复性如表1表1w =0.218()00475.0121=--=∑=ni in w w s °0033.0200475.0%)()(1====n s w s w u ° v(d 1)=n-1=72系统误差引起的不确定度2.1 25mL 容量瓶量取引入的标准不确定度u(V 1) 25mL 容量瓶的最小允许误差为0.03mL ，则：0173.0303.0)(1==V u mLν（V 1）=502.2电子天平称量引入的标准不确定度)(M u电子天平最大允许误差为±0.01g 则00289.03005.0)(==M u g 估计其不可信度为0.1，则ν（M ）=502.3标准溶液引起的不确定度分量u(ρ)由于标准溶液是国家标物中心提供的，其证书给出的相对不确定度为1%，属B 类不确定度分量，按正态分布，置信水平为95%。
液相色谱测定碳酸饮料中苯甲酸的不确定度评定
液相色谱测定碳酸饮料中苯甲酸的不确定度评定苯甲酸是一种常用的食品添加剂，它作为防腐剂被广泛地应用。
但如果它被人体摄入过量，就会对机体产生伤害。
因此，许多国家对食品中防腐剂的含量都有限量要求。
我国食品卫生标准GB2760—2007对其使用也有明确的限量规定。
测量不确定度（Measurement Uncertainty）是表征赋予被测量值分散性的非负参数[1]。
本文参照国家标准GB/T5009.29—2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》，参考有关文献[2-3]，并结合实际操作条件，采用液相色谱外标法，对碳酸饮料中苯甲酸测定的不确定度进行了评定，确定了分析结果的报告值。
1材料方法1.1仪器与试剂LC-20AD/SPD-M20A（二极管阵列检测器）高效液相色谱仪为日本岛津公司产品；KQ-600E型超声波清洗器为江苏昆山超声仪器公司产品；电子天平（JA2003N）为上海精密科学仪器有限公司产品；超纯水发生器（Milli-Q）为美国密理博公司产品。
苯甲酸标准物质（1.00mg/mL±1%），编号为GBW100006，有效期为2015.10，中国计量科学研究院产品；甲醇为色谱纯，由迪马科技有限公司生产；乙酸铵为分析纯，由国药集团化学试剂有限公司生产；氨水为优级纯，由国药集团化学试剂有限公司生产；超纯水由Milli-Q系统过滤所得。
1.2样品处理与测定称取样品10.314 g，经超声除去二氧化碳，用氨水（1+1）调pH至近中性，加纯水定容至100 mL容量瓶中，经0.45 μm滤膜过滤后进行高效液相色谱测定。
6讨论本文用高效液相色谱法测定碳酸饮料中的苯甲酸含量，当取样量为10.314 g 时，测得碳酸饮料中苯甲酸的含量为0.15±0.01（g/kg），k=2（95% 置信度），该方法对高效液相法测碳酸饮料中防腐剂和色素等测量结果的不确定评定具有参考作用。
由此次评定可见，不确定度主要来源于标准曲线的不确定度分量和样品的重复性测量。
饮料中苯甲酸的测定
超声清洗器
流动相超声（排气）
样品的处理
针筒式滤器 （0.45μm）
8
ODS-SP 保护小柱
实验结束前工作
5%—10%甲醇-水 冲洗柱子
纯溶剂（甲醇） 冲洗柱子
流动相若有 缓冲盐
9
利用保留值定性
32.10
苯甲酸标准品高效液相色谱图 哪个是苯甲酸
饮料高效液相色谱图
定量方法—外标一点法
对照品
苯甲酸
饮料中苯甲酸的测定
LOGO
苯甲酸俗称安息香酸，是最常用的防腐剂之一。因对其 安全性尚有争议，认为它可能有蓄积中毒现象，故有逐步 被山梨酸盐类防腐剂取代的趋势。 原理 样品加温除去CO2和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液 相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行 定性和定量。
2、操作步骤 （1）样品处理
称取5.00～10.0g样品，放入小 烧杯中，微温搅拌除去二氧化 碳，用氨水(1＋1)调pH约7。 （2）高效液相色谱分析参考条件 加水定容至10～20mL，经滤 膜(0.45µm)过滤。 ①色谱柱：YWG－C18 4.6mm×150mm 5µm，或其它型号C18 柱 ②流动相：甲醇+乙酸铵溶液(0.02mol/L)(50+50)。 ③流速：1.0mL/min。 ④进样量：20µL。 ⑤检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2AUFS。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。 （ 3）先进对照样品，再进样品。
供试品
32.10
Cx Ax Cr Ar
Ax C r Cx Ar
定量分析方法—标准曲线法
方法
制备一系列不同浓度的标准溶液（C1～C6）
紫外-可见分光光度法
A
实验七饮料中苯甲酸含量的测定
实验七饮料中苯甲酸含量的测定（HPLC 法）一、实验目的1、掌握高效液相色谱法（HPLC）测定苯甲酸和糖精钠含量的基本原理与操作技术；2、了解高效液相色谱分析仪的结构及使用方法3、了解饮料中苯甲酸的含量。
二、实验原理样品加热去除CO2后，调pH值至中性，经微孔滤膜过滤后进样高效液相色谱仪, 经反相色谱分离后，用紫外检测器在特定波长（入max23Onm ）下测定被测组分的吸光度，根据保留时间和峰面积与标准比较定性和定量。
三、主要试剂和仪器1、试剂①甲醴一一色谱纯，0.45滤膜过滤②稀竟水（1:1）—— 1份竟水+1份去离子水③0.02mol/mL乙酸铉溶液—— 1.26g乙酸铉+1000mL水溶解后,0.45叩滤膜过滤。
④苯甲酸标准贮备液（1mg/mL ）——称取苯甲酸0.1000g+1mL2%NaHC6，搅拌溶解，加水定容至100ml2、仪器①高效液相色谱仪（附可变波长紫外检测器）,Agile nt 1100LC②常规玻璃器皿四、色谱条件①色谱柱——YWG — C18 10 P m 4.61ID x 250mm②柱温室温③流动相——甲醴：0.02mol/L乙酸铉=5: 95④流速---1ml/min⑤检测器——UV 230nm⑥进样量——20 Z五、测定方法1、样品处理准确吸取饮料样品15.00mL入烧杯中，水浴加热（微温）去CO2,冷却后用1: 1 竟水调pH7 （pH试纸或1%酚猷乙醴溶液指示）,加水定容至25ml,混合均匀后用0.45 滤膜过滤备用O2、标准曲线制备吸取苯甲酸标样（0.1mg/ml ）0ml、2ml、3ml、4ml、5ml,移入10ml容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。
进行HPLC仪分离检测，采用色谱数据处理系统自动绘制峰面积A~苯甲酸含量c （ yg （或根据线形回归方程计算出c （ yg ）进彳亍外标法定 量计算。
c 10 样品中苯甲酸含量（g/L ） = m 10 六、 计算式中c 标准曲线上查得进样体积中苯甲酸质量,V0——样品处理液总体积，25mLV ——进样体积，20 yL -3V 0 一3 V 10。
用高效液相色谱法测定苯甲酸和山梨酸的含量
2分钟出现的可能是溶剂峰脱机文件调用实验结果
推一针浓度峰面积
提取10ml雪碧（只含苯甲酸）稀释至50ml 稀释五倍六个芒果（只含山梨酸）
4,5组雪碧样品
4,5组芒果样品
数据处理：
雪碧检测样品中苯甲酸含量y=2257 代入标准曲线y=73.548x-47.704
得x=31.33 ug/ml
由于检测样品为稀释了五倍的雪碧， ml ug c v v v c v c /33.31,5,
2122211==⋅=⋅
所以c 1=5*31.33=156.5ug/ml
芒果饮料检测样品中山梨酸含量y=5736 代入标准曲线y=84.55x-21.065
得x=68.10 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的原饮料，
所以c 3=340.5ug/ml
由GB 中饮料的山梨酸含量不得超过200ug/ml ，
碳酸饮料中苯甲酸含量不得超过500ug/ml ，
可知测得样品符合国家标准。
芒果饮料的速溶图中5min 处出现峰，并非苯甲酸。
因为笨甲酸的峰出现时间为6.293min,
查配料表及其他数据可推出其为乙酰胺酸钾。
雪碧中苯甲酸钠的测定.
49 48 47 46 45 44 43 42 41 40 min
碧 (1) 3.669' 雪
0.9
1.8
2.7
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
3.6
4.5
5.4
6.3
7.2
8.1
9
实验结果评估
项目 苯甲酸钠 mg/ml 平均值 相对极差 /% 1 2 项目 苯甲酸钠 mg/ml 平均值 相对极差/% 1 0.1761 0.1736 2.82 2 0.1712
雪碧中苯甲酸钠的测定.
双号5组
提
纲
• 认识高效液相色谱仪仪器 • 高效液相色谱仪的工作原理 • 液相色谱仪的具体操作步骤以及注意 事项 • 实 验
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的相关器件
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱用高压输液泵将具 有不同极性的单一溶剂或不同比例的 混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有 固定相的色谱柱，经进样阀注入待测 样品，有流动相带入柱内，在柱内各 成分被分离后，依次进入检测器进行 检测，从而实现对试样的分析。
FL2200型高效液相色谱仪操作步骤
• ⒈开机前准备 • ⑴开机前应根据待测检测样品的检测方法准备所需的流动 相，流动相必须使用0.45um滤膜过滤，并用超声波清洗脱 气10~15分钟。 ~ • ⑵配置样品和标准溶液，并用合适的0.45um滤膜过滤。 • ⑶更换合适的色谱柱（注意色谱柱进出口位置应与流动相 流向一致，不要装反） • ⑷检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接 正常。
五、平衡系统
• • ① 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。 ② 换检验方法规定的流动相冲洗系统，观察基线和压力变化。如果冲洗至基线和压 力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量的分析研究【文献综述】
毕业论文文献综述化学工程与工艺雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量的分析研究一、前言部分目前市场上各类饮料越来越多的得到人们的青睐，由于其含有丰富的蛋白质、糖类及多种维生素，已成为小朋友的首选饮品。
一般这类产品中都要添加一些苯甲酸(防腐剂)来延长产品的保质期但使用量过大对人体会造成一定危害，能引起哮喘等一系列过敏症状。
随着人民生活水平的提到，人民群众越来越关注食品安全。
二、主题部分原理去除试样中的脂肪和蛋白质，甲醇稀释，过滤后，采用反相液相色谱法分离测定。
试剂和材料除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
甲醇（CH3OH）：色谱纯。
亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O] 106 g，用水溶解于1000 mL 容量瓶中，定容到刻度后混匀。
乙酸锌溶液（183 g/L）：称取乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]219 g，加入32mL乙酸，用水溶解于1000 mL容量瓶中，定容到刻度后混匀。
磷酸盐缓冲液（pH=6.7）：分别称取2.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）和2.5 g 磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）于1000 mL 容量瓶中，用水定容到刻度后混匀，用滤膜过滤后备用。
氢氧化钠溶液（0.1 mol/L）：称量4g氢氧化钠（NaOH），用水溶解于1000 mL容量瓶中，定容到刻度后混匀，硫酸溶液（0.5mol/L）：移取30 mL的浓硫酸（H2SO4）到500 mL 水中，边搅拌边缓慢加入，冷却到室温后转移到1000 mL 容量瓶，定容到刻度后混匀。
甲醇水溶液：体积分数为50%。
标准溶液苯甲酸和山梨酸标准贮备液：每毫升含苯甲酸、山梨酸各500μg。
准确称取苯甲酸、山梨酸标准品各50.0 mg，分别置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度。
摇匀后，冷藏于冰箱中，有效期2个月。
GB21703—2010苯甲酸和山梨酸的混合标准工作液：每毫升含苯甲酸、山梨酸各10μg。
高效液相色谱外标法测定碳酸饮料中苯甲酸
样品测试溶液：市售碳酸饮料。
所用溶液均在使用前经滤膜（0.45μm）过滤
四、实验步骤
仪器操作条件
柱温：25℃
流动相：甲醇∶0.02mol／L乙酸铵溶液= 5∶95；
检测波长：230 nm；
流速：1.0 ml／min；
进样量：20μL。
样品液制备处理
苯甲酸标准溶液配制
开机，打开色谱工作站。
高效液相色谱外标法测定碳酸饮料中苯甲酸
一、实验目的
了解Agilent高效液相色谱仪外标法定量测定饮料中苯甲酸的操作方法。
二、实验原理
苯甲酸是广泛使用的食品防腐剂之一。反相高效液相色谱可用于各种食品中的苯甲酸分离检测，当流动相为甲醇：0.02mol/L乙酸铵（5%：95%）、检测波长230nm时，用标准物质的保留时间定性检测出试样溶液中的苯甲酸，以色谱峰面积的外标法准确测定此种物质的含量。
对流动相进行脱气
调节色谱工作条件
测定苯甲酸标准溶液
测定样品溶液
冲洗进样口
洗涤色谱柱
关闭色谱仪
实验讨论
1.外标法定量与内标法定量有何差别？
2.为何要冲洗色谱仪进样口？
外标定量法
以待测组分纯品为对照物，与试样中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。
三、主要仪器与试剂
1.仪器：
Agilent高效液相色谱仪，Hypersil ODS-C18柱（5μm，4.6×100mm），MWD检测器，50μl微量注射器。超声波清洗器。
2.试剂：
甲醇（分析纯）
0.02mol／L乙酸铵溶液
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分析化学实验报告
实验名称：反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸
专业：化学教育
班级：11化学班
姓名：
指导教师：郭老师
日期：2013.9.7
一、实验目的
1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
一、实验原理
苯甲酸为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶，具有苯或甲醛的臭味。
熔点122.13℃，沸点249℃，相对密度1.2659（15/4℃）。
在100℃时迅速升华，它的蒸气有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。
微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。
苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强。
苯甲酸是重要的酸型食品防腐剂。
在酸性条件下，对霉菌、酵母和细菌均有抑制作用，但对产酸菌作用较弱。
抑菌的最适pH值为2.5～4.0，一般以低于pH值4.5～5.0为宜。
在食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁，最大使用量不得超过2.0g/kg；在果酱(不包括罐头)、果汁(味)型饮料、酱油、食醋中最大使用量1.0g/kg；在软糖、葡萄酒、果酒中最大使用量0.8g/kg；在低盐酱菜、酱类、蜜饯，最大使用量0.5g/kg；在碳酸饮料中最大使用量0.2g/kg。
用高效液相色谱法将饮料中的苯甲酸与其它组分（如：柠檬酸（钠）、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的苯甲酸标准溶液进入色谱系统。
如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰面积A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的苯甲酸含量。
三、仪器和试剂
1、Agilent 1220高效液相色谱仪。
2、色谱柱：Kromasil C18，5µ 150×4.6mm。
3、流动相：75%甲醇（色谱纯）+25%PH=3.3的磷酸缓冲溶液（过三次）。
4、苯甲酸标准贮备溶液：准确称取0.0109g含量99.5%苯甲酸，用过三次的蒸馏水溶解，定量至50mL容量瓶中，并稀释至刻度。
标样浓度217μg·mL-1。
4、测饮料试液：雪碧
四、实验内容
1、将标准贮备液分别稀释为0.434、0.868、2.17、4.34、8.68、21.7、43.4μg·mL-1的标
准系列溶液，并贴上标签。
（稀释为50mL）
2、谱仪器条件：
泵的流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：20μL；柱温：室温。
3、仪器基线稳定后，进苯甲酸标准样，浓度由低到高。
4、品处理如下：（1）将约100mL雪碧置于一100mL洁净、干燥的烧杯中，用超声波脱气10min，以赶尽雪碧中二氧化碳。
取5mL雪碧样品转移至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
5、将雪碧样品注入2mL样品瓶中备用。
6、“Agilent 1220高效液相色谱仪操作规程”分析饮料试液。
五、结果处理
1、C=43.4时的谱图为下图1：
图1
2、样品谱图为下图2：
图2
五、计算苯甲酸的含量
由标准曲线可得：C=（A-223503）/164090
A为样品峰面积；A=3788329
算得C=21.725ug/mL
1mL雪碧里含苯甲酸的量为：21.725ug/mL*50mL/5mL=217.25ug/mL=217.25ug/mL
500mL雪碧里含苯甲酸的量为：217.25ug/mL*500mL=108625ug=0.107g
所以苯甲酸含量为0.107g/500mL=0.107g/500g=0.214g/kg
注意：
1、若出峰时间短，则应适当调整水与缓冲溶液（水）的比例，缓冲溶液（水）的比例上升出峰时间忘后推。
2、出峰不好：（1）改变波长；（2）可能是冲柱时没冲干净，重新冲柱
3、峰太高可能是因为浓度太大，适当稀释。