黄连生物碱在大鼠体内的代谢转化及分布_王亮
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
小檗碱 :大鼠按照 400 mg· kg-1体重灌胃小檗 碱 。争取在 5 min内灌完 , 以减少误差 。灌胃后分别 于 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3 h后眼眶取血 0.8 mL, 置于肝 素化的离心管中 , 3 000 ×g离心 15 min, 得到血清 0.2 mL, 添加 0.6 mL甲醇 , 漩涡 1 min, 离心 , 上清液 70 ℃ 下烘干 , 再用 0.2 mL甲醇超声溶解 , 离心 , 微孔滤膜 过滤 。按照 2.1色谱条件测定黄连生物碱含量 。 2.4 组织分布 大鼠按照 800 mg· kg-1体重灌胃 黄连总生物碱 。灌胃后 2 h, 宰杀大鼠 , 分取肝脏 、心 脏 、肺 、肾脏 、脾脏 、脑 、血液 。脏器用生理盐水冲洗 表面血迹 , 滤纸吸干 , 称重 , 磨碎 。 用 20 mL甲醇超 声提取 , 取上清液 1 mL, 烘干 , 再用 0.2 mL甲醇超 声提取 , 离心 , 微孔滤膜过滤 。 按照 2.1色谱条件测 定黄连生物碱含量 。 2.5 肠胃推进 大鼠按照 800 mg· kg-1体重灌胃 黄连总生物碱 。 分别在灌胃 1, 2, 3, 4, 5, 6 h处死 , 分别取胃 、小肠 、大肠 , 将器官剪开 , 外翻 , 20 mL甲 醇超声提取 , 离心取上清液 1 mL, 用甲醇稀释至 10 mL, 微孔滤膜过滤 。 按照 2.1色谱条件测定黄连生 物碱含量 。 3 结果 3.1 黄连总生物碱在大鼠体内的药代动力学 对 大鼠灌胃黄连总生物碱后 , 总生物碱在体内的血药 浓度变化见图 1。 大鼠灌胃黄连总生物碱后 2 h左 右 , 小檗碱在 大鼠血 液中 的含量 出现 1 个极大 值 (3.7 mg· L-1 );然后血药浓度下降 , 到 5 h左右出
[ 关键词 ] 黄连总生物碱 ;高效液相色谱法 ;药代动力学 ;分布 ;转化
黄 连 为 毛 茛 科 多 年 生 草 本 植 物 黄 连 Coptis chinensisFranch的根茎[ 1] , 其活性成分 为黄连生物 碱 。石柱黄连 (味连 )含小檗碱 50%左右 , 而小檗碱 、 药根碱 、巴马汀和黄连碱等 4个生物碱之和占总生物 碱的 90%左右[ 2] 。有关小檗碱的药代动力学研究较 多[ 3-4] , 其他黄连生 物碱的药代动 力学研究 相对较 少[ 5] 。中药成分在动物体内的代谢与作用网络具有 “网通虹势 ”规律[ 6-7] :中药材成分群往往是同一母核 的多种衍生物 , 药理作用相似 ;同一母核的有效成分 衍生物群在动物内可以相互抑制 、加速及转化 , 其代 谢网络相容相通 ;动物内存在巨大的与自然界类似的 以 CYP450酶为主导的代谢酶网络系统 , 按 CYP450 进化树的关系对中药及复方成分组群进行代谢和产 生药效 。黄连生物碱的结构类似 , 均是异喹啉类生物 碱的衍生物 。这些生物碱之间在动物体内是否存在 相互之间的转化 , 目前尚未见报道 。
对照品溶液的配制 :精密称取小檗碱 、药根碱 、巴 马汀 、黄连碱对照品各 10 mg, 置于量瓶中 , 加甲醇溶 解并定容至 100 mL, 摇匀 , 配得质量浓度为 100 mg·
· 2017·
第 35卷第 15期 2010年 8月
VoAl.u3g5u,stI, ss2u0e1 0 15
(1.西南大学 药学院 , 重庆 400716;2.西南大学 生命科学学院 , 重庆 400715; 2.铁岭师范高等专科学校 , 辽宁 铁岭 112000)
[ 摘要 ] 目 的 :测定黄连生物碱在大鼠体内的药代动力学 、组织分布 , 及药 根碱 、黄连碱 、巴马汀 、小檗碱 4种生物碱 在大 鼠体内的转化 。 方法 :大鼠分别灌胃 黄连总碱 、小檗碱 , 采用反相高效液相色谱法测定大鼠的血浆 、组织 、胃肠道中黄连 4种生 物碱的含量 。 结果 :小檗碱在大鼠体 内的血药浓度出现 2个峰值 , 达峰时间分 别 2, 5 h, 其中血 药浓度 分别为 Cmax3.7, 2.8 mg · L-1 ;小檗碱在大鼠血液中可以转化为药 根碱 ;给大鼠灌胃黄连总生物碱后 , 小檗碱 在大鼠胃中 的浓度单 调下降 , 而黄连碱 、
3
3.99 ±0.04
0.30 ±0.03
3.3 黄连总生物碱在大鼠体内的分布 文献有关小 檗碱组织分布取点时间为 0.25, 0.75, 6 h[ 9] , 但未对 血药浓度达高峰时间检测 , 根据实验 , 小檗碱达峰值
在 2.0 h左右 , 因此选择在 2.0 h进行组织分布实验 。 黄连生物碱在大鼠各器官中的分布见表 2。小檗碱 主要分布在大鼠的肺中 , 与文献报道一致 [ 9] 。巴马汀 的分布与小檗碱完全类似 , 主要分布在肺中 , 其次分
流动相的配制 :由乙腈与醋酸缓冲体系 (7.7 g醋酸 铵 , 12 mL冰醋酸 , 定容于 500 mL蒸馏水中 )按 30∶ 70组成 , 流速 1 mL· min-1;采 用二极管阵列检测
器 , 检测 波长 345 nm;色 谱柱 ODS-C18 (4.6 mm× 250 mm, 5 μm);进样量 20 μL。
布在肝脏中 。而黄连碱和药根碱的分布与小檗碱和
巴马汀不同 , 主要分布在肝脏中 , 其次分布在肺中 。
第 35卷第 15期 2010年 8月
VoAl.u3g5u,stI, ss2u0e1 0 15
器官
肺 肝 脾 肾 心 脑
表 2 黄连总生 物碱在大鼠组织中的分布
8.07 ±0.09
小檗碱 /μg· kg-1 总生物碱 /μg· kg-1
1257.5 ±7.59 702.2 ±5.90 375.2 ±7.02 228.5 ±5.97 95.5 ±1.67 36.3 ±1.22
2220.2 ±21.07 1863.2 ±10.75
673.0 ±10.81 596.5 ±6.67 269.5 ±2.75 176.0 ±4.44
巴马汀 (批号 080125)、黄连碱 (批号 080213)、 药根碱 (批号 080215)、小檗碱 (批号 080322)等均 购自成都曼思 特生物科 技有 限公司 , 含量 98%以 上 。黄连总生物碱由实验室自制 , 小檗碱 、巴马汀 、 药根碱和黄连碱 4个 生物碱之和为 90%。 甲醇和 乙腈为色谱纯 , 其他试剂为分析纯 。 2 方法 2.1 色谱条件 色谱柱 HypersilC18(4.6 mm×200 mm, 5 μm), 流动相乙腈 -磷酸二氢钾 (28∶72), 流速 1.0 mL· min-1 , 柱温 30 ℃, 检测 波长 345 nm[ 8] 。
1 材料 1.1 动物 SD大鼠 , 体重 (200 ±20)g, 雌雄各半 , 由 重庆医科大学提供, 合格证号 SCXK(渝 )2007-0001。 1.2 仪器与试剂 LC-6AD高效液相色谱仪 (日本 岛津 );KQ5200DA型数控 超声 波清 洗器 ;TG16-W 微量高速离心机 , 组织匀浆器 。
· 2018·
现第 2 个极大值 (2.8 mg· L-1 )。 黄连碱 、巴马汀
和药根碱在血液中的浓度含量较低 (总生物碱中黄
连碱 、巴马汀和黄连碱的含量本身也很低 ), 达峰时 间分别为 2, 5 h。 与文献报道结果类似[ 5] 。
图 1 黄连总碱血药浓度曲线
3.2 小檗碱在大鼠体内的药代动力学 对大鼠单独 灌胃小檗碱后 , 小檗碱在体内的血药浓度变化见表 1。随着时间的增加 , 小檗碱在血液中的含量不断增 加 , 达峰时间为 2 h左右 。同时 , 根据 HPLC分析结 果 , 从大鼠血液中不仅检测到小檗碱 , 还检测到药根 碱 。 在 0.5 h时 , 药根碱在血液 中的质量浓度 达到 (0.44 ±0.02)μg· L-1 , 随着时间延长 , 药根碱的含 量逐渐增加 , 1.5 h达到最大血药浓度 , 然后逐渐下 降 。 表明部分小檗碱在血液中可能转化为药根碱 。
72.4 ±0.73 22.4 ±0.81
黄连碱 /μg· kg-1
312.2 ±6.18 535.2 ±9.74 126.0 ±6.83 163.7 ±6.23
44.2 ±1.14 109.2 ±2.63
巴马汀 /μg· kg-1
376.2 ±5.50 288.0 ±4.52
75.1 ±0.74 41.5 ±0.99 57.4 ±1.08
第 35卷第 15期 2010年 8月
ຫໍສະໝຸດ Baidu
VoAl.u3g5u,stI, ss2u0e1 0 15
黄连生物碱在大鼠体内的代谢转化及分布
王亮 1 , 叶小利2 , 李学刚 1＊ , 陈竹1 , 陈晓丹 3 , 高英 1 , 赵忠启 1 , 黄文文1 , 陈新 1 , 易骏 1
质量 /g
2.033 ±0.145 6 9.956 ±0.043 5 0.478 ±0.072 3 2.342 ±0.109 8 1.058 ±0.068 4 2.033 ±0.094 3
药根碱 /μg· kg-1
274.2 ±4.64 338.7 ±3.86
96.2 ±0.76 162.7 ±5.37
L-1的对照品溶液 ;再取 0.1 mL对照品溶液 , 定容到 100 mL, 得质量浓度为 100 μg· L-1的对照品溶液 。 2.2 动物分组 SD大鼠 , 平衡喂养 3 d后 , 随机分 成 4组 :其中前 3组每组 4只 , 雌雄各半 ;第 4组 12 只 , 雌雄各半 。 第 1组灌胃黄连总生物碱进行血药 浓度试验 ;第 2组灌胃小檗碱进行血药浓度试验 ;第 3组灌胃总生物碱进行组织分布试验 ;第 4组灌胃 总生物碱进行胃肠道推进试验 。 2.3 血药浓度 黄连总生物碱 :大鼠按照 800 mg · kg-1体重灌胃黄连总生物碱 。争取在 5 min内灌 完 , 以减少误差 。 灌胃后分别于 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 h 后眼 眶 取 血 0.8 mL, 置 于 肝 素 化 的 离 心 管 中 , 3 000 ×g离心 15 min, 得血清 0.2 mL, 添加 0.6 mL 甲醇 , 漩涡 1 min, 离心 , 上清液 70 ℃下烘干 , 再用 0.2 mL甲醇超声溶解 , 离心 , 微孔滤膜过滤 。 按照 2.1色谱条件测定黄连生物碱含量 。
表 1 大鼠灌胃小檗碱后血液中生物碱的含 量变化 μg· L-1
t/h
小檗碱
药根碱
0
0
0
0.5
2.05 ±0.05
0.34 ±0.02
1
3.71 ±0.04
0.56 ±0.02
1.5
7.99 ±0.04
1.19 ±0.03
2
9.02 ±0.06
0.49 ±0.05
2.5
6.78 ±0.05
0.42 ±0.04
[ 稿件编号 ] 20091130003 [ 基 金 项 目 ] 重 庆 市 重 大 攻 关 项 目 (CSTC, 2008AA5021, 2010AC5007 );中 央 高 校 基 本 科 研 业 务 费 专 项 资 金 (XDJK2009C095);西南大学优博项目 (kb2009017) [ 通信作者 ] ＊李学刚 , 博导 , 从事天 然活性成 分的分离 纯化 、化学 修饰 、结 构 鉴 定 及 药 理 功 能 研 究 , E-mail:xuegangli2000 @ yahoo.com.cn [ 作者简介 ] 王亮 , 硕士研 究生 , 从事 天然药 物分离 及药理 功能研 究 , E-mail:vip.123@ 126.com
巴马汀和药根碱逐渐增加 , 表明在大鼠的胃中小檗碱可转 化为药根 碱 ;小檗碱 和巴马 汀主要分 布在动 物的肺 部 , 其次分 布在 肝脏中 , 而药根碱和黄连碱 主要分布在动物的肝脏中 , 其次分布在肺部 。 结 论 :小 檗碱可以转 化为药根 碱 , 根 据胃肠道推 进实 验部分解释了小檗碱在血液中出现 2次峰值的原因 。
[ 关键词 ] 黄连总生物碱 ;高效液相色谱法 ;药代动力学 ;分布 ;转化
黄 连 为 毛 茛 科 多 年 生 草 本 植 物 黄 连 Coptis chinensisFranch的根茎[ 1] , 其活性成分 为黄连生物 碱 。石柱黄连 (味连 )含小檗碱 50%左右 , 而小檗碱 、 药根碱 、巴马汀和黄连碱等 4个生物碱之和占总生物 碱的 90%左右[ 2] 。有关小檗碱的药代动力学研究较 多[ 3-4] , 其他黄连生 物碱的药代动 力学研究 相对较 少[ 5] 。中药成分在动物体内的代谢与作用网络具有 “网通虹势 ”规律[ 6-7] :中药材成分群往往是同一母核 的多种衍生物 , 药理作用相似 ;同一母核的有效成分 衍生物群在动物内可以相互抑制 、加速及转化 , 其代 谢网络相容相通 ;动物内存在巨大的与自然界类似的 以 CYP450酶为主导的代谢酶网络系统 , 按 CYP450 进化树的关系对中药及复方成分组群进行代谢和产 生药效 。黄连生物碱的结构类似 , 均是异喹啉类生物 碱的衍生物 。这些生物碱之间在动物体内是否存在 相互之间的转化 , 目前尚未见报道 。
对照品溶液的配制 :精密称取小檗碱 、药根碱 、巴 马汀 、黄连碱对照品各 10 mg, 置于量瓶中 , 加甲醇溶 解并定容至 100 mL, 摇匀 , 配得质量浓度为 100 mg·
· 2017·
第 35卷第 15期 2010年 8月
VoAl.u3g5u,stI, ss2u0e1 0 15
(1.西南大学 药学院 , 重庆 400716;2.西南大学 生命科学学院 , 重庆 400715; 2.铁岭师范高等专科学校 , 辽宁 铁岭 112000)
[ 摘要 ] 目 的 :测定黄连生物碱在大鼠体内的药代动力学 、组织分布 , 及药 根碱 、黄连碱 、巴马汀 、小檗碱 4种生物碱 在大 鼠体内的转化 。 方法 :大鼠分别灌胃 黄连总碱 、小檗碱 , 采用反相高效液相色谱法测定大鼠的血浆 、组织 、胃肠道中黄连 4种生 物碱的含量 。 结果 :小檗碱在大鼠体 内的血药浓度出现 2个峰值 , 达峰时间分 别 2, 5 h, 其中血 药浓度 分别为 Cmax3.7, 2.8 mg · L-1 ;小檗碱在大鼠血液中可以转化为药 根碱 ;给大鼠灌胃黄连总生物碱后 , 小檗碱 在大鼠胃中 的浓度单 调下降 , 而黄连碱 、
3
3.99 ±0.04
0.30 ±0.03
3.3 黄连总生物碱在大鼠体内的分布 文献有关小 檗碱组织分布取点时间为 0.25, 0.75, 6 h[ 9] , 但未对 血药浓度达高峰时间检测 , 根据实验 , 小檗碱达峰值
在 2.0 h左右 , 因此选择在 2.0 h进行组织分布实验 。 黄连生物碱在大鼠各器官中的分布见表 2。小檗碱 主要分布在大鼠的肺中 , 与文献报道一致 [ 9] 。巴马汀 的分布与小檗碱完全类似 , 主要分布在肺中 , 其次分
流动相的配制 :由乙腈与醋酸缓冲体系 (7.7 g醋酸 铵 , 12 mL冰醋酸 , 定容于 500 mL蒸馏水中 )按 30∶ 70组成 , 流速 1 mL· min-1;采 用二极管阵列检测
器 , 检测 波长 345 nm;色 谱柱 ODS-C18 (4.6 mm× 250 mm, 5 μm);进样量 20 μL。
布在肝脏中 。而黄连碱和药根碱的分布与小檗碱和
巴马汀不同 , 主要分布在肝脏中 , 其次分布在肺中 。
第 35卷第 15期 2010年 8月
VoAl.u3g5u,stI, ss2u0e1 0 15
器官
肺 肝 脾 肾 心 脑
表 2 黄连总生 物碱在大鼠组织中的分布
8.07 ±0.09
小檗碱 /μg· kg-1 总生物碱 /μg· kg-1
1257.5 ±7.59 702.2 ±5.90 375.2 ±7.02 228.5 ±5.97 95.5 ±1.67 36.3 ±1.22
2220.2 ±21.07 1863.2 ±10.75
673.0 ±10.81 596.5 ±6.67 269.5 ±2.75 176.0 ±4.44
巴马汀 (批号 080125)、黄连碱 (批号 080213)、 药根碱 (批号 080215)、小檗碱 (批号 080322)等均 购自成都曼思 特生物科 技有 限公司 , 含量 98%以 上 。黄连总生物碱由实验室自制 , 小檗碱 、巴马汀 、 药根碱和黄连碱 4个 生物碱之和为 90%。 甲醇和 乙腈为色谱纯 , 其他试剂为分析纯 。 2 方法 2.1 色谱条件 色谱柱 HypersilC18(4.6 mm×200 mm, 5 μm), 流动相乙腈 -磷酸二氢钾 (28∶72), 流速 1.0 mL· min-1 , 柱温 30 ℃, 检测 波长 345 nm[ 8] 。
1 材料 1.1 动物 SD大鼠 , 体重 (200 ±20)g, 雌雄各半 , 由 重庆医科大学提供, 合格证号 SCXK(渝 )2007-0001。 1.2 仪器与试剂 LC-6AD高效液相色谱仪 (日本 岛津 );KQ5200DA型数控 超声 波清 洗器 ;TG16-W 微量高速离心机 , 组织匀浆器 。
· 2018·
现第 2 个极大值 (2.8 mg· L-1 )。 黄连碱 、巴马汀
和药根碱在血液中的浓度含量较低 (总生物碱中黄
连碱 、巴马汀和黄连碱的含量本身也很低 ), 达峰时 间分别为 2, 5 h。 与文献报道结果类似[ 5] 。
图 1 黄连总碱血药浓度曲线
3.2 小檗碱在大鼠体内的药代动力学 对大鼠单独 灌胃小檗碱后 , 小檗碱在体内的血药浓度变化见表 1。随着时间的增加 , 小檗碱在血液中的含量不断增 加 , 达峰时间为 2 h左右 。同时 , 根据 HPLC分析结 果 , 从大鼠血液中不仅检测到小檗碱 , 还检测到药根 碱 。 在 0.5 h时 , 药根碱在血液 中的质量浓度 达到 (0.44 ±0.02)μg· L-1 , 随着时间延长 , 药根碱的含 量逐渐增加 , 1.5 h达到最大血药浓度 , 然后逐渐下 降 。 表明部分小檗碱在血液中可能转化为药根碱 。
72.4 ±0.73 22.4 ±0.81
黄连碱 /μg· kg-1
312.2 ±6.18 535.2 ±9.74 126.0 ±6.83 163.7 ±6.23
44.2 ±1.14 109.2 ±2.63
巴马汀 /μg· kg-1
376.2 ±5.50 288.0 ±4.52
75.1 ±0.74 41.5 ±0.99 57.4 ±1.08
第 35卷第 15期 2010年 8月
ຫໍສະໝຸດ Baidu
VoAl.u3g5u,stI, ss2u0e1 0 15
黄连生物碱在大鼠体内的代谢转化及分布
王亮 1 , 叶小利2 , 李学刚 1＊ , 陈竹1 , 陈晓丹 3 , 高英 1 , 赵忠启 1 , 黄文文1 , 陈新 1 , 易骏 1
质量 /g
2.033 ±0.145 6 9.956 ±0.043 5 0.478 ±0.072 3 2.342 ±0.109 8 1.058 ±0.068 4 2.033 ±0.094 3
药根碱 /μg· kg-1
274.2 ±4.64 338.7 ±3.86
96.2 ±0.76 162.7 ±5.37
L-1的对照品溶液 ;再取 0.1 mL对照品溶液 , 定容到 100 mL, 得质量浓度为 100 μg· L-1的对照品溶液 。 2.2 动物分组 SD大鼠 , 平衡喂养 3 d后 , 随机分 成 4组 :其中前 3组每组 4只 , 雌雄各半 ;第 4组 12 只 , 雌雄各半 。 第 1组灌胃黄连总生物碱进行血药 浓度试验 ;第 2组灌胃小檗碱进行血药浓度试验 ;第 3组灌胃总生物碱进行组织分布试验 ;第 4组灌胃 总生物碱进行胃肠道推进试验 。 2.3 血药浓度 黄连总生物碱 :大鼠按照 800 mg · kg-1体重灌胃黄连总生物碱 。争取在 5 min内灌 完 , 以减少误差 。 灌胃后分别于 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 h 后眼 眶 取 血 0.8 mL, 置 于 肝 素 化 的 离 心 管 中 , 3 000 ×g离心 15 min, 得血清 0.2 mL, 添加 0.6 mL 甲醇 , 漩涡 1 min, 离心 , 上清液 70 ℃下烘干 , 再用 0.2 mL甲醇超声溶解 , 离心 , 微孔滤膜过滤 。 按照 2.1色谱条件测定黄连生物碱含量 。
表 1 大鼠灌胃小檗碱后血液中生物碱的含 量变化 μg· L-1
t/h
小檗碱
药根碱
0
0
0
0.5
2.05 ±0.05
0.34 ±0.02
1
3.71 ±0.04
0.56 ±0.02
1.5
7.99 ±0.04
1.19 ±0.03
2
9.02 ±0.06
0.49 ±0.05
2.5
6.78 ±0.05
0.42 ±0.04
[ 稿件编号 ] 20091130003 [ 基 金 项 目 ] 重 庆 市 重 大 攻 关 项 目 (CSTC, 2008AA5021, 2010AC5007 );中 央 高 校 基 本 科 研 业 务 费 专 项 资 金 (XDJK2009C095);西南大学优博项目 (kb2009017) [ 通信作者 ] ＊李学刚 , 博导 , 从事天 然活性成 分的分离 纯化 、化学 修饰 、结 构 鉴 定 及 药 理 功 能 研 究 , E-mail:xuegangli2000 @ yahoo.com.cn [ 作者简介 ] 王亮 , 硕士研 究生 , 从事 天然药 物分离 及药理 功能研 究 , E-mail:vip.123@ 126.com
巴马汀和药根碱逐渐增加 , 表明在大鼠的胃中小檗碱可转 化为药根 碱 ;小檗碱 和巴马 汀主要分 布在动 物的肺 部 , 其次分 布在 肝脏中 , 而药根碱和黄连碱 主要分布在动物的肝脏中 , 其次分布在肺部 。 结 论 :小 檗碱可以转 化为药根 碱 , 根 据胃肠道推 进实 验部分解释了小檗碱在血液中出现 2次峰值的原因 。