实验四--氨在肝性脑病发病中的作用1培训课件
实验性肝性脑病PPT课件
OHNH3
H+
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（3）肌肉产氨增多 肌肉收缩加剧
腺苷酸分解
产氨增多
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上消化道出血 高蛋白饮食
肝硬化
肠道细菌产 氨增加
肾脏产氨 血氨升高
肌肉分解代
肠粘膜淤血、水肿
谢增强
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（二）氨对脑的毒性作用
1. 干扰脑细胞的能量代谢 (氨从四个环节干扰脑组织有氧氧化)
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氨对脑组织的毒性作用 示意图-能① 量代谢
4
严重肝脏疾患 门-体分流
肝脏不能处理 毒性代谢产物
毒性产物 绕过肝脏
5
病因与分类
6
一、病因 严重肝功能障碍
1. 晚期肝硬化 2. 急性重型病毒性肝炎 3. 晚期肝癌 4. 严重急性肝中毒 5. 门-体静脉分流术后
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二、分类 内源性肝性脑病、外源性肝性脑病
由急性严重肝细胞坏死 引起，毒性物质在通过 肝脏时未经解毒即进入 体循环。
Benzodiazepines site
GABA site
Benzodiazepines site
GABA
Cl-
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GABA与突触后神经元的特异性GABA受体结合 ↓
氯离子通道开放 ↓
氯离子进入胞内↑ ↓
神经细胞静息电位处于超极化状态 ↓
突触后抑制 ↓
肝性脑病 46
胰高血糖素↑ 胰岛素↑
血氨↑
神经冲动的形成、传导受抑制
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二、假性神经递质学说
与正常(真性)神经递质 结构相似，但其功能却 远较正常神经递质为 弱的一类物质(递质)
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正常及假性神经递质
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苯丙氨酸
酪氨酸
氨基酸脱羧酶
氨在肝性脑病发病机制中的作用PPT课件
尿素
分解
氨基酸
NH3
脑
NH3
（1）干扰能量代谢 （2）影响神经递质的平衡 （3）刺激神经细胞膜
肝
肠道
NH4Cl
NH3
转氨酶
氨对脑组织 的毒性作用γΒιβλιοθήκη GABA谷氨酸 脱羧酶
GABA
实 验 结 论：
1、氨在肝性脑病的发病机制中起着重要作用。
2、谷氨酸钠对氨中毒有一定的治疗作用。
THANK
YOU
SUCCESS
2019/4/15
SUCCESS
2019/4/15
实 验 分 组：
甲组：扎肝 乙组：不扎肝 丙组：扎肝 丁组：扎肝 NH4Cl + + + + 肠道输入NH4Cl 肠道输入NH4Cl 肠道输入NaCl 谷氨酸钠 + 肠道输入
20ml/Kg
耳缘静脉iv.
大 抽 搐
分组
甲组 乙组 丙组 丁组 时间
用量 基本 （ml/Kg） 情况
称重、固定、去毛
局麻
上腹正中 切口
全层连续缝合
扎肝
十二指肠荷包缝合、插管
60滴/分
关腹
输液、观察 （记时、记量）
家兔出现大抽搐时 （记时、记量）
呼吸、 肌张力、 继续输至死亡（记时、记量） 对外界刺激的反应
右中叶
方形叶
左中叶
右外叶
左外叶
围绕肝叶根部
尾状叶
一定要扎紧
插管前排气
THANK
YOU
氨在肝性脑病发病 机制中的作用
相关理论
实验目的 实验步骤
实验结果分析 实验结论
肝性脑病
继发于急性肝功能衰竭或 严重慢性肝病的一种神经精神 综合征。
氨中毒在肝性脑病发病中的作用(精)
轻
微
（ 前 驱 期 ）
性 格 、 行 为 改
扑翼样震颤
Flapping tremor (aste‘rixis)
昏睡、精神错乱
肝性昏迷 (hepatic coma)
肝性脑病的发生机制
假性神经递质学说
氨中毒学说
肝性脑病
血浆氨基酸失衡 学说
甲兔：腹正中线剑突下4-8cm切口——暴露肝脏结扎除右 外叶及尾状叶的肝叶——沿幽门找出十二指肠游离固 定——向肠腔注射复方NH4Cl（5ml/q5min)——出现大 抽搐时再次放血1ml测血氨。
乙兔：不结扎肝叶，其余操作步骤与甲兔基本相同，与甲 兔出现大抽搐注射复方NH4Cl量和时间相同时，从颈总 动脉放血1ml测血氨。 继续推注复方NH4Cl直至乙兔出现大抽搐，记录所用复 方NH4Cl总量和时间。
观察项目
• 呼吸运动、肌张力、角膜反射、瞳孔大小、 对刺激的反应及抽搐等。
• 出现大抽搐时两兔复方NH4Cl用量及时间 • 血氨
注意事项：
• 专人测定血氨 • 肝叶结扎线置于肝叶根部，避免勒破肝脏 • 乙兔推注复方NH4Cl晚于甲兔 • 复方NH4Cl切勿漏入腹腔
血氨测定方法：
• 纳氏试剂显色法： 饱和碳酸钾溶液1ml----血液1ml----立即以玻璃
棒蘸硫酸1滴----迅速盖上扩散瓶。 倾斜扩散瓶将血液及碳酸钾充分混匀。（旋转10
分钟，放置１0分钟） ----取出玻棒---纳氏试剂3ml 将玻棒上含氨硫酸洗入试管中，肉眼观察血液氨的浓 度。
γ -氨基丁酸学说
实验目的
• 学习复制肝功能障碍时氨代谢异常的动 物模型的方法
• 观察肝性脑病时机体的典型表现及血氨 水平的变化
机能学实验-氨在肝性脑病发生中的作用
0 5min 10min 15min 20min 25min 30min 5ml 10ml 15ml 20ml 25ml 30ml 35ml
提前
氨在肝性脑病发生中的作用观察 组 出现大抽搐所需 出现大抽搐 血氨浓度 别 NH4Cl用量(ml) 所需时间(min) 第1次 第2 次 呼吸 肌张力
甲兔
乙兔
01
03
02
观察项目
大抽搐：四肢伸直，坚硬如柱，头尾昂起，脊柱挺硬
对氨的清除能力下降，致使血氨水平显著
升高，高浓度的氨通过血脑屏障进入脑组
织，引起脑功能障碍。
01
02
03
04
氨中毒学说
如何复制肝性脑病的动物模型？？
氨的来源增多 氨的清除减少
肠腔注射复方氯化胺
肝叶结扎
学习复制肝功能障碍时氨代谢异常的动物模型的方法
01.
观察肝性脑病时机体的典型表现及血氨水平的变化
肝性脑病的概念
模型是如何复制的（氨中毒学说）
实验数据横纵向对比分析
实验现象的分析（氨对脑的毒性作用）
讨论要点
观察项目
01
02
03
干扰脑细胞能量代谢
使脑内神经递质改变
氨对神经细胞膜的抑制作用
氨对脑代谢功能的影响
血氨增高是肝性脑病的重要诱因
甲兔为肝性脑病，乙兔为急性氨中毒
肝脏具有解氨毒的作用，但有一定限度
甲兔：结扎大部肝叶＋注射复方NH4Cl
乙兔：不结扎肝叶 ＋注射复方NH4Cl
氨在肝性脑病发病中的作用中山大学基础医学实验教学中心
每公斤体重 给药量(ml)
开始实验
小结
肝脏的功能 氨中毒机理
中山大学中山医学院 病理生理学教研室 谭红梅
实验原理
NH4+ + OH-
NH3 + H2O
脑 血脑 血液
屏障
鸟氨酸循环
肝
尿素
实验对象：家兔
实验器材：兔手术台及器械、注射器、导尿管 定时钟、纱布、棉线、缝合针等
实验药品：1%普鲁卡因、2.5%氯化铵混合液、 1%醋酸、2.5%谷氨酸钠混合液
观察指标
一般情况、角膜反射、对刺激的反应 出现痉挛时间、给药量
每次 5 ml 每 5 min 源自次 直到出现痉挛抢救十二指肠插管 1%醋酸，5 ml/kg
NH4+ + OH- NH3 + H2O
耳沿静脉 2.5%谷氨酸钠，30 ml/kg
谷氨酸钠 + NH3 谷氨酰胺
实验结果
组别
1
实
2
验
3
组
4
平均
1
对
2
照
3
组
4
平均
出现痉挛时间 (min)
总给药量 (ml)
实验步骤
家兔称重、固定 上腹正中局麻
实验组
对照组
结扎切除肝脏
假结扎肝脏
十二指肠插管 关闭腹腔松绑 注射氯化铵液
抢救
肝脏结扎示意图
尾叶
注意：切断镰状韧带时勿损伤后方的下腔静脉 在肝蒂部结扎肝脏，结扎要牢固
十二指肠插管荷包缝合法
胃
6～8 cm
注意：插管朝下，打防滑结，防治插管脱出
氯化铵混合液注射
氨在肝性脑病发病中的作用
中山大学中山医学院 病理生理学教研室 谭红梅
氨在肝性脑病发病中的作用
氨在肝性脑病发病中的作用【实验原理与目的】肝性脑病是指继发于严重肝脏疾病的一种神经-精神综合征。
氨中毒学说是阐述肝性脑病发病机制的主要学说之一。
本实验目的是指导学生采用肝大部分切除术复制出急性肝功能不全模型，对经不同处理的实验动物输入氯化铵，观察出现相应症状所需氯化铵用量及时间，探讨氨在肝性脑病发病机制中的作用。
此外，加强学生对实验设计对照原则的理解。
【实验对象】家兔2只，成年，健康，性别相同，体重相近，实验前禁食过夜，自由饮水。
【实验器材与药品】1．器械哺乳类动物急性手术器械一套，兔固定台，方盘，动脉夹，5ml、10ml、50ml注射器及针头，婴儿秤。
2．药品1％普鲁卡因，复方氯化铵(NH4C1)溶液。
3．其他塑料导管、静脉输液装置、粗、细手术线。
【实验步骤与观察指标】取家兔2只，随机分为实验组和对照组进行实验。
(一)实验组(肝叶大部分切除+注射复方NH4C1溶液)1．将家兔称重后仰卧固定于兔台上，剪去上腹部正中被毛，用1％普鲁卡因作局部浸润麻醉。
2．从剑突下作长6～8 cm的上腹部正中切口，打开腹腔，暴露出肝脏，术者左手食指和中指在镰状韧带两侧将肝脏往下压，右手持剪剪断肝与横膈之间的镰状韧带(图3-6-3-1)。
辨明肝脏各叶，用粗棉线沿肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶之根部围绕一周并结扎(图3-6-3-2)，待上述肝叶变成暗褐色后用组织剪逐叶剪除。
保留右外叶及尾状叶(图3-6-3-3)。
3．沿胃幽门向下找出十二指肠，用小圆缝合针作荷包缝合(图3-6～3-4)。
从荷包中央剪小口，将细塑料管插入十二指肠腔内约5 cm，收缩荷包缝合并打结，然后再用缝线在塑料管上另打一个结固定，以防塑料管滑脱。
将肠管回纳腹腔，只留塑料管一端于腹外，用三角缝合针全层缝合腹壁，将动物松绑，放在实验台上观察和进一步实验。
4．每间隔5 min用注射器通过塑料管向肠腔内注入2．5％的复方NH4C1溶液5 ml，直至出现全身性抽搐。
机能实验讨论：氨在肝性脑病发病中的作用
2020.5.8二、氨在肝性脑病发病中的作用1、肝性脑病的概念及发病机制是什么？2、PPT的实验步骤中为什么要分别设立甲、乙、丙兔，其目的何在?3、结扎肝门血管以及灌入氯化铵是否能复制肝性脑病的动物模型？为什么？4.这三组家兔的血氨的变化趋势是什么?机制为何？5、肝叶結扎并注射氯化铵組会产生什么症状?其原因是什么?1、肝性脑病的概念及发生机制是什么？概念：肝性脑病（HE）又称肝性昏迷，是指严重肝病引起的、以代谢紊乱为基础的中枢神经系统功能失调的综合征，早期表现为可逆性的，主要包括人格改变，智力减弱，意识障碍等，晚期发生不可逆性肝昏迷，甚至死亡。
发生机制：①氨中毒学说：血氨↑，进入脑组织，引起脑的代谢和功能障碍。
②假性神经递质学说：严重肝病时，假性神经递质在脑干网状结构中堆积，使神经冲动的传递发生障碍，不能维持唤醒功能，从而发生昏迷。
③氨基酸失衡学说：严重肝病时，血浆BCAA/AAA比值↓→脑内假神经递质↑，正常递质↓→抑制性神经活动增强，严重可出现昏迷。
④GABA 学说：血氨↑，进入脑组织，增强抑制性递质介导的中枢抑制作用，中枢抑制作用增强。
2、PPT的实验步骤中为什么要分别设立甲、乙、丙兔，其目的何在？影响肝性脑病的发生的因素有血氨浓度和肝脏功能，设置甲乙丙是为了做对照，甲乙对比可以说明肝对氨的解毒作用，甲丙对比可以说明血氨在肝功能障碍时的毒性作用。
3、结扎肝门血管以及灌入氯化铵是否能复制肝性脑病的动物模型？为什么？可以，因为结扎肝门血管可以导致肝功能障碍而导致对氨的解毒作用降低甚至丧失，此时注入氯化铵可以导致血氨浓度升高进而导致肝性脑病的发生。
4、这三组家兔的血氨变化趋势是什么？机制为何？甲组的血氨浓度明显升高，因为甲组肝功能障碍，解毒能力下降，注入氯化铵会导致血氨明显升高。
乙组血氨浓度略微升高然后恢复正常，乙组肝功能正常，注入氯化铵后血氨升高，一段时间后由于肝脏的解毒功能而恢复正常。
丙组血氨浓度刚开始无明显变化，随着时间的推移而逐渐升高，丙组的肝功能障碍，没有注入氯化铵，故开始时血氨正常，但随着机体代谢产生氨，而肝脏无法代谢，导致氨在血液中堆积，使血氨逐渐升高。
氨在肝性脑病发病机理中的作用.pptx
氨在肝性脑病发病机理中的作用
1
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
一 实验目的
1．学习复制急性肝功能不全的动物模型, 观 察相关指标的变化. 2. 学习并了解氨在肝性脑病发生机理中的重 要作用。
2
二、实验原理
肝性脑病的概念
发病机理不清，可能机制：氨中毒学说、
假神经递质学说、氨基酸失衡学说、
GABA学说、综合学说
肝性脑病 血氨
氨2+CO2
尿素
血氨清除减少 鸟氨酸循环障碍 血氨生成增多 肠道产氨↑
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（2）肝叶大部分结扎术 从胸骨剑突下沿腹正中线行长约 6～8cm的切口，打开腹腔，暴露；暴露肝脏，向下压肝，剪 断肝与横膈之间的镰状韧带，辨明肝脏各叶（见图）。用粗 棉线结扎肝左外叶、左中叶、右中叶的根部（仅留下右外叶 和尾状叶），因而模拟急性肝功能不全。（乙组不作） （3）十二指肠插管 沿胃幽门向下找到十二指肠，提出腹腔， 用眼科剪在肠壁上剪一小口，将细导尿管插入肠腔约4cm， 沿插管周作荷包缝合（小圆针），收缩荷包结扎固定（见 图），将肠管回纳腹腔，检查腹内无出血，关闭腹腔（三角 针）。 （4）观察指标 呼吸（频率、幅度）、角膜反射、瞳孔大小、 对刺激的反应、是否出现肌肉痉挛、抽搐及强直。观察家兔 一般状况。 （5）十二指肠插管中注入复方氯化铵溶液 每隔5min向十二 指肠插管中注入2.5%复方氯化铵溶液5ml，观察并记录各项 指标的变化，直至出现全身性抽搐、角弓反张为止，记录所 用的复方氯化铵溶液的总量，
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4.实验中复制家兔肝性脑病模型应注意哪些问题？
注意：麻醉面积尽量大 按摩加速吸收
图1 皮下局麻示意图
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优点：不损伤肠系膜 保证胃肠的通畅
答：实验组是肝性脑病； 对照组肝脏正常，则是单纯的氨中毒
2.严重肝功能不全患者，血氨升高的原因？
①尿素合成减少，氨清除不足。肝性脑病时血氨增高的主要原因是由于肝脏鸟 氨酸循环障碍，由氨合成尿素明显减少，导致血氨增高；
②氨的产生增多：血氨主要来源于肠道产氨。肝脏功能严重障碍时，门脉血流 受阻，肠粘膜淤血，水肿，肠蠕动减弱以及胆汁分泌减少等，均可使消化吸收功 能降低，导致肠道细菌活跃；一方面可使细菌释放的氨基酸氧化酶和尿素酶增多； 另一方面，未经消化吸收的蛋白成分在肠道潴留，使肠内氨基酸增多；
由于肾小管腔中H+减少，生成NH4+减少，而NH3弥散入血增加。也可使血氨增高。
3.血氨过高对脑有何毒害作用？
⑴ 干扰脑细胞能量代谢，脑组织中大量氨与α－酮戊二 酸结合成谷氨酸时，导致三羟酸循环障碍，严重影响 细胞代谢和能量来源；
⑵ 使脑内神经递质发生改变，兴奋递质（谷氨酸，乙酰 胆碱）减少，抑制性递质（谷氨酰胺，γ-氨基丁酸） 增多；
5. 每隔5min向十二指肠内注入2.5%NH4Cl溶液5ml ，直到出 现大抽搐。记录从给药至出现大抽搐的时间、氯化铵总用 量，并计算每千克体重氯化铵用量（ml/kg）。
（二）对照组 肝脏仅游离，不结扎，不剪除。
五、结果
1. 表1 家兔肝性脑病实验观察记录表
2. 症状描述：呼吸加快、抽搐、震颤、角弓反张
实验四 掌握家兔肝性脑病模型的复制方法； 2. 观察肝性脑病的临床症状；
掌握肝性脑病机制之一：氨中毒学说； 3. 锻炼动手操作能力。
二、实验对象 家兔 三、器材、药品
手术器械一套 1%普鲁卡因、2.5%NH4Cl
4. 沿幽门向下找出十二指肠，剪一小口，将导管插入十二指 肠约4cm，打结固定后关闭腹腔，给动物松绑。
六、分析、讨论
1.本实验中，对照组动物会出现全身性抽搐吗？如果有，分 析其机制与实验组有何不同。 2.严重肝功能不全患者，血氨升高的原因？ 3.血氨过高对脑有何毒害作用？ 4.实验中复制家兔肝性脑病模型应注意哪些问题？
七、结论
1.本实验中，对照组动物会出现全身性抽搐吗？如果有，分析其机制与实 验组有何不同。
肝硬化晚期合并肾功能障碍，尿素排除减少，可使弥散入肠道的尿素增加，使 肠道产氨增加。
如果合并上消化道出血，由于肠道内血液蛋白质增多，产氨增多。 肝性脑病患者昏迷前，可出现明显的躁动不安，震颤等肌肉活动增强的症状， 肌肉中的腺苷酸分解代谢增强，使肌肉产氨增多。 如果患者由于通气过度，造成呼吸性碱中毒或应用了碳酸酐酶抑制剂利尿，则
图2 十二指肠插管示意图
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