叠加内标法色谱定量分析

从表 ( 可以看出： 叠加内标法和内标法的回收 率很接近， 只有叠加法的回收率偏低。所以， 在准确 度方面叠加内标法和内标法的差异是较小的。因 此， 在无合适的内标物的情况下， 用叠加内标法完全 可以代替内标法和叠加法。 从表 - 可以看出： 叠加内标法在精密度上优于 内标法和叠加法， 但内标法和叠加法的 ?LM 也都没 有超过 (B ， 因此， F 种方法用于上述测定都是可行 的， 只是各有所长而已。
约， 很多情况下内标物的选择非常困难， 有时甚至无 法选到合适的内标物。鉴于这种情况， 我们尝试将 内标法与叠加法相结合构成一种新的定量方法， 称 之为叠加内标法， 用于没有合适内标物的色谱分析。
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叠加内标法定量原理
已知某样品中含有 A， （可以有更 /， B * 个组分 多的组分， ……） ， 命名 A 组分为峰面积校 B$ ， B! ， B* ， 正组分， / 组分为叠加内标组分， B 组分为任意组分。 样品经色谱分离后得到 * 个组分的峰面积分别为 上述 * 个组分相对于 / 组分的校正因 ! A， ! / 和 ! B； 子分别为 " A/， 样品中 * 个组分的含量 $ > """ 和 " B/； 分别为 # A ， # / 和 # B 。分别准确称取 $ C 样品和 然后将两者混合， 混合物称为加标样 % D C / 组分， 品。加标样品经色谱分离后得到 A 组分的峰面积为 ! $， / 组分的峰面积为 ! （ ! ! ! 是样品中原有的 / 组 分和加入的叠加内标 / 组分共同的峰面积） 。 B 组分 或其他组分的峰面积与计算无关。 "#! 求样品中各组分含量的步骤 " # ! $ ! 利用 A 组分进行峰面积校正 令 A 组分加标后与加标前的峰面积的比值为 此处引入校正系数 & 的目的是为了消除进样量 &， 误差） ， 则 & 的表达式为： & E !$ F !A （$）
! ’ LM ?LM （ 8 & <） （ 8 & <） （ B ）
) D E(( ) D E(( ) D E)* ) D ))) D ))F ) D )))DJ )D+ )DJ
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叠加内标法的应用
表 F 为采用叠加内标法测定的某一白酒样品中
样品中加入 ) H ()) 8 异戊醇配成加标酒样， 经色谱 分离后记录甲醇、 异戊醇的峰面积。将数据代入式 （()） 中， 计算白酒中甲醇、 异戊醇和异丁醇的含量。
%&’() $ /01234 =44!1!3; !;109;6C #16;4694 I01234 K;109;6C #16;4694 I01234 =44!1!3; I01234
表 $ ! 种方法测定白酒中异戊醇含量的精密度 %*) 8+),/0/-4 -1 /0-&23( &(,-*-( /4 5/4) 6)7)+2/4)6 ’3 7*) 7*+)) 2)7*-60 >3:;4 （ 8 & <） ) D E(E ) D E(E ) D E)J ) D E(( ) D E() ) D E)" ) D E() D E() D E(( ) D E(F ) D E)" ) D E)* ) D E)* ) D E(F ) D E() D E() ) D E(( ) D E() ) D E)" ) D E)+ ) D E)G ) D E(E ) D E(E ) D E((
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前言
内标法是经典的色谱定量方法， 在配制分析样
再利用 & 对加标前的 A， / 组分的峰面积进行 修正： ! E & G !A ’ E & G !/ （!） （*）
品时要求加入一个或数个内标物组分。内标物必须 是分析样品中不含有的组分， 而且要求与样品中的
［ $， !］ 其他组分有良好的分离 。由于受分离因素的制
第 $& 卷第 ) 期 !""$ 年 & 月 !" !!!!!!!!"
色
谱
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经验交流
叠加内标法色谱定量分析
妍! ， 冯英智! ， 张
( 榕* ， 张维冰$，
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郑永杰$ ， 康
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色
谱
第 !A 卷
点， 在实际应用中可以作为内标法的补充方法， 特别 适用于没有合适内标物的情况。其原理和方法不仅 适用于色谱分析， 也适用于极谱分析、 溶出分析等其 他分析方法。
!AAB 2 BA)CB 史景江， 马熙中 D 色谱分析法 D 重庆： 重庆大学出版社， !AAB D BA)CB ［E］ F#-G H&)I&’( 2 @4+J6&J+9 (+: J0415+61(4+708 +’+98:&:2 30+’(:0+： #K’+’ "J&;’J; +’< L;J0’191(8 @4;::， !AMN 2 !OM)!AP 詹益兴 D 实用气相色谱分析 D 长沙： 湖南科学技术出版 社，!AMN D !OA)!AP
参考文献：
［!］ "#$ %&’()*&+’(，,- .&)/01’( 2 30415+61(4+708 +’+98:&: 5;601<2 301’(=&’(： 301’(=&’( >’&?;4:&68 @4;::，
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式 （ !） 、 式 （*） 中的 & 为加标后与加标前的两次进样 的峰面积校正系数。虽然 & 是从组分 A 得到的， 但 亦适合其他组分。 ! 和 ’ 分别为 ! A 和 ! / 的校正 值。 " # ! $ " 引入叠加法 ［$］ ： 引入叠加法的计算公式 % E % D G ! "（ F ! 7 H ! "） （(） 式 （(） 中， % 表示样品中原有内标物组分的质量； % D 表示加入的内标物组分的质量； ! " 表示样品中 原有内标物组分的峰面积； ! 7 表示加标后内标物组 分总的峰面积。 在本文中， ! ! 相当于 ! 7 ， ’ 相当于 ! " ， % 与 因此有： % D 含义不变， % E % D G ’（ ( ! ! H I） 将式 （$） 及式 （*） 代入式 （)） ， 可得： （ ! $ F ! A） （ ! $ F ! A） %E G ! / G % D［ F !! H G ! /］ （’） 式 （ ’） 又可写成： % E ! $ G ! / G % D（ F ! A G ! ! H ! $ G ! /）（%） " # ! $ % 引入内标法 ［$］ 引入内标法计算公式 ： （ ! B F ! D） #B E G " BD G $"" G % ( $ （+） 式 （+） 中， # B 为样品中 B 组分的含量； % 为样品中 原有内标物组分 D 的质量； $ 为样品的质量； " BD 为 被测组分 B 相对于内标物组分 D 的校正因子； ! B， ! D 分别为组分 B 和内标物组分 D 的峰面积。 （)）
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使用叠加内标法对内标物试剂的要求
加入的内标物试剂不一定是 ( D 已知纯度数据： 含 ! 组分的纯物质， 但要求 ! 组分的纯度为已知。 加入的内标物试剂本身不含 - D 不含有 , 组分： 有 , 组分， 允许含有其他组分。 F D 不含有降低 , 组分和 ! 组分分离度的组分。
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结论
叠加内标法具有内标法和叠加法所不具备的优
收稿日期： !"""#$$#!% 作者简介： 郑永杰 （$&’(#） ， 男， 副教授， 硕士研究生， 电话： （"()!） !%*+!"!， ,#-./0： 1234 -./05 667895 :;95 <=。
第J期
郑永杰等：叠加内标法色谱定量分析 !"! 试验结果比较
・ EGJ ・
在本文中， 叠加内标组分 ! 相当于式 （ "） 中的内 标物组分 #， 其他各项意义相同， 因此可导出叠加内 标法定量计算公式： （ " $ & " !） !$ % ’ # $! ’ ()) ’ $ % & 式： ! $ % " $ ’ # $! ’ ()) ’ " ( ’ $ #［ & （ ", ’ "- . ） ］ （()） "! ’ "( ’ & （*） 综合式 （+） 和式 （*） 可得叠加内标法定量计算公
甲醇、 异戊醇和异丁醇含量的数据及计算结果。设 其色谱峰面积分别为 " , ， 在 () H )) I< 白酒 " !， " $；
表! %&’() ! 叠加内标法测定白酒中醇的含量数据 9-47)470 -1 &(,-*-(0 /4 7*) 5/4) 6)7)+2/4)6 ’3 &66/7/-4 /47)+4&( 07&46&+6 2)7*-6 P06, 6906 N3IO3;0;1 #6IOC0 /0126;3C K#36IAC 6C7323C K#3R:1AC 6C7323C + H -FG GJ H (+G (- H +GJ 64404 #16;4694 #6IOC0 (( H EJG (-" H -FE N399071!3; Q67139 ( H *FF ( H ))) ( H )") N3;10;1 （ 8 & <） ) D )"" ) D E(F ) D )"E
/01234 =44!1!3; !;109;6C
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叠加内标法与叠加法和内标法的比较
优点 叠加内标法的内标物可以是 与内标法比较： （(）
#16;4694 I01234 K;109;6C #16;4694 I01234 =44!1!3; I01234
被测样品中已有的组分， 因此， 不必考虑内标物的分 离问题， 可以选择样品中分离良好的任一组分作为 内标物； （-） 用于没有合适内标物的分析。 与叠加法的比较： 在叠加法中， 虽然理论上一次 加入并不限制测定组分的数目， 但需要对每个被测 定组分同时进行加入， 当被测定组分较多时， 实际操 作很繁琐； 而叠加内标法只需要一次加入和两次进 样即可以同时测定多个组分。 !"$ 缺点 与内标法比较： 需两次进样， 即分别测量一次样 品和加标样品。 与叠加法比较： 在测定内标物以外的组分时需 要知道该组分的校正因子。
（$ > 齐齐哈尔大学化学与化学工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 $’$""’；! > 黑龙江北大仓集团有限公司， 黑龙江 齐齐哈尔 $’$"")；* > 齐齐哈尔市卫生防疫站，黑龙江 齐齐哈尔 $’$""’； ( > 中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究分析中心，辽宁 大连 $$’"$$） 摘要： 叠加内标法是指在色谱定量分析中将内标法与叠加法结合的一种新的定量方法。叙述了叠加内标法定量的 理论依据， 规定了其操作步骤， 并详细说明了这种方法的适用条件和优缺点。 关键词： 色谱定量分析； 叠加内标法； 叠加法； 内标法 中图分类号： ?’)+ 文献标识码： @ 文章编号： （!""$） $"""#+%$* ")#"(’(#"*
考察了叠加内标法、 内标法和叠加法的回收率 表 -。 和精密度， 试验结果列入表 (、
表# ! 种方法测定白酒中异戊醇的回收率
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%*) +),-.)+/)0 -1 /0-&23( &(,-*-( /4 5/4) 6)7)+2/4)6 ’3 7*) 7*+)) 2)7*-60 567,893:;4 =4404 >3:;4 ?073@09A /06; （ 8 & <） （ 8 & <）（ 8 & <） （ B ） （ B ） ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D E(F ) D F)) ) D G)) ) D *)) ) D F)) ) D G)) ) D *)) ) D F)) ) D G)) ) D *)) ) D -GG ) D J(G ) D +") D -+( ) D J-" ) D +") ) D -FG ) D E*) D +)G "" H G+ "G H )) "G H "* *) H FF "" H )) "G H G+ +" H G+ "- H )) +" H J) +* H +( "" H FF "+ H (*