乳酸菌细菌素的制备
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10
◆ 青贮饲料
◆ 不同的研究或者接种不同类型的乳酸菌有不同的结果。一 般接种同型乳酸菌（如乳酸片球菌；植物胚芽乳杆菌；酪 蛋白乳杆菌；粪链球菌；戊糖片球菌）可降低青贮饲料pH 值，增加乳酸含量，降低丁酸含量；接种异型乳酸菌（如 布氏乳杆菌；发酵乳杆菌）则提高青贮饲料pH，增加乙酸 的生成。
◆ 畜禽生产
◆ 饲料中添加乳酸菌，能提高蛋雏鸡成活率和日增重，可使 断乳后仔犬体重显著增加，因此显著提高饲料利用率。
◆ 肉品贮藏
◆ 乳酸菌常用于生物防腐，研究表明，用乳酸菌发酵液保鲜 肉品，可以抑制肉品中的致病菌和腐败菌的生长，保存风 味物质，不改变食品组织状态，而且在正常冷却储存条件 下，也不影响食品的感官特性。
9
工业应用
◆ 食品生产
◆ 常用于制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄 酒、泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。在牛奶中 加入乳酸菌可提高牛奶保健作用。
◆ 经乳酸菌发酵的乳酸菌奶酪蛋白及乳脂被转化为 短肽、氨基酸和小分子的游离脂类等更易被人体 吸收的小分子。奶中丰富的乳糖已被分解成乳酸， 乳酸与钙结合形成乳酸钙，极易被人体吸收，也 可被乳糖不耐症人群选用。乳酸菌奶能促进胃液 分泌，促进消化，对胃具有保养功能，并能抑制 肠道内腐败菌的生长，其生物保健价值远远高于 牛奶。
5
生理功能
◆ 5．抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用。 ◆ 6．免疫调节作用，增强人体免疫力和抵抗
力。 ◆ 7．抗肿瘤、预防癌症作用。 ◆ 8．提高SOD酶活力，消除人体自由基，具
抗衰老、延年益寿作用。 ◆ 9．有效预防女性泌尿生殖系统细菌感染。 ◆ 10．控制人体内毒素水平，保护肝脏并增
强肝脏的解毒、排毒功能。
16
◆ 菌体收集
◆ 利用超速离心机对发酵后的菌液进行 离心，在转速为4000-6000r/min的条 件下离心10min，去上清收集沉积 物。
17
◆ 4菌泥冷冻干燥
◆ 将收集到的沉积物加入至复配保护剂， 用振荡器混匀，制成菌悬液。再将其盛入 冷冻平皿中，随后先置4℃冰箱平衡30min 后，移入-30℃冰箱60min，然后置-80℃冰 箱60min，再在冷冻真空干燥机上冷冻干燥 14h，密封保存于4℃冰箱中。根据实验设 计，真空冷冻干燥条件设置冻干仪腔体温 度为-60℃-70℃，压力为0.006Pa，时间为 14h。
11
乳酸菌冻干粉制作方案
◆ 材料
◆ 菌种 ： 乳酸菌
◆ 培养基 ：MRS培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、牛 肉膏10g、葡萄糖20g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸三 氨1g、乙酸钠5g、硫酸镁0.8g、硫酸锰0.25g、吐 温80 1ml、PH值6.2~6.4、用蒸馏水定容至1000ml， 115-120℃灭菌30min。 计数培养基：1LMRS 培养基加入琼脂20g
6
生活习性
繁殖：在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。在液 体发酵培养基内可以很快地生长，离心洗涤可以 获得纯度较高的菌体且兼具需氧和厌氧的性能。
运动：大多数不运动，少数以周毛运动。 活性：普通的乳酸菌，活力极弱，它们只能在相对
受限制的环境中存活，一旦脱离这些环境，其自 身也会灭亡。只有经过特殊工艺处理的乳酸菌才 能到达肠道。进入肠内的乳酸菌，必须具备数量 多、活力强，才能发挥其生物功效
、
Βιβλιοθήκη Baidu12
技术路线
13
主要试剂和仪器
◆ 试剂 奶粉、甘露醇、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、
葡萄糖、磷酸氢二钾、柠檬酸三氨、乙酸 钠、硫酸镁、硫酸锰、吐温、蒸馏水、生 理盐水等。 ◆ 仪器 ◆ 高压灭菌锅、培养箱、无菌操作台、高速 离心机、发酵罐、真空冷冻离心机、菌液 瓶等
14
.具体实施方案
◆ 1乳杆菌活化 ◆ 将实验室冰箱保藏的德氏乳杆菌用100ml
灭菌的MRS液体培养基进行第一次活化，活 化温度37 ℃，24h后平板检测纯度和活菌 数，检测达标后再将上述100ml菌液全部转 入至400ml灭菌MRS液体培养基进行第二次 活化，24h后平板检测纯度和活菌数，检测 达标后转至40L发酵罐中进行扩大培养48h。
15
◆ 2活菌数的测定
◆ 菌种经活化、扩培后，接入MRS液体培养基 培养，待测活菌数时，取0.5mL发酵液加入 至4.5mL灭菌的生理盐水中，依次做10倍系 列稀释，选取10-8、10-9、10-10三个稀释 倍数，吸取0.2mL稀释液注入无菌培养皿中， 倾注法加入15mL左右的计数培养基混匀， 每个稀释度做三个平行培养皿。待培养基 凝固后，倒置放入37℃恒温培养箱中，培 养48h，选取菌落数在30-300之间的培养皿 计菌落数。
2
乳酸菌小介绍
中文学名：乳酸菌 界：细菌界 门：厚壁菌门Firmicutes 纲：芽孢杆菌纲Bacilli 目：乳杆菌目Lactobacillales 科：乳杆菌科Lactobacillaceae 属：乳杆菌属Lactobacillus 代谢类型：异养厌氧型
3
形态特征
◆ 乳酸链球菌族，菌体 球状，通常成对或成 链。
18
◆ 5存活率测定
◆ 冷冻干燥后的乳酸菌以生理盐水复活，进 行平板计数，结果以个/g表示。
19
谢谢观看！！！
7
类型
◆ 乳酸菌大体上可分为两大类： 1） 动物源乳酸菌 2）植物源乳酸菌
◆ 因为取自植物易被人体吸收，不论摄取多 大的量，人体不会产生异体蛋白排斥反应， 且植物源乳酸菌比动物源者更具有活力， 能比动物源多8倍的数量到达人体小肠内定 植，从而发挥其强大而稳定的生物功效。
8
作用机理
乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能。 乳酸菌能促进动物生长，调节胃肠道正常 菌群、维持微生态平衡，从向改善胃肠道 功能；提高食物消化率和生物效价；降低 血清胆固醇，控制内毒素；抑制肠道内腐 败菌生长：提高机体免疫力等
4
生理功能
◆ 1．防治有些人种普遍患有的乳糖不耐症 （喝鲜奶时出现的腹胀、腹泻等症状）。
◆ 2．促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物 质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质。
◆ 3．增加加肠道有益菌群，改善人体胃肠 道功能，恢复人体肠道内菌群平衡，形成 抗菌生物屏障，维护人体健康。
◆ 4、抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生 的毒素，清除肠道垃圾。
生药1311
乳酸菌细菌素的制备
系部:制药系 专业:生物制药 组员:张婉月 徐洁 严梦迎
臧赢 陈孝颜
乳酸菌的介绍
乳酸菌（Lactobacillus）是发酵糖类且主要 产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性 细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵 过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。是一 种存在于人类体内的益生菌。乳酸菌可用于 制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄酒、 泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。
◆ 青贮饲料
◆ 不同的研究或者接种不同类型的乳酸菌有不同的结果。一 般接种同型乳酸菌（如乳酸片球菌；植物胚芽乳杆菌；酪 蛋白乳杆菌；粪链球菌；戊糖片球菌）可降低青贮饲料pH 值，增加乳酸含量，降低丁酸含量；接种异型乳酸菌（如 布氏乳杆菌；发酵乳杆菌）则提高青贮饲料pH，增加乙酸 的生成。
◆ 畜禽生产
◆ 饲料中添加乳酸菌，能提高蛋雏鸡成活率和日增重，可使 断乳后仔犬体重显著增加，因此显著提高饲料利用率。
◆ 肉品贮藏
◆ 乳酸菌常用于生物防腐，研究表明，用乳酸菌发酵液保鲜 肉品，可以抑制肉品中的致病菌和腐败菌的生长，保存风 味物质，不改变食品组织状态，而且在正常冷却储存条件 下，也不影响食品的感官特性。
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工业应用
◆ 食品生产
◆ 常用于制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄 酒、泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。在牛奶中 加入乳酸菌可提高牛奶保健作用。
◆ 经乳酸菌发酵的乳酸菌奶酪蛋白及乳脂被转化为 短肽、氨基酸和小分子的游离脂类等更易被人体 吸收的小分子。奶中丰富的乳糖已被分解成乳酸， 乳酸与钙结合形成乳酸钙，极易被人体吸收，也 可被乳糖不耐症人群选用。乳酸菌奶能促进胃液 分泌，促进消化，对胃具有保养功能，并能抑制 肠道内腐败菌的生长，其生物保健价值远远高于 牛奶。
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生理功能
◆ 5．抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用。 ◆ 6．免疫调节作用，增强人体免疫力和抵抗
力。 ◆ 7．抗肿瘤、预防癌症作用。 ◆ 8．提高SOD酶活力，消除人体自由基，具
抗衰老、延年益寿作用。 ◆ 9．有效预防女性泌尿生殖系统细菌感染。 ◆ 10．控制人体内毒素水平，保护肝脏并增
强肝脏的解毒、排毒功能。
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◆ 菌体收集
◆ 利用超速离心机对发酵后的菌液进行 离心，在转速为4000-6000r/min的条 件下离心10min，去上清收集沉积 物。
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◆ 4菌泥冷冻干燥
◆ 将收集到的沉积物加入至复配保护剂， 用振荡器混匀，制成菌悬液。再将其盛入 冷冻平皿中，随后先置4℃冰箱平衡30min 后，移入-30℃冰箱60min，然后置-80℃冰 箱60min，再在冷冻真空干燥机上冷冻干燥 14h，密封保存于4℃冰箱中。根据实验设 计，真空冷冻干燥条件设置冻干仪腔体温 度为-60℃-70℃，压力为0.006Pa，时间为 14h。
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乳酸菌冻干粉制作方案
◆ 材料
◆ 菌种 ： 乳酸菌
◆ 培养基 ：MRS培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、牛 肉膏10g、葡萄糖20g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸三 氨1g、乙酸钠5g、硫酸镁0.8g、硫酸锰0.25g、吐 温80 1ml、PH值6.2~6.4、用蒸馏水定容至1000ml， 115-120℃灭菌30min。 计数培养基：1LMRS 培养基加入琼脂20g
6
生活习性
繁殖：在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。在液 体发酵培养基内可以很快地生长，离心洗涤可以 获得纯度较高的菌体且兼具需氧和厌氧的性能。
运动：大多数不运动，少数以周毛运动。 活性：普通的乳酸菌，活力极弱，它们只能在相对
受限制的环境中存活，一旦脱离这些环境，其自 身也会灭亡。只有经过特殊工艺处理的乳酸菌才 能到达肠道。进入肠内的乳酸菌，必须具备数量 多、活力强，才能发挥其生物功效
、
Βιβλιοθήκη Baidu12
技术路线
13
主要试剂和仪器
◆ 试剂 奶粉、甘露醇、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、
葡萄糖、磷酸氢二钾、柠檬酸三氨、乙酸 钠、硫酸镁、硫酸锰、吐温、蒸馏水、生 理盐水等。 ◆ 仪器 ◆ 高压灭菌锅、培养箱、无菌操作台、高速 离心机、发酵罐、真空冷冻离心机、菌液 瓶等
14
.具体实施方案
◆ 1乳杆菌活化 ◆ 将实验室冰箱保藏的德氏乳杆菌用100ml
灭菌的MRS液体培养基进行第一次活化，活 化温度37 ℃，24h后平板检测纯度和活菌 数，检测达标后再将上述100ml菌液全部转 入至400ml灭菌MRS液体培养基进行第二次 活化，24h后平板检测纯度和活菌数，检测 达标后转至40L发酵罐中进行扩大培养48h。
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◆ 2活菌数的测定
◆ 菌种经活化、扩培后，接入MRS液体培养基 培养，待测活菌数时，取0.5mL发酵液加入 至4.5mL灭菌的生理盐水中，依次做10倍系 列稀释，选取10-8、10-9、10-10三个稀释 倍数，吸取0.2mL稀释液注入无菌培养皿中， 倾注法加入15mL左右的计数培养基混匀， 每个稀释度做三个平行培养皿。待培养基 凝固后，倒置放入37℃恒温培养箱中，培 养48h，选取菌落数在30-300之间的培养皿 计菌落数。
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乳酸菌小介绍
中文学名：乳酸菌 界：细菌界 门：厚壁菌门Firmicutes 纲：芽孢杆菌纲Bacilli 目：乳杆菌目Lactobacillales 科：乳杆菌科Lactobacillaceae 属：乳杆菌属Lactobacillus 代谢类型：异养厌氧型
3
形态特征
◆ 乳酸链球菌族，菌体 球状，通常成对或成 链。
18
◆ 5存活率测定
◆ 冷冻干燥后的乳酸菌以生理盐水复活，进 行平板计数，结果以个/g表示。
19
谢谢观看！！！
7
类型
◆ 乳酸菌大体上可分为两大类： 1） 动物源乳酸菌 2）植物源乳酸菌
◆ 因为取自植物易被人体吸收，不论摄取多 大的量，人体不会产生异体蛋白排斥反应， 且植物源乳酸菌比动物源者更具有活力， 能比动物源多8倍的数量到达人体小肠内定 植，从而发挥其强大而稳定的生物功效。
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作用机理
乳酸菌在动物体内能发挥许多的生理功能。 乳酸菌能促进动物生长，调节胃肠道正常 菌群、维持微生态平衡，从向改善胃肠道 功能；提高食物消化率和生物效价；降低 血清胆固醇，控制内毒素；抑制肠道内腐 败菌生长：提高机体免疫力等
4
生理功能
◆ 1．防治有些人种普遍患有的乳糖不耐症 （喝鲜奶时出现的腹胀、腹泻等症状）。
◆ 2．促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物 质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质。
◆ 3．增加加肠道有益菌群，改善人体胃肠 道功能，恢复人体肠道内菌群平衡，形成 抗菌生物屏障，维护人体健康。
◆ 4、抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生 的毒素，清除肠道垃圾。
生药1311
乳酸菌细菌素的制备
系部:制药系 专业:生物制药 组员:张婉月 徐洁 严梦迎
臧赢 陈孝颜
乳酸菌的介绍
乳酸菌（Lactobacillus）是发酵糖类且主要 产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性 细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵 过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。是一 种存在于人类体内的益生菌。乳酸菌可用于 制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄酒、 泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。