15.苗天红-输血前血型血清学检查.pdf

输血前血型血清学检查疑难标本的实验操作

及试剂的使用

北京市红十字血液中心

血液研究所血型室苗天

红

输血前血型血清学检查

（输血相容性检测）

《临床输血技术规范》要求

✧血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血型）

✧抗体筛选（受血者意外抗体筛查）

✧交叉配血

一ABO血型

ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+；反定型反应强度≥2+。

ABO 正反定型不符的定义和范围

✧ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。

✧ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜

4+，反定型反应强度＜2+。

✧正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差

别＞2+以上。

ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）

✧ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。

✧正定型为O型，反定型非

O型或Ac、Bc凝集强度差别

＞2+以上

正反定型不符处理的程序

✧排除仪器设备、试剂、标

本及操作失误。

✧查阅、询问病历资料，设

计针对性试验。

✧选择试管法做正反定型。

✧ABO血型鉴定的特殊技

术。

✧吸收放散试验

✧唾液型物质检测

✧毛细管离心分离自身和输入红细胞 ✧DTT处理自身凝集

红细胞

✧分子生物学检测

（血型基因）

✧询问、查阅病历

✧试管法正反定型

✧血型鉴定特殊技术

观察

↓

假设

↓

验证

↓

解决

试管法

试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。

✧可以反复离心看结果。

✧可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、

37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素

的干扰。

✧可以观察红细胞混合外观现象。

✧可以观察红细胞溶血现象。

试管法正反定型

ABO血型定型试剂

抗-A1抗-A1用于检测A亚型。

注意：

抗-A1反应阴性

✧A亚型

✧A型抗原减弱

A型新生儿与抗A1反应阴性

或弱反应

抗-H 抗-H用于检测ABO亚型及

孟买、类孟买型。

( A或B亚型H抗原增强，孟买、

类孟买H抗原阴性。)

注意：

✧血液病致A、B抗原减弱，H抗

原可能出现增强或减弱。

✧必须做对照试验。

抗-AB 抗-AB用于鉴定A x和B x，

抗-AB与A x、B x抗原会产

生较强反应。

反定型

✧O细胞用于确认反定型的

有效性,可以发现ABO系

统以外室温反应性抗体干

扰ABO反定型。

✧自身对照用于检测是否存

在自身冷抗体干扰ABO反

定型，确认正反定型的有

效性。

✧A2细胞用于A亚型的鉴定（A亚型产生抗-A1抗体）。

注意：

✧反定型抗-A减弱，可能出现

与A1细胞阳性反应，与A2细胞反应阴性。

规范的摇试管方法

试管法凝集强度判读

反应强度红细胞凝集情况

4+一个结实的大凝块，背景清楚

3+几个大凝块，背景清楚

2+中等大小凝块，背景清楚

1+小凝块，背景较混浊

w+有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝集细胞

0没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液

pH部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色

H完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色

mf混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞

试管法凝集强度

为什么要使用标准凝

集强度：

✧操作标准化。

✧实验结果有回溯性。

✧保证不同实验室、不同工

作人员对同一标本实验结

果的一致性。

吸收放散试验

表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。可以通过将其吸收的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或弱B抗原的存在。

✧吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。

✧吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B。

✧将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间每

隔15分钟混匀一次。

✧用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。

✧56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。

✧用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。

✧注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。

巯基试剂消除自身凝集红细胞

✧巯基试剂：DTT、2-Me

✧巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷

自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝

集的红细胞。

✧用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的

0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成

2-4%的悬液备用。