15.苗天红-输血前血型血清学检查.pdf
疑难血型鉴定苗老师讲解
一、ABO血型
ABO血型鉴定是输血前最重要的血清学检测， 必须保证ABO血型鉴定系统的安全性和敏感 性。
应尽可能运用全自动检测系统，以减少结 果解释和抄录错误的风险。
ABO血型
ABO血型定型的方法 正反定型不符的原因 解决正反定型不符的程序 ABO亚型 ABO血型定型常见问题的解决方法 ABO血型与临床输血
正反定型不符结果分类：红细胞
ABO亚型 血液病致抗原减弱 血型型物质过高 急性大量失血 4个月内婴儿 近期输（异型）血 造血干细胞移植（异型） 红细胞自身凝集 直抗强阳性红细胞 获得性B、多凝集红细胞 红细胞血型嵌合体等
正反定型不符结果分类：血浆
年龄（4个月内婴儿、老年人）。 白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制剂的患者、先天丙种球蛋
举例
ABO定型常见问题的解决方法
ABO亚型
正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H 反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身对照 吸收放散试验 唾液型物质检测 血型基因检测 有条件者可作家系调查
ABO定型常见问题的解决方法
A、B抗原减弱
延长反应时间、4℃孵育 吸收放散 唾液型物质检测 既往血型调查 血型基因检测 临床追踪：一般病情缓解后血型抗原恢复
一、询问、查阅临床资料 （临床输血申请单）
患者的年龄 患者的临床诊断 患者的近期输血史 患者的近期用药史、治疗史 患者是否进行了造血干细胞移植 患者以前的血型
二、试管法
试管法定型的优点
可以反复离心看结果。 可以随意延长抗原抗体反应时间，可以改变反应
温度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的 检出或排除冷凝集素的干扰。 可以观察红细胞混合外观现象。 可以观察红细胞溶血现象。
《输血与血型》教学课件15 人教版
4、什么血型的人被称为“万能受血
者”？ AB型
5、成年人一次献血200～300毫升
影响健康的原因是（ B）
A 损失200～300毫升的血液， 人体丝毫没有影响
B 损失的血细胞和营养成分在 之后会得到补充
C 少量损失血液有助于健康 D 血液的减少可以促进人体造
6、一个AB型血的人因大量出血,需
12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚
14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东
1、在什么情况下伤者才需要输血？
如果一个人一次失血超过血 液总量的30%（约1200~1500 毫升）以上，就会严重影响人 的生命活动，甚至危及生命， 此时就必须通过输血进行抢救。
2、成年人的血量大致相当于本人 的多少?你的体重是多少?如果按成 人的比例计算，你的血量大约是多
成年人的血量大致相当于本 人体重的7％—8％
18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫·托尔斯泰
20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰·贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最痛。
15.苗天红-输血前血型血清学检查
正反定型不符
ABO 正反定型不符 （多或少抗原、抗体）
正反定型不符
巯基试剂消除自身凝集红细胞
巯基试剂：DTT、2-Me 巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷 自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝 集的红细胞。 用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的 0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成24%的悬液备用。
注意：
反定型抗-A减弱，可能出 现与A1细胞阳性反应，与 A2细胞反应阴性。
规范的摇试管方法
试管法凝集强度判读
反应强度 4+ 3+ 2+ 1+ 红细胞凝集情况 一个结实的大凝块，背景清楚 几个大凝块，背景清楚 中等大小凝块，背景清楚 小凝块，背景较混浊
w+
0 pH H
有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝 集细胞
抗体筛选的技术
患者血浆＋筛选细胞 患者血浆＋自身细胞（自身对照）
自身对照无须作为抗体筛检的一部分。 抗体筛选阳性，应做患者自身细胞对照，这有助于识别高 频抗原的抗体还是自身抗体。
方法： LISS-IAT法（低离子强度盐溶液-间接抗人球蛋白试验）由于 它的速度快、灵敏度和特异性高，被公认为检测有临床意义抗体的最 适合方法。 LISS-IAT法可以检测IgG抗体和37 ℃有反应性的IgM抗体。 LISS-IAT法（试管法、 LISS/Coombs卡）。
临床输血检验之血型血清学检查
操作步骤
将待测血液与含有酶的溶液混合， 通过酶促反应检测抗原抗体，从而 确定血型。
适用范围
酶法适用于多种血型系统的检测， 包括ABO、Rh等，准确度高，但操 作较为复杂。
抗人球蛋白法
原理
抗人球蛋白法是一种间接检测抗 原抗体的方法。通过将待测血液 与抗人球蛋白抗体混合，观察红 细胞是否凝集，从而确定血型。
操作步骤
将待测血液与抗人球蛋白抗体混 合，观察红细胞是否凝集，从而
确定血型。
适用范围
抗人球蛋白法适用于多种血型系 统的检测，准确度高，但操作较 为复杂，且需要使用特殊试剂。
04
血型血清学检查的 临床应用
输血前的血型鉴定
输血前必须进行ABO血型和Rh血型的鉴定，以确保受血者与供血者血型相容，避免 发生输血反应。
抗体检测包括直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验，前者用于检测受 血者体内是否存在针对供血者红细胞的抗体，后者用于检测受血者血清
中是否存在免疫性抗体。
抗体检测有助于及时发现并处理输血后产生的免疫反应，避免发生溶血 性输血反应。
新生儿溶血病的诊断
新生儿溶血病是指由于母子血型不合 ，母亲体内产生针对胎儿红细胞的抗 体，导致胎儿红细胞破坏而引起的溶 血性疾病。
救措施。
输血后应继续观察受血者的病情 变化，评估输血效果，并及时处
理任何可能的并发症。
06
血型血清学检查的 未来发展
新技术的应用
基因分型技术
利用基因分型技术对红细 胞和血型相关蛋白进行分 型，提高血型鉴定的准确 性和分辨率。
生物传感器技术
利用生物传感器技术快速 、准确地检测血型抗原和 抗体，提高检测效率和灵 敏度。
Rh抗体检测
输血前血型血清学检查
输血后的抗体检测
输血后抗体检测的目的是检测受血者体内是否产生了针对供血者的特异性抗体， 以评估输血的安全性和有效性。
抗体检测的方法包括直接抗球蛋白试验（DAT）和血清学检测，通过检测受血者 血清中是否存在针对供血者红细胞的抗体，判断是否存在免疫反应。
输血不良反应的预测
输血不良反应是指在输血过程中或输血后发生的与输血相关的反应，如发热、过敏 、溶血等。
02
CATALOGUE
血型血清学检查的流程
采集样本
采集时间
通常在输血前进行，以确 保血型匹配。
采集方法
通过静脉采血的方式，采 集受检者的血液样本。
样本标识
对每个受检者的血液样本 进行唯一标识，以便后续 识别和追踪。
样本处理
离心分离
将采集的血液样本进行离心分离 ，以分离出血浆和红细胞。
血浆处理
将分离出的血浆进行适当的处理， 如灭活补体、去除血小板等。
结果报告
将检测结果以书面报告的形式提交给 医生或相关医疗机构，以便进行后续 的输血治疗或手术。
03
CATALOGUE
血型血清学检查的临床应用
输血前的血型匹配
输血前血型血清学检查是确保输血安 全的重要环节，通过检查受血者和供 血者的ABO血型和Rh血型，以避免 因血型不匹配导致的输血反应。
除了ABO血型和Rh血型，其他稀有血 型如MNS、KELL、LU、YT等也需要 进行匹配，以降低输血风险。
红细胞处理
将分离出的红细胞进行适当的处理 ，如洗涤、标记等。
检测方法
抗体检测
通过检测受检者血清中的抗体， 确定受检者的血型。
交叉配血试验
通过将受检者的红细胞与已知血 型的标准红细胞进行混合，检测 是否存在红细胞凝集反应，以确 定是否可以进行输血。
输血前血液学检查 ppt课件
操作步骤
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1. 取试管两支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆） 2滴，加供血者3%~5%红细胞悬液1滴，次侧管反之。 2. 各加低离子溶液 0.65ml，混合均匀后，再各加聚凝 胺溶液2滴，并混合均匀。 3. 用离心机 3400 转 / 离心 10 秒，然后把上清液倒掉， 不要沥干，让管底残留0.1ml液体。 4. 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集， 则必须重做。 5. 最后加入悬浮液2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察 结果。如果在 60 秒内凝集散开，代表是由聚凝胺溶液引 起的非特异性聚集，配血结果相合；如果凝集不散开， 则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相 合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。
操作步骤
1. 离心供血者、受血者血液标本，使红细胞与血清分离。用生理 盐水洗涤供血者及受血者红细胞 3次，配成3%~5%的生理盐水红细 胞悬液。 2. 取洁净小试管2支，分别标记为主侧及次侧管。 3. 主侧管内加受血者血浆或血清2滴及供血者红细胞悬液1滴；次 侧管加供血者血清2滴及受血者红细胞悬液1滴，立即混匀。 4. 将2支试管放入离心机内，以1000×g离心15秒。 5. 取出试管，首先用肉眼观察试管上清液有无溶血现象，再轻轻 摇动试管，直至红细胞成为均匀的混悬液后，观察有无红细胞凝集。 6. 取1 张玻片，用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液 各1滴，均匀滴放在载玻片上，用显微镜观察并记录结果。
四、 交叉配血试验
完整的交叉配血试验应包括： 1. 复查收到的受血者血样的ABO、Rh血型以及 抗体筛查的结果。 2. 查阅受血者以前的血型检查记录，如与此次 结果不服，应及时分析原因。 3. 选择预先进行血型检查的合格献血者作交叉 配血试验。 交叉配血体系均应在37℃孵育。使用能检出不完 全抗体的配血方法进行交叉配血。除了盐水介质 法外，还应使用能检出其他血型系统抗体的方法， 例如：抗球蛋白试验，酶技术、聚凝胺法、微柱 凝胶卡式检测法等
输血前检查与安全输血
（二）、Rh定型和定型试验中应注意的问题
l Rh定型主要鉴定D抗原，定型时应按抗D 血清试剂的使用说明进行，并注意设立 对照试验系统。
l Du型的鉴定及意义 l 只有病人有抗D以外的抗体时才有必要确
定献血者Rh（D）以外的抗原，选择抗 体对应的阴性抗原血液和病人配血，可 避免溶血性输血反应的发生。
输血前检查与安全输血
交叉配血的主要作用
（1）大多数情况下能证实献血者的红细胞 与病人的ABO血型是配合的。
（2）能检查出存在于病人血清中的针对献 血者红细胞的大多数抗体。
（3）有无工作上的差错事故（如认错病 人，拿错血袋等）。
输血前检查与安全输血
交叉配血的作用仍有许多局限性，还不能 解决如下几个问题：
输血前检查与安全输血
配血试验的内容包括：
（1）病人血清对供者红细胞 检测对供者红细胞 起反应的抗体，一般称为“主侧”配Байду номын сангаас。
（2）病人红细胞对供者血清 检测对受者红细胞 起反应的抗体，一般称为“次侧”配血。
（3）病人血清对病人红细胞 称为“自身对照” 试验。目的是显示或排除自身抗体，直接抗球 蛋白试验阳性及红细胞串钱状假阳性的存在。
输血前检查与安全输血
4．患者当前检出或既往曾检出某种血型特异性 抗体，则需选择该抗体对应抗原阴性的血液配 血，例如：患者检出抗E，则需选择ABO血型 与患者同型或相容且Rh血型E抗原阴性之血液 配血。 又例如：患者既往曾检出有抗Jka抗体，尽 管随着时间的延长该抗体水平下降，当前已不 能检出该抗体，但为患者选择血液时仍需选择 ABO血型与患者同型或相容且Kidd血型Jka抗原 阴性之血液配血，只有这样才能避免因回忆反 应产生的抗Jka导致迟发性溶血性输血反应。
输血前检查
Pretransfusion Testing （輸血前檢查）(Type and screen, crossmatch)-----包括血型、抗體篩檢、交叉配合試驗等輸血前檢查成大醫院病理部陳容卿95.8.23備輸血程序備血醫囑血庫檢驗1. 病人輸血經歷調查2. 正確收集病人檢體3.填醫囑單1. 偵測目前檢體與過去ABO、抗體報告是否相符2. 準備血品–進行交叉配合試驗輸血1.核對、輸血、監控2.記錄生命跡象輸血前檢查的目的l達到輸血治療的目的—為輸血病患選擇適當之血液成分，以保障輸血時，不會造成自身血球被破壞並維持輸入血品的存活率。
1.選擇適當的ABO血型2.檢測病患的不規則抗體反應3.受血者(病患)與捐血者(血品)間的配合試驗備輸血流程l適當的醫囑及正確的檢體l實驗室(血庫)的數據資訊保存完整---過去輸血史、抗體記錄、本次結果l確實執行輸血核對l落實輸血回報ABO typing操作步驟血球分型（Cell typing）：1 紅血球以0.9% Normal Saline 洗3次後，泡製成3-5% 細胞懸浮液備用。
2 取兩支試管分別加入anti-A或anti-B試劑2滴。
3 再加入病人3-5%紅血球懸浮液各1滴。
4 輕搖混合後，以900 -1000 g 離心15秒。
5. 取出試管輕輕搖動，目測觀察有無凝集反應，記錄結果價數血清分型（Serum typing）：1 取兩支試管分別加入A1 cell 或B cell試劑各1滴。
2 再加入病人血清各2滴。
3 輕搖混合後，以900 -1000g 離心15秒。
4 取出試管輕輕搖動，目測觀察有無凝集反應，記錄結果價數AB--++A +--+B 0++-O ++--ABO GroupB Cell A1Cell Anti-B Anti-A InterpretationReaction of Serum TestedAgainstReaction of TestWith ABO typing 之結果判讀判讀血型的注意事項l如何確保判讀的正確性l詳實記錄l技術員間的誤差l定義異常血型抗體篩檢(Antibody Screening Test)l目的：利用2~3支已知抗原的血球測定血清中的不規則抗體－自體或是異體抗體l autologous control or DAT 可以不列入例行工作l發生原因：懷孕、輸血、移植、免疫注射或其他不明原因l臨床意義：避免使輸入的RBC壽命減短或引起溶血反應抗體篩檢血球的特性l一定是O型陽性l因種族抗原分布頻率不同, 偵測重要的紅血球抗原系統, 如Miltenberger system---Mi al考慮重要抗原系統劑量效應(Dose effect)如Rh, Kidd, Duffy, MNSsScreening cell I, II, III抗原組成表貼在操作台, 以便檢視陽性結果Manual Polybrene TestPt’s serum 2 drops + Donor 3-5% cells 1drop0.6 ml LIM(low ionic medium)incubate 1 min2 drops Polybrene reagent mixing3400 rpm 15 seconds & discard supernatant2 drops Resuspending reagentinterpretation影響IAT結果的重要步驟l血球與血清的比例l Incubation time：加入enhancement reagent的培育時間長短l Washing：洗滌次數的多寡與技巧(是否倒乾上清液)l AHG phase：判讀技巧l最後是否加入Coombs Control CellNewer routine non-test-tube methods for antibody detection and identificationl The microtube test: column agglutination Gel test-----ReACT; Diamedglass bead-----BioVuel Solid-Phase techniquel Six column configuration l Microwell spacingl Plastic compositionl Identifying labelsl Sealed with foil抗體篩檢陽性時l如何簡易判斷抗體種類？1.先判斷室溫是否反應---1)可先找出會干擾其他溫型抗體,如anti-M2)決定鑑定和交叉試驗方法的方向2.善用screening cell抗原組成表3.利用價數強度, 判斷單一抗體或多重抗體4.與過去抗體紀錄比較5.病患抗原的表現進行抗體鑑定l調閱並比較病患過去的抗體紀錄, 依screening cell反應型態改變, 決定重新鑑定的方向l區分是否有害的抗體l結果永久存檔,下次輸血可立即調閱l提出適當的交叉試驗方法供所有血庫同仁遵循The clinical significance of antibodies of given specificities and selection/testing of red-cell units prior to their issueAntigen-negativeYesAnti-S,-sAntigen-negative Yes Kidd antibodies Antigen-negative Yes Duffy antibodies Antigen-negative Yes Kell antibodies Antigen-negative Yes Rh antibodies (reactive in IAT)Selection of units Clinicalsignificance SpecificityThe clinical significance of antibodies of given specificities and selection/testing of red-cell units prior to their issueSeek advice from transfusion centreDepends on specificityAntibodies against low/high-frequency antigensSeek advice from transfusion centre Unlikely High-titre low-avidity antibodies (HTLA)Not clinically significant and can be ignored No Anti-Le bIAT cross-match-compatible 37°CRarely Anti-Le a , Anti-Le a+b Antigen-negative Sometimes Anti-M reactive at 37°C IAT cross-match-compatible 37°C Rarely Anti-MIAT cross-match-compatible 37°C Rarely Anti-A 1, -P 1, -N Selection of units Clinicalsignificance SpecificityCrossmatching TestAntibody screening test ( MP )(+) (-)Crossmatch using MP (-)Can be transfused(+)Protocol for AntibodyidentificationOptimal method for AbspecificityAHG (-)做哪些項目?＊確認捐血者的ABO cell typing( 含紅血球成分的血品)＊執行交叉配合試驗( Minor crossmatching test is not necessary for adult )Interpretation of Antibody Screening & Crossmatching ResultsInterpretation of Antibody Screening & Crossmatching Results四個月內新生兒的輸血前檢查＊若不考慮新生兒的ABO，輸予O型紅血球，必須考慮捐血者(血袋)的anti-A、B 的價數(<32X)＊應盡量輸用5天內的新鮮血品交叉試驗的限制l無法確認病人身分l無法偵測Rh錯誤l無法偵測所有對應捐血者抗原的病人抗體l無法預防病人的異體免疫(重複輸血會產生多重抗體)緊急用血計畫通常區分為1. 「非常緊急用血」2. 「緊急用血」。
输血学血型及相关的血清学检测-精品医学课件
36
新生儿溶血症
Rh血型>ABO血型
抗原发育：
Rh血型
ABO血型
胎儿早期充分发育
出生时不完全
出生时达到成人水平
2-4岁充分
抗体3个月发育完全
37
输血相关血清学检测
✓ 血型鉴定——血凝试验 ✓ IgG抗体——coombs试验 ✓ 不规则抗体检测
38
血型鉴定的定型原理
血凝试验---特异性抗体和有相应抗原的红细胞在液体 或固体介质中发生肉眼可见的凝集反应
白细胞 〉 血浆 〉 血小板 〉红细胞
69
成份输血的优越性
高效 安全 易于保存 节约血液资源
70
人类最早的“输血”记录 1492 教皇
71
生活风险(年死亡机率)
72
献血
体液学说与放血疗法
希波克拉底 约公元前400年
73
华盛顿 1799逝世
临床输血原则
同型输注 相合输注
74
39
40
各种ABO血型个体的血清与红细胞
41
42
43
44
45
46
交叉配血
定义：用受血者血清与供血者红细胞 （主侧）以及受血者红细胞与供血者血清 （次侧）交叉配血
盐水、抗人球、 聚凝胺三种介质配血
47
输血型溶血
母：Rh-
父：Rh+
新生儿溶血症
子：Rh+ 第二胎
1939年 Levine
(1940, Landsteiner and Weiner)
Rh 血型系统的发现
1937年--1939年 Karl Landsteiner 等 用恒河猴（ rhesus monkey）红细胞免疫家兔和豚鼠得到的 抗血清将人红细胞分为Rh阴性和Rh阳性
输血前检查
聚凝胺介质配血 凝胶方法配血
盐水介质配血方法
患 者 主 侧
献 血 者 侧
阳 性
离心 次 看结果
阴 性
抗球蛋白配血方法
患 者 主 侧 献 血 者 次 侧
37 ℃
37℃ 水浴30分钟
三洗
抗球蛋白方法配血方法
加 抗 球 蛋 白
阳 性
离心 看结果
阴 性
酶介质配血方法
患 者 主 侧 献 血 者 次 侧 主次侧 均加酶
－ － － － ＋ ＋ ＋
－ － － － ＋ － ＋
适合 Ⅰ 不适合 Ⅱ 不适合 Ⅲ 不适合 Ⅳ 保留Ⅴ 保留Ⅵ 保留Ⅶ
Ⅰ适合：能输血 II不适合：不能输血 1) 怀疑ABO血型不合 2) 怀疑患者存在不规则抗体 3) 偶尔供血者直抗阳性 III 不适合：不能输血 1)怀疑ABO血型不合 2) 怀疑供血者存在不规则抗体 3)受血者存在多凝集现象 Ⅳ 不适合：不能输血 1)怀疑ABO血型不合 2) 怀疑患者及供血者存在不规 则抗体
Rh血型定型
主要鉴定D抗原，定型时应按抗D血清试 剂使用说明进行，并注意有严格的对照试验，
包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试
验。
Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因
1、受检红细胞直抗阳性 2、高蛋白试剂引起缗钱状凝集 3、纤维蛋白造成的凝块
4、定型试剂中存在的其它抗体
5、多凝集细胞造成的假阳性
6、鉴定器材和试剂血清被污染
酶介质配血方法
37 ℃
阳 性 离心 看结果
37℃ 水浴30分钟
阴 性
低离子聚凝胺技术
原理
聚凝胺（Polybrene），一种高价离子季 胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以 中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离 减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝
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输血前血型血清学检查疑难标本的实验操作及试剂的使用北京市红十字血液中心血液研究所血型室苗天红输血前血型血清学检查（输血相容性检测）《临床输血技术规范》要求✧血型鉴定（受血者、献血者的ABO和RhD血型）✧抗体筛选（受血者意外抗体筛查）✧交叉配血一ABO血型ABO 正反定型相符：正反定型相符且正定型反应强度4+；反定型反应强度≥2+。
ABO 正反定型不符的定义和范围✧ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）。
✧ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。
✧正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上。
ABO 正反定型不符（多或少抗原、抗体）✧ABO 正反定型相符，但弱反应，正定型反应强度＜4+，反定型反应强度＜2+。
✧正定型为O型，反定型非O型或Ac、Bc凝集强度差别＞2+以上正反定型不符处理的程序✧排除仪器设备、试剂、标本及操作失误。
✧查阅、询问病历资料，设计针对性试验。
✧选择试管法做正反定型。
✧ABO血型鉴定的特殊技术。
✧吸收放散试验✧唾液型物质检测✧毛细管离心分离自身和输入红细胞 ✧DTT处理自身凝集红细胞✧分子生物学检测（血型基因）✧询问、查阅病历✧试管法正反定型✧血型鉴定特殊技术观察↓假设↓验证↓解决试管法试管法：血型定型金标准，常用于疑难血型鉴定。
✧可以反复离心看结果。
✧可以延长抗原抗体反应时间，可以改变反应温度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗体的检出或排除冷凝集素的干扰。
✧可以观察红细胞混合外观现象。
✧可以观察红细胞溶血现象。
试管法正反定型ABO血型定型试剂抗-A1抗-A1用于检测A亚型。
注意：抗-A1反应阴性✧A亚型✧A型抗原减弱A型新生儿与抗A1反应阴性或弱反应抗-H 抗-H用于检测ABO亚型及孟买、类孟买型。
( A或B亚型H抗原增强，孟买、类孟买H抗原阴性。
)注意：✧血液病致A、B抗原减弱，H抗原可能出现增强或减弱。
✧必须做对照试验。
抗-AB 抗-AB用于鉴定A x和B x，抗-AB与A x、B x抗原会产生较强反应。
反定型✧O细胞用于确认反定型的有效性,可以发现ABO系统以外室温反应性抗体干扰ABO反定型。
✧自身对照用于检测是否存在自身冷抗体干扰ABO反定型，确认正反定型的有效性。
✧A2细胞用于A亚型的鉴定（A亚型产生抗-A1抗体）。
注意：✧反定型抗-A减弱，可能出现与A1细胞阳性反应，与A2细胞反应阴性。
规范的摇试管方法试管法凝集强度判读反应强度红细胞凝集情况4+一个结实的大凝块，背景清楚3+几个大凝块，背景清楚2+中等大小凝块，背景清楚1+小凝块，背景较混浊w+有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊，显微镜下可观察到较多凝集细胞0没有可见的细胞凝集，呈均匀的红细胞悬液pH部分溶血：残留部分红细胞，液体出现透明澄清红色H完全溶血：未见红细胞，液体出现透明澄清红色mf混合外观凝集，部分红细胞形成较大凝块，周围是游离的红细胞试管法凝集强度为什么要使用标准凝集强度：✧操作标准化。
✧实验结果有回溯性。
✧保证不同实验室、不同工作人员对同一标本实验结果的一致性。
吸收放散试验表达弱A和弱B抗原的红细胞直接离心试验中不被抗-A、抗-B所凝集，但可以吸收相应的抗体。
可以通过将其吸收的抗体放散出来，并检测放散出来的抗体，以证明弱A或弱B抗原的存在。
✧吸收用RBC：盐水洗涤3次的待检压积RBC 1ml。
✧吸收用的抗血清：人源抗-A、抗-B。
✧将压积RBC和抗血清按等体积比例混合，在4℃孵育至少1小时，期间每隔15分钟混匀一次。
✧用冷盐水洗涤孵育后的细胞4-6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
✧56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
✧用试剂红细胞检测放散液（人源抗体要做盐水介质和IAT）。
✧注意：一定要用O型红细胞做阴性对照。
巯基试剂消除自身凝集红细胞✧巯基试剂：DTT、2-Me✧巯基试剂可以裂解IgM抗体单体间的二硫键，用以消除冷自身抗体造成的红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝集的红细胞。
✧用盐水洗涤红细胞3遍并配成50%的悬液，加入等量的0.01M的DTT，37℃孵育30分钟，将细胞洗涤3遍后配成2-4%的悬液备用。
DTT处理自凝红细胞二RhD血型✧被检红细胞与抗-D试剂凝集者为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
✧正常的RhD阳性：与IgM抗-D≥3+反应强度。
✧红细胞与IgM抗-D反应强度≦2+✧D变异型✧自身凝集红细胞✧抗-D引起的新生儿溶血病。
✧血液病致D抗原减弱✧直接抗人球蛋白强阳性红细胞D抗原分类D抗原的分类：根据D抗原的数量和表位不同，将D抗原分为以下3类：✧正常的D：与IgM抗-D≥3+反应强度。
✧D变异型：与IgM抗-D弱反应或阴性，需IgG抗-DIAT才能检出。
1.弱D（weak D）2.部分D（partialＤ）DEL型：只有吸收放散才能检出D。
IgM抗-D试剂✧对受血者只需用IgM抗-D试剂检测红细胞上是否有D抗原。
✧以输血为目的常规检测没有必要使用高效价的单克隆抗-D试剂及IgM+IgG单克隆抗-D试剂检测D变异型及对D阴性的标本进行确认试验，否则有不必要的风险。
因为：1. 必须设立一个凝集强度来区分正常D和D变异型，增大了误判的风险。
2. 用于献血者的抗-D试剂盐水介质离心能检出部分D变异型。
3. 如果DAT阳性，用IgG抗-D做IAT试验时将D阴性误判为D阳性。
切记：使用错误试剂的风险远远大于报告一个D变异型。
IgM+IgG抗-D试剂✧对初检为RhD阴性的献血者须进行RhD阴性确认试验，以确认其是RhD阴性还是D变异型。
✧D变异型红细胞与大多数抗-D试剂在盐水介质中弱凝集或不凝集，但与抗-D试剂孵育或在间接抗人球蛋白试验中发生凝集。
抗-D试剂三抗体筛选✧抗体筛选的目的是确定患者血清中是否存在有临床意义的抗体。
✧如果抗筛阳性，需要做抗体鉴定来确认有临床意义的抗体、最终选择合适的血液输注，同时提醒临床医生可能推迟提供配合的血液。
✧抗体筛选应该作为输血前检测的一部分，它提供了比交叉配血更为可靠和灵敏的检测抗体的方法（剂量效应等）。
✧抗体筛选或鉴定比交叉配血更敏感，认为：最严格的配血能配上就安全的认识是不全面的。
抗体鉴定✧患者抗体筛选阳性，如果时间允许，应做抗体鉴定并评估其临床意义，抗体鉴定结果应记录在患者病历中。
1. 鉴定抗体类型：IgM、IgG。
2. 鉴定抗体种类：同种抗体、自身抗体。
3. 鉴定抗体特异性:抗-？✧输血科工作人员可根据抗体鉴定的结果判断配血的相合率和选择最佳的交叉配血方法。
✧抗原检测的效率比盲配较高。
同种抗体✧同种抗体的结果须永久保存✧有剂量效应的抗体及一些弱抗体，与相应抗原纯合子反应、与杂合子不反应，配血相合不能保证输血安全性。
✧随着时间的推移，有些抗体会减弱甚至无法检出，配血相合，输血后会引起免疫记忆细胞在短时间产生大量抗体，引起溶血性输血反应。
✧对于同种抗体，每次输血都应选择无对应抗原的红细胞成分，而非仅配血相合。
抗体筛选的技术✧患者血浆＋筛选细胞✧患者血浆＋自身细胞（自身对照）自身对照无须作为抗体筛检的一部分。
抗体筛选阳性，应做患者自身细胞对照，这有助于识别高频抗原的抗体还是自身抗体。
✧方法：LISS-IAT法（低离子强度盐溶液-间接抗人球蛋白试验）由于它的速度快、灵敏度和特异性高，被公认为检测有临床意义抗体的最适合方法。
✧LISS-IAT法可以检测IgG抗体和37℃有反应性的IgM抗体。
✧LISS-IAT法（试管法、 LISS/Coombs卡）。
筛选细胞✧ 3%✧ 0.8%抗人球蛋白卡（LISS/Coombs卡）✧凝胶✧ 玻璃珠抗人球蛋白试剂✧多特异抗-IgG+C3d✧单特异抗-IgG抗体筛选抗体筛选：存在血浆干扰时应选择试管LISS-IAT法；存在自身抗体时选择盐水介质-IAT法。
LISS-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37℃孵育15分钟，离心观察细胞的凝集、溶血情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。
盐水介质-IAT：2滴血清（血浆）、1滴2-4%的红细胞，37℃孵育45-60分钟，离心观察细胞的凝集、溶血情况，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂后混匀，1000g离心15s后判读结果。
可以将细胞配成0.8%的悬液，加50ul到LISS/Coombs卡中，直接离心判读结果。
特别注意：抗人球蛋白试剂凝聚胺✧试管中加入2滴血清（血浆）和1滴2%-4%红细胞悬液，混匀。
✧以1000g离心15秒，观察结果。
如果阴性则继续试验；如果阳性，需分析原因排除干扰后继续后续试验（此处发现并处理冷凝集素）。
✧加0.6-1mlLIM试剂，混匀后室温放置1分钟。
✧加入2滴Polybrene试剂，混匀后立即以1000g离心15秒，弃去试管中液体，轻摇试管，肉眼判断红细胞凝集情况。
如果有凝集出现则继续操作，如果没有凝集出现则该试验无效。
✧加入2滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。
✧结果判定：1分钟内凝集消失为聚凝胺试验阴性，1分钟内凝集不消失为聚凝胺试验阳性。
✧对于可疑的弱阳性结果，可用生理盐水洗涤3遍后，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。
四交叉配血✧抗体筛选阴性：LISS/Coombs卡、凝聚胺法。
✧如患者血浆中有（或既往曾有）临床可能有意义的红细胞抗体，必须使用间接抗人球蛋白法进行 交叉配血。
1.同种抗体： LISS/Coombs卡（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。
注意：IgM抗体，应加做试管盐水离心法。
2.自身抗体：经典-IAT法。
3.同种抗体+自身抗体：经典-IAT法（选择没有抗体对应抗原的红细胞成分）。
抗人球蛋白卡VS凝聚胺抗体筛选阴性两种方法交叉配血结果不一致✧按那种方法的结果发血？✧以抗人球蛋白卡为准吗？怎么办？找原因！找原因！！找原因！！！抗人球蛋白卡VS凝聚胺凝聚胺法配血不合、LISS/Coombs卡配血相合✧37度无反应性的IgM抗体（同种抗体、冷自身抗体）✧凝聚胺能检出而抗人球法漏检的抗体LISS/Coombs卡配血不合、凝聚胺法配血相合凝聚胺法会漏检抗体，交叉配血结果以LISS/Coombs卡为准。
抗体筛选阴性、LISS/Coombs 卡配血不合✧ 献血者DAT 阳性。
✧ 新生儿血清中存在母体的IgG 抗-A/B 抗体。
✧ 患者曾接受ABO 不相合造血干细胞移植。
✧ 患者3个月内曾接受ABO 同型的实体器官移植，由于供者淋巴细胞产生的IgG 型抗-A 及抗-B 。
✧ 患者血清中有针对进口筛选细胞没有但亚洲人有的抗原的抗体，如抗-Mi a 、抗-Mur 、抗-Di a 。
✧ 静脉丙球中的血型抗体。