液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
主要内容
• 液相色谱-质谱联用技术简介 • 我们的仪器 • 测试准备阶段的注意事项 • 结果的解读
• 质谱基本原理
第一章 液相色谱-质谱联用技术 简介
质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比的测定来进 行分析的一种分析方法。
电离装置把样品电离为离子 质量分析器把不同质荷比的离子分开 检测器检测
清洁剂和其他表面活性剂会产生离子抑制
不能使用
表面活性剂
缓冲盐
避免使用非挥发性盐，特别是碱金属磷酸盐、硼酸盐、 柠檬酸盐等。 推荐使用甲酸铵、乙酸铵
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 流动相的流速
Column ID 4.6 mm 3.0 mm 2.1 mm 1.0 mm Capillary
Q 1 q 2 Q 2
MS 1
流量。
高流速需进行分流
需要提高毛细管温度
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• ESI
• 离子在液态产生 • 有益于热不稳定化合物的分
第一章 LC-MS技术简 介
离子源与液相色谱的流速
• ESI
• APCI
1 μ L/min - 1mL/min 最佳使用流速: 200 μ L/min 一般来说, 高流速需要高的 毛细管温度和鞘气、辅助气
200 μ L/min - 2mL/min 最佳使用流速: 500 μ L/min 一般来说，高流速需要更高 的鞘气和辅助气流量，但不
液相色谱质谱仪器器使用方法说明书
液相色谱质谱仪器器使用方法说明书液相色谱质谱仪器使用方法说明书一、引言感谢您选择我们的液相色谱质谱仪器，本说明书将详细介绍仪器的使用方法，帮助您快速上手操作并获得准确的分析结果。
二、仪器概述液相色谱质谱仪器是一种用于分离、检测和定性化合物的分析仪器。
本仪器采用了先进的液相色谱技术和质谱检测技术，结合了两者的优势，能够广泛应用于食品安全、药物研发、环境检测等领域。
三、仪器组成1. 液相色谱柱：本仪器配备了高效液相色谱柱，用于样品的分离。
2. 质谱检测器：本仪器采用了质谱检测器，用于对分离后的样品进行检测和分析。
3. 数据处理系统：本仪器配备了专业的数据处理系统，能够对检测结果进行快速、准确的分析和解读。
四、仪器使用步骤1. 准备工作：a. 确保仪器与电源连接正常，并开启电源。
b. 检查液相色谱柱和质谱检测器的状态，确保其完好无损。
c. 启动数据处理系统，并确保其与仪器的连接正常。
2. 样品准备：a. 根据需要进行样品的提取和净化处理。
b. 将经过处理的样品溶解于适当的溶剂中，并进行必要的稀释。
3. 仪器设置：a. 打开数据处理系统的软件界面，并进行相关的仪器设置，如进样量、流速等。
b. 确定待测物质的目标离子和质谱参数，并进行设置。
4. 仪器操作：a. 将样品注入进样器中，调整进样量和进样速度。
b. 调节流速和梯度程序，使样品在色谱柱中得到良好的分离。
c. 监控质谱检测器的输出信号，记录和分析检测结果。
d. 根据需要进行重复检测或优化实验条件。
5. 数据处理：a. 将数据导出到数据处理系统中。
b. 使用数据处理系统进行数据校正、峰识别和峰面积计算。
c. 根据需要生成报告或数据图表，并进行结果的解读和分析。
五、注意事项1. 在操作仪器前，请仔细阅读所提供的安全操作手册，并遵循相关安全规程。
2. 使用适当的溶剂和试剂，避免对仪器和操作人员产生危害。
3. 定期对仪器进行维护和校准，确保其正常运行和准确性能。
液相色谱串联质谱的小知识
一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机(Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS T une）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source T emp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
流量。
高流速需进行分流
需要提高毛细管温度
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• ESI
• 离子在液态产生 • 有益于热不稳定化合物的分
ionization，APCI）
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
正离子模式：ESI(+)或APCI(+)
适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨 或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。
负离子模式：ESI(-)或APCI(-)
适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较 多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模 式。
大气
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• 离子源的作用
去溶剂 离子化 液相色谱与质谱的接口
真空过渡
去除干扰
• 大气压电离源（Atmosphere pressure ionization，API）
电喷雾电离源（Electrospray ionization，ESI） 大气压化学电离源（Atmosphere pressure chemicel
推荐使用水、甲醇、乙腈、异丙醇 不能使用四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、氯仿
酸
不能使用无机酸(可能会导致腐蚀) 推荐使用醋酸和甲酸
三氟乙酸（TFA）会产生离子抑制作用
液相色谱-质谱联用技术
液相色谱-质谱联用技术液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱两种技术的分析方法。
它通过液相色谱的分离能力和质谱的物质鉴定能力，可以同时获得化合物的分离和结构信息，适用于复杂样品的定性和定量分析。
液相色谱（LC）是一种基于不同化合物在液相中的分离速度差异来分离化合物的方法。
它具有高分离能力、高选择性和易于操作等特点，广泛应用于生物、制药、环境和食品等领域。
液相色谱的核心是通过固定相和流动相之间的相互作用来实现化合物的分离。
而质谱（MS）则是一种基于化合物的质量与电荷比（m/z）来确定化合物结构和组成的方法。
质谱利用化合物在质谱仪内的质荷比来生成化合物的质谱图谱，从而实现化合物的鉴定和定量分析。
LC-MS联用技术的基本原理是将液相色谱与质谱相连接，通过在液相色谱柱出口处将待分析的化合物分子引入质谱仪中进行分析。
这样一来，通过液相色谱对样品进行分离，可以避免复杂样品矩阵的干扰，并使待分析化合物逐一进入质谱仪进行离子化和探测。
质谱仪将产生的质谱信号转化为质谱图谱，进而进行化合物的鉴定和定量分析。
整个过程中，液相色谱和质谱的运行参数需要相互匹配和优化，以保证良好的分离效果和质谱信号。
LC-MS联用技术具有许多优点。
首先，它能够提供化合物的分离和结构信息，有效地应对样品复杂性的挑战。
其次，它能够对目标化合物进行快速定性和定量分析，为化合物的鉴定和生物活性评估提供支持。
此外，LC-MS联用技术还具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的特点，可以检测并鉴定一些浓度较低的化合物，如药物代谢产物和生物标志物。
此外，LC-MS联用技术还适用于多种化合物类别的分析，如有机物、无机物、生物大分子和药物等。
在实际应用中，LC-MS联用技术被广泛用于药物研究和开发、环境监测、食品安全和生物科学等领域。
例如，在药物研究中，LC-MS联用技术可以用于药物的代谢研究、药物动力学研究、药物质量控制和药物残留分析等。
液相色谱质谱仪安全操作及保养规程
液相色谱质谱仪安全操作及保养规程液相色谱质谱仪（LC-MS）是一种高档的分析仪器设备，其功能主要是将液相色谱与质谱相结合，能够对样品的组成及结构进行快速、准确的分析。
本文主要介绍液相色谱质谱仪的安全操作和保养规程，以确保仪器的顺畅运行和长期使用。
操作安全1.安全指南在使用液相色谱质谱仪之前，用户必须熟知仪器的安全指南，确保自己的安全和设备的安全。
安全指南通常包括以下内容：•工作场所应清洁、通风良好，无任何杂物；•操作前需要注意静电防护；•在操作过程中，用户应当严格遵守操作步骤，不要随意更改设备的工作状态；•操作过程中不要摆放任何易燃、易爆、有毒、有害物品；•已使用的化学试剂及设备必须正确处理。
2.实验室涉及的安全标识为保证实验室的安全，用户必须熟知实验室内涉及的安全标识。
液相色谱质谱仪实验室通常包括以下安全标识：•电源开关；•高压开关及指示灯；•消防灭火器及应急电话等。
保养规程1.日常维护•屏幕及键盘：每天用干净柔软的布擦拭，防止灰尘与污垢积累；•列管和积分器：应该定期清洗，以免样品残留而污染设备和传感器；•柱温箱：应该定期清洗，并且使用干的清洗布将柱温箱干燥，以免产生水分影响设备；•电脑主机：需要定期清理灰尘，以保持通风良好；•定期检查冷却水的水质和水量，以免反应器过热。
2.工作结束后的清理和保养•清洗并干燥积分器，以免样品残留影响使用；•清理槽内残留的试剂；•将标准品及样品浓缩得到的溶液和残留杂质处理掉，以免污染液相色谱质谱仪；•关闭电源等设备，避免设备过热及短路。
总结液相色谱质谱仪的安全操作和保养规程能够保证设备的顺畅运行，延长其使用寿命。
用户在使用设备之前，必须认真了解安全指南和实验室内涉及的安全标识，以确保自己的安全。
用户还必须按照规程进行日常维护，及时清理设备，确保设备的正常运行。
总之，正确的操作和日常维护，加上仪器的定期检查，都有助于仪器的长期安全运行。
液相色谱-质谱联用（LC-MS）使用指南及注意事项
液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项⾼洁⽣物站A308 仪器型号: 岛津LCMS-20201.开机1.1 开机前准备确认氮⽓畅通，液氮罐GAS出⼝压⼒表指针在0.7~0.8MPa之间。
压⼒不够时，将其对⾯的增压阀拧⼤，使压⼒达到要求，若压⼒还不够，说明需要更换液氮。
确认流动相溶剂瓶内液体够⽤（流动相A-娃哈哈⼩瓶装纯净⽔，B为⼄腈，分别加千分之零点三五的HPLC级三氟⼄酸），液⾯要没过吸滤头。
打开UV检测器箱门，将三通与质谱分流接头连接。
1.2 开机过程开机顺序为1 2 3 4 5 6，关机顺序为6 5 4 3 2 1。
1.3 打开电脑之后打开分析程序。
将MS配置到程序中。
⽅法如下：Main→System Configuration→LCMS→上⽅蓝箭头→OK听到“滴”⼀声后，页⾯显⽰液相与质谱绿⾊ready状态，说明LC与MS均与程序连接良好。
2.1样品准备浓度：0.1 mg/ml 左右溶剂：流动相（⼄腈⽔甲醇），若以上均不溶，⽤少量DMSO溶解再稀释到以上溶剂中过滤膜！！样品瓶要确保⽆尘2.2仪器准备打开之前设定好的Method File→Download（⽬的是将仪器参数从程序配置到仪器） ?如果刚刚开机的话，各个部件还未预热，需要把各个部件打开。
打开顺序为：1234567（7打开后8和9⾃动打开）1）如果⽅法中的分⼦量扫描范围不是你需要的，重新设置：在下图中，Scan（+）Scan（-）分别为正负离⼦扫描设置。
扫描速度=扫描范围/ 扫描周期，扫描速度在1000u/second 左右⽐较好，所以改变扫描范围之后，要相应地改变扫描周期，使扫描速度在1000左右。
扫描范围为m/z 50-2000，⼀般设置100以上起始，因为溶剂中100以下⼩分⼦杂质较多，终⽌分⼦量⼀般为⽬标分⼦量的⼆倍稍⾼。
2）LC洗脱程序设置，设置⽅法与HPLC相似。
第三章液相色谱 质谱联用技术
N
O H N
NH
O N
N
O
N
C
O N
N
H H3C
OH OH
槟榔有效成分的分析
? 槟榔含有多种人体所需的营养元素和有益 物质，同时也含有多种药理活性成分，主 要包括生物碱、酚类化合物、脂肪油以及 多种氨基酸和各种各样的矿物质等。槟榔 的主要作用是由槟榔碱的功效体现的。槟 榔碱(Arecoline) 属于生物碱，是一种含氮杂 环的有机物，分子式C 8H 13O2N ，沸点209℃， 溶于醇、醚、氯仿和苯等有机溶剂，不溶 于水。
ESI 在大气压和环境温度下进行，被分析物的分子在电离过程中通常 产生多重质子化的离子。下图是典型的 ESI 质谱图，由一簇不同程度 质子化的分子离子峰 组成，相邻两峰相差一个质子。对于任意相邻两 峰，由下列公式计算所含的质子数 (n) 和样品的分子量 (M) 。
? 优点：形成的是单电荷的准分子离子，不 会发生ESI 过程中因形成多电荷离子而发生 信号重叠、降低图谱清晰度的问题；适应 高流量的梯度洗脱的流动相；采用电晕放 电使流动相离子化，能大大增加离子与样 品分子的碰撞频率，比化学电离的灵敏度 高3 个数量级。
大气压化学电离源 APCI
Needle 喷雾针 （加热）
负离子模式：适合于酸性样品，可用氨水或三 乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强负 电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试 使用负离子模式。
3. 流动相的选择
? 常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同 比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液。
? LC/MS 接口避免进入不挥发的缓冲液，避免 含磷和氯的缓冲液，含钠和钾的成分必须＜ l mmol/L 。
液相色谱-质谱联用仪的原理及应用
要点二
多组学分析
未来，液相色谱-质谱联用技术将更 多地应用于多组学分析，如代谢组学 、蛋白质组学等。这些分析需要高通 量、高灵敏度和高准确性的技术支持 ，为液相色谱-质谱联用技术的发展 提供了新的机遇。
要点三
临床医学应用
液相色谱-质谱联用技术在临床医学 领域的应用将不断增加，如疾病诊断 、药物代谢研究等。这些应用需要快 速、准确和可靠的分析方法，为液相 色谱-质谱联用技术的发展提供了新 的挑战和机遇。
更灵敏的检测器
质谱检测器的灵敏度不断提高，将使得液相色谱-质谱联用技术能 够检测到更低浓度的分析物，提高分析的准确性和可靠性。
自动化和智能化
随着自动化和人工智能技术的不断发展，液相色谱-质谱联用仪的 操作将更加简便，数据分析将更加快速和准确。
未来挑战与机遇分析
要点一
复杂样品分析
随着生命科学、环境科学等领域的不 断发展，对复杂样品的分析需求将不 断增加。液相色谱-质谱联用技术需 要不断提高分离效能和检测灵敏度， 以满足这些领域的需求。
广泛的应用领域
LC-MS在化学、生物、医学、环境等领域 中具有广泛的应用，如药物分析、代谢组 学、蛋白质组学、环境污染物分析等。
高灵敏度
质谱技术具有高灵敏度，可以对痕量组分 进行检测。
高通量
随着技术的发展，LC-MS已经实现了高通 量分析，可以同时处理多个样品。
宽检测范围
LC-MS可以检测多种类型的化合物，包括 极性、非极性、挥发性以及大分子化合物 等。
环境毒理学研究
通过液相色谱-质谱联用仪对环境中的有毒有害物质进行 分析，可研究其对生物体的毒性作用机制和生态风险。
生物医学领域应用
代谢组学研究
液相色谱-质谱联用仪可用于生物体液中代谢产物的定性和定量分析，从而揭示生物体 的代谢状态和疾病机制。
液相色谱串联质谱的小知识知识讲解
液相色谱串联质谱的小知识一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机 (Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的 MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
VARIAN 液相色谱色谱-质谱联用仪操作规程
VARIAN 液相色谱色谱-质谱联用仪操作规程
一、仪器准备
1.打开氮气确证压力为0.7MPa；打开氩气减压阀确证压力0.05MPa；
2. 打开液相色谱各个模块电源，打开电脑，双击桌面上的
Workstation Toolbar 图标，激活工作站工具栏；双击system
control进入仪器控制界面，等待联机和自检。
3. 开启真空泵，察看真空度，确保真空度达到1×10-6以上。
二、设定色相色谱、质谱条件
点击WorkStation 工具栏上View/Edit Methods 图标，编辑或激活一个采集方法，包括HPLC 参数和MS 相关参数，不同样品，该参数各不相同，具体包括：色谱柱(2.1×150mm,3μm，柱温，流速，进样量，流动相；离子源，扫描方式，喷雾针电压，筛板电压，雾化气温度及压力，干燥气温度及压力，碰撞气压力，检测电压，扫描范围。
三、样品测定
在主控界面下点击Acquisition，在进入数据收集窗口。
点击Active a Method，激活分析方法。
点击File-New Sample List，新建样品分析列表。
待System Control 界面出现Waiting 后，按Begin 键，开始自动采集数据。
四、关机及注意事项
关闭液相色谱所有模块电源；关闭氮气和氩气减压阀及钢瓶阀门
流动相2-3天更换一次；测试样品必须用流动相溶样；用
0.22μm样品过滤膜过滤。
液相色谱质谱联用仪使用方法说明书
液相色谱质谱联用仪使用方法说明书一、概述液相色谱质谱联用仪（Liquid Chromatography Mass Spectrometry,LC-MS）是一种高效、灵敏、准确的分析仪器，可广泛应用于药物研发、食品安全、环境监测等领域。
本说明书将详细介绍液相色谱质谱联用仪的使用方法，以帮助用户正确操作设备、获得准确可靠的实验结果。
二、仪器准备在操作液相色谱质谱联用仪前，必须先保证仪器和设备处于正常工作状态。
以下是仪器准备的步骤：1. 检查仪器的电源和通电线路，确保供电正常。
2. 打开仪器主机，并等待其启动完成。
3. 检查液相色谱部分的压力、流速等参数是否正常设置。
4. 检查质谱部分的离子源、质谱扇区等参数是否正常设置。
5. 检查进样部件及其周围的管线是否干净，无杂质。
6. 检查色谱柱的连接是否牢固，无泄漏。
三、样品处理在进行液相色谱质谱联用分析之前，需要对样品进行适当的前处理。
以下是样品处理的一般步骤：1. 收集样品，并进行必要的前处理，如固相萃取、溶解等。
2. 确保样品处理过程中不受外界污染物的干扰。
3. 对于浓度较高的样品，需进行稀释，以避免过高的信号干扰质谱仪器。
4. 在样品处理过程中，注意保持操作环境的洁净和无尘。
四、仪器操作液相色谱质谱联用仪的操作需要严格按照下述步骤进行：1. 启动液相色谱模块和质谱模块，并确保它们的连接稳固。
2. 在液相色谱控制软件中设置样品信息、进样体积和流速等参数。
3. 使用自动进样器或手动进样装置将样品注入，务必避免空气进入系统。
4. 开始液相色谱分离过程，注意实时观察结果，确保色谱峰的分离良好。
5. 通过质谱软件设置离子源和扇区等参数，将样品引入质谱进行离子化。
6. 在质谱软件中选择所需的检测模式和离子反应监测。
7. 开始质谱分析，观察质谱峰的出现和相对丰度。
8. 根据实验需要，可进行质谱检测参数的优化和调整。
9. 实验结束后，关闭仪器，并做好相关的仪器保养和维护。
液质操作
液相色谱质谱联用仪的使用方法及注意事项液相色谱仪共有四个模块组成，从上至下分别为：四元泵，自动进样器，柱温箱，DAD 检测器。
每一个模块左下角开关，右上角状态灯，灯绿色为空闲运行状态，灯黄色为未就绪未运行状态，灯红色为非正常状态，鼠标移至状态灯处可显示非正常的原因，一般为温度未准备好或者漏液。
每一模块右下角标签，标签左上为模块号，标签右下角为序列号，报故障时要提供模块号和序列号。
仪器上面有四个玻璃瓶，分别连接管ABCD，一般A走水相为棕色试剂瓶，一天换一次，BC用于有机试剂，AD水相，确保保留时间平稳（在比例阀中BC 在上，AD在下，水中盐分遇到有机相可能会因过饱和而析出掉落，水相在下确保析出的晶体重新回到水相中溶解）四元泵由左至右的部件名称：泵头，比例阀，在线脱气机，泵头上有一白色装置是蠕动泵，泵内注入异丙醇10﹪溶液（分析纯，高纯水配制），作用保护泵头中的活塞杆和密封垫，因为水相中的盐分可能会结晶加速管得磨损。
一周更换一次。
冲洗阀（purge阀），左旋拧松，液体进入废液桶，右旋拧紧，液体进入进样器。
其作用是快速排气泡以及快速置换系统。
操作：左旋冲洗阀，四元泵一格右键，“方法”设置流速自动进样器可同时检测100个样品，自检前关好门，打开开关后，开始自检，自检过程不要把手或物品深入进样器中干扰，自检完毕后状态灯灭柱温箱左边为3微升右边6微升，指示仪器间的死体积,当样品的流速大于2ml/min 时，用6微升的一边安装柱子。
一般柱温设置比室温高5度，最高可达80度，温度越高压力越小，出峰越快。
为半导体控温，温度升降更加高效。
实验完毕需要用纯甲醇冲洗，防止水相停留在柱子中生长水霉污染柱子。
长时间不用之前用旋钮塞在柱子两端，以免柱子干燥影响柱效。
DAD检测器二极管阵列，可同时测定样品8种不同波长下的谱图。
中间为流通池，可取出，最大压力为60psi。
流通池左上金属亮片内装氘灯，用于氘灯的更换。
氘灯的寿命为1000h，作为光源。
WatersXevoTQS液相色谱质谱操作
Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1.适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。
2.仪器设备的主要技术指标：1) 梯度性能：保留时间标准偏差（SD）≤0.047min。
2) ESI正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/μl指标要求：平均信噪比（S/N）≥3000:1；平均峰面积≥60000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N）:4500psi；峰面积：120000；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
3) ESI负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/μl指标要求：平均信噪比（S/N）≥400:1；平均峰面积≥1000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N）:520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
4) 系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD）≤0.5%；峰高相对标准偏差（%RSD）≤0.9%。
5) NanoFlow正离子灵敏度指标要求：峰强（m/z =785.8）≥1×107，测试样品：Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/μl测试结果：峰强度（m/z =785.8）：1.48×107；符合指标要求。
6) T RIZAIC正离子模式MS说明：测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA T10, PHO T88指标要求：保留时间标准偏差：≤0.25%测试结果：ADH T19：标准偏差为0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。
实验室中的质谱分析正确操作质谱仪器的注意事项
实验室中的质谱分析正确操作质谱仪器的注意事项实验室中的质谱分析：正确操作质谱仪器的注意事项质谱分析是一种广泛应用于科学研究和工业实验室的分析技术，它通过将样品分子进行电离和碎裂，然后用质谱仪器对其进行分析和检测。
在实验室中进行质谱分析时，正确操作仪器至关重要，以确保准确且可靠的结果。
本文将介绍实验室中正确操作质谱仪器的注意事项。
一、准备工作在操作质谱仪器之前，首先要确保仪器正常运转，并进行必要的准备工作。
以下是几个需要注意的细节：1. 检查仪器的电源和连接线路，确保其正常工作；2. 检查质谱仪器内部的真空系统，确保真空度达到要求；3. 确保质谱仪器所需的耗材，如离子源和质谱柱等，已正确安装和连接；4. 对于液相色谱-质谱联用系统，检查液相色谱部分的流动性能，如流速和梯度程序等。
二、仪器操作正确操作质谱仪器能够提高分析结果的准确性和重复性。
以下是一些操作细节需要注意：1. 样品处理：在进行质谱分析之前，样品必须被适当地处理。
这可能包括样品提取、纯化和肽链断裂等步骤。
确保样品处理过程中遵循标准化的操作程序和适当的质控措施，以避免污染或样品损坏。
2. 进样操作：正确的进样操作对于质谱分析的结果至关重要。
确保样品进样量准确，并使用适当的进样方法，如自动进样器或手动进样器，以确保结果的重复性和准确性。
3. 离子源设置：离子源是质谱仪器中重要的部件之一。
在设置离子源时，应根据不同的分析目标选择合适的离子化方式，如电喷雾离子源（ESI）或化学电离（CI）。
优化离子源参数，如电压、流量和温度等，以获得最佳的离子化效果。
4. 碎片检测：在质谱分析中，碎片离子的检测对于结构鉴定至关重要。
通过调整碎片检测的条件，如碎片能量和碎裂电压等，以增强碎裂效果，提高结构鉴定的准确性。
5. 质谱柱选择和条件优化：根据所要检测的样品类型和分析目标，选择适当的质谱柱和优化条件。
确保质谱柱具有良好的分离能力，并优化质谱分析的条件，如流速、温度和梯度程序等。
液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦ppt课件
高效液相色谱质谱联用（HPLC/MS）是指高效液 相色谱与质谱串联的技术，是将应用范围极广的 高效液相分离方法与灵敏、专属、能够提供分子 量和结构信息的质谱法结合起来的一种现代分析 技术。
HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源（LC与MS连接装置）、 质量分析器、真空系统、计算机数据处理系统组成。
四、故障排除
信号低 质量准确度差 雾化器出口是小 液滴而不喷雾
1.确保雾化气压设定 足够高以利液相色谱 流动相气化 2.检查雾化器中针头 的位置 3停止溶剂流动，卸 下雾化装置，检查雾 化器末端是否损坏
无液流
1.检查溶液化学性质，确 定样品溶剂是合适的 2.保证用新样品，并且正 确存储样品 3.检查雾化器条件 4.清洁毛细管入口 5.检查毛细管有无损坏和 污染源自. MRM优化子离子碰撞能
三、液质操作系统的注意事项
•流动相以及样品必须过膜 （有机滤膜、水系膜） •流动相应超声脱气 10~20min,否则压力易 波动（装有在线脱气机， 影响会小一些） •反相常用流动相为甲醇、 乙腈、水以及缓冲盐溶液。
• 注意：LC中常采用无机缓冲 盐，LC/MS中则应该使用挥 发性的缓冲盐，如甲酸铵、 乙酸铵；或挥发性酸碱甲酸、 乙酸、氨水等调节pH
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检 测 器 的 选 择
质谱检测器 MS
二极管阵列 检测器DAD
示差检测器 RID
荧光检测器 FLD
蒸发光散色 检测器ELSD
三、液质操作系统的注意事项
正 负 离 子 模 式 选 择 的 一 般 原 则 ：
适用于碱性样品，可用乙酸或 甲酸对样品甲乙酸化。样品中 含有仲氨或叔氨时可优先考虑 使用正离子模式（如磺胺类、 喹诺酮类物质）
024-超高效液相色谱二级质谱联用仪操作规程
1.目的规范超高效液相色谱/二级质谱联用仪的操作程序，保证检测工作的顺利进行，操作人员的人身安全和设备安全。
2.适用范围适用于装有二极管阵列检测器的Agilent RRLC/6410B液相色谱质谱联用仪，用于测定有机样品的使用操作。
3.职责3.1操作人员按照本规程操作仪器。
3.2管理人员负责监督仪器的操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
3.3药械供应管理科负责仪器综合管理。
4.操作程序4.1安全操作及使用环境4.1.1室内保持通风良好；仪器应避免阳光直射，远离震源。
4.1.2环境条件控制在温度10℃—30℃，湿度10%--85%之间。
4.1.3仪器发生异常时，应立即切断电源，待压力降至0后再进行处理。
4.1.4仪器设有自动报警器，当出现漏液或压力过高时，仪器报警，应关闭仪器，进行检查。
4.1.5操作中如需更改柱子或零件，需停机后，待压力降至0 后，方可操作。
4.2操作规程4.2.1开机4.2.1.1准备溶剂先经0.45μm的滤膜减压过滤，样品必须过0.45μm滤膜净化。
配制流动相，并连接通管路。
4.2.1.2打开液氮罐自增压阀门，调节液氮罐或N2 发生器的输出压力为0.56-0.69MPa（80-100psi），调节高纯氮气钢瓶减压表输出压力小于0.2 MPa (一般为0.15MPa 或10-30Psi）。
确认前级泵的气镇阀处于关闭状态。
依次打开LC1200 各电源开关，打开G6400 系列 QQQ 的电源开关，此时听到一声电磁阀的声音，前级泵启动，然后涡轮泵开始工作，等待大概2min 左右待QQQ 上的SmartCard4 通讯板完成初始化。
执行 Start—Programs-Accessories—Command Prompt 打开Dos 提示符，输入命令Ping192.168.254.12，如下图观察是否通讯正常。
如果结果显示通讯正常，回到桌面启动Data Acquisition 图标，此时MassHunter 软件启动，并听到另外一声电磁阀的声音，表示仪器通讯正常。
tlc使用技巧
tlc使用技巧TLC使用技巧TLC（翻译：液相色谱-质谱联用技术）是一种常用的分析方法，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
为了更好地利用TLC技术进行分析，以下是一些TLC使用的技巧和注意事项。
1. 选择合适的TLC板TLC板有不同的材质和吸附剂，根据需要选择合适的TLC板。
常见的TLC板材有硅胶、铝箔和玻璃板，吸附剂有无机和有机材料。
根据分析物的特性选择合适的TLC板，以获得更好的分离效果。
2. 好好准备和操作TLC板在使用TLC板之前，应确保其表面干净且无污染。
使用洁净的手套和工具进行操作，避免板面受到污染或损坏。
在操作TLC板时，应尽量避免直接接触板面，以免影响分析结果。
3. 选择合适的溶剂系统溶剂系统对TLC分析结果有很大影响。
选择合适的溶剂系统可以提高分离效果和分析速度。
在选择溶剂系统时，应考虑分析物的极性和溶解度，以及吸附剂的选择。
4. 控制溶剂前进速度溶剂的前进速度对TLC分析结果有重要影响。
过快的溶剂前进速度会导致分离不完全，而过慢的速度则会延长分析时间。
为了获得最佳结果，应通过调整溶剂的组成和板的倾斜度来控制溶剂前进速度。
5. 选择合适的检测方法TLC分析结果的检测方法有多种选择，如紫外可见光检测、荧光检测和质谱检测等。
根据需要选择合适的检测方法，以获得更准确的分析结果。
6. 注意样品的加载量样品的加载量对TLC分析结果也有重要影响。
过高的加载量会导致分离不完全，而过低的加载量则可能导致分析结果不明确。
应根据样品的浓度和分析要求选择适当的加载量。
7. 进行多次重复实验为了验证TLC分析结果的准确性和可重复性，应进行多次重复实验。
每次实验都应使用新的TLC板和样品，以排除实验误差对结果的影响。
8. 记录实验条件和观察结果在进行TLC分析时，应详细记录实验条件和观察结果。
这些记录有助于分析结果的复现和分析过程的改进。
9. 注意安全问题在使用TLC技术时，应注意安全问题。
避免接触有毒或腐蚀性物质，确保实验室有良好的通风条件。
第十四章 液相色谱-质谱联用.
目前，LC-MS采用大气压离子化（Atmospheric pressure ionization, API)技术作为液质联用的接口技术，也是质谱离子 化技术。
API主要包括：
✓ 电喷雾 electrospray ionization, ESI
✓ 大气压化学电离 atmospheric pressure chemical ionization, APCI
26
27
ESI: 基质对样品响应的影响
一般而言,样品信号强度响应随着其 它电解质浓度的增高而降低;
这一现象叫作‘离子抑制。 样品离子和电解质离子对电荷及占
据液滴表面的竞争导致离子抑制。
表面竞争
电荷竞争
28
ESI: 基质对样品响应的影响 基质选择一般原则
➢ 一般而言，对于正离子检测模式，样品必须比基 质更具碱性，以便形成 (M+H)+ 或足够的极性去 形成稳定的加和离子，例 (M+NH4)+。
✓ 液流被强迫通过一根窄的管路以使其得到高的线速度 ✓ 高温加热器和喷雾器使液流在脱离管路时蒸发成气体
由于溶剂蒸汽的保护，样品分子较少受热裂解的影响，大量的 热量用于溶剂的蒸发，但是有时也会有热不稳定样品分解
35
（2）气相化学电离
36
2. 大气压化学电离源 APCI
Needle 喷雾针
（
reagent gas 试剂气
24
（4）影响化合物 ESI电离的因素
(a）化合物的浓度 (b）基质的性质 (c) 化合物的表面活性 (d) 流速
25
ESI: 样品浓度对其响应的影响
离子的释放取决 于浓度. ✓• 信号在 10 μM 时达到饱和. ✓• 线性动态范围 限制在2-3个数量 级 ✓信号的饱和归因 于离子在液滴表 面过于密集,致使 某些样品离子不 能到达液滴表面.
液相色谱串联质谱的小知识
一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机 (Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的 MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第一章 LC-MS技术简 介
• ESI
离子源与液相色谱的流速
• APCI
1 μL/min - 1mL/min
200 μL/min - 2mL/min
最佳使用流速: 200 μL/min
最佳使用流速: 500 μL/min
一般来说, 高流速需要高的 毛细管温度和鞘气、辅助气 流量。
液相色谱-简介 • 我们的仪器 • 测试准备阶段的注意事项 • 结果的解读
第一章 液相色谱-质谱联用技术
• 质谱基本原理
简介
质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比的测定来进
行分析的一种分析方法。
电离装置把样品电离为离子
质量分析器把不同质荷比的离子分开
大气
液质联用仪的离子源
第一章 LC-MS技术简 介
• 离子源的作用
去溶剂
液相色谱与质谱的接口
离子化
真空过渡
去除干扰
• 大气压电离源（Atmosphere pressure ionization，API）
电喷雾电离源（Electrospray ionization，ESI）
大气压化学电离源（Atmosphere pressure chemicel ionization，APCI）
液质联用仪的离子源
第一章 LC-MS技术简 介
正离子模式：ESI(+)或APCI(+)
适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨 或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。
负离子模式：ESI(-)或APCI(-)
适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较 多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模 式。
– 以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分 和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片 按质量数分开，经检测器得到质谱图。
液相色谱-质谱联用仪
第一章 LC-MS技术简 介
– LC-MS, LC-ITMS, LC-TOF, LC-QqQ, LC-Q-TOF, LC-ITTOF, LC-Q-IT等
– 四极杆分析器（Quadrupole）
灵敏度
– 离子阱分析器（Ion trap）
– 扇形磁分析器
在全扫描模式下仍然具有较高灵
– 飞行时间分析器（TOF)
敏度；可实现多级质谱(MSn)的
– 傅里叶离子回旋共振变换分析器
功能
单级质谱和串联质谱
第一章 LC-MS技术简 介
单级质谱：LC-MS, LC-TOF 串联质谱
– 适用于不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定 化合物、大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多 聚物等）的分析测定
液相色谱-质谱联用仪
第一章 LC-MS技术简 介
真空系统
离
离
LC
子
源
子 传 输 系
统
质 量 分 析 器
检 测 器
数 据 系 统
大气
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 液相色谱柱
规格：50×2.1mm、100×2.1mm、150×2.1mm、 150×4.6mm， 250×4.6mm
填料粒径：亚二微米（1.7-1.9 m）、2.5 m 、3 m、 3.5 m、 5 m
填料类型：C18、C8、-NH2、-CN等
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 流动相
• ESI
• APCI
• 离子在液态产生
• 离子在气态产生
• 有益于热不稳定化合物的分 析
• 不利于热不稳定化合物的分 析
• 有益于中等到高极性化合物 的分析
• 有益于低极性到中等极性化 合物的分析
• 有益于大分子（蛋白/多肽） 的分析
• 适合于小分子分析
离子源
第一章 LC-MS技术简 介
液相色谱-质谱联用仪
Flow Rate 1.0 mL/min 0.5 mL/min 0.2 mL/min 50 L/min < 10 L/min
• 样品分离的需要 • 柱子内径 • 离子源类型
液相色谱-质谱联用仪
第一章 LC-MS技术简 介
真空系统
离
离
LC
子
源
子 传 输 系
统
质 量 分 析 器
检 测 器
数 据 系 统
检测器检测
色谱-质谱联用技术
第一章 LC-MS技术简 介
体现了色谱和质谱优势的互补，它将色谱对复杂样品的高分离 能力与质谱的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构 信息的优点结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。
• 气相色谱-质谱联用技术(GC-MS) • 液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)
表面活性剂
清洁剂和其他表面活性剂会产生离子抑制 不能使用
缓冲盐
避免使用非挥发性盐，特别是碱金属磷酸盐、硼酸盐、 柠檬酸盐等。
推荐使用甲酸铵、乙酸铵
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 流动相的流速
Column ID 4.6 mm 3.0 mm 2.1 mm 1.0 mm Capillary
溶剂
推荐使用水、甲醇、乙腈、异丙醇 不能使用四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、氯仿
酸
不能使用无机酸(可能会导致腐蚀) 推荐使用醋酸和甲酸 三氟乙酸（TFA）会产生离子抑制作用
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 流动相
碱
不要使用碱金属碱(可能会导致腐蚀) 推荐使用氨水 三乙胺/三甲胺（TEA/TMA）有助于形成负离子
一般来说，高流速需要更高 的鞘气和辅助气流量，但不 需要提高毛细管温度
高流速需进行分流
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
空间串联质谱：LC-QqQ, LC-Q-TOF, LC-IT-TOF, LC-Q-IT 时间串联质谱：LC-ITMS
Q
q
Q
1
2
2
第一章 LC-MS技术简 介
真空系统
离
离
LC
子
源
子 传 输 系
统
质 量 分 析 器
检 测 器
数 据 系 统
大气
质量分析器
第一章 LC-MS技术简 介
• 质量分析器的作用
– 将离子源产生的离子按m/z顺序分开并排列成谱
• 主要技术参数
– 所能测定的质荷比范围
– 分辨率
• 质量分析器的种类
对选择离子分析具有较高的