花青素的测定

四种原花青素含量测定方法比较

四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。

其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。

本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。

通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。

二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。

由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。

目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。

这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。

高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。

但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。

紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。

然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。

薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素（Anthocyanins）是一类广泛存在于植物中的天然色素，具有丰富的抗氧化和抗炎特性。

以下是关于花青素检测的50条内容和方法：1. 花青素的检测可以通过分光光度法进行，该方法通过测量样品吸收特定波长的光来确定花青素的含量。

2. 除了分光光度法，高效液相色谱法（HPLC）也是一种常用的花青素检测方法，可以准确测量不同类型的花青素。

3. 在花青素检测中，常用的溶剂包括甲醇、乙腈和水，这些溶剂可以帮助提取样品中的花青素。

4. 还可以使用质谱法（MS）结合色谱法进行花青素的鉴定和定量分析，能够提高检测的精准度和准确性。

5. 花青素的含量可以通过比色法进行测定，该方法通过添加试剂产生有色产物来测量花青素的浓度。

6. 采用高性能液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）可以对花青素进行定性和定量分析，具有高灵敏度和选择性。

7. 使用紫外-可见分光光度法（UV-Vis）可测定花青素的吸光度，从而推算花青素的浓度。

8. 考虑到植物样品中可能存在其他干扰物质，需要对样品进行预处理，如蛋白质去除和净化，以提高花青素的检测灵敏度和准确性。

9. 对于不同环境下的花青素含量变化调查，可以通过原子吸收光谱分析（AAS）确定植物中金属离子对花青素生成的影响。

10. 考虑到花青素的稳定性，检测前样品处理和存储条件至关重要，如低温保存、光照避免、氧气隔离等。

11. 比较两个或多个样品中花青素的含量，可以通过内标法（Internal standard method）进行定量，以减小实验误差。

12. 回收率试验可以通过添加已知浓度的花青素作为标准品，验证提取方法的效果和准确性。

13. 花青素的结构分析可以使用质谱联用色谱技术（LC-MS）进行，以确定不同花青素的分子结构和质量。

14. 对于不同类型的花青素，还可以使用凝胶层析法（Gel Filtration Chromatography）进行分离和检测。

15. 非离子表面活性剂（Non-ionic surfactants）可以在样品制备中用来改善花青素的提取率和稳定性。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素检测是一项重要的化学分析技术，用于测定植物和食品中的花青素含量。

花青素是一类常见的天然色素，具有抗氧化和抗炎作用，因此对其含量进行快速和准确的测定具有重要的科学和应用意义。

以下为50条关于花青素检测内容和方法的详细描述：1. 花青素是一类具有紫、蓝、红等颜色的天然色素，主要存在于植物的花朵、果实和叶子中。

2. 花青素的主要类型包括花色素苷、原花青素和异花青素等，它们在植物中起着色素和抗氧化作用。

3. 花青素检测的方法包括分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等，常用的是分光光度法和高效液相色谱法。

4. 分光光度法是利用物质吸收特定波长的光线进行测定，通过比色法或比浊法来测定花青素的含量。

5. 高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪进行测定，通过分离和检测样品中的花青素成分来计算含量。

6. 质谱法是利用质谱仪进行测定，通过记录花青素分子的质荷比来确定其含量。

7. 花青素检测常用的标准曲线方法是通过不同浓度的标准品制备标准曲线，再根据待测样品吸光度的测定值来计算含量。

8. 花青素的提取方法包括有机溶剂提取、酸碱水提取、超声波提取等，不同样品可选择合适的提取方法。

9. 有机溶剂提取是利用乙醇、丙酮等有机溶剂将花青素从植物组织中提取出来，然后通过浓缩和干燥得到提取物。

10. 酸碱水提取是利用酸性或碱性水溶液将花青素从植物组织中提取出来，可以有效保留花青素的天然结构。

11. 超声波提取是利用超声波功率促使样品中的花青素溶解在有机溶剂或水中，提高了提取效率。

12. 花青素的测定结果可根据测定方法的不同而有所差异，因此需要在同一实验条件下进行多次重复测定来确保结果的准确性。

13. 在花青素检测过程中，可能会受到样品中其他化合物的干扰，因此需要进行干扰检查和修正。

14. 花青素检测结果可以用于评价植物的品质、食品的营养价值和天然色素的应用价值。

15. 花青素检测在食品工业中具有重要的应用，如在果汁、酒类、饮料等产品中进行质量控制。

花青素检测方法（花色素苷）

花青素检测方法（花色素苷）
A1 花青素的测定方法
A1.1 方法来源：企业内控方法
A1.2 方法原理：
A1.3 试剂：
A1.3.1 甲醇（AR）
A1.3.2 盐酸（AR）
A1.3.3 2%盐酸甲醇：盐酸：甲醇=2：100（V/V）A1.4 仪器和用具：
A1.4.1 电子天平（1/100000）
A1.4.2 玻璃仪器：容量瓶
A1.4.3 超声波清洗器
A1.4.4 紫外分光光度计
A1.4.5 比色皿（1cm）
A1.5 步骤
精密称取样品20mg，加60ml 2%盐酸甲醇超声溶解，取出冷却，定容至100ml，摇匀，过滤，待测。

A1.6 测定
用1cm 玻璃比色皿在540nm 波长下测定其吸光度A，用2％盐酸甲醇溶液作空白对照。

（吸光度应控制在0.3～0.7之间，否则应调整试样液浓度，再重新测定吸光度。

）
A1.7 计算
A × V
X = × 100%
1020 × W × 100
其中： X：花青素含量，%；
A：样品在波长为540nm处的吸光度值；
V：样品稀释体积，mL；
W：样品的称样量，g；
1020：飞燕草素的比吸光值。

原花青素的含量测定方法

花青素含量。通过在特定的波长或某一范围的波长下，
测定待测物品的吸光度，近而对原花青素进行定量分
析。
原花青素(procyanidins，简称 PC)是植物中广泛存在的一类属于双黄酮衍生物的天然多化合物，原花青素具有极强的抗氧化特性，一般存在于植物的果实、种子、花和皮中，在葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、松树等植物中的含量都很丰富。在原花青素各种不同聚合体中以二聚体的抗氧化能力最强．原花青素具有多种生物活性，能防治多种疾病，具有高效、低毒、高生物利用率等特点，在植物中的主要作用是保护植物
NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇溶液，盖塞，摇匀，于95℃的水
浴中加热反应40min 取出，于冷水中迅速冷却，溶液显红色，以0mL
溶液作为空白对照，于546nm 处测定其吸光度。采用最小二乘法作
原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。
结果见表
取得标样体积（/ml）
0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
对应标样浓
度（mg/ml)
测的吸光度
值A
b. 样品测定分别精确吸取10mL 样品，用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。吸取上述样品待测液3mL 于25mL 具塞试管中，按标准曲线制作项下的操作步骤，依次分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液（注释：NH4Fe(SO4)2 溶液，盐酸正丁醇溶液在这里都是分析纯。是大孔树脂对原花青素的纯化食盐中的分析纯部分）加热，测其吸光度。根据标准曲线计算出结果，按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。 4. 结果与分析
中易被氧化的成分，在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是 V-E50 倍，并且还具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及美容等作用． 1. 实验原理朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度 A 是吸光物质的浓度 C 及吸收介质厚度 l(吸收光程)的函数。比耳的结论是，当用适当波长的单色光照射一固定液层厚度的均匀溶液时，A 与 C 成正比，其数学表达式为:

吸光度法测定花青素含量

吸光度法测定花青素含量
一、试验器材
1 材料与试剂
花青素标样；体积分数95%的乙醇；盐酸、甲醇、正丁醇、硫酸铁铵，均为分析纯。

2 仪器与设备
超声波细胞粉碎机、微波炉、低速大容量多管离心机、UV—1200 型紫外可见分光度计、pHS—3C型酸度计、RE—52型旋转蒸发仪、电子恒温水浴锅。

二.
1、标准曲线的绘制
准确配制质量浓度为0.50 mg/mL的花青素标准溶液，分别吸取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mL置于6支10mL具塞比色管中，各加入甲醇溶液至1.0mL，然后加入6.0mL正丁醇—盐酸溶液（体积比为95∶5）和0.2mL质量分数为2％的硫酸铁铵溶液（临用时配制），摇匀后，置沸水浴中加热40 min，然后迅速冷却，在波长400~600 nm处进行扫描，确定其最大吸收波长530nm，于最大吸收波长处测定花青素标准溶液吸光度，得到标准曲线方程。

将待测溶液在最大吸收波长下的吸光度值(平行6次）。

再通过标准曲线得出其浓度。

花青素含量测定方法

花青素含量测定方法
1．仪器和试剂
采用760CRT型双光束紫外可见光分光光度计。

试剂选用2％盐酸甲醇溶液：浓盐酸：99％甲醇(2：98)。

2. 方法
2．1 样品处理
将含有花青素的树木鲜叶片去脉剪成1～2 mm碎片，随机取样，准确称量0．2 g，置于50 mL烧杯中，加人10 mL 2％盐酸甲醇溶液浸泡，杯口用封口膜扎紧以防挥发，置室温避光处浸提2小时，至肉眼观察叶组织完全变白取出过滤，用2％盐酸甲醇溶液定容至50 mL容量瓶中，于紫外可见分光光度计上分析。

2．2 测定
在紫外可见光分光光度计上全波段扫描2％盐酸甲醇溶液浸提叶片的浸提溶液吸收光谱，结果表明，紫外区最大吸收波长在280砌附近，可见光区域最大吸收波长在500～550砌内[引。

其最大吸收波长在530～535 I]／n处，在此采用波长530 nm条件下定量测定。

用2％盐酸甲醇溶液作为空白对照，在紫外可见光分光光度计上，用1 em厚比色皿，在波长530 nln处测定其吸光度(A)。

花青素的分离提纯测定实验具体方案.

花青素的提取、测定仪器材料试剂：仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁实验步骤一、花青素的提取：1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。

3、称取2g磨成粉末4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液5、讲合并提取液进行抽滤6、60℃减压浓缩7、真空干燥8、得粗提取液2、提取条件的优化：p 水平A提取温度 /℃B乙醇浓度/%C提取时间/minD料液比/（g/ml）p 1 50 50 60 1:10 p 2 60 60 90 1:20 p 3 70 70 120 1:30A B C D 结果实验序号1 1 1 1 12 1 2 2 23 1 3 3 34 2 1 2 35 2 2 3 16 2 3 1 27 3 1 3 28 3 2 1 39 3 3 2 1K1K2K3Q确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。

3、纯化纸层析法提纯1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。

2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。

3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇∶V(乙酸∶V(水=4∶1∶5,V(正丁醇∶V(2mol/LHCl=1∶1,V(乙酸∶V(浓HCl∶V(水=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓HCl∶V(水=3∶97等（即层析液）。

然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。

4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙醇洗涤、浓缩,即可得到样品。

花青素检测内容和方法 -回复

花青素检测内容和方法-回复花青素检测是一种常用的方法，用于确定食物、植物和其他生物中是否存在花青素化合物。

花青素是一类具有特殊结构和颜色的天然色素，广泛存在于植物中，特别是花朵、水果和蔬菜中。

在这篇文章中，我将详细介绍花青素检测的内容和方法。

第一部分：花青素的概述首先，我们来了解一下花青素的基本概念。

花青素是一类化学物质，属于类黄酮类化合物。

它们是水溶性的，可以通过分光光度法检测其浓度。

花青素具有丰富的生物活性，包括抗氧化、抗炎症和抗癌等特性。

因此，花青素在医药和食品领域具有重要的应用价值。

第二部分：花青素检测的常见方法花青素的检测方法有很多种，其中常见的几种方法包括分光光度法、高效液相色谱法和质谱法。

1. 分光光度法分光光度法是花青素检测中最常用的方法之一。

它利用花青素在特定波长下吸收光线的特性进行测定。

首先，要选择合适的波长进行检测，常用的波长为紫外光谱的510-540纳米范围。

然后，将待测样品制备成溶液，并使用分光光度计测量样品的吸光度。

根据吸光度和标准曲线的关系，可以确定样品中花青素的浓度。

2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种精确测定花青素浓度的分析方法。

它利用花青素在特定条件下与色谱柱相互作用的特性进行分离和测定。

在HPLC方法中，样品经过前处理后注入色谱柱，通过流动相不同的组成进行分离。

然后，使用紫外检测器检测样品中花青素的峰值，并根据峰面积和标准曲线的关系确定含量。

3. 质谱法质谱法是一种高灵敏度和高分辨率的分析技术，可用于花青素的定性和定量分析。

质谱法可以直接测定花青素分子的质量和结构。

通过质谱仪的扫描，可以得到花青素的质谱图，并通过比对已知标准品的质谱图进行分析。

第三部分：花青素检测的样品准备在进行花青素检测之前，需要对样品进行适当的预处理。

首先，要将样品磨碎或切碎，以提高样品暴露表面积。

然后，将样品加入适量的溶剂中，浸泡一段时间，以提取花青素。

提取液中的杂质可以通过滤纸或离心去除。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素是一类具有强烈吸收红外光的化合物，广泛存在于植物中。

它们赋予了许多植物花朵、水果和蔬菜明亮的颜色。

花青素不仅可以提供视觉上的吸引力，还具有抗氧化和抗炎症等生物活性。

因此，检测花青素的含量和质量对食品、药物和其他相关领域的研究非常重要。

花青素含量的检测方法有许多种，下面将介绍一些常用的方法：1. 分光光度法：分光光度法是一种常见且简便的检测花青素含量的方法。

它基于花青素对特定波长的光有很强的吸收能力。

通过将样品溶解在适合的溶剂中，使用紫外-可见光谱仪测量吸光度，然后根据不同波长下的吸光度值来计算花青素的含量。

这种方法可以测量花青素的总含量。

2. 高效液相色谱法：高效液相色谱法（HPLC）是一种准确测定花青素含量的常用方法。

它基于为花青素分离和检测提供了高分辨能力的高效液相色谱仪。

首先，样品中的花青素会被分离出来，然后通过波长选择性检测器进行定量分析。

这种方法可以同时测量多种不同类型的花青素，并且具有高灵敏度和高选择性。

3. 液相色谱质谱联用法：液相色谱质谱联用法（LC-MS）是一种更为精确的花青素检测方法。

它将高效液相色谱与质谱技术结合起来，可以通过质谱仪的高分辨率和灵敏度来确定花青素的结构和含量。

这种方法对于复杂的样品和低浓度的花青素分析非常有用。

4. 薄层色谱法：薄层色谱法是一种简单快速的花青素分析方法。

它基于花青素在薄层色谱板上迁移的性质，并通过与特定试剂反应形成具有色素的斑点来检测花青素。

该方法不需要复杂的仪器设备，适用于初步评估样品的花青素含量。

5. 酶联免疫吸附测定法：酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于抗体-抗原反应的花青素检测方法。

通过使用特异性的抗体来检测花青素，可以实现高灵敏度和高选择性的分析。

这种方法对于复杂样品和低浓度花青素的检测非常有效。

总之，准确测定花青素含量对于食品、药物和化妆品等行业至关重要。

上述介绍的不同方法可以根据实际需要选择合适的进行花青素的检测。

花青素的测定国标

花青素的测定国标一、花青素国家标准简介花青素国家标准分为两个部分：GB/T 19531和GB/T 19532。

前者规定了花青素的测定方法，后者则覆盖了花青素专用柱和专用试剂。

二、花青素测定方法根据GB/T 19531标准，以下是花青素测定方法：1.取样。

将20克的样品取出并用磨粉机粉碎。

2.提取。

将粉末样品用乙醇提取30分钟并过滤。

3.干燥。

将提取物在耗氧器中干燥至恒重。

4.溶解。

将样品溶解于乙醇中，并添加适量的甘油。

5.测定。

用紫外分光光度计分别在530nm和657nm波长下进行吸光度测定。

6.计算。

根据溶液比值计算花青素的含量。

三、花青素测定注意事项在花青素的测定过程中，需注意以下几点：1.保持实验室环境恒温，以避免温度波动。

2.样品粉末的粒度应均匀细腻，避免出现不均匀的情况影响实验结果。

3.使用合适的提取溶剂，并保证提取时间和过滤效果。

4.使用质量优良的试剂，以确保稳定和准确的实验结果。

四、花青素的作用花青素有多种功效，包括：1.美容。

花青素可以促进皮肤细胞生长，保护皮肤免受有害氧化物的损伤，增加皮肤的光泽度和弹性。

2.抗氧化。

花青素具有强大的抗氧化作用，能够减缓紫外线和自由基对身体造成的伤害。

3.预防心血管疾病。

花青素可以降低胆固醇、保护血管，减少心血管疾病的发生。

五、使用花青素的注意事项1.不宜过量。

长期摄入过多的花青素可能导致身体不适。

2.注意食用安全。

有些食物中的花青素对某些人可能过敏或引起不适，如对茄子过敏的人应该避免摄入其花青素。

3.选择天然食物。

选择新鲜、天然的花青素食物，避免添加剂和其他化学物质的影响。

总之，花青素的测定在食品工业和医学领域中非常重要。

以上的方法和注意事项，在测定花青素的含量时应被谨慎考虑。

未来，花青素的应用将会继续扩大，助力人类健康和长寿。

花青素的测定方法1:原花色素的测定方法（分光光度法）本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子与松树皮提取物）中原花色素含量的测定。

1. 方法提要原花色素（也称缩合单宁）是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体，属多酚类化合物。

与其他酚类化合物不同，黄烷醇（缩合单宁，单体，双体等）在酸性介质中可与香草醛反应，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。

2. 仪器分光光度计。

3. 试剂所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

（1）香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。

（2）提纯的原花色素或儿茶素。

（3）4%香草醛甲醇液。

（4）标准使用液：将提纯的原花色素溶于蒸馏水，制成1mg/mL 储备液，将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。

标准使用液应于测定当天配制。

如无提纯的原花色素，可用儿茶素代替，配制方法同上。

4. 测定步骤（1）样品中原花色素的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60%甲醇提取，40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后定容。

冰冻干燥的固体原花色素制剂，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶）制成原花色素液。

原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。

（2）样品测定：用锡箔将试管（14mm×20mm）包裹严，仅留管口用于加样。

向管内加入试样0.5mL，再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合，然后加入1.5mL浓盐酸，彻底混匀，室温下显色15min。

也可在暗环境下进行以上操作。

最后在500nm处比色。

可按以上操作步骤制得标准曲线（即0.1mg原花色素在500nm 处的吸收值为0.55）。

5. 结果计算计算原花色素量的公式，原花色素（1×10-3mg）=A500nm÷0.55×100×V式中V——试样稀释体积（倍数）。

6. 注释（1）本方法的检测范围为（5~500）×10-3mg/0.5mL样液。

保健食品中原花青素的测定

保健食品中原花青素的测定Determination of procyanidins in health food1范围本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。

本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。

本方法最低检出量为3卩g,最低检出浓度为3卩g/mL 本方法最佳线性范围：3〜150卩g/mL。

2 原理原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。

原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。

本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。

计算试样中原花青素含量。

3试剂3.1甲醇分析纯。

3.2正丁醇分析纯。

3.3盐酸分析纯。

3.4硫酸铁铵NH4Fe (SQ) 2 • 12H20溶液：用浓度为2mol/L盐酸配成2%( w/v )的溶液。

3.5原花青素标准品葡萄籽提取物，纯度95%4仪器4.1 分光光度计4.2回流装置5分析步骤5.1试样的制备5.1.1片剂取20片试样，研磨成粉状。

5.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽可能挤出。

5.1.3 口服液摇匀后取样。

5.2提取521 粉状试样称取50—100mg试样置于50mL容量瓶中，加入30mL甲醇，超声处理20min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放置至澄清后取上清液备用。

5.2.2 含油试样称取50mg试样置于小烧杯中，用20mL 甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50mL容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。

5.2.3 口服液吸取适量样液（取样量不超过1mL）置于50mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

5.3测定5.3.1 标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10mL甲醇中，吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

各取1mL测定。

与试样测定方法相同。

5.3.2 试样测定将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后，取出6mL置于具塞锥瓶中，再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和1mL试样溶液，混匀，置沸水浴回流，精确加热40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15min后，于546nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。

花青素含量的测定

花青素是一类具有重要生物活性的天然色素，广泛存在于植物中，并对人体健康有益。

测定花青素含量的方法有多种，以下是其中一种常用的方法：
试剂和仪器：甲醇、乙酸、五氯酚酞溶液、高压液相色谱仪（HPLC）等。

步骤：
1.将待检测的样品（如花瓣、果实等）取适量，冷藏保存。

2.取少量样品，用甲醇将其加以浸泡，使其充分均匀地溶解，形成混合液。

该混合液可放于水浴中加热加速搅拌。

3.通过滤纸将混合液过滤，使其中的杂质分离并去除。

4.将滤过的液体放入离心管并进行离心分离，将上清液取出。

5.将上述上清液加入乙酸及五氯酚酞溶液中，混匀后置于常温下反应15-20
分钟，即可形成浅红色溶液。

6.将步骤5中得到的溶液进行过滤，然后放入样品瓶中，即为待测样品溶
液。

7.通过高压液相色谱仪（HPLC）对待测样品溶液中的花青素成分进行分析
和检测，得到花青素的含量。

注意事项：
1.在操作前应严格遵守操作规程，保持实验环境清洁卫生。

2.在每个步骤中加入足量的试剂以确保精准的测定结果。

3.操作时应小心谨慎，防止操作过程中出现意外。

4.为了得到较为准确的测试结果，最好采用与国家标准接近的检测方法，并
在实验条件允许的情况下重复测试。

花青素的分离提纯测定实验具体方案

花青素的提取、测定仪器材料试剂：仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁实验步骤一、花青素的提取：1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。

3、称取2g磨成粉末4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液5、讲合并提取液进行抽滤6、60℃减压浓缩7、真空干燥8、得粗提取液二、提取条件的优化：--完整版学习资料分享----确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。

三、纯化纸层析法提纯1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。

2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。

3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇)∶V(乙酸)∶V(水)=4∶1∶5,V(正丁醇)∶V(2mol/LHCl)=1∶1,V(乙酸)∶V(浓HCl)∶V(水)=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓HCl)∶V(水)=3∶97等（即层析液）。

然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。

4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙)醇洗涤、浓缩,即可得到样品。

四、花青素的测定1.采用普鲁士蓝法测定花青素的还原能力。

取一定浓度的样品溶液1 mL，加入磷酸盐缓冲液和1%K3Fe（CN）6各2.5 mL，混合均匀，混合液50 ℃保温20 min，快速冷却，加入10 %的三氯乙酸溶液2.5 mL，离心10 min。

取上清液2.5 mL，加入等量蒸馏水和0.1%的FeCl3 1mL，摇匀，10min后700nm下测定吸光值A700，以抗坏血酸为对照。

花青素检测方法 - 行规(2014.9 29)

西安隆泽生物工程有限责任公司花青素含量测定方法(行标)编号：起草人/日期：审核人/日期：批准人/日期：版本号：编写依据：CP2005USP29EP5修订号：颁布日期：实施日期：操作程序注意事项一、仪器与试剂紫外一可见光分光光度计。

甲醇（AR）36%浓盐酸（AR）2%盐酸-甲醇溶液：36%HCl（浓盐酸）5ml加85ml甲醇。

对照样品（花青素含量25%）二、样品溶液制备准确称取样品约20mg（W1），置50mL容量瓶中，加入约40mL2%盐酸-甲醇溶液，在超声水浴中（20℃左右）振荡溶解20min，放置10min至室温后，用2%盐酸-甲醇溶液定容，再吸取5mL用2%盐酸-甲醇溶液稀释至100mL过滤，取过滤液作为供试样品溶液，准备测定。

三、对照样品溶液制备准确称取对照样品约20mg（W2），其他处理同样品溶液制备.四、测定用1㎝比色皿，以2%盐酸-甲醇溶液做空白，在540nm处测定供试样品溶液的吸光度（A1）、对照样品溶液的吸光度（A2）。

计算公式如下（以飞燕草素计）：A1×W2含量（%）=x KA2×W1西安隆泽生物工程有限责任公司式中：A1——样品吸光度W1——样品称样量(g)A2——对照样品吸光度W2——对照样品称样量（g）K——对照样品纯度注意：样品溶液吸光度应保持在0.3~0.7之间。

否则，调整样品稀释倍数。

五、误差范围以绝对偏差判定。

绝对偏差=测量值—平均值1、同一时间平行样测定结果绝对偏差为±0.2%。

2、不同时间、不同人员平行样测定结果绝对偏差为±0.2%。

西安隆泽生物工程有限责任公司。

花青素含量的测定

花青素含量的测定花青素是一种常见的植物色素，广泛存在于植物中，特别是在花朵和水果中。

花青素不仅赋予植物丰富多彩的颜色，还具有多种生理活性和保健功能。

因此，准确测定花青素含量对于研究植物生长发育以及开发植物资源具有重要意义。

测定花青素含量的常用方法有分光光度法、高效液相色谱法、电化学法等。

其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，被广泛应用于花青素含量的测定。

分光光度法是基于花青素本身在紫外-可见光区域具有特定的吸收光谱特性。

通常情况下，花青素在紫外区域（200-400nm）和可见光区域（400-700nm）都有吸收峰，峰值波长和吸光度的大小与花青素的结构和浓度有关。

因此，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以间接推算出花青素的含量。

具体的测定步骤如下：1. 样品的制备：将待测样品（如花朵、水果等）剪碎或研磨成细粉，加入适量的提取液（如乙醇、甲醇等），充分摇匀，静置一段时间，使花青素充分溶解在提取液中。

2. 提取：将提取液和样品混合物进行离心或过滤，得到澄清的提取液。

3. 分光光度法测定：取适量的提取液，利用紫外-可见光分光光度计，在特定波长下（通常为紫外区域的吸光峰）测定样品的吸光度。

根据吸光度和标准曲线的关系，可以计算出样品中花青素的含量。

需要注意的是，为了保证测定结果的准确性和可靠性，实验中应该设置空白对照组和标准曲线。

空白对照组是不含花青素的提取液，用于消除其他物质的干扰。

而标准曲线则是利用已知浓度的花青素标准品，根据吸光度和浓度的线性关系建立的，用于计算样品中花青素的含量。

为了提高测定的精确度，还可以对样品进行预处理，如去除杂质、调整pH值等。

同时，在测定过程中要注意操作规范，控制好实验条件，避免误差的产生。

测定花青素含量是研究植物色素和植物生理活性的重要手段。

分光光度法是一种常用而有效的测定方法，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以准确推算出花青素的含量。

通过合理的实验设计和操作，可以获得准确可靠的测定结果，为植物资源的开发和利用提供科学依据。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素是一类存在于植物中的天然化合物，主要包括类黄酮和花色素。

它们在植物生长和发育过程中起着重要的作用，同时也赋予了植物丰富多彩的颜色。

花青素不仅是植物界的重要色素，在医学和食品工业中也有广泛的应用。

因此，准确地检测花青素成分以及其含量是很重要的。

本文将介绍花青素检测的内容和方法。

花青素的检测内容主要包括两个方面：一是对花青素种类进行鉴定和分析，二是对花青素的含量进行测定。

花青素种类的鉴定和分析是通过不同的分析技术来实现的，包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。

这些技术能够对花青素分子的结构进行分析，确定其种类和含量。

而花青素的含量测定则是通过比色法、分光光度法、高效液相色谱法等方法来实现的。

花青素的含量测定是花青素分析的重要环节之一。

其中，比色法是最常用的一种方法。

它基于花青素的分子结构中具有强吸收光谱特性的特点，通过测定花青素溶液的吸光度来确定其含量。

这种方法简单、快速、准确，适用于大多数花青素的含量测定。

分光光度法也是常用的一种方法，通过比较样品与对照样品的吸光度来确定花青素的含量。

这种方法对样品要求较高，但具有较高的灵敏度和准确性。

而高效液相色谱法是一种较为复杂的方法，它通过测定样品中花青素的相对峰面积来计算花青素的含量。

这种方法适用于含有多种花青素的样品，对花青素种类和含量的鉴定和测定更为准确。

花青素检测的方法是根据不同的检测目的和样品条件选择的。

常用的方法有以比色法为基础的光度法、分光光度法和高效液相色谱法等。

下面将详细介绍这几种方法的原理和操作步骤。

比色法是最常用的方法之一，它是通过测定花青素溶液对特定波长的光吸收来确定花青素的含量。

其基本原理是，花青素分子中的色团使溶液对特定波长的光具有吸收能力，通过测量溶液的吸光度来确定花青素的含量。

具体操作步骤如下：1. 准备样品和对照溶液。

样品溶液是待测花青素样品的溶液，对照溶液是不含花青素的纯溶剂。

两者的浓度应相同。

原花青素测定方法

原花青素测定方法1. 电化学法原理:原花青素易以氢供体的形式捕获其它活泼的自由基形成多酚自由基。

邻苯三酚在碱性水溶液中迅速发生自氧化链式反应，产生中间产物超氧阴离子自由基- ( O 2 ・)。

分子量大的多酚所形成的自由基较为稳定，可以发生偶合，形成聚合的多酚分子，同时发生竟争反应，使继续引发邻苯三酚自由基链式反应的趋势减弱或消失，表现为具有较强的清除自由基能力，且清除能力在一定的条件下与原花青素的加入量有线性关系，并随体系碱度的增大，羟基氢离子电离而增大。

超氧阴离子自由基 ( O 2- )被清除，自氧化链式反应被阻断，反应终止，使邻苯三酚在 - 0. 96V( vs. SCE)的自氧化峰电流减小，故可以做为原花青素的定量测定方法。

试验方法：于5 mL比色管中，加入适量浓度的原花青素贮备液，0. 5 ml 0. 5 mol /L的 Tris- HCI( pH= 8. 33)缓冲溶液，1. 0 mL5. 00 mmol /L邻苯三酚，定容刻度，摇匀。

在 1 min-6 min内，记录扫描电位在(- 0.8)―(- 1. 2V)范围内 - 0. 96± 0. 02V处的二阶导数极谱波。

2. 定量核磁共振法原理:定量核磁共振法以被测成分的特征氢核的共振吸收信号为目标进行分析，分析结果直观且准确性好。

原花青素通常是由表儿茶素及儿茶素通过4→8 位或4→6 位的碳-碳键连接，生成聚合度不同、空间结构十分复杂的混合物。

但每个原花青素分子中只有一个末端单元，并且它的H-4位移变化不明显，因此可以用它来表征样品中原花青素分子的数量。

试验方法：用微量天平精密称取内标物邻苯二甲酸氢钾约10 mg、样品约 40 mg，加入 DMSO-d 6为溶剂 1 mL 使其充分溶解，转移到核磁管中进行1 H谱NMR 分析。

检测条件：5 mm BBO 探头，600.192MHz，谱宽为 12335.5 Hz，脉冲宽度为13 μs，采样时间为17 s，延迟时间为6 s，采样次数为16 次。

花青素测定

花青素的测定目的花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。

本实验学习花青素的提取及测定方法。

一、实验原理花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。

花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm，摩尔消光系数为4.62×104，故可用分光光度法测定其含量。

但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。

因此，需同时测定提取液在620nm（可溶性糖）和650nm（叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。

二、材料、设备及试剂1.材料茶叶2.2. 设备分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。

3. 试剂0.1 mol·L-1的盐酸乙醇溶液（8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成1L）。

三、操作方法1. 花青素的提取取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中，加10ml盐酸乙醇溶液，在60℃水浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。

2. 测定以0.1mol·L-1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。

四、实验结果实验结果如下表依据公式1．计算花青素的光密度值ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620)2.计算花青素含量=ODλε×V×1000000m花青素含量（nmol/g）ODλ:花青素在530nm波长下的光密度ε：花青素摩尔消光系数4.62×106v:提取液总体积（ml）m:取样质量（g）1000000: 计算结果换算成nmol的倍数由一串红测得结果则有：ODλ=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341所以，花青素含量（nmol/g）=1.3341/4.62/104×25/0.100×106=7219.156 由红花继木测得结果则有：ODλ=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 所以，花青素含量（nmol/g）=0.2959/4.62/104×25/0.116×106=1380.337五、结果分析与讨论从实验实验可以看出，一串红的花青素含量比红花继木的花青素含量高很多。