高级生理学实验教学大纲(09生技教学版)

实验1 坐骨神经腓肠肌标本的制备

【目的要求】

学习蛙类动物双毁髓的实验方法

学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法

【动物与器材】

蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液

【方法与步骤】

制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓）

录制后肢标本

分离两后肢

分离坐骨神经

分离股骨头

游离腓肠肌

检验标本

注意：制备标本过程中经常用任氏液湿润去皮的标本。

【思考题】

剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？

金属器械碰压，触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？

如何保持标本的机能正常？

实验2 刺激强度与骨骼肌收缩的影响

【目的要求】

1学习肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。

2观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。

【基本原理】

腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩发应，此时的刺激为阈下刺激。当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大收缩发应。这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大。可以引起肌肉发生最大收缩发应的最小刺激强度为最适刺激强度。

【动物与器材】

蟾蜍（或蛙）的腓肠肌标本、常用手术器械、计算机采集系统、张力传感器（100g）、刺激电极、支架、双凹夹、肌槽、瓷盘、滴管、任氏液、橡皮泥、棉线。

【方法与步骤】

1开启刺激，观察肌肉收缩反应。如果肌肉无收缩反应，则适当增加刺激强度，其他刺激参数保持不变。间隔少许时间，同法进行第二次刺激，直到出现最小收缩。测量收缩幅度并记下刺激强度，此时的刺激强度为阈强度。

2 同法逐渐增强刺激强度，观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。

3当刺激强度达到某一数值后，肌肉收缩幅度不再随刺激强度的增加而升高，记录3～4次同等高度的收缩曲线和刺激强度。

1. 如何保持标本在实验过程中机能稳定？

2. 何为标本的最适刺激强度？

3. 观察实验中同一标本的阈刺激强度与最适刺激强度是否会变化？为什么？

实验3、血细胞的观察、计数和ABO血型鉴定

【目的要求】

1 观察、了解血细胞形态、结构与功能

2学习血细胞的计数方法

3学习掌握ABO血型鉴定的方法及原理。

【动物与器材】

家兔、血细胞计数板、专用盖玻片、微量吸管、计数器、血细胞稀释液、人血涂片、采血针、显微镜、载玻片、A型和B型标准血清、滤纸片、酒精棉球、蒸馏水、消毒牙签、生理盐水等

【方法步骤】

（一）血涂片观察

1 红细胞观察

2 白细胞观察

3 血小板观察

（二）ABO血型鉴定

1采血

2滴入A、B标准血清中并搅拌

3辨别血型

4显微镜观察

5记录受试者的血型，讨论判断机理。

（三）血细胞计数

1熟悉计数板

2红细胞计数

3血小板计数

【思考题】

1根据自己的血型，说明你能接受或输血何种血型的人，为什么？

2如何区别血液凝集与凝固，其机制是否一样？

3 输血前为何要做交叉配血试验？

4如何减少血细胞计数的误差？

实验 4 心肌的期前收缩与代偿间歇

【目的与要求】

1观察心室收缩活动的不同时相对额外的刺激的反应

2了解心肌的生理特性

3通过实验阐述心肌产生期外收缩的条件与代偿间歇出现的机理

【基本原理】

心肌收缩的机能特性之一是具有较长的不应期，整个收缩期和舒张早期都是不应期。在心室收缩期给任何刺激，心室都不发生反应。在心室舒张期给单个阈上刺激，则产生一次正常的节律以外的收缩反应，称为期外收缩。当静脉窦传来的节律性兴奋恰好落在期外收缩的收缩期时，心室则不发生兴奋，须静脉窦传来下一次兴奋才会收缩。因此。在期外收缩之后，就会出现一个较长时间的间歇期，称为代偿间歇。

【动物与器材】

蟾蜍或蛙，常用手术器械，蛙板(或蜡盘)，蛙心夹，计算机采集系统，张力传感器，支架，

双凹夹，滴管，双针形露丝刺激电极，培养皿(或小烧杯)，纱布，棉线，橡皮泥，任氏液【方法与步骤】

1暴露蟾蜍或蛙的心脏，连接记录装置。将刺激电极安放在心室外壁，使之既不影响心搏又能使心室紧密接触。刺激电极与刺激电极输出端相连。

2记录正常的心搏曲线作对照

3选择能引起心室发生期外收缩的刺激强度(于心室舒张期调试)，分别与心室收缩期和舒张期的早，中，晚给予单个刺激(注意:刺激前后要有三四次正常心搏曲线作对照，不可连续输出两个刺激)。观察心搏有无变化，重复并肯定实验结果。

4同上法，加大刺激强度，观察心室肌对额外刺激的反应

【思考题】

1 实验结果同骨骼肌比较，表明心肌有何特性

2 心肌的不应期长有何生理意义

3 本实验不用连续刺激，为什么?于心室收缩和舒张期早、中、晚分别给与刺激的实验设计思路是什么?

4 为何刺激前后要有对照曲线?

实验 5 家兔呼吸运动的调节

【目的要求】

1学习记录家兔呼吸运动的方法。

2观察并分析肺牵张反射及不同因素对呼吸运动的影响。

【基本原理】

人体及高等动物的呼吸运动所以能持续地、有节律地进行，是由于体内调节机制的存在。体内、外的各种刺激，可以直接作用于中枢或不同部位的感受器，反射地影响呼吸运动，以适应机体代谢的需要。肺的牵张反射参与呼吸节律的调节。

【动物与器材】

家兔、手术台、手术器械、张力传感器与滑轮或动物呼吸传感器、计算机采集系统、20ml 与1ml注射器、橡皮管（长1.5m，内径1cm）、20％或25％氨基甲酸乙酯、生理盐水、装有CO2的气袋、装有钠石灰的气袋。

【方法与步骤】

急性动物实验时，记录呼吸运动的方法有三种，一种是通过压力传感器与气管插管连接记录；另一种是通过系在胸（或腹）部、装有张力或压力传感器的呼吸带记录；第三种是通过张力传感器记录膈肌运动。本实验采用第三种操作方法。

1动物麻醉、固定，进行颈部气管、动脉及神经的分离术，插入气管插管，分离出一侧颈总动脉和双侧迷走神经，穿线备用。

2剑突软骨分离术

剪开胸骨下端剑突部位的皮肤，再沿腹白线切开长约2cm左右的切口。细心分离剑突表面的组织（勿伤及胸腔），暴露出剑突软骨和骨柄，用金冠剪剪去一段剑突软骨的骨柄，使剑突软骨与胸骨完全分离，但必须保留附于其下方的膈肌片，并使之完好无损。此时膈肌的运动可牵动剑突软骨。

3将系有长线的金属钩钩住游离的剑突软骨中间部位，线的另一端通过万能滑轮系于张力传感器的应变梁上。

4开启计算机采集系统，接通张力传感器的输入通道，调节记录系统，使呼吸曲线清楚地显示在显示器上。

5实验观察

（1）记录呼吸运动曲线，仔细识别吸气或呼气运动与曲线方向的关系。