微生物生长的测定
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适于颜色较浅的样品，浓度107/ml以上。
特点：快速、简便；但易受干扰。
8.生理指标法
▪测含氮量
蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分， 通过测含氮量就可推知微生物的浓度。
一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%， 根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含 量。
▪其他方法
▪测定微生物的呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热、消耗底物量、 产二氧化碳、产酸、粘度等，都可用于生长量的测定。
2.涂片染色法
应用：可同时计数不同微生物的菌数 适于土壤、牛奶中细菌计数。
方法：用镜台测微尺计算出视野面积； 取0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数； 计算公式：
每ml原菌液含菌数= 视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 ×稀释倍数
3.平板菌落计数法
1ml 1ml 1ml
1ml
9ml
9ml
→或烘干→称重（干重）
7.比浊法
原理：菌体细胞在悬液中数目越多，越昏浊，光的穿透 力越弱，用比色计或分光光度计测定光密度OD，OD值 与菌液浓度成正比。
例：液体培养基中每隔2h抽样测OD值，结果如下： 时间 0 2 4 6 OD值 0.1 0.12 0.2 0.5
则6小时后菌体增长=(0.5－0.1)÷0.1=4倍 或对照标准曲线求出菌液浓度。该法快速、简便，
第二十四讲 微生物生长的测定
一、微生物生长表示法
描述微生物的生长情况，通常用群体增长量表示： 群体微生物细胞数目的增长情况； 群体原生质量的增长情况； 群体某些生理指标变化情况。
1.血球计数板法直接计数法 血球计数板
血球计数板法
原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中 均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换 算成单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞如血球、酵母菌等。不适用于细 菌等个体较小的细胞，原因：细菌细胞太小，不易沉降； 油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌 悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
4.液体稀释法
4.液体稀释法
对样品做10倍连续稀释，从适宜的3个连续稀释度中 各取5ml试样，接种3组共9支装有培养液的试管中 （每管接入1ml）。经培养后，记录每个稀释度出 现生长的试管数，然后查M.P.N.表（most probable number，最大可能数），根据样品稀释
倍数就可 10n计算处10其 n-1中1的0n活 -2 菌含量。
9ml
9ml
1ml
×2
1ml
×2
1ml
×2
最常用的活菌计数法。
• 将检样作系列稀释，取适当稀释度的稀释液一定量 涂布于固体培养基上，培养一定时间后计数菌落。
• 则菌数/ml=（平均菌落数×稀释倍数）÷取样量
平板活菌计数法
★技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（15~20min完成操 作），严格无菌操作。 ★注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度；样品混匀处理； 倾注平板时的培养基温度。 ★适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微 生物， ★误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品ml
1ml
1ml
×3
9ml 1ml
9ml
×3
9ml 1ml
9ml
×3
5.薄膜过滤计数法
适于测定量大，含菌量低的流体样品如水、空气等。 方法：将定量样品通过微孔簿膜（硝化纤维素薄膜、醋 酸纤维薄膜） ，菌体被阻留在膜上，取下薄膜放在培 养基上培养，计数菌落数。
6.干重法
该法适于单细胞、多细胞及丝状真菌（无法对单 个细胞进行计数） 液体中培养→过滤→洗涤→称重（湿重）
特点：快速、简便；但易受干扰。
8.生理指标法
▪测含氮量
蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分， 通过测含氮量就可推知微生物的浓度。
一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%， 根据一定体积培养液中的含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含 量。
▪其他方法
▪测定微生物的呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热、消耗底物量、 产二氧化碳、产酸、粘度等，都可用于生长量的测定。
2.涂片染色法
应用：可同时计数不同微生物的菌数 适于土壤、牛奶中细菌计数。
方法：用镜台测微尺计算出视野面积； 取0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数； 计算公式：
每ml原菌液含菌数= 视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 ×稀释倍数
3.平板菌落计数法
1ml 1ml 1ml
1ml
9ml
9ml
→或烘干→称重（干重）
7.比浊法
原理：菌体细胞在悬液中数目越多，越昏浊，光的穿透 力越弱，用比色计或分光光度计测定光密度OD，OD值 与菌液浓度成正比。
例：液体培养基中每隔2h抽样测OD值，结果如下： 时间 0 2 4 6 OD值 0.1 0.12 0.2 0.5
则6小时后菌体增长=(0.5－0.1)÷0.1=4倍 或对照标准曲线求出菌液浓度。该法快速、简便，
第二十四讲 微生物生长的测定
一、微生物生长表示法
描述微生物的生长情况，通常用群体增长量表示： 群体微生物细胞数目的增长情况； 群体原生质量的增长情况； 群体某些生理指标变化情况。
1.血球计数板法直接计数法 血球计数板
血球计数板法
原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中 均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换 算成单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞如血球、酵母菌等。不适用于细 菌等个体较小的细胞，原因：细菌细胞太小，不易沉降； 油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌 悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
4.液体稀释法
4.液体稀释法
对样品做10倍连续稀释，从适宜的3个连续稀释度中 各取5ml试样，接种3组共9支装有培养液的试管中 （每管接入1ml）。经培养后，记录每个稀释度出 现生长的试管数，然后查M.P.N.表（most probable number，最大可能数），根据样品稀释
倍数就可 10n计算处10其 n-1中1的0n活 -2 菌含量。
9ml
9ml
1ml
×2
1ml
×2
1ml
×2
最常用的活菌计数法。
• 将检样作系列稀释，取适当稀释度的稀释液一定量 涂布于固体培养基上，培养一定时间后计数菌落。
• 则菌数/ml=（平均菌落数×稀释倍数）÷取样量
平板活菌计数法
★技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（15~20min完成操 作），严格无菌操作。 ★注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度；样品混匀处理； 倾注平板时的培养基温度。 ★适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微 生物， ★误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品ml
1ml
1ml
×3
9ml 1ml
9ml
×3
9ml 1ml
9ml
×3
5.薄膜过滤计数法
适于测定量大，含菌量低的流体样品如水、空气等。 方法：将定量样品通过微孔簿膜（硝化纤维素薄膜、醋 酸纤维薄膜） ，菌体被阻留在膜上，取下薄膜放在培 养基上培养，计数菌落数。
6.干重法
该法适于单细胞、多细胞及丝状真菌（无法对单 个细胞进行计数） 液体中培养→过滤→洗涤→称重（湿重）