大黄中大黄素的提取分离与鉴定
大黄中药材及其醇、水提取物中大黄素成分分析标准物质研究
大黄中药材及其醇、水提取物中大黄素成分分析标准物质研究采用“单一化学成分→复杂成分体系”的量值传递技术路线，完成了大黄、大黄95%乙醇提取物、大黄水提取物中大黄素成分分析系列标准物质的研制。
使用大黄素国家一级纯度标准物质进行量值传递，利用高效液相色谱协作标定法，确定了不同基质中大黄素成分的标准值；建立不确定度评估数学模型并计算各不确定度分量，最终获得不确定度值。
完成大黄、大黄95%乙醇提取物、大黄水提取物中大黄素成分分析标准物质，其大黄素成分分别为0.40%±0.03%，1.15%±0.18%，0.16%±0.08%（k=2，P=0.95）。
建立的量值传递技术路线成功解决了中药复杂体系中化学成分量值溯源的技术难题，研制的标准物质属国家级计量有证标准物质，为大黄中药材及其提取物中大黄素的定量质量控制提供了准确可靠的标准物质、物质标准、标准方法。
标签：大黄；大黄95%乙醇提取物；大黄水提取物；大黄素；标准物质；不确定度[Abstract]The certified reference materials （CRMs）of emodin in rhubarb and its alcohol extract，water extract were developed by using quantity transfer technology from single chemical composition to the complex systems. The CRM of emodin was used for quantity transfer，and high performance liquid chromatography （HPLC）method was used to determine the contents of emodin in different matrix composition. By establishing mathematical model and calculating the parts of uncertainty，the uncertainty values were finally gotten. CRMs of emodin in rhubarb，alcohol extract and water extract were accomplished. The content values of emodin were 0.40% ±0.03%，1.15%±0.18%，0.16%±0.08% （k=2，P=0.95），respectively. The established method for quantity transfer has successfully solved the technical problems that the value of active ingredient of traditional Chinese med icine can′t be traced to SI units. The series of CRMs are assigned as grade primary reference materials，which are useful for quality control of the emodin content，also provide the accurate and reliable CRM，materials standard and standard methods.[Key words]rhubarb；alcohol extract；water extract；emodin；CRM；uncertainty中药历史悠久，其用药特点是多成分复杂体系协同起效，因此如何进行中药的质量控制成为研究重点与难点，这也成为了制约中药国际化与现代化进程的主要原因。
分光光度法测定大黄中大黄素的含量
乙酸乙酯溶解 ，％ Ｎ ：Ｏ 溶液萃取数次 ， ５ ａＣ ， 合并萃取
液 ， １ ％ 盐酸 至酸性 ， 橙 黄 色沉 淀 。 冰 乙酸重 加 ０ 得 用
收 稿 Ｅ期 ：０ ７０ －１ ｔ ２ ０ －９０
图 １ 大 黄素在 Ｎ Ｏ ａ Ｈ中的平衡方程
图 １ 明， ＮＯ 表 当 ａ Ｈ过量 时 ， 大黄 素结 构 中蒽 醌
药有 限公 司 ； 大 黄 素 标 准 溶 液 ： ０ ｇ ｍＬ 精 密 称 取 ５０ ／ 。
大 黄素几 乎不 溶 于水 ， 溶 于 乙醇 、 ａ Ｈ水 溶 易 ＮＯ 液 中， 微溶 于 乙醚 、 氯仿 、 。 由于天 然 大 黄 中大 黄 苯
素含 量较 少 ， 而且杂质 多 ， 测定 方法 较复 杂 。实验 发 现， 大黄 素 在 Ｎ Ｏ 水 溶 液 中 的 平衡 随着 ｐ 的 变 ａＨ Ｈ 化 而可逆 ， １为 大 黄 素 在 Ｎ Ｏ 水 溶 液 中的平 衡 图 ａＨ
摘要
建 立 了 １ 量 ９ ％ 乙 醇 回流 提 取 、５倍 量 乙酸 乙脂 二 次 回 流 提 取 ， ０倍 ０ １ 最后 用碱 提 酸 沉 法 制 备 高 纯 度 大 黄
素 的 方 法 。 用 改进 的 分 光 光 度 法 对 纯 化后 产 品 进 行 测 定 ， 黄 素含 量 达 ８ ． １ 。 显 色剂 为 ５ｍ ｌＬ的 Ｎ Ｏ 溶 液 ， 大 ５４ ％ ｏ ／ ａＨ
上 ３个羟 基完 全质 子 化 ， 上 共 轭 环上 有 甲基 的 推 加
电子 作用 ， 轭 体 系 内电子 云流 动 增 加 。大 黄 素 与 共
ＮＯ ａ Ｈ反应 生 成稳 定 红 色 络 合 物 ， 一 定 波 长 下 有 在 最 大 吸收 ， 可用 分光光 度 法进行 测定 。当提 高酸度 ，
中药大黄的成分检测方法研究
中药大黄的成分检测方法研究中药大黄不仅仅是中药材同时也可作为食材，在使用的过程中为了保证药品的纯度在对其进行检测时可利用现代科技技术。
本次研究的目的则是分析中药大黄的几种检测方法。
标签：中药；大黄；检测方法；成分在中药中大黄是常见且常用的一种药材，应用范围较广，大黄具有斜热通肠、凉血解毒、祛瘀等功效[1]。
大黄的应用价值比较高，分布在四川、甘肅等地区，然而大黄的种类比较多，但是能用的却比较少。
1 HPLC检测法流动相为甲醇-1.0%冰醋酸，在430 nm下进行检测，在图谱中有23个共有峰，针对12个来自不同产地及不同时间段收集样本来说其相似度>90%，在检测中药大黄成分时具有专属性指纹图谱的优势。
利用微乳电动毛细管色谱法对来源不同掌叶大黄监理指纹图谱，采用没有经过图层的石英毛细管柱，以SDS、正丁醇、硼砂溶液与正辛烷作为缓冲液，再添加由乙腈组成的O/W型微乳体系，将分离电压及检测波长分别设置为18 kV及280 nm。
在检测完成之后通过聚类分析及相似度对其进行分析，然后将研究的掌叶大黄分为道地药材、一般药材及次品[2]。
在确定大黄指纹图谱共有的模式之后，利用HPLC法对掌叶大黄不同炮制品水提取物的指纹图谱，再根据灰关联度分析的方法对止血谱效的关系进行分析。
大黄经炮制后鞣质类成分及蒽醌类成分的含量变化对大黄止血效果有着重要的影响作用。
当以流动相为乙腈-水-1%冰醋酸时，在254 nm之下可有效的反应出了大黄中含有的化学成分指纹图谱，因此可确定大黄指纹图谱最佳进样量时61.35 ug。
2 薄层扫描色谱法利用超临界流体萃取薄层色谱扫描方法对大黄中所含大黄素进行测定，超临界流体萃取技术具有提取物纯净的优势，可以直接分析点样。
使用薄层层析方法分离大黄中游离型及结合型蒽醌类，然后再利用薄层扫描的方法对其含量进行测测定。
在硅胶G层上使用正己烷-乙酸乙酷-甲酸对生大黄、熟大黄及配方颗粒中的大黄素进行测定，同时使用双波长薄层扫描仪进行测定。
大黄素的提取工艺进展,
中药制剂中大黄素提取工艺的进展摘要：本实验主要详细介绍了大黄素的几种常见的提取工艺，论述了提取工艺的进展，大黄素常见的提取方法有反相高效液相色谱法，葡聚糖凝胶分子筛及重结晶法，超声波－微波协同萃提取测定大黄素含量且获得较为满意的结果，实验证明该方法分离能力强、干扰少，具有广泛的应用性。
1 常用的大黄素提取方法1.1方法一：准确称取烘至恒重的本品粉末5 g，加硫酸液(2．5ml／1)30 ml，加热回流2h，冷却，加氯仿50ml，水浴回流1h，分取氯仿层，酸液再加氯仿40ml，继续回流，冷却后分取氯仿层，合并氯仿层，水洗三次，回收氯仿，残渣加甲醇溶解定容至5ml[1]。
1.2方法二：(双相水解提取法)精密称取样品粉末5g，加入60m1氯仿浓度为2．5M硫酸溶液，水浴回流4h，转至分液漏斗中静置，分出氯仿层再用氯仿60、50、40m1，萃取酸水层，合并回收氯仿液，残渣加甲醇溶解、定容至5m1，[1]1.3方法三：准确称取烘至干燥恒重的本品粉末5g，置圆底烧瓶内，加甲醇40m1，加热回流提取1h，过滤，滤液蒸干，残渣加2.5M硫酸液10m1，沸水浴中水解30 min，放冷后用乙醚萃取三次(20m1，15m1，15m1分取乙醚层，合并，回收乙醚，残渣加甲醇溶解、定容至5ml)。
将三种方法制得的样品液10m1点于同一块薄层板上，展开后观察。
[1]2 超声波－微波协同萃提取将萃取物先用硅胶层析板点样，初步确定萃取效果。
展开剂为石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸= 15∶ 5∶ 1的上层清夜。
然后将萃取物样品测试条件进行HPLC分析，萃取液中保留时间为8.288 min 的峰和对照品中大黄素(保留时间8.354 min)的出峰时间基本一致，且峰型对称，结合薄层层析分析结果可确定该组分为大黄素[2]。
实验表明，超声波功率内置为50W的仪器条件下，影响超声波－微波协同萃取大黄素的因素依次为: 乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、微波功率。
实验二 大黄中大黄素的提取
滤渣பைடு நூலகம்
③水洗至中性，干燥
水洗：有H2SO4 留在滤渣中，若不 除去，干燥过程水分减少， H2SO4 浓度增高，造成药材碳化。
滤饼
①
②
③
二、总羟基蒽醌苷元的提取
1. 实验仪器： 平底烧瓶、索氏提取器、冷凝管、滤纸 2. 实验试剂： 干燥滤饼、乙醚
3. 实验方法 干燥滤饼
①置索氏提取器中，加150 （100+50）乙醚，提取1.5h
实验二 大黄中大黄素的提 取、分离和鉴定
一、大黄的酸水解
1. 实验仪器： 圆底烧瓶、冷凝管、电炉、滤布 2. 实验试剂： 大黄粉、20%H2SO4
3. 实验方法 15g大黄粉
回流：防止水分蒸发使硫酸浓度增 加造成药粉碳化。
①120ml 20%H2SO4,直火回流加热1h， ②滤布抽滤
酸水提取：大黄的蒽醌类化合物多 以苷的形式存在，用酸水解可得总 蒽醌苷元，苷原极性弱，留在滤渣 中。
乙醚提取：苷元极性弱，用弱极性 乙醚提取。
乙醚提取液（总蒽醌苷元）
温度需控制在溶剂蒸汽至冷凝管 第二个球处：防止乙醚蒸汽逸出 造成污染且影响提取效率。
玻璃仪器必须干燥，若平底烧瓶 中有水，水将会改变提取试剂的 极性，影响提取效率，且可能与 乙醚混溶后改变溶剂沸点。
三、pH梯度萃取
1. 实验仪器： 锥形瓶、布氏漏斗、滤纸、pH试纸 2. 实验试剂： 乙醚提取液、NaHCO3 、Na2CO3、NaOH
①
②
④ ③
四、柱色谱分离大黄素
1. 实验仪器： 色谱柱、烧杯、烧杯 2. 实验试剂： 硅胶、脱脂棉、丙酮、石油醚-乙酸乙酯
3. 实验方法
用洗脱剂检漏，留2cm洗脱剂缓冲 且排除脱脂棉的气体
实验六 虎杖中大黄素的提取、分离和检识
实验六虎杖中大黄素的提取、分离和检识虎杖又名阴阳莲、土地榆、苦杖，为蓼科植物虎杖（Polygonum cuspidatum siebet Zucc．）的根茎。
有活血化瘀，清热解毒，祛痰止咳等功用。
近年来用于治疗急性黄疸，降低血脂，升高白血球和血小板，并可治疗慢性气管炎等多种炎症及烧伤等症。
虎杖根茎中含有大量的蒽醌成份和二苯乙烯类成份。
一、虎杖根茎中已知主要成份的理化性质1．大黄酚（Chrysophanol）：金黄色片状结晶（丙酮）或针状结晶（乙醇），mp196~197℃，能升华。
可溶于苯、氯仿、乙酸、乙醇。
NaOH水溶液及热的Na2CO3水溶液。
微溶于石油醚和乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液。
2．大黄素（Emodin）：橙黄色针状结晶，mp256~257℃，能升华。
易溶于乙醇，可溶于NH4OH、Na2CO3和NaOH水溶液，几乎不溶于水。
3．大黄素甲醚（Physion）：砖红色针状结晶，mp206℃，能升华。
易溶于NaOH 溶液，可溶于苯、氯仿、吡啶、甲苯，微溶于乙酸、乙酸乙酯、乙醚，不溶于水。
4．大黄素葡萄糖苷（Emodin monoglucoside）：浅黄色针状结晶（稀乙醇中析出，含分子结晶水），mpl90~191℃。
5．白藜芦醇（Resveratol）：无色针状结晶，mp256~257℃，216℃，264℃，能升华。
易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。
6．虎杖苷（白藜芦醇葡萄糖苷，Polydatin，Piceid）：无色针状簇晶，mp223~226 ℃（分解）。
易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水，可溶于乙酸乙酯，Na2CO3和NaOH的水溶液，微溶于冷水，难溶于乙醚。
二、目的要求1．掌握从虎杖中提取羟基蒽醌类成份的方法。
2．熟悉用硅胶柱层析方法分离混合羟基蒽醌类成份的一般操作技术。
3．熟悉羟基蒽醌类化合物的主要检识反应。
三、实验原理本实验是根据游离蒽醌类成份能溶于含水氯仿的性质，先将原料的浓酸溶液湿润后，加入含水氯仿进行回流提取，在回流过程中即可将结合态的蒽醌（苷类）类成份水解成为游离蒽醌，这样就可连同原存在的游离态蒽醌成份，一并被含水氯仿提取出来。
大黄的提取分离
⼤黄的提取分离⼤黄的提取分离实验报告⼀．背景和⽬的⼤黄，⼜名黄良、⽕参、将军等，为我国传统常⽤中药材。
⼤黄(Radixe RhiZomaRhei)为寥科植物掌叶⼤黄(RheumPalmatumL)，唐古特⼤黄(Rheum tangutieumMaxim.exBal勺或药⽤⼤黄 (RheumoffieinaleBaill)的⼲燥根和根茎。
掌叶⼤黄和唐古特⼤黄药材称北⼤黄，主产于青海、⽢肃等地。
药⽤⼤黄药材称南⼤黄，主产于四川。
于秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。
除去须根，刮去外⽪切块⼲燥，⽣⽤，或酒炒，酒蒸，炒炭⽤。
味苦、性寒。
归脾、胃、⼤肠、肝、⼼包经。
1.1天然产物提取、分离和纯化技术概述植物的化学成分⽐较复杂，种类很多，因此在着⼿研究⼀个植物的有效成分时，⾸先要⼤致知道有哪些类型的化学成分，这就需要对各类化学成分的进⾏简单的定性预试验。
通常先⽤⼏种不同极性的溶剂分别进⾏提取，进⾏⽣物活性筛选，确定哪⼀个溶剂提取部位有效后，再对该部位进⾏各类化学成分的预实验。
另外在植物资源化学研究⼯作中，常常根据⼯作需要，定向的寻求某类化学成分，这就要进⾏某类化学成分的单项预实验。
根据预实验的结果，判断可能含有哪些类型的化学成分，然后按照所含化学成分的性质，设计有效成分分离的具体⽅法。
通常将植物分别⽤⽯油醚、95%⼄醇和⽔提取。
这样便可以把绝⼤部分植物成分提取出来，假使我们不着重研究挥发油，⼀般经过酒精和⽔两种溶剂的提取就可以进⾏预实验。
预实验往往只能提供初步的线索。
1.1.1.⽔提液取植物粉末5g，加50mL蒸馏⽔，在50-60℃的⽔浴上加热约1⼩时后过滤，此滤液即可在试管及滤纸上作糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、⽣物碱等项的预试验。
1.1.2.酒精提取液取植物粉末5g，加50mL95%的酒精，在⽔浴上加热回流约1⼩时后过滤，滤液即可进⾏酚类、鞣质、有机酸等项的预实验。
其后将滤液浓缩⾄浆状，置于研钵中，⽤少量5%盐酸溶解，取盐酸⽔溶液进⾏⽣物碱的预实验。
中药化学实验内容
4）鉴定
、实验目的
1、学习生物碱的TLC检识方法
2、巴马汀、四氢巴马汀的定性鉴别（TLC、m.p.）
二、实验原理 用硅胶板进行巴马汀、四氢巴马汀的TLC检识，选用氨薰的方法避免生物碱在硅胶板 上易拖尾的现象。
三、实验方法
1、TLC
点板→氨缸中放5min→展开槽展开→取出察看（可见光、荧光、显色剂） 样品：巴马汀、四氢巴马汀的样品及对照品，用乙醇溶解
四、实验注意事项
1、湿润 目的：避免干药材吸水后溶胀，在渗漉筒中膨胀而使渗漉液难流出； 方法：溶剂量为药材的1/2，放置15分钟； 程度：湿润后的药材手握成团，放开后松散。
2、装筒方法：
（1）两层小纱布湿润后盖于渗漉筒小孔上，避免紧、大；
（2）湿润后的药粉均匀地倒入渗漉筒里，避免松紧不匀；
（3）药粉上盖一层滤纸，压上瓶盖，以防药粉翻出，影响提取得率；
四、注意事项
1、NaBH4为强还原剂，避免长时间接触空气及用手接触；
2、加NaBH4时充分摇匀，使反应充分；
3、四氢巴马汀在碱液中易氧化成巴马汀。
五、思考题
1、加入NaBH4后，颜色由黄变无色、溶液变混浊的原因？
2、用6 mol HCl调反应液PH2至无气泡产生的原因？此时的溶液呈什么现象？
3、用NH4OH调PH9原因、现象？
4、本实验在可见光和荧光下检识有什么现象？为什么？
5、熔点测定时，样品量多会对测定结果有什么影响？
6、从鉴定结果如何判断样品的纯度？
实验二 大黄中大黄素的提取、分离和鉴定
（1）酸水解
2、芦丁的精制和酸水解11
3、槲皮素五乙酰化物的制备12
4、糖鉴定13
5、芦丁、槲皮素的鉴定14
高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量
论文标题高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量班级药学30801专业名称药学系部名称制药工程系河北化工医药职业技术学院毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。
尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。
对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。
作者签名：日期：指导教师签名：日期：使用授权说明本人完全了解大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。
作者签名：日期：学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。
除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。
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本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。
作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。
本人授权大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
涉密论文按学校规定处理。
作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录摘要 (3)第一章：大黄的概述 (3)§1-1基本信息 (3)§1-2化学成分 (4)§1-3药效作用 (4)1-3-1消化系统的影响 (4)1-3-2对血液系统的影响 (4)1-3-3抗感染作用 (5)§1-4不良反应 (5)§1-5现代研究 (5)第二章：高效液相色谱法测大黄中大黄素和大黄酚的含量 (6)§1-1仪器与试剂 (6)1-1-1仪器 (6)1-1-1试剂 (6)§2-2方法与结果............................................................. (7)2-2-1色谱条件 (7)2-2-2对照品的制备 (7)2-2-3供试品的制备 (7)2-2-4阴性对照溶液的制备 (7)2-2-5干扰试验 (7)2-2-6标准曲线的绘制 (7)2-2-7精密度试验 (7)2-2-8重复性试验 (7)2-2-9稳定性试验 (7)2-2-10加样回收率试验 (8)2-2-11样品的测定 (8)第三章：讨论 (8)§3-1药材含量测定中提取剂的确定 (8)§3-2HPLC法中检测波长的确定 (8)§3-3HPLC法中线形范围的确定 (9)参考文献 (9)第一章：摘要论文题目：高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量摘要摘要内容：大黄是我国临床常用的中药之一，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效，大黄中的有效成分有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等150多种成分。
大黄中大黄素的提取分离与鉴定
H COOH
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2.流程
10g大黄粉 100ml 20% H2SO4直火回流加热1h，滤布抽滤
滤 渣
水洗至中性，干燥
滤饼
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10g大黄粉
直火回流加热
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滤布抽滤
滤渣
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二.总羟基蒽醌苷元的提取
1.实验原理 大黄中总蒽醌苷元为亲脂性成分，故可用乙醚提取，连续回 流提取法在溶剂提取法中效率最高
2.流程图 干燥滤饼
置索氏提取器中，加150ml（100+50）Et2O 提取2.5h（至提取液近无色）
Et2O 提取液(总蒽醌苷元)
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6
研碎装入纸筒
索氏提取器回流
最新课件7ຫໍສະໝຸດ 三.PH梯度萃取1.实验原理 根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚和大黄素 甲醚的酸性强弱不同，采用由弱到强加入不同碱液进 行萃取的方法，分离的单大黄素粗品。
实验原理大黄的蒽醌类化合物大多以苷的形式存在如大黄酚葡萄糖苷大黄素葡萄糖苷大黄酸葡萄糖苷芦荟大黄素葡萄糖苷一些双葡萄糖链苷及少量的番泻苷abcd等其主要成分的结构如下
实验二 大黄中大黄素的提取，分离和鉴定
一.大黄的水解 二.总羟基蒽醌苷元的提取 三.PH梯度的萃取 四.柱色谱分离大黄素 五.大黄素的鉴定
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2.流程图
Et20提取液
Et2O提取液（1）
NaHCO3液（大黄酸）
Et2O提取液（2）
NaCO3液
Et2O提取液（3）
NaCO3液（芦荟 沉淀（芦荟大黄素） 大黄素）
Et2O提取液（4） NaOH液(大黄素甲醚
和大黄酚)
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大黄中大黄素的提取、分离和鉴定
大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术（3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法（4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法二、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。
结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。
游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
【1】本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其R f值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。
【2】大黄酸：黄色针状结晶mp.321—322℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。
大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华。
其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。
易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。
【3】大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H三、实验器材试药：大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉30g【4】20%H2SO4150ml加热1h,抽滤、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取1h乙酸乙酯层5%NaHCO3萃取水层（紫红色）乙酸乙酯层5%Na2CO3水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）HCl黄色沉淀（粗品）水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结晶具体操作步骤：1.游离蒽醌的提取称取大黄粗粉30g，加20%H2SO4水溶液150mL，加热1小时，放冷，抽滤，同时滤饼水洗至近中性（除去H2SO4），于70℃干燥后，置回流装置中，加入乙酸乙酯300mL回流提取1小时，得到乙酸乙酯提取液。
大黄中大黄素的提取分离
大黄中大黄素的提取分离
大黄酸R1=H R2=COOH
大黄素R1=CH3R2=OH
芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3
大黄酚R1=CH3R2=H
黄色沉淀（粗品）
水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结晶
解释：
1.大黄中羟基蒽醌类化合物多数以苷的形式存在，故先用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游离蒽醌可溶于乙醚的性质，用乙醚将它们提取出来。
2.由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离它们。
大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
【1】徐选明，刘新大黄中大黄素提取工艺的优化中国中医药信息杂志2004，11，5
【2】李乃明，丁宙大黄素的分离和结构鉴定广州医学院学报1985，13，3 【3】朱庆玲，李瑞和大黄中大黄素的提取工艺研究时珍国医国药2006，17，3。
大黄中大黄素的提取分离与鉴定
食品添加剂中的应用
天然色素
大黄素具有鲜艳的黄色，可以作为天然色素添加到食 品中，改善食品的色泽和感官品质。
抗氧化剂
大黄素具有抗氧化活性，可以作为食品抗氧化剂，延长 食品的保质期和保持食品的营养价值。
保健品及化妆品中的应用
保健品
大黄素具有多种生物活性，如抗炎、 抗菌、抗肿瘤等，可以作为保健品的 成分，提高保健品的功效。
型。
质谱鉴定
要点一
总结词
质谱鉴定是一种通过测量物质分子质量和碎片信息进行成 分分析的方法。在大黄素的鉴定中，质谱技术可以提供大 黄素分子的精确质量信息和可能的碎片信息，有助于确定 其分子结构。
要点二
详细描述
质谱鉴定利用高能电子束或激光束与大黄素分子相互作用 ，使其产生带电碎片。通过测量这些碎片的质量和数量， 可以推断出大黄素分子的精确质量和可能的化学结构。与 红外光谱和紫外光谱相结合，质谱鉴定为大黄素的鉴定提 供了更全面的结构信息。
紫外光谱鉴定
总结词
紫外光谱鉴定是一种基于物质吸收紫外光的 特性进行成分分析的方法。通过测量大黄素 在紫外区的吸收光谱，可以推断出其结构特 征和共轭体系。
详细描述
紫外光谱鉴定利用不同物质在紫外光区具有 不同吸收特性的原理，通过测量大黄素的紫 外吸收光谱，可以确定其共轭双键的数量和 位置，进一步推断出大黄素的分子结构和类
大黄素的药理作用与生物活性
药理作用
大黄素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、 抗菌等多种药理作用。
生物活性
大大黄素在临床上对多种疾病具有治 疗作用，如结肠炎、肾炎、肝炎等。
02
大黄中大黄素的提取方法
溶剂提取法
01
02
03
04
原理
大黄中大黄素提取条件的优化
率为指标采用单因素试验和正交试验对上述因素进 行了考察, 确定了提取大黄素最佳的工艺条件, 为大 黄素的高效提取提供了理论依据。
1 材料与方法
1. 1 仪器 紫外可见分光光度计( U V- 752 型) , 上海光谱
仪器厂。
* 收稿日期: 2010- 09- 09 作者简介: 李红亚( 1977- ) , 女, 河北省蠡县人, 讲师, 硕士, 主要从事中草药的微生物转化研究. E- mail: lihy77@ sina. com. 通讯作者: 朱宝成( 1963-) , 男, 河北省献县人, 教授, 主要从事微生物与生化药学研究.
Table 3 The effects of extracting conditions to the production of emodin
项目 Items
提取溶剂量/ mL D osage of so lv ent
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
K1 K2 K3 K4 K '1 K '2 K '3 K '4 极差 R 主次次序 最优水平 最优组合
So lvent T he gr oss weig ht Purity
of emo din
quo tient
苯 氯仿
0. 065 9 0. 069 4
45. 37 39. 57
乙醚 乙酸乙酯
0. 067 3 )
32. 22 )
大黄素的产量/ g
T he net weig ht
o f emodin
0. 029 9 0. 027 4 0. 021 7
16
14 0
酸水量/ mL T he dosage
大黄中大黄素的提取
长治学院2011届学士学位毕业论文大黄中有效成分的提取及小白鼠泻下作用的研究——大黄素的提取学号：姓名：指导教师：专业：系别：完成时间：2011年5月目录摘要 (Ⅰ)关键字 (Ⅰ)1引言 (1)2 材料、试剂与仪器 (1)2.1材料 (1)2.2试剂 (1)2.3仪器 (1)3 提取与分离 (1)3.1 材料的预处理 (1)3.2 溶剂提取 (1)3.2.1混合溶剂提取 (1)3.2.2苯回流提取 (2)3.2.3碱液提取 (2)4结果分析 (3)4.1混合溶剂提取结果分析 (3)4.1.1乙醇(A)和水(B)混合液回流提取结果分析 (3)4.1.2氯仿（A）和乙醇（B）混合溶剂提取结果分析 (4)4.2苯提取结果分析 (5)4.3碱液提取结果分析 (6)4.3.1碳酸钠提取结果分析 (6)4.3.2碳酸氢钠提取结果分析 (7)4.3.3氢氧化钠提取结果分析 (8)4.4结论 (9)5 结构鉴定 (9)5.1 熔点的测定 (9)5.2 颜色反应 (9)5.2.1 Borntrager`s反应 (9)5.2.2 醋酸镁反应 (10)6小鼠实验 (10)7总结与展望 (10)参考文献 (12)Abstract (13)Keywords (13)致谢 (14)大黄中有效成分的提取及小白鼠泻下作用的研究——大黄素的提取摘要：用六种不同的提取剂进行三因素三水平正交实验，从中药大黄中提取大黄素。
根据各提取剂的不同因素对大黄素提取率的影响，得出大黄素提取的最佳条件为：150mL的10%碳酸钠溶液煎煮提取0.5h。
小鼠实验表明大黄素具有的泻下作用较弱。
运用颜色反应和理化常数进行结构初步鉴定。
关键字：大黄大黄素正交试验提取1引言大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L）、唐古特大黄（Rheum tangguticum Maxin ex Balf）或药用大黄（Rheum officnale Bail l）的干燥根及根茎，分布于陕西、甘肃东南部、青海、四川西部、云南西北部及西藏东部。
高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量
高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量【关键词】高效摘要：采纳高效液相色谱法中的梯度洗脱测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量。
结果显示，所测得的二组分的含量和相对标准偏不同离为%、%；、% ，提示该法操作简单，结果靠得住，与药典法没有显著性不同。
关键词：高效液相色谱法；梯度洗脱；大黄素；大黄酚大黄是我国临床经常使用的中药之一，素有“将军”之称，在中药复方中应用相当普遍，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效，《神农本草经》称大黄“主下瘀血、血闭、寒热、破症瘕积聚、留饮、宿食、荡涤肠胃、通利水谷、调中化食、安和五藏”。
人们对大黄的研究日趋加深，接踵发觉了新的活性成份。
大黄中的有效成份有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等150多种成份。
大量的研究说明，大黄的诸多制剂均以保留总蒽醌为目的。
本研究采纳高效液相色谱法中的梯度洗脱直接测定经甲醇简单提取后的样品中的大黄酚和大黄素的含量，结果靠得住。
1 仪器与试剂11 仪器HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，包括四元泵、真空脱气机、柱温箱、紫外检测器。
色谱柱: Hypersil ODS ×μm；预柱:C18×50mm)5μm)（大连依利特公司）。
12 试剂大黄素、大黄酚对照品购自中国药品生物制品检定所；大黄生药材为市售（产地为甘肃、四川）；乙腈为色谱纯，其余为分析纯。
2 方式与结果21 色谱条件NH4OAC水溶液（PH=）：乙腈=A:B；梯度洗脱：0分钟A:B=71:29，12分钟A:B=21:79，14分钟A:B=21:79，15分钟A:B=71:29。
检测器：紫外检测器；波长：436nm；流速：min；进样体积：10μl；柱温箱温度：25℃。
22 标准曲线的绘制周密称取大黄素、大黄酚对照品各别离置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即为大黄酚和大黄素的标准贮备液，浓度为2mg/ml。
大黄中大黄素的提取分离与鉴定课件
采用光谱、色谱等手段对大黄素进行鉴定， 如高效液相色谱法、紫外光谱法等。
确定提取分离方法
根据大黄素的理化性质，选择合适的提取分 离方法，如溶剂萃取、色谱分离等。
制定实验操作流程
根据确定的提取分离和鉴定方法，制定详细 的实验操作流程。
实验操作流程
准备实验材料和设备
提取大黄素
准备好大黄样品、提取溶剂、色谱柱、检 测器等实验材料和设备。
大黄是一种多年生草本植 物，属于蓼科，主要分布 在中国、朝鲜、日本等亚 洲国家。
历史背景
大黄在中国已有两千多年 的药用历史，被广泛应用 于中医临床。
植物特点
大黄的叶片通常较大，呈 椭圆形或宽椭圆形，叶脉 明显。
大黄素简介
化学结构
大黄素是大黄的主要有效 成分，属于蒽醌类化合物 。
物理性质
大黄素为黄色针状结晶， 熔点较高，难溶于水，可 溶于乙醇、乙酸乙酯等有 机溶剂。
心血管疾病
大黄素可以用于治疗高血压、高血脂 等疾病，降低血脂和血压，预防心血 管事件的发生。
神经系统疾病
大黄素可以用于治疗癫痫、偏头痛等 疾病，减轻神经系统症状，促进神经 功能恢复。
06
大黄素提取分离与鉴定的 实验方案与操作流程
实验方案设计
确定实验目的和要求
明确实验目的和要求，为大黄素的提取分离 与鉴定提供指导。
适用范围
适用于实验室小规模提取，但提取 效率较低。
回流法
提取原理
利用有机溶剂对大黄进行多次循 环回流提取，使大黄素溶解在提
取溶剂中。
操作步骤
将大黄饮片放入提取器中，加入 适量的有机溶剂，加热至沸腾， 保持回流状态一定时间，收集提
取液，浓缩得到大黄素。
大黄的提取分离
大黄活性成分的研究三班一组目录•一、实验目的•二、实验设计•三、实验结果•四、实验讨论•根据所提供的实验条件自主设计实验，采用硅胶柱色谱和制备薄层色谱对中药大黄进行提取、分离和鉴定，应用HPLC进行分析和含量测定。
•采用普通硅胶柱色谱和制备薄层色谱方法组合的方式，对大黄主要成分进行提取、分离，获得HPLC纯度（峰面积比）90%以上的成分至少三种。
一、查阅资料，了解生药基源大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim. Et Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎。
•其主要成分：OOOH OHR 2R 1大黄酚大黄酸大黄素甲醚芦荟大黄素大黄素R 1=CH 3 R 2=H R 1=CH 3 R 2=OH R 1=CH 3 R 2=OCH 3R 1=H R 2=CH 2OH R 1=H R 2=COOH极性顺序为:大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚二、参考文献及实验室提供的试剂，确定溶剂洗脱系统比较五种化合物，可根据极性差别进行分离，利用薄层小板进行试验，发现石油醚和乙酸乙酯洗脱系统良好，能分开大多数化合物，并且在层析液中加入几滴冰醋酸成点性更好。
甲醇和二氯甲烷极性较大，不适宜作为起始洗脱剂，所以实验系统暂定为石油醚：乙酸乙酯。
100：1100：5100：10三、实验过程1.提取取大黄浸膏1.5g，用甲醇溶解，2.5g（100~140目）硅胶拌样，拌至完全干燥。
称取20g（200~300目）硅胶，用石油醚进行湿法装柱，上样。
2.溶剂系统PE:AE PE:AE100:1100:50100:2100:70100:3100:80100:5100:90100:1090:100100:2050:100100:30点板合瓶，得到新的一组样品合瓶后样品号1号：17-24（橘黄色色带）2号：25-293号：30-324号：33-345号：45-63（黄色）6号：64-777号：78-878号：88-98（黄色）9号：99-10710号：108-118（淡绿色）11号：119-122•把浓缩合瓶后的样品重新点板，与混标进行对照，发现大黄酸还未洗脱下来考虑到大黄酸极性较大，遂考虑换用二氯甲烷:甲醇洗脱系统梯度如下：DCM:MeOH50:120:110:17:1•把洗脱下来的样品继续点板合瓶12号：168-171（黄色）13号：172-177合瓶后的1-13号点板•发现1号、5号、8号、10号、12号样品较纯，准备进HPLC含量测定结果如下：1号，保留时间15.057，含量97.2%，大黄酚8号，保留时间11.398，含量90.85%，大黄素10号，保留时间4.482，含量59%，芦荟大黄素不纯，待制备12号，保留时间7.198，含量48%，大黄酸不纯，待制备5号，2个主峰，大黄酚72.63%和大黄素甲醚24.31%•将不纯的样品进行制备，用TLC小板摸条件，大板制备，刮板，洗脱，纯化样品。
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将此样品加到硅胶柱顶端，填脱脂棉。 加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用试管分段 收集(10-15mL/瓶)
南中医 中药化学实验 大黄素
点样，观察
南中医 中药化学实验 大黄素
五.大黄素的鉴定
熔点测定
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显色反应
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THANKS
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R1 R2
大黄酚 芦荟大黄素 大黄素 大黄素甲醚 大黄酸
H
CH3
H CH2OH OH CH3 OCH3 CH3 H COOH
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2.流程
10g大黄粉
100ml 20% H2SO4直火回流加热1h，滤布抽滤
滤 渣 水洗至中性，干燥
滤饼
南中医 中药化学实Байду номын сангаас 大黄素
10g大黄粉
2.流程图
Et20提取液
Et2O提取液（1）
NaHCO3液（大黄酸）
Et2O提取液（2）
NaCO3液
Et2O提取液（3）
NaCO3液（芦荟 大黄素）
沉淀（芦荟大黄素）
Et2O提取液（4） NaOH液(大黄素甲醚 和大黄酚)
南中医 中药化学实验 大黄素
南中医 中药化学实验 大黄素
用6M HCl调pH3，抽滤。得到沉淀（大 黄素粗品）。
南中医 中药化学实验 大黄素
称取12g硅胶，取适量洗脱剂。 将50mL洗脱剂与硅胶混合。
南中医 中药化学实验 大黄素
用脱脂棉填柱子底部，加入洗脱 剂与硅胶混合液，打开玻璃柱下 端活塞。
将大黄素粗品所在的滤纸剪碎，用少量 丙酮溶解样品后，加少许硅胶(约1g)拌匀， 再在水浴上挥干丙酮。
南中医 中药化学实验 大黄素
南中医 中药化学实验 大黄素
取大黄素粗品，进行点样。
南中医 中药化学实验 大黄素
四.柱色谱分离大黄素
1.实验原理 根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚，大黄 素甲醚等5种成分的极性大小不同，则与鬼叫吸附剂 产生的吸附能力不同而分离
2.实验方法 （1）.湿法装柱 （2）.干法上样 （3）.洗脱收集 （4）.合并浓缩 （5）.放置析晶
实验二 大黄中大黄素的提取，分离和鉴定
一.大黄的水解 二.总羟基蒽醌苷元的提取 三.PH梯度的萃取
四.柱色谱分离大黄素
五.大黄素的鉴定
南中医 中药化学实验 大黄素
一.大黄的水解
1.实验原理 大黄的蒽醌类化合物大多以苷的形式存在，如大黄酚葡萄糖 苷，大黄素葡萄糖苷，大黄酸葡萄糖苷，芦荟大黄素葡萄糖 苷，一些双葡萄糖链苷及少量的番泻苷A,B,C,D等，其主要成 分的 结构如下。
直火回流加热
南中医 中药化学实验 大黄素
滤布抽滤
滤渣
南中医 中药化学实验 大黄素
二.总羟基蒽醌苷元的提取
1.实验原理 大黄中总蒽醌苷元为亲脂性成分，故可用乙醚提取，连续 回流提取法在溶剂提取法中效率最高
2.流程图 干燥滤饼
置索氏提取器中，加150ml（100+50）Et2O 提取2.5h（至提取液近无色）
Et2O 提取液(总蒽醌苷元)
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研碎装入纸筒
索氏提取器回流
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三.PH梯度萃取
1.实验原理 根据大黄酸，大黄素，芦荟大黄素，大黄酚和大黄素 甲醚的酸性强弱不同，采用由弱到强加入不同碱液进 行萃取的方法，分离的单大黄素粗品。
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