(医疗药品)高等药分试题及答案

1.简述现代药物分析教传统药物分析的新特点。

传统的药物分析，大多是应用化学方法分析药物分子，控制药品质量。其中容量分析法和重量分析法占有主导和统治地位。

从静态发展到动态分析，从体外发展到体内分析，从品质分析发展到生物活性分析，从单一技术发展到联用技术，从小样本分析发展到高通量分析，从人工分析发展到计算机辅助分析。采用的现代仪器分析技术有光谱分析法、色谱分析法、电化学分析法等，使药物分析技术向微量、灵敏、准确、简便、快速、自动化的方向发展。

2.现代药物分析的新进展主要有哪些方面。

分析领域的发展：药物质量控制、手性药物分析、药物代谢分析、兴奋剂检测等

分析技术的发展：分子烙印技术、超临界流体色谱、微乳色谱等。。

3.常用的手性固定相有哪些？并简述其各自的原理.

手性固定相(chiralstationaryphase,CSP)是通过物理吸附或者化学键合的方法把手性化合物键合到固相载体上，由于样品中的对映体与键合的手性分子形成非对映异构体络合物的结合能力的差异而达到拆分目的。

手性固定相可以根据其化学类型分类为：

(1)Pirkle型（刷型）CSP：具有确定的化学结构，①被分离溶质与CSP芳环的π-受体和π-

授体之间的π-π作用；②CSP上的仲胺、羰基基团与溶质的酸性质子、羟基、氨基之间的氢键作用；③偶极-偶极作用；④大体积非极性基团靠近CSP手性中心而产生的空间立体效应。

(2)配体交换型CSP：利用配体交换的分离机制而制成的，一个金属离子可结合一个配体分

子和一个对映体溶质分子,形成可逆的非对映体复合物,以达到分离对映体的目的。主要用于拆分氨基酸。

(3)蛋白质类CSP：由L-氨基酸组成的高分子聚合物，具有天然的手性选择性质，其具有大

量不同的可与样品分子结合的部位，固定相与疏水性溶质之间发生较强的疏水作用。对酸类、胺类药物的拆分较好。

(4)冠醚类CSP：冠醚是具有一定大小空腔的大环聚醚化合物，和一定的金属离子形成包容

性络合物，手性试剂与其中的金属离子相互作用，从而使对映体得到拆分。溶质分子与手性冠醚环腔形成主客体络合物的稳定常数不同。冠醚的手性“臂障"越大，其手性识别能力越高。

(5)环糊精类CSP：环糊精的手性识别主要来自环内腔对芳烃或脂肪烃类侧链的包容作用,以

及环外壳上的羟基与药物对映体分子发生氢键缔合作用。

4.手性高效液相色谱法的分类有哪些？并简述其各自的原理。

1)间接法即衍生化试剂法（CDR）采用非手性固定相

将光活性试剂SE引入溶质分子内，对映体混合物以手性试剂SA作柱前衍生，形成一非对映异构体对，然后以常规的固定相分离

(R)–SA→(R)–SE–(R)–SA

(R)–SE+

(S)–SA→(R)–SE–(S)–SA

2)直接法

a.手性固定相法（CSP）

利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离。

b.手性流动相添加剂法（CMP）

将手性试剂添加到流动相中，利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不

同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离。

5.毛细管电泳的种类有哪些？毛细管电泳分离的驱动力是什么？毛细管电泳比高效液相色谱高效的原因是什么？

毛细管电泳CE又称高效毛细管电泳HPCE，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。

分类：

毛细管区带电泳CZE：毛细管和电极槽灌有相同的缓冲液

胶束电动毛细管色谱MECC：在CZE缓冲液中加入一种或多种胶束

毛细管凝胶电泳CGE：管内填充凝胶介质，用CZE缓冲液

毛细管等速电泳CITP：使用两种不同的CZE缓冲液

毛细管等电聚焦CIEF：管内装pH梯度介质，相当于pH梯度CZE

毛细管电动色谱PICEC：在CZE缓冲液中加入可微观分相的高分子离子

CE是以高压电场为驱动力

细管电泳比高效液相色谱高效的原因：

（1）高效CE理论塔板数为几十万，而HPLC一般几千到几万；毛细管电泳中，使用空心毛细管柱，无涡流扩散项，毛细管内壁也不涂渍固定液，消除了组分在固定相与流动相间平衡所需的时间，传质阻抗项趋零，而高效液相色谱中存在两种影响因素，因而CE的柱效高于HPLC。

（2）快速CE一般在十几分钟内完成分离；

（3）微量CE进样所需的样品体积为nL级,仅为HPLC的几百分之一

（4）多模式可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器；

（5）经济实验消耗不过几毫升缓冲溶液，维持费用很低；

（6）自动CE是目前自动化程度较高的分离方法

6.HPLC-ESI-MS联用分析条件选择时需考虑的主要因素有哪些？

流动相的选择：

优先使用低水比例的溶液为流动相，水含量高，降低离子化效果；提高有机相比例可提高离子化效率。一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈。不挥发性的盐会在离子源内析出结晶，而表面活性剂会抑制其它化合物电离，与LC/MS不匹配，如磷酸盐、枸橼酸盐、硼酸盐。在LC-MS分析中常用的挥发性酸、碱和盐，如醋酸铵、甲酸铵、甲酸、乙酸、氨水等。为了离子化效果，以上电解质浓度宜小。定性分析时，有时加入NH4+、Li+，帮助判断母离子。但会使图谱复杂。

pH的选择：

C18柱pH适用范围是2~8。pH值影响离子状态，影响生成气相离子的效率和检测灵敏度。测碱性物质，pH值在（pKa-2），正离子检测。测酸性物质，pH值在（pKa+2），负离子检测。实际工作中，负离子方式检测酸性物质，往往加少量乙酸（＜0.05%）可使灵敏度提高。

流动相的流速和色谱柱内径的选择：

流动相流速受柱子内径和流动相组成影响。对ESI，较小的流速可获得较好离子化效率。尽量选内径小的色谱柱。但是要兼顾分析速度的因素，因此多采用内径2.1mm的色谱柱，0.2~0.4ml/min的流速。只有粗径柱，只能大流量时，可用三通分流以满足MS的流量要求。

流动注射（FIA）比柱分离响应强，但混有待测组分外的物质。

有些样品很容易吸附在进样阀和管路中，因此实验后要对柱子进行冲洗（纯水—纯甲醇）7.在进行天然药物HPLC-UV分析时，是否可以直接对得到的单一色谱峰进行含量测定？为