食品安全地方标准 婴幼儿配方乳粉中α-乳清蛋白的测定 凝胶色谱法(编制说明)

《食品安全地方标准婴幼儿配方乳粉中α-乳清蛋白的测定

凝胶色谱法》编制说明

（征求意见稿）

一、标准起草的基本情况

根据省卫生厅《关于印发2013年江苏省食品安全地方标准制（修）订项目计划的通知》（苏卫办监督〔2013〕10号）的要求，《食品安全地方标准婴幼儿配方乳粉中α-乳清蛋白的测定凝胶色谱法》列入2013年江苏省食品安全地方标准制定计划项目，委托书项目编号为JSSPDB-2013-008。江苏省产品质量监督检验研究院负责该项标准的起草工作。本标准主要起草人：徐春祥、张征、颜春荣、朱晓军、王多娇、甘凝岚、林慧、周玮、方萍、徐维辰、袁实。

本标准项目经收集国内外标准、征询修订的意见和建议，收集数据和相关信息，召开研讨会讨论标准的修订、起草标准修改初稿。目前已向监管部门、行业协会、企业、高等院校、研究院所发出征求意见稿20份，收到8份回复。

二、标准的主要技术内容及依据

（一）适用范围

本标准适用于以牛乳和羊乳为原料的乳粉及婴幼儿配方奶粉中α-乳清蛋白的检测，不适用于含水解蛋白的样品。

（二）检测原理

以盐酸胍为变性剂，以2-巯基乙醇为还原剂，断开蛋白质中的硫-硫（S-S）化学键，形成展开的α-乳清蛋白的单体结构。采用凝胶渗透色谱柱进行分离，测定280nm处吸光值，外标法计算α-乳清蛋白的含量。

（三）各项技术指标及主要条款的说明

1、样品处理方法

称取相当于含有10mg蛋白质的乳粉或婴儿配方奶粉样品，放入10mL 容量瓶中，用流动相溶解并定容。取1.5mL该溶液转移到自动进样瓶中，加入10µL2-巯基乙醇，旋紧瓶盖，涡旋10秒钟。将样品置于室温下约2个小时后再进行仪器分析。制备好的样品在48小时

内测定。

2、液相色谱条件

分离模式采用凝胶渗透色谱法（GPC），将一个保护柱SWxL（6.0 x 40mm）和两个TSK-GEL G3000SWXL（7.7mm x 30.0cm）柱串联放置，使原料中的主要蛋白质达到充分分离。在280nm处进行紫外光检测。流动相为6M盐酸胍溶液，进样量为50µL，流速为0.5mL/min。

3、方法的线性范围

用流动相将标准储备液稀释成浓度为0.0125、0.025、0.125、0.25、0.5mg/mL的标准溶液。以α-乳清蛋白的浓度为横坐标，以280nm处吸光值对应峰面积为纵坐标，建立标准曲线，线性相关系数r2≥0.9999。

4、方法的准确度和精密度

添加回收样品采用在定量空白样中添加α-乳清蛋白标准储备溶液的方法来制备。在添加浓度为2.5mg/mL的储备溶液并进行样品处理后测定，回收率为98.4-99.5%，RSD≤3.90%。

5、检出限和定量限的确定

以3倍信噪比(S/N=3)的最低浓度作为α-乳清蛋白标准溶液的最低检出限(LOD)，检出限为1mg/L。以10倍信噪比（S/N=10）最低浓度作为α-乳清蛋白标准溶液的最低定量限 (LOQ)，取定量限为3mg/L，这是基于标准溶液的仪器检出限和定量限。在称取0.1g样品，定容体积为10mL的情况下,本方法对样品的最低检出限为0.01g/100g，最低定量限为0.03g/100g。

6、方法特异性考察

选取乳制品中含有的酪蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白按照本标准方法（初稿）进行分析，发现均未对α-乳清蛋白的色谱峰造成干扰。

7、质控样分析结果

取3份不同浓度质控样，按照标准描述进行处理。制备好的样品在48小时内测定。结果表明准确度与精密度均在可接受范围。

8、起草单位及验证单位的检验结果比对

由江苏省产品质量监督检验研究院提供标准品、盲样和耗材，

对形成的标准初稿进行验证。主要考察内容包括线性、准确性、精密度、检出限、定量限、盲样分析等。江苏省疾控中心、苏州质检所、江苏省理化测试中心根据食品安全国家标准工作程序手册对标准初稿进行验证，并出具验证报告。三家验证机构的结果均符合标准要求。

（四）注意事项

盐酸胍、β-巯基乙醇是有毒危险化学品，操作时应佩戴防毒面具，在通风橱中进行操作。

三、国内外标准比较情况

（一）有关国外标准：经查询，目前国外没有α-乳清蛋白含量检测的相关标准。

（二）相关国内标准：目前国内没有α-乳清蛋白相关标准。本标准在结果表达方式上参考GB 11674-2010《食品安全国家标准乳清粉和乳清蛋白粉》，α-乳清蛋白的含量以g/100g表示。检测方法的技术要求与GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》附录F保持一致。

(三) 与我国有关法律、法规和其他标准的关系：目前我国婴幼儿配方食品相关的国家标准分别是GB10765-2010《食品安全国家标准婴儿配方食品》和GB10767-2010《食品安全国家标准较大婴儿和幼儿配方食品》。本标准可作为GB10765-2010标准的补充和深化，是未来婴幼儿配方食品质量控制的趋势。

四、其他需要在网上公开说明的事项

暂无。