芦丁标准曲线
ch06工作曲线法测定芦丁含量讲解
芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成） 精密移取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、 5.0ml和样品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇 使成5.0ml→各精密加入亚硝酸钠溶液（1→20） 0.3ml，摇匀，放置6分钟→各加硝酸铝（1→20） 0.3ml，摇匀，再放置6分钟→各加氢氧化钠试液4ml, 用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。 在510nm波长下测定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶 作空白）以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制 标准曲线。测定样品的浓度。
要使得测定浓度准确 应当考虑影响测定准确的因素： 1 显色反应的完全程度（取决于）： 介质的pH 显色剂的用量 反应温度 反应时间 2 吸光度的物理测定条件
如何确定反应最佳条件
在建立方法时，需要通过实验确定最佳反应 条件，为此改变其中一个因素（例如介质的 pH值暂时固定其他因素，显色后测量相应溶 液的吸光值，通过吸光度-pH曲线确定反应 的酸度范围，其他几个影响因素的适宜值也 可以按这一方法分别确定。
实验六 工作曲线法测定芦丁含量
可见分光光度法
内容
一、分光光度法的特点 二、可见分光光度法与紫外的区别 三、分光光度计测定物质含量的原理 四、工作曲线法测定芦丁含量 五、本次实验注意事项
六、仪器的操作
分光光度法的特点（包括紫外和可见）
分光光度法与其他测定方法比较有这样一些特点 1、首先，它的应用广泛，在国际上发表的有关分析的 论文总数中，分光光度法占28%，我国约占所发表论 文总数的33%。 2、灵敏度高，由于新的显色剂大量合成，并在应用研 究方面取得了重要进展，使得测定物质的灵敏度提高。 3、选择性好，目前有些元素只要控制适当的显色条件 就可以直接进行光度法测定。 4、准确度高，浓度测量的相对误差在1～3%范围 5、分析成本低，操作简便快速。
【结构】芦丁标曲的制作
【关键字】结构黄酮类化合物的结构黄酮类化合物以黄酮（2-苯基色原酮）为母核而衍生的一类黄色色素。
其中包括黄酮的同分异构体及其氢化的还原产物，也即以C6-C3-C6为基本碳架的一系列化合物。
二氢黄酮类二氢黄酮醇类黄烷－3，4－二醇类（Flavanones）（Flavanonols）（Flavan-3,4-diols)黄烷三醇类（Flavan-3-ols）芦丁1.3 黄酮类物质的提取1.3.1 溶剂提取法水提法热水仅限于提取甙类,例如自槐花米中提取芦丁。
由于热水浸提时易溶于水的杂质(如蛋白质、鞣质、淀粉、多糖类化合物等)较多,后处理较复杂,提取效率也不高,故不常使用。
有机溶剂提取法黄酮类化合物的提取,主要是根据被提取物的性质及伴随的杂质来选择适合的提取溶剂,甙类和极性较大的甙元,一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。
大多的甙元宜用极性较小的溶剂,如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取,多甲氧基黄酮类甙元,甚至可用苯来提取。
乙醇和甲醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂,高浓度的醇(如90% ～95% )宜于提取甙元,60%左右浓度的乙醇或甲醇水溶液适宜于提取甙类物质。
如采用70%乙醇提取芦笋中芦丁,浸提5h,条件为最优。
提取过程中常用冷浸法或回流法,提取次数一般为2-4次。
两种方法各有优缺点前者无需加热,有好处保持提取物的成分,但提取时间长,效率低，后者效率高,但需加热,因此成分不稳定的原料(如一些中药药材)不宜用此法。
一般来说,醇提法的对总黄酮的提取效果要好于水提法。
碱溶酸沉法由于黄酮类成分大多具有酚轻基,具有易溶于碱性水而难溶于酸性水的性质,可用碱性水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)或碱性稀醇(如50%乙醇)浸出,在提取液中,加酸酸化,黄酮类化合物即可沉淀析出。
用碱性溶剂提取时，所用的碱浓度不宜过高,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物母核,当有邻二酚轻基时,应加硼酸保护。
生物制药实验(1)
实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。
除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。
槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。
芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。
芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。
；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
其结构如下图：一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。
溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
三、实验器材研钵，500mL烧杯，广泛试纸，四层纱布，滤纸，漏斗，10mL试管，5mL移液管，波棒，洗耳球，温控烘箱石灰乳，浓盐酸，镁粉，10%α-萘酚乙醇溶液，浓硫酸，乙醇，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%柠檬酸甲醇溶液四、实验流程pH8～9滤液药渣10分钟，维持pH8～9pH至4～5沉淀低温（60℃）干燥，称重。
芦丁含量测定的实验报告
一、实验目的1. 掌握芦丁提取和分离的基本原理和方法。
2. 学习运用分光光度法测定芦丁含量。
3. 了解黄酮类化合物的性质和应用。
二、实验原理芦丁（Rutin）是一种黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、降血脂等生物活性。
本实验采用碱提酸沉法提取芦丁，然后利用分光光度法测定芦丁含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐花米、芦丁标准品、无水乙醇、浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、硝酸铁、三氯化铁、无水碳酸钠等。
2. 实验仪器：分析天平、电子恒温水浴锅、紫外可见分光光度计、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、滤纸等。
四、实验步骤1. 芦丁标准溶液的配制（1）称取0.1g芦丁标准品，用无水乙醇溶解并定容至100mL，配制成浓度为1mg/mL的芦丁标准溶液。
（2）取芦丁标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置于5个10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，配制成浓度为100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL的芦丁标准系列溶液。
2. 样品溶液的制备（1）称取3g槐花米，用研钵研成粉末。
（2）将槐花米粉末置于50mL烧杯中，加入30mL饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸15分钟后，抽滤，滤渣再用20mL饱和石灰水溶液煮沸10分钟，合并滤液。
（3）用15%盐酸中和滤液至pH值为4.5，转移至100mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，配制成样品溶液。
3. 标准曲线的绘制（1）取5个10mL容量瓶，分别加入不同浓度的芦丁标准溶液0.5mL，用无水乙醇定容至刻度。
（2）在510nm波长处，用紫外可见分光光度计测定芦丁标准溶液的吸光度。
（3）以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
4. 样品溶液中芦丁含量的测定（1）取2.0mL样品溶液，置于10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度。
（2）在510nm波长处，用紫外可见分光光度计测定样品溶液的吸光度。
黄酮、多糖标准曲线制作方案
1、黄酮标准曲线制作1.1 芦丁标准溶液配制精密称取干燥芦丁对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，60 ％乙醇溶解，定容，得标准对照液（含无水芦丁0．200 0 g/ L）。
1.2 芦丁标准溶液最大吸收波长的测定准确吸取芦丁标准溶液10mL于25mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.7mL，摇匀，静置5 min；再加10%硝酸铝溶液0.7mL，摇匀，静置6 min；再加4% 氢氧化钠溶液5 mL，60 ％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10 min后，在100~600nm波长范围测定测定其最大吸收波长，参比为空白试剂。
1.3芦丁标准曲线的制作分别精密移取芦丁标准对照液0、1、2、3、4、5 mL 置25 mL 容量瓶中，补60 ％乙醇10 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0．7mL，摇匀，静置5 min；再加10%硝酸铝溶液0．7mL，摇匀，静置6 min；再加4% 氢氧化钠溶液10 mL，60 ％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10 min，以第1瓶溶液为空白调零，于500 nm测各瓶溶液吸光度；以浓度（C）和吸光度（A）进行线性回归。
2、多糖标准曲线制作2.1葡萄糖标准溶液配制精密称取干燥至恒重的葡萄糖10 mg，加适量去离子水溶解，转移至100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，即得0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。
2.2 葡萄糖标准溶液最大吸收波长的测定取1ml葡萄糖标准溶液于干燥洁净试管中然后分别加入2．0 mL 5 ％的苯酚试剂，再迅速加入7 mL浓硫酸振摇，待其冷却到25 ℃，放置30 min。
在100~600nm波长范围测定测定其最大吸收波长，2.3葡萄糖标准曲线制作用移液管分别量取葡萄糖标准溶液0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1 mL转于干燥洁净的试管中，补加去离子水至刻度使其成1 mL。
并编号为1、2、3、4、5、6，然后分别加入2．0 mL 5 ％的苯酚试剂，再迅速加入7 mL浓硫酸振摇，待其冷却到25 ℃，放置30 min。
黄酮标准曲线绘制实验报告
黄酮标准曲线绘制实验报告采摘于海南大学东坡湖畔3 1.3 实验步骤：及波长的确定样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20 目筛，装入试剂瓶中备用。
根据查阅文献总黄酮在波长为510nm 处吸收值最大。
精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg 置于100mL 烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL 的芦丁标准溶液。
及绘制标准曲线精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。
得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml 的标准品溶液，分别取1ml 到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,CaiDai,2011）。
（以试剂空白做参比）以吸光度A 为纵坐标,浓度c 为横坐标,绘制标准曲线。
用最小二乘法进行线性拟合,得 c 与 A 的线性回归方程以及相关系数R2 。
序号浓度（ug/ml）吸光度1 0 0 2 15 0.180 3 30 0.349 4 45 0.546 5 60 0.727 6 75 0.884 7 90 1.063 表1-1：芦丁标准曲线测定数据图1-2：芦丁标准曲线根据查阅文献总黄酮在波长为510nm 处吸收值最大。
取黄酮提取液，取提液2ml 至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。
取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。
其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度。
芦丁的纯化及其含量测定
芦丁的纯化及其含量测定【摘要】目的制备高纯度芦丁的目的是用作对照品或满足其它特殊需要的试剂。
方法从槐米中提取芦丁，并将其制备成对照品。
采用既简便又经济的酸提碱沉法从槐米中提取芦丁，经过精致，分离得芦丁对照品，并用一般方法、薄层层析法、核磁共振法进行鉴定，高效液相法测定其含量。
结果经化学法、薄层层析法鉴定，核磁共振鉴定表明芦丁样品与芦丁标准品图基本一致；高效液相测得含量98.05%。
结论此种实验室制备芦丁对照品的方法操作简单易行，产品纯度较高可作为对照品代替标准品用。
【关键词】芦丁；分离；纯化；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTo establish the methods for purification，identification and determination of rutin reference substance.Methods Extract rutin from Sophora japonica L. by the alkali extraction and acid precipitation. Then refinement and separation of the rutin reference substance was done. Identified the substance by the normal way. TLC and NMR . HPLC was used to determine the content of rutin. Results After identified by chemical way， TLC， and NMR， the results showed that the chart of the sample of rutin and the chart of standard substance were unanimous， the mean content was 98.05%.ConclusionThis way of preparing rutin in the lab is simple and practical. The products are very pure，so it can be used in place of substance replaced standard substance.Key words：Rutin; Separation ; Purify ； HPLC； Determination芦丁是一种分布广泛的黄酮类化合物，主要存在于槐米，芸香，荞麦，沙棘等植物。
一种绘制芦丁标准曲线的方法[发明专利]
![一种绘制芦丁标准曲线的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/0a55a7d0580216fc710afdba.png)
专利名称：一种绘制芦丁标准曲线的方法专利类型：发明专利
发明人：丁小淇
申请号：CN201310601901.1
申请日：20131125
公开号：CN103743862A
公开日：
20140423
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种绘制芦丁标准曲线的方法。
步骤如下：首先，采用光电子称精密称取目的芦丁；然后用无水乙醇冲洗；在沸水中进行溶解；摇晃均匀后蒸发至无水；用吸取器将其转移至定容器皿中，然后加入碳酸钠溶液，摇匀；静置；弃上清；再加入氯化铝溶液；静置；取其沉淀物，即可。
芦丁与无水乙醇的质量比为3:1；所述氯化铝，其中需要混入亚硝酸钠。
本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，实验条件要求不高，可以用于反复性操作，纯度较高，对于下一步制取普洱茶叶十分有利。
申请人：丁小淇
地址：116000 辽宁省大连市西岗区凤鸣街44-5
国籍：CN
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生物制药实验(1)
实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。
除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。
槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。
芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。
芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。
；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。
其结构如下图：一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。
溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
三、实验器材研钵，500mL烧杯，广泛试纸，四层纱布，滤纸，漏斗，10mL试管，5mL移液管，波棒，洗耳球，温控烘箱石灰乳，浓盐酸，镁粉，10%α-萘酚乙醇溶液，浓硫酸，乙醇，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%柠檬酸甲醇溶液四、实验流程pH8～9滤液药渣10分钟，维持pH8～9×）pH至4～560℃）干燥，称重。
化学实验芦丁实验报告
一、实验目的1. 学习植物中芦丁的提取方法。
2. 掌握分光光度法测定芦丁含量的原理和方法。
3. 了解芦丁的鉴定方法。
二、实验原理芦丁是一种黄酮类化合物，广泛存在于植物中，具有多种生物活性。
本实验采用醇提法提取芦丁，利用分光光度法测定芦丁含量，并通过对芦丁的鉴定，验证提取物的纯度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分光光度计、超声波清洗器、旋转蒸发仪、电子天平、研钵、漏斗、滤纸、容量瓶、移液管、比色皿等。
2. 试剂：芦丁标准品、芦丁提取液、无水乙醇、95%乙醇、硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠、硫酸铜、盐酸、硫酸、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 芦丁标准曲线的绘制（1）准确称取芦丁标准品10mg，用95%乙醇溶解，转移至100mL容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，得到浓度为100μg/mL的芦丁标准溶液。
（2）分别吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL芦丁标准溶液于比色皿中，依次加入5mL 95%乙醇、0.5mL 5%硝酸铝溶液、0.1mL 1%氢氧化钠溶液，摇匀，静置6min。
（3）以试剂空白为参比，在510nm波长下测定吸光度。
（4）以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 芦丁提取与测定（1）准确称取植物样品5g，用无水乙醇浸泡过夜，然后超声提取30min。
（2）过滤，滤液转移至旋转蒸发仪中，浓缩至近干。
（3）用95%乙醇溶解残渣，转移至100mL容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，得到芦丁提取液。
（4）准确吸取2.0mL芦丁提取液于比色皿中，依次加入5mL 95%乙醇、0.5mL 5%硝酸铝溶液、0.1mL 1%氢氧化钠溶液，摇匀，静置6min。
（5）以试剂空白为参比，在510nm波长下测定吸光度。
（6）根据标准曲线计算芦丁含量。
3. 芦丁的鉴定（1）取少量芦丁提取液，滴加少量硫酸铜溶液，观察颜色变化。
（2）取少量芦丁提取液，滴加少量盐酸，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程：y = 0.0043x + 0.0172，相关系数R² = 0.9988。
薄层层析—紫外分光光度法测定槐米中芦丁的含量
薄层层析—紫外分光光度法测定槐米中芦丁的含量实验目的：通过薄层层析-紫外分光光度法测定槐米中芦丁的含量。
实验原理：
芦丁为橙黄色结晶，可溶于水和乙醇，不溶于苯、石油醚等有机溶剂。
芦丁能在紫外光下吸收，其吸收峰为253 nm。
本实验利用薄层层析从槐米中分离出芦丁，再用紫外分光光度法测定其吸收峰值，根据标准曲线求出芦丁的含量。
实验仪器：
薄层层析仪、紫外分光光度计、显微镜。
实验步骤：
1.制备标准曲线溶液：取芦丁纯品10 mg，用乙醇溶解，稀释成10 mL，即为1000 μg/mL的芦丁溶液。
分别取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL芦丁溶液，加乙醇稀释至10 mL，在紫外分光光度计上测定其在253 nm的吸光度，绘制标准曲线。
2.取适量槐米研磨成粉末，称取0.5 g，加乙醇10 mL，振荡震荡30 min，离心沉淀，取上清液用过滤纸过滤，收集滤液。
3.将滤液注于干燥的薄层层析板上，用气流干燥待样品点干，分别注上标准曲线溶液和槐米样品溶液。
将层析板浸泡在室温下的甲醇中，待样品上移至1 cm处时取出，用热风吹干。
4.用紫外分光光度计在253 nm处测定样品吸光度，计算出槐米中芦丁含量。
实验数据与结果：
标准曲线方程：y=0.0289x+0.0109；R²=0.997
样品吸光度：0.321
槐米中芦丁含量：11.496 mg/100 g
结论：本实验通过薄层层析-紫外分光光度法测定出槐米中芦丁的含量为11.496 mg/100 g。