蛋白质分子基础复习整理笔记

蛋白质分子基础

题型：

名词解释5-6个

简答题4个

问答和计算3个问答肯定有一题是实验设计有一题是蛋白质一级结构的测定

附加题

目录

第一章绪论氨基酸 (1)

第二章蛋白质制备 (4)

第三章蛋白质一级结构测定 (10)

第四章蛋白质的化学修 (15)

第五章肽的人工合成 (17)

第六章蛋白质的分子构象 (17)

第七章蛋白质的结构与功能关系 (19)

每章需掌握的知识

（P.S结合了老师最后一节课的内容，但最好不要只按照这个来复习，有空一定要看PPT看

书；否则挂了可不要怪我哦！）

第一章绪论氨基酸

常见20种氨基酸及其疏水性、亲水性、带电性、代号、旋光性、等电点

甘氨酸Gly 脯氨酸Pro 苏氨酸Thr 天冬氨酸Asp

丙氨酸Ala 苯丙氨酸Phe 半胱氨酸Cys 谷氨酸Glu

缬氨酸Val 酪氨酸Tyr 甲硫氨酸Met 赖氨酸Lys

亮氨酸Leu 色氨酸Trp 天冬酰胺Asn 精氨酸Arg

异亮氨酸Ile 丝氨酸Ser 谷氨酰胺Gln 组氨酸His

名词解释：

必需氨基酸：8种，体内不能合成，必须由食物中的蛋白质供给。

非必需氨基酸：12种，只要有氮元素存在人体就能自己制造，组成人体蛋白质的重要成份，而且保持一定比例。

半必需氨基酸：人体合成速度慢,不能满足人体需求。

氨基酸的等电点：氨基酸分子中所含的—NH3+和—COO—数目正好相等，净电荷为0时的环境pH值即为氨基酸的等电点，简称pI。

氨基酸等电点的计算：

侧链不带电荷中性氨基酸，其等电点是它的pK'1和pK'2的算术平均值：

pI = (pK'1+ pK'2 )/2

酸性氨基酸：（这个是对于含有3个可解离基团的氨基酸来说的，可以看下面的方法）pI = (pK'1 + pK'R—COO-)/2

碱性氨基酸：（这个是对于含有3个可解离基团的氨基酸来说的，可以看下面的方法）pI = (pK'2 + pK'R—NH2 )/2

对于含有3个可解离基团的氨基酸来说，只要依次写出它从酸性经过中性至碱性溶溶解高过程中的各种离子形式，然后取两性离子两侧的pK值的算术平均值，即可得其pI值。

步骤：

<1> 由PK’值判断解离顺序，总是PK1’< PK2’< PK3’< …，即谁的PK’值小，谁就先解离。

<2> 按照解离顺序正确写出解离方程式：简式，注意解离基团的正确写法。

<3> 找出呈电中性的物质，其左右PK’值的平均值就是氨基酸的等电点：PI＝（PK左’+PK右’）/2

1.半胱氨酸pK1(α-COO-)=1.96，pK2(R-SH)=8.18，pK3(α-NH3+)=10.28，该氨基酸pI值为：

A.5.07

B.6.12

C.6.80

D.7.68

E.9.23

2.赖氨酸pK1(α-COO-)=2.18，pK2(α-NH3+)=8.95，pK3(R-NH3+)=10.53，该氨基酸pI值为：

A. (pK1+ pK2)/2

B. (pK2+ pK3)/2

C. (pK1+ pK3)/2

D. (pK1+ pK2+ pK3)/3

E. (pK1+ pK2+ pK3)/2

3 .天冬氨酸pK1(α-COO-)=1.96，pK2(α-COO-)=3.65，pK3(α-NH3+)=9.60，该氨基酸pI 值为：

A.2.8

B.3.65

C.5.74

D.6.62

E.7.51

旋光性：

从蛋白质温和水解得到的a-氨基酸都是L型的。

D-丙氨酸存在于昆虫的幼虫和蛹中。

D-亮氨酸存在于短杆菌肽中。

在细菌中发现了许多D-型的非蛋白质氨基酸

D-谷氨酸和D-丙氨酸存在与细菌细胞壁的肽聚糖中。

甘氨酸的a-碳不是手性碳，故没有旋光性。

光吸收：

220-300nm：Tyr、Phe、Trp

苯丙Phe的max＝257nm

酪Tyr的max＝275nm

色Trp的max＝280nm

蛋白质的生物学/行使的功能：

新陈代谢的催化剂-酶。

有机体的结构成分。

储藏氨基酸的功能。

运输功能。

激素的功能。

免疫的功能。

接受和传递信息作用功能。

调节或者控制功能。

第二章蛋白质制备

蛋白质分离纯化的一般程序及其注意事项

1.生物组织的机械破碎:研磨法、超声波法、冻融法和酶解法等(细胞外分泌物无需破碎)。

2.根据蛋白质的特性，选择不同的溶剂进行抽提。

水溶性蛋白用中性缓冲溶液抽提，

酸性蛋白用稀碱性溶液抽提，

脂溶性蛋白用表面活性剂抽提等。

3.离心:去亚细胞颗粒、细胞碎片等

4.粗提: 离心除去固体杂质后，可通过沉淀法、超滤法、萃取法等处理，得到蛋白质粗制品。

5.精制：可用层析法、电泳法等进行精制。

6.结晶：取得蛋白质晶体并测定蛋白质的性质。

注意事项：

动物组织和器官要尽可能除去结缔组织和脂肪。

制备植物细胞时，在缓冲液中加入聚乙烯吡咯啉酮(PVP)可以减少褐变, 它可以吸附多酚化合物。

革兰氏阳性菌可用溶菌酶消化，37o C处理15分钟即可溶解细胞壁。

革兰氏阴性菌较难消化。可先用非离子去污剂（如Triton X-100）、巯基乙醇或甘油处理细胞。在溶液中还可加入脱氧核糖核酸酶I（10 ug/mL），可以使溶液的黏度降低，可以提高抽提液的质量。

膜蛋白的释放：

外周蛋白

通过静电力或共价键和外膜脂质的极性头部螯合在一起。

占膜蛋白的20~30%

内在蛋白（固有蛋白）

嵌合在膜脂双层结构中。

大部分膜蛋白是固有蛋白

外周蛋白的分离：

改变离子强度；

金属螯合剂（EDTA）可将其抽提出来

内在蛋白的提取：

提取的原则

抽提膜蛋白时，首先削弱膜蛋白和膜脂的疏水结合，同时保持疏水基暴露在外的天然状态。此过程叫做增溶作用。

常用的增溶剂是去污剂，它可以使膜蛋白疏水部分与膜分离，同时保留住膜蛋白表面的疏水结构。

用去污剂增溶之后，膜蛋白要用透析的方法除掉去污剂，再进行其他方法的分离纯化。