抗坏血酸清除DPPH自由基的作用机理
2011核心(通讯)-发酵轮叶党参提取物清除DPPH自由基的作用
［文章编号］ １６７１－５８７Ⅹ（２０１１）０６－１０８７－０３［收稿日期］ ２０１１－０７－２０［基金项目］ 吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（２００９０５２０８）；吉林省中医药管理局中医药科技项目资助课题（０８ｓｙｓ－１０３）［作者简介］ 刘婷婷（１９８７－），女，吉林省延吉市人，在读医学硕士，主要从事植物化学物与健康方面的研究。
［通信作者］ 韩春姬（Ｔｅｌ：０４３３－２４３５０７６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈａｎｃｈｊｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ）发酵轮叶党参提取物清除ＤＰＰＨ自由基的作用刘婷婷１，韩春姬１，２，俞 星１（１．延边大学基础医学院预防医学教研部，吉林延吉１３３００２；２．延边大学食品研究中心，吉林延吉１３３００２）［摘 要］ 目的：探讨发酵和未发酵轮叶党参提取物清除１，１－二苯基苦基苯肼（ＤＰＰＨ）自由基（ＤＰＰＨ·）的能力，阐明酵母菌发酵对轮叶党参清除自由基能力的影响。
方法：实验用活性酵母发酵轮叶党参７ｄ后用沸水提取，并用８０％乙醇除去蛋白质和多糖，减压浓缩，采用清除ＤＰＰＨ·能力的方法比较发酵、未发酵轮叶党参提取物及抗坏血酸对ＤＰＰＨ·的清除能力。
结果：发酵轮叶党参提取物对ＤＰＰＨ·清除能力的半数有效量（ＥＣ５０）为０．１２ｇ·Ｌ－１，未发酵轮叶党参ＥＣ５０为０．４０ｇ·Ｌ－１，发酵轮叶党参与未发酵轮叶党参组比较，清除ＤＰＰＨ·的能力明显增强（Ｐ＜０．０１）。
轮叶党参发酵之后，齐墩果酸含量提高了１．４１倍。
结论：用活性酵母发酵轮叶党参后，清除ＤＰＰＨ·能力提高，且发酵后其化学成分发生变化。
［关键词］ 发酵；轮叶党参；１，１－二苯基苦基苯肼；自由基［中图分类号］ ＴＳ ２５５．７ ［文献标志码］ ＡＤＰＰＨ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄＣｏｄｏｎｏｐｓｉｓｌａｎｃｅｏｌａｔａｅｘｔｒａｃｔＬＩＵ Ｔｉｎｇ－ｔｉｎｇ１，ＨＡＮ Ｃｈｕｎ－ｊｉ １，２，ＹＵ Ｘｉｎｇ１（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ １３３００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ １３３００２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙ ｔｈｅ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ａｎｄ ｎｏｎ－ｆｅｒｍｅｎｔｅｄＣｏｄｏｎｏｐｓｉｓ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ（ＣＬ）ｅｘｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｙｅａｓｔ ｏｎ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆＣＬ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＣＬ ｗａｓ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖｅ ｙｅａｓｔ ｆｏｒ ７ｄ，ｔｈｅｎ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｉｌｉｎｇ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ，ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗｅｒｅ ｒｅｍｏｖｅｄ ｗｉｔｈ ８０％ｅｔｈａｎｏｌ，ｖａｃｃｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ．Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｏｆｆｅｒｍｅｎｔｅｄ，ｎｏｎ－ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ＣＬ ｅｘｔｒａｃｔ ａｎｄ Ｖｃ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ １，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌ－ｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｓｓａｙ，ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｔｈｅ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ＥＣ５０ｖａｌｕｅｓ ｏｆｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ａｎｄ ｎｏｎ－ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ＣＬ ｅｘｔｒａｃｔ ｗｅｒｅ ０．１２ｇ·Ｌ－１ ａｎｄ ０．４０ｇ·Ｌ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ＤＰＰＨ·ｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ＣＬ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｎｏｎ－ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ＣＬ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｐ＜０．０１）．Ａｆｔｅｒ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｏｌｅａｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ＣＬ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ １．４１ｔｉｍｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＤＰＰＨ·ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＣＬ ａｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖｅ ｙｅａｓｔ，ａｎｄ ｉｔｓ ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ａｆｔｅｒ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ ｌａｎｃｅｏｌａｔａ；１，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌ－ｈｙｄｒａｚｙｌ；ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ 目前，国内外对植物提取物抗氧化作用的研究很多，尤其是对药食两用的中草药抗氧化作用研究及其中的天然抗氧化剂的研究［１－３］。
黑灵芝提取物清除DPPH自由基的作用
基[ 3] , 但黑灵芝 ( Ganoderma atrum ) 清除 DPPH 自由 基的活性尚未见报道。自由基的检测方法很多, 如 电子顺磁共振法、 电子自旋共振法、 气相色谱法、 发 光法等。但这些方法大多需用昂贵的仪器 , 一般实 验室难以应用。DPPH 分光光度法的测定原理是依 据 DPPH 在乙醇和乙醇 - 水溶液中呈深紫色, 最大吸 收波长分别在 517 nm 和 525 nm 处[ 4] 。当有自由基 清除剂存在时 , 由于与其单电子配对而使其吸收逐 渐消失 , 其褪色程度与配对电子数成化学计量关系, 因而可用分光光度 法进行定量分 析, 测定简 便、 快 速 , 同时 DPPH 较长的半衰期使此分析方法保持了 良好的重现性。1958 年 , Blois 首次将其应用于抗氧 化剂的筛选研究。此后 , 国外又有很多学者用此法 研究了物质清除自由基的性质。 本研究利用 DPPH 自由基体系 法, 对从黑灵芝 ( Ganoderma atrum ) 中提取的有效活 性成分, 进行清 除 DPPH 自由基作用的测定, 并与合成抗氧化剂如 BHT 和抗坏血酸清除自由基能力进行了比较。
2 结果与讨论
2. 1 波长 - 吸光度之间的关系 分别扫描了 DPPH 溶液在无水乙醇和乙醇 -水 介质中的光谱图 , 考察其紫外吸收情况。测定结果 显示 ( 见图 1) , 在无水乙醇体系中, DPPH 的最大吸 收波长在 517 nm 附近, 与文献报道一致 [ 11] , 在乙醇 水介质中 , DPPH 的最大吸收波长在 525 nm 处 ( 图 2) 。测定在乙醇 - 水介质中的活性时, 选择测定波长 为 525 nm。
- 10] 用[ 5
1. 3. 1
测定方法
邻苯三酚 : 50 mmol/ L; Tris -HCl 缓 冲液: 50 mmol/ L, pH 8. 2; 抗坏血酸、 BHT 为食品级; 其它试剂均为分 析纯。 双光束 紫外可见分光 光度计 TU - 1901( 北京 普 析通用仪器有限公司 ) , 电子天平( BS224S, 德国赛多 利斯) , 数显恒温水浴锅( HH - 4 国华电器有限公司 ) , 多功能调速振荡器 HY - 3( 金坛环宇 ) , 电热恒温鼓风 干燥箱 DGG - 9104B 型( 上海森信 ) , 超声清洗仪 ( KQ 50E 型, 昆明市超声仪器有限公司) , 超临界 萃取设 备( HA121 - 50 -01, 江苏南通 华安超临界萃取有 限公 司) , 旋转蒸发仪 ( RE - 52A, 上海 亚荣生化仪器 有限 公司 ) , MS - 2000 型压力自控密闭微波 炉 ( 上海 新仪 微波化学科技有限公司) 。 1. 2 黑灵芝活性成分的提取 1. 2. 1 溶剂回流法 准确称取粉碎后的黑灵芝 4. 00 g 1: 20 加入溶剂回流提取 3 h, 重复两次 取液抽滤 滤液真空浓缩至浸膏 40 按 固液比 冷却 提 真空干燥
用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力 (2)
研究简报用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力3彭长连 陈少薇 林植芳 林桂珠(中国科学院华南植物研究所,广州510650)摘要 几种抗氧化剂的浓度与其清除1,12二苯基苦基苯肼(DPPH)能力呈显著的线性相关.不同抗氧化剂清除DPPH能力差异明显.抗坏血酸与DPPH反应的灵敏性高于其抑制肾上腺素氧化的能力.用DPPH法和亚油酸氧化法同时测定了生长在不同光强下植物叶片抗氧化能力的变化,两种方法所得结论相一致.结果表明清除有机自由基法是一种快速、简便、灵敏的评估植物抗氧化能力的可行方法.关键词 1,12二苯基苦基苯肼(DPPH),植物,抗氧化能力,自由基学科分类号 Q946 生物的抗氧化能力与其抗病性、抗逆性及延缓衰老密切相关.因而从天然植物中寻找有效的抗氧化剂应用于医药、食品、保健品、饮料、化妆品等之中,或从氧化与抗氧化代谢的平衡来探讨生物对变化环境条件的适应性机理,都是当前的研究热点之一. 迄今用于评价植物抗氧化能力的方法虽已有诸如硫氰酸盐(thiocyanate)法[1]、硫代巴比妥酸(TBA)法[2]、ORAC法(automated oxygen radical absorbance capacity assay)[3]等.但这些方法或者手续相当繁琐费时,或者所需试剂或大型仪器的费用昂贵,尚缺乏一种灵敏、简单易行的有效方法.1, 12二苯基苦基苯肼(1,12Diphenyl222picryl2 hydrazyl,DPPH)是一种稳定的有机自由基,通过检测生物试剂对DPPH自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱.然而对自由基信号的直接检测需要使用顺磁共振仪而使其难以普及.近年来,国外已有人初步利用DPPH溶液的紫红色吸光度变化作为清除自由基能力的分光光度测定[4,5],但对其准确性、灵敏度和可行性尚未有系统的探讨.本文旨在研究DPPH分光光度法用以评价植物抗氧化能力的可行性,为抗氧化剂的筛选和抗氧化胁迫机理的研究提供新的方法和依据.1 材料与方法111 仪器和试剂 紫外可见分光光度计(Beckman DU27),二苯基苦基苯肼(1,12diphenyl222picrylhydrazyl,DPPH),肾上腺素,硫代巴比妥酸(TBA),亚油酸,外源抗氧化剂抗坏血酸(AsA)、 皮素(QCT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丁基羟基甲苯(BHT),为Sigma公司产品,α2生育酚(α2TP)为Merck公司产品.自由基捕获剂1,22二羟基苯23,52二磺酸钠(Tiron),甲醇,乙醇为国产产品.112 植物材料 试验植物为广东省鼎湖山常绿阔叶林中的乔木黧蒴(Castanopsis f issa)和林下灌木九节(Psycot ria rubra).盆栽幼苗生长于本所试验地的自然光强(100%光)和遮阴降低光强为自然光的36%和16%条件下.012g叶片用50%乙醇浸提,研磨和离心(5000×g,15min),定容至10ml. 113 有机自由基(DPPH)消除能力的测定 参考Larrauri和Y okozawa等[4,5]的方法进行修改.利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰,以分光光度法测定加抗氧化剂或植物提取液后A525吸收的下降表示其对有机自由基消除能力.反应体积2ml,DPPH溶于少量甲醇后,以50%乙醇配制为120μmol/L.植物提取液稀释10倍,反应时加011ml稀释的提取液及119ml DPPH.室温下静置20min后测吸光度变化.样品对DPPH 的清除百分比=12[(A-B)/A0]×100%,这里A0为未加样的DPPH(119ml DPPH+011ml 50%乙醇)的吸光度,A为样品与DPPH反应后的吸光度,B为样品的空白(样品011ml+119ml 3中国科学院广州分院及广东省科学院测试基金和中国科学院“九五”重点基金(KZ9522J12105)联合资助. Tel:(020)877056262405,E2mail:pengchl@ 收稿日期:1999211220,修回日期:200020420250%乙醇)的吸光度.然后用公式:[(清除率×反应加入的DPPH 量)/样品质量(μg )]求得单位质量的外源抗氧化剂或植物样品对DPPH 的实际清除量.114 抑制亚油酸氧化能力的测定 最终浓度为0138mmol/L 的亚油酸加0133mmol/L H 2O 2加速氧化,在有或无植物提取液下置于室温放置5h ,不时摇动,随后用硫代巴比妥酸(TBA )法测定所产生的丙二醛(MDA )[6].用抑制MDA 形成的百分数表示抗氧化能力.115 抑制肾上腺素氧化 参照翁元凯等的方法[7],以碱性连二亚硫酸钠产生O ・2,用不同浓度的AsA 抑制O ・2对肾上腺素的氧化,480nm (肾上腺素红的特征吸收峰)检测吸收的下降.2 结果与讨论211 DPPH 的吸收光谱 有机自由基DPPH 溶液有两个特征吸收峰330nm 和525nm ,加入抗氧化剂抗坏血酸(AsA )和 皮素(QCT )后两个吸收峰皆降低(图1),但525nm 吸收的降低较显著,故选用可见光525nm 的吸收来表示DPPH 含量的变化,这与Larrauri 等[4]报道DPPH 吸收峰在517nm 有点差异.图1 DPPH 的吸收光谱212 抗氧化剂浓度与其清除DPPH 的关系 没食子酸(GIP )、 皮素(QCT )、还原型谷胱甘肽(GSH )和α2生育酚(α2TP )是植物体内常见的抗氧化剂,BHT 是人工合成的常用食品抗氧化剂,Tiron 则是人工合成的自由基捕获剂.图2可见这几种抗氧化剂的浓度皆与DPPH 的光吸收呈显著的线性负相关(图2),相关系数r 除BHT 为018977(图2b )外,其余都在019670～019935之间.抗氧化剂浓度越高,清除DPPH 的能力越大.结果说明无论是植物的内源抗氧化剂还是人工合成的抗氧化剂,其抗氧化性都可用DPPH 法作定量评价.图2 几种抗氧化剂与DPPH 吸收峰(A 525)下降的关系(a )■———■:QCT ,y 1=-010872x +110543,r =019904;●———●:GIA ,y 2=-012485x +110843,r =019935;(b )■———■:BHT ,y 3=-010245x +019008,r =018977;●———●:GSH ,y 4=-010149x +110715,r =019918;(C )■———■:α2TP ,y 5=-010233x +018558,r =019788;●———●:Tiron ,y 6=-010212x +017586,r =019670.213 不同抗氧化剂清除DPPH 能力的比较 表1看出计算降低DPPH 吸收50%时抗氧化剂的浓度(IC 50值)或每微克抗氧化剂实际清除DPPH 的数量皆表明,没食子酸的清除能力最强,皮素次之,而GSH 、α2TP 和两种人工合成的抗氧化剂BHT 及Tiron 则较低.这与Cao 等[8]利用ORAC 法的测定指出一些类黄酮比ASA 、α2TP 和GSH 有更强的抗氧化活性结果相一致.表1 几种抗氧化剂清除DPPH 自由基能力的变化抗氧化剂 IC 50(DPPH 吸收降低50%时抗氧化剂的量) ρ/μg c /μmol ・L -1DPPH 清除量/g ・g -1GIP2111612324122QCT 516791317170AsA 8141261535107BHT 13190351132183GSH 34136621121130α2TP 19150221631119Tiron16180381121187214 抗坏血酸清除DPPH 与抑制肾上腺素氧化的比较 抑制肾上腺素氧化也常用作测定抗氧化能力的一种方法.图3比较了肾上腺素法与DPPH 法用于评价抗坏血酸(AsA )抗氧化能力的灵敏度.结果看出AsA 含量与DPPH 吸收之间的斜率为-010638,相关系数为019986(图3b ),而AsA 含量与抑制肾上腺素氧化之间的斜率为-010011,相关系数为019775(图3a ).即DPPH 法的直线斜率和与AsA 含量的相关性皆大于肾上腺素法,表明其更为灵敏与准确.此外,肾上腺素法需在碱性条件下反应,其活性氧(O ・2)源也需通过化学反应产生,而DPPH 法则可直接检测DPPH 自由基的变化.图3 抗坏血酸抑制肾上腺素氧化(a)和清除DPPH (b)的比较(a )y 1=-010011x +011619,r =019775;(b )y 2=-010638x +110962,r =019986.215 DPPH 法和亚油酸氧化法测定植物叶片抗氧化能力的比较 亚油酸氧化法也是测定植物抗氧化能力的常用方法.用它和DPPH 法比较生长在不同光强下森林植物黧蒴和九节叶片的抗氧化能力(图4),可以看出两种方法的结果基本一致.随生长光强的增加,两种植物抗氧化能力都提高.自然光照下九节叶片的抗氧化能力大于黧蒴,而且光强对九节抗氧化能力的影响较黧蒴大,显示前者对光强的敏感性较高.由此结果进一步表证了DPPH 法研究植物抗氧化能力与植物种类及外界环境因子之间关系的可行性.图4 生长在不同光强下的植物提取物清除DPPH (a)和抑制亚油酸自动氧化(b)的变化□:黧蒴;■:九节. 综上所述,应用DPPH 法来评价外源抗氧化剂和植物抗氧化能力是一种快速(反应时间仅需20min左右)、简便(操作简单,且用一般的分光光度计即可测定)、灵敏(只需要少量的植物样品)、直接(抗氧化剂直接作用于DPPH自由基,测定DPPH吸收的变化,而其他许多方法都是间接测定氧化产物的减少)可行的方法.参 考 文 献1 Osawa T,Namiki M A.Novel type of antioxidant isolated from leaf wax of Eucalypt us leaves.Agric Biol Chem,1981,45(3): 735～7392 Ottolenghi A.Interaction of ascorbic acid and mitochondrial lipides.Arch Biochem Biophys,1959,79:355～3633 Cao G,Alessio H M,Culter R G.Oxygen2radical absorbance capacity assay for antioxidants.Free Radical Biol Med,1993,14(3):303～3114 Larrauri J A,Sanchez2Moreno C,Saura2Calixto F.Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels.J Agric Food Chem,1998,46(7):2694～26975 Y okozawa T,Dong E,Natagawa T,et al.In vit ro and i n vivo studies on the radical2scavenging activity of tea.J Agric Food Chem,1998,46(6):2143～21506 林植芳,李双顺,林桂珠,等.水稻叶片衰老与超氧歧化酶、脂质过氧化的关系,植物学报,1984,26(6):605～615Lin Z F,Li S S,Lin G Z,et al.Acta Bot Sin,1984,26(6): 605～6157 翁元凯,黄 山,翁念宇.用碱性连二硫酸钠水溶液产生超氧阴离子自由基,生物化学与生物物理进展,1989,16(3): 209Wong Y K,Huang S,Wong L Y.Prog Biochem Biophys,1989, 16(3):2098 Cao G,Sofic E,Prior R L.Antioxidant capacity of tea and common vegetables.J Agric Food Chem,1996,44(11):3426～3431Detection of Antioxidative C apacity in Plants by Scavenging Organic Free R adical DPPH.PEN G Chang2Lian,CHEN Shao2Wei,L IN Zhi2Fang,L IN Gui2Zhu(South Chi na Instit ute of Botany,The Chi nese A cademy of Sciences,Guangz hou510650, China).Abstract A very significant linear relationship was found between the capacity of scavenging DPPH free radical and concentrations of six antioxidants(r= 01898～01994)determined by spectrophotometry. There was an obvious difference in the capacity of scavenging DPPH free radical among different antioxidants.Both scavenging DPPH and inhibiting the oxidation of adrenalin were closely related with the concentration of ascorbic acid.The change of DPPH levels is more sensitive than that of adrenalin in the presence of ascorbate.The antioxidative ability in leaves extracts of two woody plants grown under different light intensities was measured by either scavenging DPPH or inhibiting the oxidation of linoleic acid.The same conclusion was drawn through these two assays.It is suggested that scavenging DPPH free radical is a rapid,simple,sensitive and practical assay for the evaluation of antioxidative capacity in plants.K ey w ords 1,12diphenyl222picrylhydrazyl(DPPH), plant,antioxidative capacity,free radical中国生物化学与分子生物学会简讯 由中国生物化学与分子生物学会承办的第十五届亚洲大洋洲生物化学家和分子生物学家联合会(FAOBMB)学术会议于10月21日至24日在北京举行。
保健食品中天然抗氧化剂的筛选与应用考核试卷
一、单项选择题
1. D
2. B
3. C
4. A
5. C
6. A
7. D
8. B
9. D
10. A
11. D
12. A
13. B
14. D
15. A
16. A
17. D
18. A
19. A
20. B
二、多选题
1. ACD
2. ABC
3. ABCD
4. ABCD
5. ABC
6. ABC
7. ABCD
保健食品中天然抗氧化剂的筛选与应用考核试卷
考生姓名：__________答题日期：_______得分：_________判卷人：_________
一、单项选择题（本题共20小题，每小题1分，共20分，在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）
1.以下哪种物质不属于天然抗氧化剂？()
A.维生素C
2.提取天然抗氧化剂时可能遇到溶媒选择、提取效率、活性保持等技术挑战。解决策略包括使用绿色提取技术、优化提取工艺参数、采用冻干等保活技术。
3.应用效果受抗氧化剂种类、添加量、食品基质、加工条件等因素影响。优化方法包括选择适合的抗氧化剂、确定最佳添加量、改进加工工艺。
4.实验方案：采用DPPH法评估抗氧化活性，高效液相色谱法测定含量。原理：DPPH法通过测定抗氧化剂对DPPH自由基的清除能力评价活性。材料：样品、DPPH溶液、甲醇等。步骤：样品处理，DPPH法测定，HPLC分析。
四、判断题（本题共10小题，每题1分，共10分，正确的请在答题括号中画√，错误的画×）
1.天然抗氧化剂只能在低温下保持稳定。（）
2.所有天然抗氧化剂都是水溶性的。（）
DPPH法评价抗氧化活性研究进展_韦献雅
DPPH法评价抗氧化活性研究进展韦献雅1，殷丽琴1，钟 成2，章明海1，牛应泽1,*（1.四川农业大学油菜研究中心，四川 成都611130；2.四川农业大学玉米研究所，四川 成都611130）摘 要：植物化合物或植物提取物的抗氧化活性的体外评价是研究功能因子的一个重要方面。
1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ，DPPH ）法常用于评价化合物或植物提取物的抗氧化活性，但由于没有一个标准化的方法，因而不同实验的结果难于相互比较。
本文从DPPH 法的原理、测定方法、检测波长、DPPH 初浓度、反应时间、清除率计算公式、结果表达、评价指标等几个方面对DPPH 法做归纳总结，分析几种外界因素对DPPH 法的影响，有助于研究者提高认识，从而准确的开展研究工作。
关键词：DPPH 法；自由基；抗氧化剂；抗氧化活性Advances in the DPPH Radical Scavenging Assay for Antioxidant Activity EvaluationWEI Xian-ya 1, YIN Li-qin 1, ZHONG Cheng 2, ZHANG Ming-hai 1, NIU Ying-ze 1,*(1. Rapeseed Research Center, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China;2. Maize Research Institute, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130, China)Abstract: in vitro evaluation of the antioxidant activity of plant compounds or plant extracts is an important aspect of functional factor research. The DPPH (1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radical scavenging assay is widely used for antioxidant activity evaluation of plant compounds and extracts. However, this method lacks a standardized program so that results from different experiments may be difficult to compare with each other. The present review presents a comprehensive overview of the principle, measurement procedure and wavelength, initial DPPH f ree radical concentration, reaction time, calculation of the scavenging rate, expression of results and evaluation indices. Several external factors influencing the DPPH assay are also discussed.Key words: DPPH method; free radical; antioxidant; antioxidant activity 中图分类号：TS207.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2014）09-0317-06doi:10.7506/spkx1002-6630-201409062收稿日期：2013-06-25基金项目：四川省科技计划项目（12CGZHZX0712）；四川省教育厅重点科技项目（11LD018）作者简介：韦献雅（1980—），女，博士研究生，研究方向为作物遗传育种。
p可以抗氧化机理
p可以抗氧化机理
抗氧化机理是指生物体内或外添加的物质如何抵御氧化应激和减少氧化损伤的过程。
下面是一些常见的抗氧化机理：
1. 自由基清除：自由基是一种高活性的分子，它们倾向于通过与其他分子中的电子结合来稳定自身。
抗氧化物质如维生素C、维生素E和谷胱甘肽等可以捕获自由基并稳定它们，从而减
少氧化反应的发生。
2. 去除有氧刺激：抗氧化物质可以通过减少有氧刺激物质的产生来降低氧化应激。
例如，抗氧化物质可以抑制氧化酶的活性，降低有氧反应的速率。
3. 铁离子螯合剂：铁是一种常见的催化剂，在氧化过程中起到重要作用。
抗氧化物质如儿茶素类化合物可以与铁离子结合，从而限制其参与氧化反应。
4. DNA修复和细胞能量维持：氧化损伤可以导致DNA断裂和细胞能量耗竭。
抗氧化机制包括维持DNA修复系统的正常功
能以及提供足够的能量供应，从而修复和保护细胞免受氧化损伤。
5. 激活抗氧化酶系统：抗氧化酶如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽-S-转移酶等具有抗氧化能力。
抗氧化
物质可以通过增加这些酶的合成和活性来增强细胞的抗氧化能力。
总之，抗氧化机理通过多种途径来减少氧化应激和氧化损伤的发生，从而维护细胞和生物体的正常功能。
抗坏血酸清除DPPH自由基的作用机理
517 nm wavelength. Herein, the radical scavenging mechanisms of ascorbic acid on DPPH radicals were investigated by UV-Vis
spectrometric, electrochemical and mass spectrometric determinations. It was found that DPPH existed in two different forms,
O2N · NN
O2N
O2N
+e－, +H + NO2
H NN
NO2
Antioxidant
O2N
DPPH 自由基
DPPH2
图 1 抗 氧 化 剂 递 电 子 、 递 质 子 与 DPPH 自 由 基 生 成 DPPH2 的 反应式
Fig.1 Reaction equation in which electron and proton are transferred from antioxidant to DPPH to form DPPH2
图 2 抗 坏 血 酸 和 DPPH 混 合 溶 液 的 UV-Vis 吸 收 光 谱 Fig.2 UV-Vis spectrum of aqueous ascorbic acid solution and its
mixture with DPPH ethanol solution
由图 2 可知，抗坏血酸因其羰基与 C2 和 C3 间的不 饱合键的共轭作用在 282nm 波长处可观察到羰基的较强 的 R 吸收带，而 DPPH 在 200～250nm 波长范围内可观 察到较强的因苯环共轭导致的 k 带、E 带和 B 带相重叠 的末端吸收带，同时在 323nm 波长处出现 DPPH 自由基 单电子的 n →π* 跃迁导致的吸收带和在 517nm 波长处 出现，可能是由于 DPPH 中的 3 个苯环通过氮 - 氮双键 共轭引起的π→π* 跃迁引起的可见区的吸收带。从以 上紫外光谱分析可推知，DPPH 在乙醇溶液中不仅是以 自由基形态存在，还有可能存在 DPPH 自由基与空气中 的氧作用后生成的高度共轭结构的正离子形态 DPPH+ 导 致其在可见光区具有强烈的吸收光谱，其结构见图 3。
酶解制备褐藻胶寡糖及其产物的抗氧化活性分析
酶解制备褐藻胶寡糖及其产物的抗氧化活性分析周绪霞;徐鋆;丁玉庭【摘要】以褐藻酸钠为底物,通过褐藻胶裂解酶酶解方法得到3种不同分子质量范围的褐藻胶寡糖组分(ADO-A、ADO-B和ADO-C),对其抗氧化性活性进行了研究.结果表明:3种寡糖组分都有一定的抗氧化活性,且活性随着寡糖浓度的增加而加强,其中ADO-C的抗氧化活性最高.在DPPH·体系中,ADO-C的IC50值为0.53mg/mL;在·OH体系中,ADO-C对羟基自由基的清除活性大干同浓度的抗坏血酸(P ＜0.05)；还原力方面,在较低的浓度下,ADO-C表现出的还原力显著大于其余的2种(P＜0.05).实验表明,酶解得到的褐藻胶寡糖具有较强的抗氧化性,ADO-C(MW＜8000)的抗氧化性最显著,即分子质量较小的寡糖有更强的抗氧化活性.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)002【总页数】5页(P116-120)【关键词】褐藻胶寡糖;酶解;抗氧化性【作者】周绪霞;徐鋆;丁玉庭【作者单位】浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州,310014;浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州,310014;浙江工业大学生物与环境工程学院,浙江杭州,310014【正文语种】中文褐藻胶(Alginate)是一种由β-1，4-D-甘露糖醛酸(M)和α-1，4-L-古罗糖醛酸(G)2 种单体通过1，4-糖苷键链接而成的线性多糖聚合物，主要来自于海带、马尾藻、巨藻等褐藻类植物，具有抗肿瘤、增强免疫、促生长等多种生理活性，但由于其自身是一种高聚合度的物质，分子质量较大，不易溶解，且黏度较大，实际应用有一定的局限性［1］。
褐藻胶分子结构中含有大量的羟基，酶解可以改变糖分子伸展结构，使糖羟基暴露，改善其性能。
褐藻胶寡糖是褐藻胶的降解产物，是由2～10个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物，由于其相对分子质量低，具有溶解性能好、机体吸收利用率高、稳定性好等特性［2］。
川芎水提物体外抗氧化活性的研究
第38卷第2期 唐山师范学院学报 2016年3月 Vol.38 No.2 Journal of Tangshan Normal University Mar. 2016────────── 收稿日期：2015-12-04作者简介：张晶晶（1987-），女，河南安阳人，硕士研究生，研究方向为生物化学。
-38-川芎水提物体外抗氧化活性的研究张晶晶，杨占峰（郑州工业应用技术学院 医学系，河南 郑州 451150）摘 要：通过测定川芎水提物对·OH 、·O 2－和DPPH 三种自由基的清除作用，评价其抗氧化性能。
采用索氏提取器提取川芎水提物，以抗坏血酸为对照，采用分光光度法测定其清除率。
川芎水提物对三种自由基有不同程度的清除能力，对三种自由基的清除效果依此为DPPH ﹥·O 2－﹥·OH 。
川芎水提物在体外具有较明显的抗氧化活性，在实验浓度范围内，其抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。
关键词：川芎；川芎水提物；抗氧化；自由基 中图分类号：Q5-33文献标识码：A 文章编号：1009-9115(2016)02-0038-03DOI ：10.3969/j.issn.1009-9115.2016.02.011Antioxidant Activity Study of Water Extraction of Chuanxiong Capsule in VitroZHANG Jing-jing, YANG Zhan-feng(Medical School, Zhengzhou University of Industrial Technology, Zhengzhou 451150, China)Abstract: The antioxidant activities of the water extraction of chuanxiong capsule were determined by examining the scavenging effect of the water extraction on hydroxyl(·OH), superoxide anion (·O 2－), and 1, 1-Dipheny-2-picrylhydrazyl(DPPH) radicals. The water extraction of chuangxiong capsule was obtained by soxhletextractor with ascorbic acid as reference compound. Spectrophotometry was used to assess the antioxidant properties. There were different scavenging abilities in the water extraction of chuanxiong capsule on hydroxyl, superoxide anion, and DPPH radicals. The scavenging effects on the three free radicals were DPPH > ·O 2－> ·OH. There was marked antioxidant activity in the water extraction of chuanxiong in vitro. In the experimental concentration range, the scavenging effects of the water extraction of chuanxiong showed positive correlation with the concentration of the water extraction of chuanxiong.Key Words: chuanxiongcapsule; water extract of chuanxiong; antioxidant; radical自由基是机体内氧化反应产生的副产物，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应。
抗坏血酸捕获超氧自由基
抗坏血酸捕获超氧自由基抗坏血酸（Vitamin C）是一种常见的水溶性维生素，对人体健康有着重要作用，其中之一就是具有抗氧化功能。
超氧自由基（Superoxide anion radical, O2-）是一种高度活性的氧自由基，常常与其他的自由基形成有害的氧化反应，导致细胞组织受损。
抗坏血酸可以通过捕获超氧自由基来发挥其抗氧化功能，保护人体健康。
超氧自由基的生成机制和对细胞的影响超氧自由基是一种相对稳定的自由基，它可以在多种条件下产生。
最常见的是在氧气存在的环境下，由氧分子（O2）接受一个电子而产生。
这个过程可以由体内多种酶类催化，例如线粒体呼吸链中的氧化还原酶、酪氨酸酶、NADPH氧化酶等。
外界的辐射、化学物质、烟草、饮食等也会促使超氧自由基的生成。
当人体内超氧自由基的浓度过高时，会对细胞造成不良的影响。
超氧自由基可以影响线粒体的功能，导致能量代谢障碍；它还可以损伤细胞膜，引起炎症反应；过量的超氧自由基还会引起细胞凋亡，从而导致组织器官受损。
抗坏血酸 + O2- -> 抗坏血酸脱氢抑制剂 + O2这个反应是一个氧化还原反应，即抗坏血酸（还原剂）向超氧自由基（氧化剂）提供一个电子，从而消除超氧自由基。
此时，抗坏血酸转化为抗坏血酸脱氢抑制剂，它继续捕获其他活性自由基，发挥持久的抗氧化作用。
抗坏血酸捕获超氧自由基，可以用于维持人体内的氧化还原平衡。
抗坏血酸可以将过量的超氧自由基转化为较为稳定的氧分子，从而减少超氧自由基的危害。
抗坏血酸还可以与其他抗氧化剂协同作用，发挥更好的抗氧化效果。
正常人体内，抗坏血酸的含量较为稳定，有助于保持氧化还原平衡。
但是在一些疾病状态下，例如感染、创伤、缺氧等，会导致超氧自由基的生成量增加，而抗坏血酸的被消耗速度加快，从而引起抗氧化失衡，对人体健康产生不良影响。
在这些情况下，适当地补充抗坏血酸可以有效地提高人体的抗氧化能力，有助于维护健康。
结论抗坏血酸可以通过捕获超氧自由基的方式，发挥其抗氧化作用，保护人体健康。
发酵轮叶党参提取物清除DPPH自由基的作用
发酵轮叶党参提取物清除DPPH自由基的作用刘婷婷;韩春姬;俞星【摘要】目的:探讨发酵和未发酵轮叶党参提取物清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基(DPPH·)的能力,阐明酵母菌发酵对轮叶党参清除自由基能力的影响.方法:实验用活性酵母发酵轮叶党参7d后用沸水提取,并用80％乙醇除去蛋白质和多糖,减压浓缩,采用清除DPPH·能力的方法比较发酵、未发酵轮叶党参提取物及抗坏血酸对DPPH·的清除能力.结果:发酵轮叶党参提取物对DPPH·清除能力的半数有效量(EC50)为0.12g·L-1,未发酵轮叶党参EC50为0.40 g· L-1,发酵轮叶党参与未发酵轮叶党参组比较,清除D PPH·的能力明显增强(P＜0.01).轮叶党参发酵之后,齐墩果酸含量提高了1.41倍.结论:用活性酵母发酵轮叶党参后,清除DPPH·能力提高,且发酵后其化学成分发生变化.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(037)006【总页数】3页(P1087-1089)【关键词】发酵;轮叶党参;1,1-二苯基苦基苯肼;自由基【作者】刘婷婷;韩春姬;俞星【作者单位】延边大学基础医学院预防医学教研部,吉林延吉133002;延边大学基础医学院预防医学教研部,吉林延吉133002;延边大学食品研究中心,吉林延吉133002;延边大学基础医学院预防医学教研部,吉林延吉133002【正文语种】中文【中图分类】TS255.7目前，国内外对植物提取物抗氧化作用的研究很多，尤其是对药食两用的中草药抗氧化作用研究及其中的天然抗氧化剂的研究[1-3]。
1，1-二苯基苦基苯肼(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl,DPPH)自由基(DPPH·)被广泛用于评价植物的抗氧化能力，所涉及的对象从常见的果蔬农作物到药食两用的植物提取物等。
维生素C的生物化学活性及机理13资料
维生素C在人体的生物化学活性王云生摘要:VC又名抗坏血酸，是人体血浆中最有效的水溶性抗氧化剂，参与体内各种物质代谢并且是各种酶的催化剂；VC 能有效清除氧自由基，阻断自由基引发的氧化反应，保证生物膜免受氧化损伤和过氧化的损伤；还可提高超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化酶的活性。
随着现代科学技术的进步，人们对维生素C又有了更多的了解。
维生素C在抗氧化、促进胶原蛋白合成、胆固醇代谢、参与机体的解毒、预防多种疾病、抗肿瘤等方面占有重要的地位。
关键字：维生素C；抗氧化；自由基Vitamin C in thebiological activity of human bodyAbstract: VC, also known as ascorbic acid, is the most effective water soluble antioxidants in human plasma, participate in various metabolism in vivo and is the catalyst of various enzymes; VC can effectively clear oxygen free radical, oxidation blocking free radical initiated, ensure the membrane from oxidative damage and oxidative damage; can also improve the superoxide superoxide dismutase (SOD) and the activity of antioxidant enzymes. With the progress of modern science and technology, people on the vitamin C and have more understanding. Vitamin C plays an important role in the antioxidant, promote the synthesis of collagen, cholesterol metabolism, detoxification, involved in the prevention of various diseases, tumor.Keyword:vitamin C;antioxidant;free radicalVC作为一种最简单的维生素，它本身是一个含有6个碳原子的酸性化合物，具有烯醇式结构，共有4种异构体，其中L—抗坏血酸的生物活性最高，即常说的抗坏血酸。
维生素C的生物化学活性及机理13
维生素C在人体的生物化学活性王云生摘要:VC又名抗坏血酸，是人体血浆中最有效的水溶性抗氧化剂，参与体内各种物质代谢并且是各种酶的催化剂；VC 能有效清除氧自由基，阻断自由基引发的氧化反应，保证生物膜免受氧化损伤和过氧化的损伤；还可提高超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化酶的活性。
随着现代科学技术的进步，人们对维生素C又有了更多的了解。
维生素C在抗氧化、促进胶原蛋白合成、胆固醇代谢、参与机体的解毒、预防多种疾病、抗肿瘤等方面占有重要的地位。
关键字：维生素C；抗氧化；自由基Vitamin C in thebiological activity of human bodyAbstract: VC, also known as ascorbic acid, is the most effective water soluble antioxidants in human plasma, participate in various metabolism in vivo and is the catalyst of various enzymes; VC can effectively clear oxygen free radical, oxidation blocking free radical initiated, ensure the membrane from oxidative damage and oxidative damage; can also improve the superoxide superoxide dismutase (SOD) and the activity of antioxidant enzymes. With the progress of modern science and technology, people on the vitamin C and have more understanding. Vitamin C plays an important role in the antioxidant, promote the synthesis of collagen, cholesterol metabolism, detoxification, involved in the prevention of various diseases, tumor.Keyword:vitamin C;antioxidant;free radicalVC作为一种最简单的维生素，它本身是一个含有6个碳原子的酸性化合物，具有烯醇式结构，共有4种异构体，其中L—抗坏血酸的生物活性最高，即常说的抗坏血酸。
金边瑞香实验报告
一、实验背景金边瑞香（Daphne odora Var.marginata），又称瑞香、睡香等，是瑞香科瑞香属的常绿小灌木，原产于我国长江流域，具有极高的观赏价值和药用价值。
本研究旨在通过对金边瑞香的活性成分提取、抗氧化活性以及组织培养等实验研究，深入了解其化学成分、药理作用和繁殖技术。
二、实验材料与方法1. 实验材料- 金边瑞香：采自江西省南昌市，选取生长健壮、无病虫害的植株。
- 主要试剂：无水乙醇、乙酸乙酯、正己烷等有机溶剂；抗坏血酸、DPPH自由基等。
2. 实验方法（1）活性成分提取1. 将金边瑞香干燥、粉碎，过筛，得粗粉。
2. 将粗粉用无水乙醇、乙酸乙酯、正己烷等有机溶剂进行超声提取，分别得乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和正己烷提取物。
3. 将提取物进行浓缩、干燥，得各提取物。
（2）抗氧化活性测定1. 采用DPPH自由基清除法测定抗氧化活性。
2. 以抗坏血酸为阳性对照，以无水乙醇为阴性对照，分别测定各提取物对DPPH自由基的清除率。
（3）组织培养1. 以金边瑞香茎段和叶片为外植体，采用MS培养基进行组织培养。
2. 通过正交试验设计和比较试验设计，探讨最佳培养基配方及培养途径。
3. 研究激素和其他培养条件对有效增殖系和植株再生的影响。
三、实验结果与分析1. 活性成分提取通过实验，成功提取出金边瑞香的乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和正己烷提取物。
经鉴定，提取物中主要含有挥发油、黄酮类、生物碱等活性成分。
2. 抗氧化活性测定实验结果显示，金边瑞香提取物对DPPH自由基具有较强的清除作用，其清除率随提取物浓度的增加而升高。
与抗坏血酸相比，金边瑞香提取物的抗氧化活性略低，但具有显著差异。
3. 组织培养通过正交试验设计和比较试验设计，确定了最佳培养基配方及培养途径。
结果表明，在MS培养基中添加一定浓度的NAA和6-BA，可显著提高金边瑞香植株的增殖率和再生率。
四、实验结论1. 金边瑞香中含有多种活性成分，具有抗氧化、抗炎、镇痛等药理作用。
AA_2_G与V_c对DPPH自由基清除作用的比较
图1
AA 2 G 的分子结构
1
材料与方法
1. 1 试剂及仪器 2 O D 葡 萄糖基 L 抗 坏血酸 ( AA 2 G) ( 宁 夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实 验室从枸杞干果中分离得到[ 8] ) , 维生素 C ( 上海润 捷化学试剂有限公司 ) , DPP H ( 美国 Sigm a Aldrich
V ( 溶剂 ) / mL 3. 98 3. 96 3. 92 3. 90 3. 84 4. 00 5. 00
空白 参比
9. 9 mg 的 DPPH , 用无水乙醇定容于 50 mL 容量瓶 中, 配成 c= 5. 0 ! 10- 4 mol/ L 溶液, 避光保存, 备用. 2) V c 溶 液的配制 . 称取 3. 5 mg 的 L AA, 用 = 60% 乙醇 定 容于 10 m L 容量 瓶 中, 配 成 c = 2. 0 ! 10- 3 m ol/ L 溶液, 避光保存, 备用 . 3) AA 2 G 溶液的 配制. 称取 6. 8 m g 的 AA 2 G, 用 = 60% 乙醇定容于 10 mL 棕色容量瓶中 , 配成 c= 2. 0 ! 10 - 3 mol/ L 溶液 , 避光保存 , 备用 . 4) 反应溶液的配制. 用 0. 01 mol/ L 柠檬酸溶液 与 0. 01 m ol/ L 柠檬酸钠溶液的混合溶液配成 pH = 3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0 的缓冲溶液 ; 再用缓冲溶液分别 配成反应溶液: 乙醇 ( = 60% ) 缓冲溶液( = 40% , pH = 3. 0) ∀ ; 乙醇 ( = 60% ) 缓冲溶液 ( = 40% , pH = 4. 0) #; 乙醇 ( = 60% ) 缓冲溶液 ( = 40% , pH = 5. 0) ∃; 乙醇 ( = 60% ) 缓冲溶液 ( = 40% , pH = 6. 0) %; 乙醇( = 60% ) 水( pH = 7. 0) . 1. 2. 2 V c 与 AA 2 G 对 DPPH 的清除作用 DP PH 自由基分析法的原理是 , 依据 DPPH 具有单电 子而使其在 = 517 nm 处有一强吸收( 深紫色) , 当有 自由基清除剂与其单电子配对而使其吸收逐渐减弱 ( 颜色变淡) 或消失. 一般褪色程度与其所接受的电子 数呈定量关系, 因而可用分光光度法进行定量分析, 以评价自由基清除剂的能力, 其能力用清除率来表 示. 一般, 抗氧化剂对 DPPH 的清除率越大, 其抗氧 化能力越强 . 实验中分别加入一定体积的 V c 或 AA 2 G 溶液到 5 mL 棕色容量瓶中, 充分混合 , 室温下避 光静置 30 min, 在最大吸收波长( 517 nm) 处测定其吸 光度 A ( 表 1) . 依据以下公式计算清除率 . 清除率 S = [ 1- ( A i - A j ) / A 0 ] ! 100% .
杨树芽提取物清除DPPH自由基的作用
（ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆＰ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ， Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｆＣ ｏ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ０ ０ ２ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ＤＰＰＨ ｒ ａ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｃ ａ ｖ ｅ ｎｇ ｉ ｎ ｇ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｐ ｏ ｐ ｌ ａ ｒ ｂ ｕ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ
ＵＵ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ． １ ｏ ｎ ｇ ， Ｌ Ｅ Ｉ Ｈｕ ｉ ． Ｚ Ｈ Ａ ０ Ｑ ｉ ． ｘ ｉ ｕ ． ｅ ｔ ａ ｌ
安 徽 医 药
Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ２ ０ １ ３ Ｊ ｕ ｌ ； １ ７ （ ７ ）
・ １ ０ ９ １・
◇药学 研 究 ◇
杨树 芽提 取物清除 Ｄ Ｐ Ｐ Ｈ 自由基 的作 用
ｄ ａ ｎ ｔ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄｓ Ｂ ｙ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｕ ｎ ｄ ｗｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｄ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｐ ｌ ａ ｒ ｂ ｕ ｄ ｓ ． Ａｓ ｃ ｏ ｒ ｂ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ， ｔ ｏ ｃ ｏ ｐ ｈ ｅ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ ｒ ｕ ｔ ｉ ｎ ａ ｓ ｒ ｅ ｆ －
野生鱼腥草黄酮类化合物清除DPPH自由基的作用
野生鱼腥草黄酮类化合物清除DPPH自由基的作用作者：张春生方玉梅王毅红谭萍来源：《绿色科技》2010年第07期摘要:以六盘水本地野生鱼腥草为原料,70%乙醇作为提取介质,提取野生鱼腥草黄酮类化合物。
以抗坏血酸( VC)和VE为对照品,采用DPPH法研究野生鱼腥草黄酮提取物对自由基的清除作用。
结果表明,野生鱼腥草黄酮提取物具有较强的抗氧化作用,在其浓度为51.644g/mL时其清除率可达62.27%,显著高于相同浓度下的VC和VE的清除率。
因此,野生鱼腥草黄酮提取物可作为一种天然抗氧化剂。
关键词:鱼腥草;黄酮;DPPH自由基中图分类号:Q58文献标识码:A文章编号:1674-9944(2010)07-0175-031 引言生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。
现代医学研究证明,衰老、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系[1]。
自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应,造成相关细胞结构与功能的破坏,其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损伤,使人体发生病变。
在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情况下,如果不及时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化能力,人体就会加速衰老、易患疾病。
天然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用,同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。
因此,对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的天然抗氧化剂研究,己得到普遍关注[2]。
鱼腥草为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。
产于我国长江流域以南各省。
夏季茎叶茂盛花穗多时采收,洗净,阴干用或鲜用,名见《名医别录》。
唐苏颂说:“生湿地,山谷阴处亦能蔓生,叶如荞麦而肥,茎紫赤色,江左人好生食,关中谓之。
菹菜,叶有腥气,故俗称:鱼腥草。
” [3]黄酮类化合物(Flavonoids)又称生物类黄酮(Bioflavonoid),一般能溶于水、稀乙醇、乙酸乙酯等极性溶剂中,难溶于乙醚、氯仿和苯。
单宁的生物学功能及其在畜禽养殖中的应用研究进展
Research Progress on the Mechanism of Testosterone Synthesis in Leydig CellsZHU Qingyu 1,2, GUO Lewei 1,2, LIU Hongyu 1,2, ZHAO Jing 1,2, LYU Wenfa 1,2*, WANG Jun 1,2*（1.Joint Laboratory of Modern Agricultural Technology International Cooperation, Ministry of Education, JilinAgricultural University, Jilin Changchun 130118, China; 2.Key Lab of Animal Production, Product Quality and Security, Ministry of Education, Jilin Agricultural University, Jilin Changchun 130118, China ）Abstract: Testosterone is one of the most important sex hormones in male animals mainly synthesized from cholesterol in Leydig cells. Testosterone is involved in regulating important physiological processes in vivo, which is significant for sperm genesis and maintaining normal physiological activities of other tissues and organs. The synthesis of testosterone is complex, involving multiple signaling pathways, cytokines, transcription factors and non-coding RNA regulation. In this paper, we reviewed the research progress of testosterone synthesis mechanism in Leydig cells, and provided reference for further research on testosterone synthesis.Keywords: Testosterone; Leydig cell; Cholesterol; Synthetic mechanism（责任编辑：周会会）单宁的生物学功能及其在畜禽养殖中的应用研究进展唐青松1,2，徐 娥1，蒋宗勇2，易宏波2*（1.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳 550025；2.广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东广州 510640）摘 要：单宁是一种重要的植物次级代谢多酚类产物，分为缩合单宁、水解单宁和复合单宁，广泛分布于植物界。
2抗坏血酸的功能类别及作用机理
资料三证明技术上确有必要和使用效果的资料资料三证明技术上确有必要和使用效果的资料或者文件3.1申请扩大使用范围的背景说明油脂作为人类三大营养素之一，不仅是是人体中脂肪和热量的主要来源，并且能为人类提供一些必需的营养成分，如磷脂、甾醇，以及含多个双键的必需脂肪酸，帮助人体吸收脂溶性物质和脂溶性维生素等，同时赋予食品良好的口感和风味。
被广泛应用于人们的日常生活和食品生产加工领域。
由于自身结构的原因，无论是油脂还是富含油脂的食品在生产、加工、运输、储藏及使用过程中受到光、热、金属等的影响，极易发生氧化导致酸败，从而影响食品的感官，降低营养价值，并产生对人体有害的二级氧化产物。
因此预防油脂氧化是食品生产企业十分重要的工作。
常温下，油脂氧化最主要的途径是自动氧化(autoxidation)。
自动氧化过程从自由基的生成开始，之后发生自动催化的链式反应（如下所示）。
光照、脂肪氧化酶、金属离子等物质的存在都会催化自由基的产生。
链引发：RH+X·→ R·+XHRH+ 1O2→ R·+HOO·光、热、一些光敏物质、电离辐射、脂氧酶、过渡金属和金属蛋白是链引发的催化剂。
链增长：R·+3O2→ ROO·ROO·+ RH→ ROOH+ R·ROOH→ RO·+·OH2ROOH→ RO·+ ROO·+H2ORO·+ RH→ R·+ ROH·OH+ RH→ R·+ H2O链终止：ROO·+ ROO·→ROOR+O2ROO·+ R·→ ROORR·+ R·→R－RRO·+ RO·→ ROORR·+ RO·→ ROR在此链式反应中，RH代表油脂中的不饱和脂肪酸油脂氧化严重影响食品感官风味，破坏食品中的营养成分，并且产生有害物质。
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2.1 抗坏血酸和 DPPH 混合溶液的 UV-Vis 吸收光谱
A
0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00
150
282nm 300
A
450 600 750 波长 /nm
A
3.5
3.0
B
2.5
2.0
325nm
1.5
517nm
1.0
1
0.5
2
3
0.0
150 300 450 600 750 900
86 2011, Vol. 32, No. 01
食品科学
※基础研究
抗坏血酸清除 DPPH 自由基的作用机理
李铉军，崔胜云 *
(延边大学 长白山生物资源与功能分子教育部Байду номын сангаас点实验室，吉林 延吉
133002)
摘 要：采用光谱、电化学和质谱分析方法研究抗坏血酸对 DPPH 自由基清除机理，发现 DPPH 在溶液中是以自 由基形态和含氮 - 氮双键的高度共轭结构的正离子态(DPPH+)存在且抗坏血酸对上述两种形态都有清除作用。由于 DPPH 自由基与 DPPH+ 在溶液中处于平衡态，故同种抗氧化剂用 517nm 波长处 DPPH+ 的吸收强度变化可间接评价 对 DPPH 自由基的清除作用，但对不同抗氧化剂而言，因抗氧化剂对 DPPH 的不同形态相对清除作用的不同会带来 较大的误差或误判。本研究对准确评价抗氧化剂的自由基清除作用具有一定指导意义。 关键词：抗坏血酸；D P P H 自由基；清除机理；分光光度法；循环伏安法；质谱法
O2N · NN
O2N
O2N
+e－, +H + NO2
H NN
NO2
Antioxidant
O2N
DPPH 自由基
DPPH2
图 1 抗 氧 化 剂 递 电 子 、 递 质 子 与 DPPH 自 由 基 生 成 DPPH2 的 反应式
Fig.1 Reaction equation in which electron and proton are transferred from antioxidant to DPPH to form DPPH2
图 2 抗 坏 血 酸 和 DPPH 混 合 溶 液 的 UV-Vis 吸 收 光 谱 Fig.2 UV-Vis spectrum of aqueous ascorbic acid solution and its
mixture with DPPH ethanol solution
由图 2 可知，抗坏血酸因其羰基与 C2 和 C3 间的不 饱合键的共轭作用在 282nm 波长处可观察到羰基的较强 的 R 吸收带，而 DPPH 在 200～250nm 波长范围内可观 察到较强的因苯环共轭导致的 k 带、E 带和 B 带相重叠 的末端吸收带，同时在 323nm 波长处出现 DPPH 自由基 单电子的 n →π* 跃迁导致的吸收带和在 517nm 波长处 出现，可能是由于 DPPH 中的 3 个苯环通过氮 - 氮双键 共轭引起的π→π* 跃迁引起的可见区的吸收带。从以 上紫外光谱分析可推知，DPPH 在乙醇溶液中不仅是以 自由基形态存在，还有可能存在 DPPH 自由基与空气中 的氧作用后生成的高度共轭结构的正离子形态 DPPH+ 导 致其在可见光区具有强烈的吸收光谱，其结构见图 3。
DPPH 溶液在 323nm 和 517nm 波长处有两个特征的 吸收峰[16]。迄今，抗氧化剂对 DPPH 自由基清除率是通 过测定加入抗氧化剂前后 DPPH 在 517nm 波长处吸光度
收稿日期：2010-03-05 作者简介：李铉军(1 97 7 —)，男，讲师，硕士，研究方向为食品分析。E-mail ：xj li @y bu. ed u. cn * 通信作者：崔胜云(1957 —)，男，教授，博士，研究方向为生物分析化学。E-mail：sycui820@
本实验以具有递电子和递氢能力的抗坏血酸作为抗 氧化剂，利用分光光度法、循环伏安法(CV)和质谱法比 较研究抗坏血酸清除 DPPH 自由基的反应机理。通过抗 坏血酸和 DPPH 混合溶液的循环伏安分析和质谱测定结 果，提出溶液中不同 DPPH 存在形态和抗坏血酸相互作 用的反应机理。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器 1,1 二苯基 -2-苦基肼(DPPH)、抗坏血酸 美国 Sigma
O2N · NN
O2N
－e
NO2 +e
O2N NN
O2N
NO2
DPPH 自由基
DPPH+
图 3 DPPH 自 由 基 和 其 高 共 轭 结 构 氧 化 产 物 的 化 学 结 构 图
Fig.3 Chemical structure of DPPH radical and highly conjugated
公司；氯化钾、无水乙醇为国产分析纯试剂；实验用 水为三次蒸馏水。
UV-8500 紫外 - 可见分光光度计 天美公司；M-273 电化学分析仪 美国EG & G公司；HP 1100-1946A LC-MS 液 - 质联用仪 美国惠普公司。 1.2 方法
新鲜配制 0.1000mmol/L DPPH 无水乙醇溶液及含有 一定浓度的抗坏血酸和 0.1000mmol/L DPPH 的混合溶液。 分别对 DPPH、DPPH 和抗坏血酸混合溶液进行 UV-Vis 吸收光谱、循环伏安和质谱测定。通过比较 DPPH 与抗 坏血酸作用前后的光谱、电化学、质谱测定结果的变 化研究抗坏血酸清除 DPPH 自由基的反应机理。质谱测 定采用无柱色谱端口自动进样，质谱分析条件为：API-ESI 离子源，扫描范围 m/z 100～800，离子源喷射电压 4.0kV，锥孔电压 70V，氮气流速 8.5L/min，毛细管温 度 180℃，检测器为安捷伦 1100 型四极杆质谱检测器。
oxidation product
当 DPPH 溶液中加入 0.02mmol/L 抗坏血酸时，末端 吸收和 323nm 波长处的吸收带及 517nm 波长处的吸收带 的吸收强度都在明显减小(图 2B)，其中波长 517nm 处的 吸光度从 1.07 减小到 0.86，而在 323nm 波长处的吸光
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radical form (DPPH·) and highly conjugated form (DPPH+), and ascorbic acid could scavenge both of them in the solution.
Generally, the two forms of DPPH were at equilibrium in the solution. This makes it possible to indirectly evaluate DPPH
波长 /nm
图 A.抗坏血酸(0.1000mmol/L)溶液紫外光谱图；图 B：1.DPPH (0.1000mmol/L)乙醇溶液紫外光谱图；2. DPPH(0.1000mmol/L)溶 液与 0.0 200mmol/ L 抗坏血酸混合溶液的紫外光谱图；3. DPPH (0.1000 mmol/L)溶液与 0.100mmol/L 抗坏血酸混合溶液的紫外光谱图。
517 nm wavelength. Herein, the radical scavenging mechanisms of ascorbic acid on DPPH radicals were investigated by UV-Vis
spectrometric, electrochemical and mass spectrometric determinations. It was found that DPPH existed in two different forms,
effects on the two forms of DPPH.
Key words：ascorbic acid；DPPH free radical；scavenging mechanism；spectrometry；cyclic voltammetry；mass
spectrometry 中图分类号：O651
DPPH Radical Scavenging Mechanism of Ascorbic Acid
LI Xuan-jun，CUI Sheng-yun* (Key Laboratory of Natural Resources of Changbai Mountain and Functional Molecules, Ministry of Education,
Yanbian University, Yanji 133002, China)
Abstract ：DPPH radical scavenging properties of antioxidants are generally evaluated by determining absorbance (A517 nm) at
食品科学
※基础研究
度从 1.51 减小到 1.32，说明低浓度的抗坏血酸对 DPPH 自由基和正离子态的 DPPH+ 都具有清除作用。在实验中 也发现，DPPH 溶液加入抗坏血酸后溶液由浅蓝色变为 无色，这是由于抗坏血酸对有色的正离子态的 DPPH+ 具 有分解清除作用所致。当加入的抗坏血酸浓度增加至与 DPPH 浓度(0.1mmol/L)相等时，DPPH 的末端吸收大大降 低的同时 517nm 波长处的吸收带几乎消失，但 323nm 波 长处的吸收带仍有较大的吸收且溶液的颜色从蓝色完全 变为黄色。这一结果说明：当抗坏血酸浓度较高时， 抗坏血酸的还原性导致其直接还原 DPPH+ 的氮 - 氮双键并 使其分解生成具有如下共轭结构的产物(图 4)。