通过植物细胞叶绿体的分离

叶绿体分离色素方法

叶绿体分离色素方法
叶绿体是植物细胞中非常重要的细胞器，其中含有大量的叶绿素色素。

为了研究叶绿体的结构和生理功能，需要将叶绿体从细胞中分离出来进行研究。

以下是分离叶绿体色素的方法：
1. 摇床分离法：先将植物细胞研磨后，借助离心机分离出细胞的液态基质，再用摇床将其中的叶绿体色素分离提取。

2. 差速离心法：类似于摇床分离法，但运用的离心机设备更高级，可以根据叶绿体在不同离心力下的沉降差异，更快速有效地分离出叶绿体。

3. 渗透法：将破碎后的细胞用高浓度糖溶液浸泡，使细胞内受到渗透压的作用，碎液中的叶绿体色素通过渗透压差异被分离出来。

4. 离心浮游法：将植物细胞碎液经过多次离心，可以使叶绿体通过不同的重力区分而浮游到离心管的不同层次，从而实现叶绿体的分离提取。

以上是分离叶绿体色素的常用方法，具体的选择应根据实验的需求和条件而定。

叶绿体的分离和观察

生命科学学院Life Scie nee College细胞生物学实验报告姓名：柳伟雄班级：2013级生科一班山东大学实验报告 2015年5月10日学号：2同组者：曾玮璠姓名：柳伟雄系年级：生科一班2013级科目：细胞生物学实验题目：叶绿体的分离和观察一、目的和要求1. 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法、原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。

一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。

在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。

一次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。

叶绿体的分离应在等身溶液（0.35mol/L 氯化钠或0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体损伤。

将匀浆液在1000r/min 的条件下离心2分钟，以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。

然后，在3000r/min 的条件下离心5分钟，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。

分离过程最好在 0C — 5C 的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。

因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。

另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片、盖玻片和无荧光油。

三、试剂和器材1. 材料：新鲜菠菜2. 试剂：（1） 0.35mol/L 氯化钠溶液（2） 0.01%吖啶橙（acridine orange ）3、器材：（1 ）主要设备：普通离心机，组织捣碎机，粗天平，荧光显微镜（2）小型器材：500ml 烧杯2个，250ml 量筒1个，滴管20支，10ml 刻度离心管纱布若干，无荧光载玻片和盖玻片各 4片等四、实验步骤1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g 于150ml 0.35mol/LNaCI 溶液中，装入组织捣碎机2. 利用组织捣碎机低速（5000r/min ）匀浆2— 3分钟3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml 烧杯中4. 取滤液4ml 在1000r/min 下离心2min ,弃去沉淀同组者：曾玮皤20支，试管架5个,5. 将上清液在3000r/min下离心5分钟。

实验五实验五叶绿体的分离与荧光观察

叶绿体的分离与荧光观察一．实验目的1、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。

2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。

二．实验原理1、叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。

将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心差速离心，是分离细胞器的常用方差速离心法。

2、一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。

在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。

3、依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。

沉降顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化氢酶体、沉降顺序为：沉降顺序为细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化氢酶体、内质网与高尔基体、核蛋白体。

内质网与高尔基体、核蛋白体。

4、叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35 mol／L 氯化钠或 0.4 mol／L 蔗糖溶液) 中进行．以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

将匀浆液在 1000 r／min 的条件下离心 2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。

然后，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）5、在 3000 r／min 的条件下离心 5min，分离过程最好在 0～5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

三．实验仪器1、器材：普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜、500ml 烧杯 2 个，2 、器材：250ml量筒1个，滴管10支，10ml刻度离心管20支，纱布若干，无荧光载片和盖片各4片。

3、材料：新鲜菠菜。

4、试剂：0.35 mol／L 氯化钠溶液，0.01％吖啶橙。

四．实验方法1．选取新鲜的嫩菠菜叶，去除叶梗及粗脉，称40g于150ml0.35mol／L NaCl 溶液中，装入组织捣碎机。

2．利用组织捣碎机低速(5 000 r／min)匀浆 3~5min。

叶绿体的分离与分析

叶绿体的分离与分析叶绿体是一种重要的细胞器，每个植物细胞都有数以千计的叶绿体。

叶绿体是通过植物细胞合成光合色素来进行光合作用的所在地。

在植物细胞中，叶绿体起着重要的作用，因此研究叶绿体极其重要。

在本文中，将探讨叶绿体的分离与分析。

1. 叶绿体的分离通过分离叶绿体，可以进一步了解叶绿体的结构和功能，有助于深入研究植物的光合作用和光合产物的合成等重要的生理过程。

分离叶绿体是将细胞质中的叶绿体与其他细胞器分离，提纯出纯净的叶绿体。

下面是几种常见的叶绿体分离方法：1.1 钙盐法分离利用钙盐的沉淀作用可以分离出叶绿体。

在植物细胞中，叶绿体的密度比较小，而且易于在高浓度的钙离子存在下形成沉淀，所以通过钙盐法可以较为迅速地分离出叶绿体。

该方法的缺点是得到的叶绿体杂质较多。

1.2 筛分离法该方法是通过分离细胞中各个部分的大小差异达到分离叶绿体的目的。

通过串联不同大小的筛子，可以分离出纯净的叶绿体。

该方法的优点是简单易行，缺点是得到的叶绿体数量较少，不适合大规模生产。

1.3 离心法分离利用离心力的大小差异可以将细胞质中的不同组分分离，通过离心机的不同离心速度可以分离出叶绿体。

分离出的叶绿体纯度较高，但操作复杂，不适合大规模生产。

2. 叶绿体的分析通过对叶绿体的分析，可以了解到叶绿体的结构、功能、组成和代谢等方面的信息。

以下是叶绿体的常见分析方法：2.1 原位荧光标记法通过在叶绿体上标记荧光染料可以观察到叶绿体的运动轨迹和分布情况。

该方法操作简单，但对叶绿体数量有一定要求，不适合大规模使用。

2.2 融合蛋白质分析法利用融合蛋白质技术将叶绿体膜上的蛋白质与其他蛋白质融合在一起，可以通过蛋白质电泳等方法分析融合蛋白质的组成和含量等信息。

该方法对蛋白质的要求较高，但可以进行大规模生产。

2.3 代谢产物分析法通过分析叶绿体合成代谢产物的量和种类等信息，可以了解到叶绿体的代谢活动情况。

该方法可以通过色谱等方法进行分析，可以定量和定性分析代谢产物。

叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告

叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验⽬的：1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和⽅法2、熟悉荧光显微镜的使⽤⽅法，观察叶绿体的⾃发荧光和间接荧光实验原理：差速离⼼法⽤于分离⼤⼩不同的物体。

在差速离⼼中细胞器沉降的顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质⽹与⾼尔基体、醉后为核糖核蛋⽩复合体。

密度梯度离⼼法是⽤⼀定的介质在离⼼管内形成连续的密度梯度，将细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部，通过离⼼⼒的作⽤使细胞或细胞器分层、分离，最后不同密度的细胞或细胞器位于与⾃⾝密度相同的沉降区带中。

叶绿体是⼀种⽐较⼤的细胞器，利⽤差速离⼼即可分离收集，然后⽤密度梯度离⼼纯化，便可⽤于各种研究。

实验⽤品：新鲜菠菜、提取缓冲液、蔗糖溶液、0.01%吖啶橙、离⼼机、电⼦天平、荧光显微镜、剪⼑、研钵、移液管、漏⽃、滴管、10ml离⼼管实验步骤：1、选取新鲜嫩绿菠菜叶，去叶梗及粗脉，洗净擦⼲，称30克放于150ml 0.35M.Nacl溶液中2、将液、叶同装⼊组织捣碎机中，匀浆3-5分钟，转速5000r/min3、将匀浆⽤纱布（6层）过滤于500ml烧杯中4、取滤液4ml在1000r/min下离⼼2min5、取上层清液在3000r/min下离⼼5min（沉淀为叶绿体和细胞核混合物）6、将沉淀⽤2-3mlMnacl液悬浮7、取⼀滴悬液滴⽚，加盖玻⽚后显微镜下观察8、另取⼀滴悬液滴⽚，再滴加⼀滴0.01%吖啶橙染料，混匀，盖上盖玻⽚，在荧光显微镜下观察实验结果：普通显微镜下，叶绿体呈橄榄形，绿⾊，⾼倍镜下可看到基粒（深绿⾊⼩颗粒）。

荧光显微镜下，叶绿体⾃发荧光为“⽕红⾊”，次⽣荧光为“橘红⾊”分析与讨论：1、捣碎叶⽚式时时间不宜过长，否则会破坏叶绿体2、⽤荧光显微镜找到物象后，要先拍照后观察，因为荧光会逐渐变弱。

实验1 叶绿体的分离与荧光观察

中国海洋大学实验报告2019年 3 月30 日姓名杨慧慧学号17050031803 系年级海洋生命学院2017 专业生物技术科目细胞生物学实验上课时间周六12节题目实验一叶绿体的分离和荧光观察一、实验目的1.通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。

2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。

二、实验原理1.将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。

2.叶绿体的分离应在等渗溶液中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

3.因为叶绿体有自发荧光，因此用荧光显微镜进行观察。

三、实验用品1.材料：新鲜菠菜。

2.试剂：0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)。

3.器材：(1)主要设备: 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。

(2)小型器材: 烧杯, 量筒, 滴管, 刻度离心管, 纱布，无荧光载片和盖片。

四、实验步骤与方法一、叶绿体的分离与观察1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。

2.低速匀浆3~5min。

3.将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。

4.每组取滤液4ml，1000r/min下离心2min，弃去沉淀。

5.将上清液在3000r/min下离心5min，弃去上清液，沉淀即含叶绿体(混有部分细胞核)。

6.将沉淀用0.35mol/L NaCl溶液悬浮。

7.取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。

(1)在普通光镜下观察。

(2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。

(3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料, 加盖片后即可在荧光显微镜下观察。

二、菠菜叶手撕片观察轻轻撕取新鲜嫩菠菜叶的表皮，展平置于载玻片上，滴加1~2滴0.35mol/L NaCl溶液，加盖片后置显微镜下观察。

叶绿体的分离实验报告

一、实验目的1. 学习叶绿体的分离方法。

2. 观察叶绿体的形态和结构。

3. 了解叶绿体在植物细胞中的分布。

二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，主要分布在植物的叶片细胞中。

叶绿体含有叶绿素等色素，能够吸收光能并将其转化为化学能。

本实验通过研磨植物叶片，利用叶绿体在水中溶解度低、在丙酮中溶解度高的特性，将叶绿体从细胞中分离出来。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜叶）。

2. 实验仪器：研钵、研杵、蒸馏水、丙酮、载玻片、盖玻片、显微镜、酒精灯、镊子等。

四、实验步骤1. 取新鲜植物叶片，用剪刀剪成小块。

2. 将叶片放入研钵中，加入适量蒸馏水。

3. 用研杵充分研磨叶片，使细胞破裂，叶绿体释放出来。

4. 将研磨液过滤，去除叶片碎片。

5. 取少量过滤液，加入等体积的丙酮，充分混合。

6. 静置一段时间，待叶绿体在丙酮中沉淀。

7. 用镊子取出沉淀，滴在载玻片上。

8. 将载玻片放在显微镜下观察叶绿体的形态和结构。

五、实验结果与分析1. 观察到载玻片上的叶绿体呈绿色，呈扁平的椭球形或球形。

2. 叶绿体在显微镜下具有明显的网状结构，其中包含类囊体、叶绿素等成分。

3. 通过比较实验前后叶绿体的形态和结构，可以判断叶绿体在植物细胞中的分布。

六、实验讨论1. 实验过程中，为什么加入丙酮可以使叶绿体沉淀？答：叶绿体在水中溶解度低，在丙酮中溶解度高，加入丙酮可以使叶绿体从溶液中沉淀出来。

2. 实验过程中，为什么研磨叶片时需要加入蒸馏水？答：蒸馏水可以破坏细胞结构，使叶绿体释放出来，同时保持实验液的清洁。

3. 实验过程中，为什么需要过滤研磨液？答：过滤可以去除叶片碎片，保证实验结果的准确性。

4. 实验过程中，为什么需要观察叶绿体的形态和结构？答：通过观察叶绿体的形态和结构，可以了解叶绿体的基本特征，进一步了解其在植物细胞中的分布和功能。

七、实验结论本实验成功分离出植物叶片中的叶绿体，并观察到叶绿体的形态和结构。

叶绿体的荧光染色与观察

姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目叶绿体的分离与荧光观察【实验题目】叶绿体的分离与荧光观察【实验目的】1、通过对植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。

2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光3、熟悉荧光显微镜的使用方法。

【实验材料与用品】1. 器材：离心机、组织捣碎机、天平、荧光显微镜、烧杯、量筒、胶头滴管、刻度离心管六层纱布，载玻片、盖玻片等2. 材料：新鲜菠菜3. 试剂：0.35 mol/L氯化钠溶液，0.01％吖啶橙(acridine orange)【实验原理】I.叶绿体分离的原理匀浆破碎细胞：利用差速离心方法分离等渗介质中的悬浮颗粒，收集类叶绿体大小的颗粒，得到叶绿体。

差速离心:颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。

在一给定的离心场中，同一时间内，密度和颗粒大小不同的颗粒其沉降速度也不同。

依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。

叶绿体的分离应在等渗溶液中进行（0.35mol/L氯化钠溶液或0.4mol/L蔗糖溶液），以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

分离过程最好在0-5℃条件下进行：如果在室温下，要姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目叶绿体的分离与荧光观察迅速分离和观察。

II.差速离心特点：介质密度均一，速度由高到低，逐级离心；用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器；沉降顺序：核---线粒体---溶酶体和过氧化物酶体---内质网与高尔基体---核蛋白体，可将细胞器初步分离，常需要进一步通过密度梯度离心再进行分离纯化。

III.①荧光的概念光致发光：某些物质在照射下，吸收光能进入激发态，当从激发态回到基态时，可以以电磁辐射的形式释放出吸收的光能，这种现象称为“光致发光”。

紫外辐射、可见光以及红外辐射均可引起光致发光，如磷光和荧光。

(整理)细胞生物学实验指导

细胞生物学实验指导西北农林科技大学生命科学学院细胞生物学教研室二00九年十月实验一叶绿体的分离与荧光观察一. 实验目的1. 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法.2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法.二. 实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。

叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体到损伤。

将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。

然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。

分离过程最好在0~5℃的条件下进行，如果在室温下，要迅速分离和观察。

某些物质在一定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就称为荧光。

若停止供能，荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧光），如叶绿素的火红色荧光。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。

本实验利用荧光显微镜对发荧光的叶绿体进行观察。

利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时,将受到许多因素的影响,如温度,光,淬灭剂等。

因此在荧光观察时应抓紧时间, 有必要时立即拍照。

另外,在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。

三. 实验用品1.器材： 1）主要设备: 普通离心机,粗天平,荧光显微镜；2）小型器材: 剪刀，研钵，移液管，漏斗，滴管, 10ml刻度离心管,纱布若干, 无荧光载玻片和盖玻片。

2.材料：新鲜菠菜。

3.试剂： 0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange).0.01%吖啶橙的配制：称取0.1g吖啶橙加蒸馏水100ml做干液，贮棕色瓶，置4℃冰箱保存。

叶绿体的分离与观察

叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在1000r/min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000r/min离心，可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。为了保护细胞组分的活性，全部操作过程应在0℃~4℃下进行，试剂应置冰箱预冷备用。如果在室温下进行分离要迅速。
2、利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆，3~5min。
3、将匀浆用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中。
4、取滤液4mL在1000r/min下离心2min，弃去沉淀。
5、将上清液在3000r/min下离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）。
6、沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。
7、取叶绿体悬液1滴置于载玻片上，加盖玻片后在普通光学显微镜下观察。
二、菠菜叶手切片观察
用刀片将新鲜的嫩菠菜叶切一斜面置于载玻片上，滴加1~2滴0.35mol/L NaCl溶液，加盖玻片后轻压，置显微镜下观察。
实验结果
一、叶绿体的分离与观察：在显颗粒－基粒。
实验用品
一、仪器
1．主要设备：普通离心机、组织捣碎机、普通光学显微镜。
2．500ml烧杯2个，250ml量筒1个，滴管10支，10ml刻度离心管20支，纱布若干，载玻片、盖玻片、刀片等。
二、材料：新鲜菠菜
三、试剂：0.35mol/L NaCl溶液
实验方法
一、叶绿体的分离与观察
1、选取新鲜的菠菜嫩叶，洗擦干后去除叶梗及粗脉，称3g于150mL 0.35mol/L氯化钠溶液中，装入组织捣碎机中。

叶绿体分离的实验原理和注意事项

叶绿体分离实验是一种常用于分离植物细胞中叶绿体的实验方法。

其原理是利用离心力将细胞中的不同组分分离开来。

实验步骤如下：
1.从植物组织中取出细胞。

可以用机械方法或酶解法将细胞分离出来。

2.用生理盐水或低渗溶液将细胞悬浮。

3.加入一定浓度的离心缓冲液，使细胞悬浮液达到适当的密度。

4将悬浮液放入离心机，在低速下离心，使细胞沉淀到离心管底部。

5.将上清液吸出，重复离心步骤，直到获得较纯的叶绿体。

实验注意事项：
1.离心速度和时间要控制好，一般离心速度为2000-4000 rpm，离心时间为5-10分钟。

2.离心缓冲液的选择要根据所分离的细胞种类和实验要求而定。

3.在实验过程中，要注意无菌操作，避免细菌和其他微生物的污染。

4.分离后的叶绿体要及时处理和储存，以免受到氧化和光照等因素的影响。

细胞生物学课后练习题及答案

实验一细胞膜的渗透性一、实验目的了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

二、实验原理将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。

由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。

三、实验用品一、器材50ml 小烧杯，10ml 移液管,试管（1—10cm），试管架。

二、试剂0.17mol/L 氯化钠、0.17mol/L 氯化铵、0.17mol/L 醋酸胺、0.17mol/L 硝酸钠、0.12mol/L 草酸铵、0.12mol/L 硫酸钠、0.32mol/L 葡萄糖、0.32mol/L 甘油、0.32mol/L 乙醇、0.32mol/L丙酮。

三、材料鸡血四、实验方法一、鸡血细胞悬液取50ml 小烧杯一只，加1 份鸡血和10 份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。

二、低渗溶液取试管一支，加入10ml 蒸馏水，再加入1ml稀释的鸡血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。

三、羊红细胞的渗透性1、取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml 稀释的鸡血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？2、取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml 稀释的鸡血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。

3、分别在另外8 种等渗溶液中进行同样实验。

步骤同2。

五、实验结果将观察到现象列入下表，对实验结构进行比较和分析。

六、思考题：1.在进行本实验时，你观察到的是一些细胞的碎片，而不是完整的细胞，请问是什么原因导致的？2.都是等渗溶液，为什么不同溶液的摩尔浓度不一样？实验二烟草愈伤组织的诱导与增殖（培养基配制、外植体的处理与愈伤组织的诱导）（设计、开放性实验）一、实验目的与意义掌握利用叶片作为外植体进行无性繁殖的方法。

分离叶绿体实验的原理

分离叶绿体实验的原理
分离叶绿体实验的原理如下：
叶绿体是植物细胞中的一种细胞器，其中含有叶绿素和其他与光合作用相关的分子。

分离叶绿体实验的目的是通过破碎植物细胞来分离提取叶绿体，以便进一步研究其结构和功能。

分离叶绿体的实验步骤如下：
1. 准备适当的植物材料：选择新鲜健康的植物叶片作为原料，如菠菜、苋菜等，这些植物叶片的叶绿体含量较高。

2. 酶解细胞壁：将植物叶片放入冷却的酶解液中，酶解液中含有细胞壁酶，可以分解细胞壁，使细胞释放叶绿体。

3. 离心分离：经过酶解后，用离心机将悬浮在液体中的细胞碎片和未酶解的大块组织残渣离心沉淀，离心过程中叶绿体由于其密度较大而沉淀到离心管的底部。

4. 去除上清液：倒掉上清液，只保留沉淀中的叶绿体。

5. 洗涤：向沉淀中加入适量的洗涤液，轻轻搅拌混合，然后再次离心沉淀，以去除残留的细胞碎片和其他杂质。

6. 叶绿体收集：再次去除上清液，只保留沉淀中的叶绿体。

分离叶绿体实验的关键是利用离心力将叶绿体从其他细胞组成
的混合物中分离出来。

由于叶绿体的密度较大，因此在离心过程中能够沉淀到离心管的底部。

通过多次离心和洗涤可以进一步净化所得的叶绿体。

分离得到的叶绿体可以用于进一步的实验研究，比如研究光合作用的机制、叶绿体膜的结构和功能等。

叶绿体分离与荧光染色观察

组织碎片
叶绿体经激发光波照射后，自叶绿体次生荧光的来由, 结普通光学显微镜下观察到发荧光呈现火红色，因叶绿体橘红色为叶绿体的荧光
果叶绿体的正常结构。离心在其悬液中呈现点状均匀分效果，叶绿体的悬液中混
分不纯导致混有其他组织碎布，且悬液其他组分无自发荧有的细胞核碎片中的核
析片
光反应,故观察到斑状分布的酸经丫啶橙染色荧光反
火红色荧光效果
应呈现绿色
六．思考与讨论
1.注意事项 (１）要得到完整的、有活性的叶绿体,须在低温下迅速提取,涂片后立即观察,注意离心时的
时间及强度。
(２）利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察室，会收到许多因素的影响,如温度、光、淬灭剂等。因此在进行荧光观察时应抓紧时间,必要时应立即拍照。
(３）在制作荧光显微标本时最好使用物荧光载玻片、无荧光盖玻片香柏油。 2．思考题（１)在荧光显微镜下观察叶绿体的自发荧光时，更换滤片系统，叶绿体的颜色是否有变化? 有变化。因为叶绿体的颜色取决于发出荧光能量的高低，更换不同的滤片,激发光会不同，叶绿体得到和辐射的能量就会不同，颜色也就会不一样（２)游离的叶绿体和完整细胞内的叶绿体，在荧光显微镜下，颜色和荧光强度有无区别，为什么? 有区别。因为完整细胞内的叶绿体还要进行光合作用，这会消耗掉一部分所吸收的光,所以最后释放的荧光能量就会比游离核糖体所释放的小,颜色和荧光强度就会有差别。 (3）根据观察到的实验现象，简述自发荧光和次生荧光的区别？自发荧光指不需染色，只需在激发光照射下即可发荧光的现象，而次生荧光需要染色。因为发光机制不同，所用的滤光片也会不同，最后发出的荧光颜色也会不同。（4)叶绿体分离的原理是什么?操作过程应注意什么？采用的方法是差速离心法，利用不同颗粒大小、形状不同导致沉降速率不同,把叶绿体大小的颗粒沉降出来。叶绿体的分离应在等渗溶液（０．３5mol/L 氯化钠或０.4mol/Ｌ蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤;分离过程最好在０～4℃的条件下进行;如果在室温下，要迅速分离和观察。 3.实验小结

叶绿体分离原理

叶绿体分离原理
叶绿体分离是一种通过物理和化学方法将植物细胞中的叶绿素和其他叶绿体成分分离出来的技术。

叶绿体是植物细胞中负责光合作用的细胞器，其中包含许多的叶绿素，其特征是在可见光区域能够吸收光线。

叶绿体分离的基本原理是利用不同物质在溶液中的化学性质和物理性质的差异来实现分离。

一种常用的方法是离心分离法，利用离心力将细胞破碎后的混合物分为不同的层次。

通过离心分离可以将叶绿体从其他细胞组分中分离出来。

叶绿体分离的另一种常用的方法是差速离心法。

差速离心法通过调整离心的速度和时间，利用叶绿体在离心过程中的沉降速度差异来实现分离。

由于叶绿体比其他细胞组分更重，所以在离心过程中会首先沉降到离心管底部形成沉淀，然后可以通过吸管或者倾倒的方式将叶绿体提取出来。

此外，叶绿体在化学性质上与其他细胞组分也有所差异，可以利用这一点实现分离。

例如，叶绿体可以利用高碘酸盐溶液中一氧化碳的亲和性，将叶绿体从其他细胞组分中分离出来。

也可以利用叶绿体在高温下耐受性较强的特点，通过高温处理将叶绿体分离出来。

总之，叶绿体分离是一种通过物理和化学方法将植物细胞中的叶绿体分离出来的技术。

通过离心分离、差速离心、化学亲和性等方法，可以将叶绿体从其他细胞组分中有效地分离出来，从而进一步研究叶绿体的结构和功能。

实验五叶绿体的分离与荧光观察

实验五叶绿体的分离与荧光观察
一. 实验目的
• 1 ．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途
• 2 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。
二实验原理
• 采用差速离心分离细胞器；
– 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体；
• 2．材料
– 新鲜菠菜叶
• 3．试剂
– 氯化钠溶液
四、实验方法
• （一）叶绿体的分离与观察 1. 取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 2. 加入氯化钠溶液，共150ml，研磨，制成匀浆； 3. 将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中； 4. 取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清； 5. 上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体； 6. 加氯化钠溶液悬浮沉淀； 7. 取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片： 8. 普通光镜下观察；荧光显微镜下演示 • （二）菠菜叶徒手切片观察 • 新嫩菠菜叶斜切面１片，氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：光镜下观察叶绿体
在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。
五实验结果与分析
• 1．简述：叶绿体的分离原理和方法； • 2 ．绘图：菠菜叶肉细胞的形态，显示叶绿
体。
The End
谢谢您的聆听！
期待您的指正！
• 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 • 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察其形态
和分布；
Differential centrifugation
High speed
Low speed
Hale Waihona Puke 、实验用品• 1．器材– 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片

叶绿体分离的实验原理

叶绿体分离的实验原理
叶绿体分离的实验原理主要基于叶绿体与其他细胞组织之间的差异性。

叶绿体是植物细胞中的一种细胞器，它包含叶绿素并参与光合作用。

在实验中，研究人员利用细胞质中叶绿体与其他细胞组织的生理和结构特点不同的特性，通过一系列操作将叶绿体从细胞中分离出来。

通常使用的分离叶绿体的实验方法主要包括以下步骤：
1. 提取细胞质：将待研究的植物材料（如叶片）经过初步处理，如切碎、研磨等，使细胞释放出细胞质。

2. 离心分离：通过离心将研磨后的细胞悬浮液进行离心分离，使得叶绿体和其他细胞组织分别沉淀到不同的位置。

3. 退色：为了清除其他颜色物质的干扰，通常会进行退色处理。

这一步中，可以使用某些化学物质（如酸化铁铵等）来吸附其他颜色物质。

4. 溶解其他细胞组织：使用适当的缓冲溶液和离心的方法将悬浮液中的其他细胞组织溶解掉，从而得到含有纯净叶绿体的溶液。

5. 纯化叶绿体：根据叶绿体与其他细胞组织的密度差异，可以通过密度梯度离心的方法将叶绿体进一步纯化。

通过这些步骤，可以将叶绿体从植物细胞中分离出来，得到纯
净的叶绿体悬浮液，用于进一步的研究和分析。

这一实验方法为研究叶绿体的结构、功能以及相关生理过程提供了重要手段。

叶绿体分离的原理

叶绿体分离的原理
叶绿体分离的原理是基于叶绿体的特殊性质和细胞分离的技术。

叶绿体是植物细胞中的特殊细胞器，具有独特的叶绿素色素和其他光合作用所需的酶系统。

通过叶绿体分离，可以获得高纯度的叶绿体提取物，用于研究和应用。

叶绿体分离的步骤通常包括以下几个关键的操作：
1. 细胞破碎：首先要将植物组织碾磨或切割，使细胞破碎，释放叶绿体。

这个过程可以通过离心来促进细胞破碎。

2. 离心分离：将细胞破碎液进行离心，以分离固体细胞碎片和液体部分。

在离心的过程中，叶绿体会因为其较大的密度和体积而沉降到离心管的底部。

3. 悬浮液清洗：将沉降的叶绿体上清液倒掉，并用含有缓冲液的悬浮液重新悬浮叶绿体沉淀。

4. 二次离心：再次进行离心，以去除悬浮液中的其他细胞碎片和杂质。

此步骤可重复多次，以获得更纯净的叶绿体。

5. 最终悬浮液：将悬浮液中的叶绿体上清液收集起来，即可得到高纯度的叶绿体提取物。

需要注意的是，叶绿体分离的过程中要注意保持低温和光照条件，以避免叶绿体的损伤和色素的氧化。

另外，选择合适的缓冲液和悬浮液对于分离纯化叶绿体也非常重要。

细胞生物学实验指导

实验三叶绿体的分离与荧光观察【实验目的】1、通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法.2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法.【实验原理】将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。