核酸和蛋白质分析技术
蛋白和核酸的分离方法
蛋白和核酸的分离方法1. 引言蛋白质和核酸是生物体内两种重要的生物大分子，它们在细胞的功能调控、遗传信息传递以及疾病发生发展等方面起着关键作用。
对于研究它们的结构、功能和相互作用，需要将其从复杂的细胞或组织中分离出来。
本文将介绍几种常用的蛋白质和核酸的分离方法。
2. 蛋白质分离方法2.1 离心法离心法是一种简单且常用的蛋白质分离方法。
通过利用不同蛋白质在离心过程中的沉降速度差异，可以将它们从混合物中分离出来。
一般情况下，使用超速离心机进行操作。
2.2 凝胶电泳法凝胶电泳法是一种基于蛋白质电荷和大小差异进行分离的方法。
常见的凝胶电泳有聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。
•SDS-PAGE：通过添加表面活性剂SDS使蛋白质带有负电荷，然后根据蛋白质的大小差异进行分离。
•PAGE：不添加SDS，根据蛋白质的电荷和大小差异进行分离。
2.3 柱层析法柱层析法是一种基于蛋白质在柱子中各种填料上的相互作用差异进行分离的方法。
常见的柱层析方法有：•尺寸排除层析：根据蛋白质的大小差异进行分离。
•亲和层析：利用特定配体与目标蛋白之间的特异性结合进行分离。
•离子交换层析：根据蛋白质与填料之间的电荷差异进行分离。
3. 核酸分离方法3.1 酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的核酸提取方法，适用于从细胞或组织中提取总核酸。
其原理是利用酚和氯仿形成两相体系，使DNA或RNA从水相转移到有机相中，然后通过离心将核酸从有机相中分离出来。
3.2 硅胶柱层析法硅胶柱层析法是一种常用的核酸纯化方法。
通过将混合样品加入硅胶柱中，利用核酸与硅胶之间的亲和力差异进行分离。
根据不同的条件和方法，可以选择性地分离DNA或RNA。
3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法也可以用于核酸的分离。
与蛋白质的凝胶电泳类似，通过电场作用下核酸在凝胶中的迁移速率差异进行分离。
4. 结论蛋白质和核酸的分离是生物学、生物化学等领域研究的基础工作。
核酸、蛋白检测项目
核酸、蛋白检测项目标题：核酸和蛋白检测项目一、引言在生物医学领域，核酸和蛋白的检测是研究的重要部分。
它们不仅提供了生命现象的基础信息，而且也是诊断和治疗各种疾病的关键工具。
本文将详细介绍核酸和蛋白检测的相关知识及其应用。
二、核酸检测项目核酸（DNA和RNA）是生命体的遗传物质，它们携带了生命体的所有遗传信息。
通过分析核酸序列，我们可以了解生物体的基因型，预测其表型，并且可以用于疾病的诊断和治疗。
1. DNA测序：这是最直接的核酸检测方式，通过对DNA进行测序，可以获取个体的完整遗传信息。
2. PCR技术：PCR是一种用于扩增特定DNA片段的技术，常用于病毒或肿瘤基因的检测。
3. RNA-seq：这是一种高通量的RNA测序技术，可以全面了解细胞中基因表达的情况。
三、蛋白检测项目蛋白质是生命的执行者，它们负责完成所有的生理功能。
通过检测蛋白质的表达和活性，我们可以了解生物体的功能状态，以及疾病的发生和发展过程。
1. Western blot：这是一种常用的蛋白检测技术，可以定量和定性地检测特定蛋白质的存在和表达水平。
2. ELISA：这是一种高度敏感和特异的蛋白检测方法，常用于检测血液中的抗体或抗原。
3. 蛋白质组学：这是一种系统性的蛋白检测方法，可以全面了解细胞中所有蛋白质的状态。
四、结论核酸和蛋白的检测在生物医学研究和临床实践中具有重要价值。
随着科技的进步，我们有越来越多的方法来精确地检测核酸和蛋白，这些技术的发展无疑会推动我们的科研和医疗工作更上一层楼。
五、参考文献[此处列出相关的参考文献]注：以上内容仅供参考，具体操作应根据实际需求和实验室条件进行。
核酸与蛋白质序列分析
光学测序技术利用光信号的变化来检测DNA或RNA序列， 具有高分辨率和高灵敏度等优点，是未来测序技术的重要 发展方向。
人工智能在序列分析中的应用
序列比对
人工智能算法能够快速准确地比对新序列与已知序列之间的相似 性和差异性，有助于发现新的基因和变异。
结构预测
人工智能可以预测蛋白质的三维结构，有助于理解蛋白质的功能和 相互作用机制Maxam-Gilbert和Sanger的DNA测序方法，以及 primer extension method等。这些方法可以提供核酸序列 的精确信息，但通量较低。
下一代测序（NGS）
随着技术的发展，出现了高通量的下一代测序技术，如 Illumina、SOLiD、Ion Torrent和PacBio等。这些技术可以 同时测定大量核酸序列，大大提高了测序速度和通量。
诊断标志物筛选
基于蛋白质序列分析，筛选与疾病相关的生物标志物，用于疾病的早期诊断和预后评估。
04
序列分析的挑战与未来发展
高通量测序技术的局限性
成本高昂
01
尽管高通量测序技术已经显著降低了测序成本，但仍相对昂贵，
限制了其在某些领域的应用。
数据解读难度大
02
高通量测序产生的数据量庞大，需要专业的生物信息学分析方
顺序。
酶降解法
利用特定的酶将蛋白质分解为肽段， 再测定各肽段的氨基酸序列。
自动测序法
利用特定的仪器自动进行蛋白质的 测序，如质谱仪和液相色谱仪等。
蛋白质的变异与修饰
基因突变
由于基因突变导致蛋白质合成过程中出现氨基酸 替换或缺失，从而影响蛋白质的功能。
磷酸化
蛋白质上的特定氨基酸残基被磷酸化，影响蛋白 质的活性、定位和稳定性。
蛋白质含量和核酸含量的测定
• 仪器： 仪器： • 试管及试管架、吸 试管及试管架、 量管、分光光度计、 量管、分光光度计、 分析天平、震荡机、 分析天平、震荡机、 刻度吸管、 刻度吸管、100ml 具塞三角瓶、 具塞三角瓶、漏斗
• 试剂： 试剂： • 双缩脲试剂 • 1. 标准蛋白溶液 • 两种浓度的结晶牛血清 白蛋白溶液(BSA)。 白蛋白溶液(BSA)。 • 2. 待测蛋白质溶液 • 人血清（稀释适当倍数， 人血清（稀释适当倍数， 使其浓度在标准曲线测试 范围内。 范围内。 • 0.05mol/L的NaOH溶液 的 溶液
• 仪器： 仪器： • 凯氏烧瓶500ml、 可 凯氏烧瓶 、 调式电炉、蒸汽蒸馏 调式电炉、 装置、 铰肉机Π 装置、 铰肉机 蓖孔 径不超过4nm、 组 径不超过 、 • 织捣碎机、 粉碎机、 织捣碎机、 粉碎机、 研钵Π 玻璃或瓷质、 研钵 玻璃或瓷质、 化学消化器、 化学消化器、 • 凯氏定氮仪、 空气： 仪器： • 200ug/ml的牛血清白蛋白 的牛血清白蛋白 • v-1100分光光度计、 分光光度计、 分光光度计 溶液、碱性硫酸铜（ 溶液、碱性硫酸铜（当日 恒温水浴箱、试管及 恒温水浴箱、 有效）、 ）、Fu-lin酚试剂 有效）、 酚试剂 试管架、 试管架、加样枪及加 样试架、 样试架、坐标纸
• 仪器： 仪器： • 紫外分光光度计、吸量 紫外分光光度计、 试管和试管架、 管、试管和试管架、移 液枪 • 试剂： 试剂： • 1mg/ml的牛蒡血清白蛋 的牛蒡血清白蛋
• 白溶液、 浓度为 白溶液、 浓度为1mg/ml 左右的蛋白溶液、 左右的蛋白溶液、
四、酚试剂法
• 原理：Folin-酚试剂由试剂A和试剂B两部分组成。在 原理：Folin-酚试剂由试剂A和试剂B两部分组成。 Folin-酚试剂法中， Folin-酚试剂法中，蛋白质中的肽键首先在碱性条件下与 酒石酸钾钠-铜盐溶液（试剂A 酒石酸钾钠-铜盐溶液（试剂A）起作用生成紫色络合物 类似双缩脲反应）。由于蛋白质中酪氨酸、 ）。由于蛋白质中酪氨酸 （类似双缩脲反应）。由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸的存 该络合物在碱性条件下进而与试剂B 在，该络合物在碱性条件下进而与试剂B（磷钼酸和磷钨 硫酸、溴等组成）形成蓝色复合物， 酸、硫酸、溴等组成）形成蓝色复合物，其呈色反应颜色 深浅与蛋白质含量成正比。通过比色测定， 深浅与蛋白质含量成正比。通过比色测定，参照已知含量 的标准蛋白质的标准曲线，可确定待测样品的蛋白质含量。 的标准蛋白质的标准曲线，可确定待测样品的蛋白质含量。 本法可测定蛋白质含量的范围在25 250μg/mL。 25～ 本法可测定蛋白质含量的范围在25～250μg/mL。由于不 同蛋白质所含酪氨酸和色氨酸残基的量不同， 同蛋白质所含酪氨酸和色氨酸残基的量不同，致使等量的 不同蛋白质所显示的颜色深度不尽一致，产生误差。 不同蛋白质所显示的颜色深度不尽一致，产生误差。如果 所用溶液或样品中含有带“ CO-NH2”、 CH2所用溶液或样品中含有带“-CO-NH2”、“-CH2-NH2” 、 CS-NH2”基团的化合物 基团的化合物， “-CS-NH2”基团的化合物，或者溶液或样品中含有氨基 Tris、核酸、蔗糖、硫酸铵、巯基及酚类等化合物时， 酸、Tris、核酸、蔗糖、硫酸铵、巯基及酚类等化合物时， 会给本方法的测定带来干扰。磷钼酸会给本方法的测定带来干扰。磷钼酸-磷钨酸试剂 Folin-酚试剂B 仅在酸性条件下稳定， （Folin-酚试剂B）仅在酸性条件下稳定，而蛋白质的显 色反应需在pH10的环境中进行，因此当试剂B pH10的环境中进行 色反应需在pH10的环境中进行，因此当试剂B加入后应当 立即充分混匀，以便在磷钼酸立即充分混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前与 蛋白质发生显色反应，这对于结果的重现性非常重要。 蛋白质发生显色反应，这对于结果的
蛋白质核酸沉淀分离技术
优点
操作简便，成本低。
缺点
分辨率较低，只能分离一种核酸。
聚合物沉淀法
原理
利用高分子聚合物将核酸从蛋白质等其他细胞组分中沉淀 出来。
优点
操作简便，对设备要求不高。
步骤
将细胞破碎后的混合物加入离心管，然后加入聚合物溶液 ，进行离心或搅拌，核酸会与聚合物结合形成沉淀，而蛋 白质等其他组分则留在上清液中。
将细胞破碎后的混合物加入离 心管，然后加入氯化铯溶液， 形成密度梯度，进行离心，核 酸会沉降到管底，而蛋白质等 其他组分则浮在上方。
分辨率高，可同时分离多种核 酸。
操作复杂，需要精密的设备。
密度梯度离心法
原理
利用连续的密度梯度将核酸与蛋白质等其他细胞组分分开。
步骤
将细胞破碎后的混合物加入离心管，然后加入密度梯度介质，进行离 心，核酸会沉降到管底，而蛋白质等其他组分则浮在上方。
样品特性
考虑样品的性质和组成，如蛋白质和核酸的分子 量、电荷密度和溶解度等。不同分离方法对不同 特性的蛋白质和核酸的分离效果可能有所不同， 因此需要根据实际情况进行选择。
实验条件
考虑实验室的条件和资源，如设备、空间和预算 等。如果实验室具备离心机和适当的离心管，则 可以选择离心法；如果实验室空间较为紧张，则 可能需要选择操作更为简便的方法。
总结词
其他不常用的蛋白质沉淀分离技术。
详细描述
除了上述三种常用的蛋白质沉淀分离技术外，还有一些不常用的蛋白质沉淀分离技术，如等电点沉淀 法、金属离子沉淀法、免疫沉淀法等。这些方法各有特点，但使用时需根据具体情况选择合适的分离 技术。
03
核酸沉淀分离技术
氯化铯不连续梯度离心法
原理
步骤
蛋白质和核酸相互作用的研究和应用
蛋白质和核酸相互作用的研究和应用蛋白质和核酸是生命体中不可或缺的两种分子。
蛋白质是生命体内众多生物分子中最为普遍的一类，同时也是功能最为多样化的一类生物分子。
核酸则是生命体内遗传物质的主要组成部分。
蛋白质和核酸之间的相互作用一直是生命科学领域中的一大研究热点。
本文将从生物学、化学、生物医学和生物技术等多个角度对蛋白质和核酸之间的相互作用进行探讨。
一、蛋白质和核酸之间的结合生命体内的大部分功能都是由蛋白质和核酸之间的相互作用完成的。
蛋白质和核酸之间的相互作用主要包括直接作用和间接作用两种形式。
直接作用是指蛋白质和核酸之间的物理力相互作用，如静电作用、范德华力、羟基和氨基间的氢键等力。
间接作用则是指蛋白质通过一些其他分子来与核酸进行相互作用，如转录因子、调节蛋白等。
直接作用和间接作用在生命体内的各种生物过程中都起着至关重要的作用。
蛋白质和核酸之间的作用与它们的结构密切相关。
大多数蛋白质和核酸都具有特定的三维结构，这种结构与生命体内各种生物过程的功能密切相关。
蛋白质和核酸的结构与它们之间的相互作用有着密不可分的联系，两者之间的作用会随着结构的改变而发生变化。
二、蛋白质和核酸相互作用的生物学意义蛋白质和核酸之间的相互作用在生物学上具有非常重要的意义。
这种相互作用常常被用来实现生物体内各种生物过程的调节和控制。
例如，许多转录因子是一类可以与DNA结合并实现基因转录调控的蛋白质。
这些蛋白质通过与DNA的结合，可以进而影响DNA上的相应基因的表达，实现对基因转录和表达的调节。
此外，蛋白质和核酸之间的相互作用也是DNA复制、DNA修复、RNA翻译等生物过程的重要组成部分。
三、蛋白质和核酸相互作用的化学基础蛋白质和核酸之间的相互作用在化学上的基础主要是它们在分子水平上的相互作用。
蛋白质和核酸分子之间的相互作用是由不同的化学基团之间的相互作用引起的。
这些化学基团包括胺基、羧基、磷酸基、硫醇基等。
在蛋白质和核酸之间的相互作用中，蛋白质分子通常会与DNA分子之间的磷酸二酯键进行相互作用。
大分子物质分析技术在生命科学中的应用
大分子物质分析技术在生命科学中的应用随着科技的不断发展，大分子物质分析技术正逐渐成为生命科学领域不可或缺的工具之一。
这一类技术以其高效、准确、精细的特点，广泛应用于生物分子的鉴定、定量、分离和纯化，从而为生命科学领域的研究提供了重要的支持和保障。
一、核酸分析大分子物质分析技术在核酸分析中的应用较为广泛，其中最常见的是聚合酶链式反应（PCR）。
通过PCR技术，我们可以在极短的时间内扩增一定数量的DNA序列，从而迅速获取特定DNA序列的信息。
另一个核酸分析的常用工具是凝胶电泳，它可以将DNA片段按照大小分离出来，并通过荧光染料进行检测。
通过这些技术的使用，我们可以获得DNA分析的多项信息，包括碱基序列、长度和纯度等。
二、蛋白质分析大分子物质分析技术在蛋白质分析中的应用也非常广泛，其中较为常见的技术是蛋白质电泳和质谱分析。
蛋白质电泳可以将蛋白质已经其不同的电荷数量和分子质量分离出来，从而提供一些蛋白质的基本信息。
而质谱分析则可以通过检测蛋白质裂解产生的离子，了解多肽序列、氨基酸残基数量和化学修饰等信息。
三、糖分析对于糖类生物分子的分析应用，大分子物质分析技术主要是使用花生四糖凝胶电泳（PAS-PEG）技术。
通过这一技术，我们可以分离出不同长度的糖链，从而了解糖骨架的结构和功能。
四、脂质分析脂质类生物分子非常复杂多样，它们参与了生物体内的许多重要生物过程，然而脂质类物质的分析通常是非常困难的。
大分子物质分析技术在脂质分析领域的应用并不多，主要的如高效液相色谱技术（HPLC），气相色谱技术（GC）和液相色谱技术（LC）。
通过这些技术的使用，我们可以对脂质分子的不同组成进行鉴定，获得其分子结构和动力学特性。
综上所述，大分子物质分析技术在生命科学领域的应用十分广泛。
通过这些技术的高效、准确、精细的特点，我们可以获得多项分析信息，从而深入了解生物分子的结构和功能，为生命科学领域的研究提供了重要的技术支持。
未来，随着分析技术的不断更新升级和技术的不断突破和创新，大分子物质分析技术在生命科学中的应用潜力将会越来越大，为我们揭示生物的奥秘提供更为有效的手段和方法。
核酸-蛋白质互作的生物化学研究方法
核酸-蛋白质互作的生物化学研究方法
核酸-蛋白质互作是生物学中一个重要的研究领域，它涉及到核酸和蛋白质之间的相互作用，以及它们在生物体中的功能。
研究这种相互作用的生物化学方法有很多，其中最常用的是蛋白质结构分析、核酸结合实验、蛋白质-核酸相互作用实验和蛋白质-核酸相互作用的分子模拟。
蛋白质结构分析是研究核酸-蛋白质互作的重要方法，它可以帮助我们了解蛋白质的结构和功能，以及它们与核酸之间的相互作用。
通常，蛋白质结构分析可以通过X射线衍射、核磁共振成像和计算机模拟等技术来实现。
核酸结合实验是另一种研究核酸-蛋白质互作的重要方法，它可以帮助我们了解核酸与蛋白质之间的相互作用。
通常，核酸结合实验可以通过紫外光谱、荧光光谱和电泳等技术来实现。
蛋白质-核酸相互作用实验是研究核酸-蛋白质互作的重要方法，它可以帮助我们了解蛋白质与核酸之间的相互作用。
通常，蛋白质-核酸相互作用实验可以通过紫外光谱、荧光光谱、电泳和质谱等技术来实现。
最后，蛋白质-核酸相互作用的分子模拟是研究核酸-蛋白质互作的重要方法，它可以帮助我们了解蛋白质与核酸之间的相互作用。
通常，蛋白质-核酸相互作用的分子模拟可以通过分子动力学模拟、分子对接和分子模拟等技术来实现。
总之，蛋白质结构分析、核酸结合实验、蛋白质-核酸相互作用实验和蛋白质-核酸相互作用的分子模拟是研究核酸-蛋白质互作的重要生物化学方法。
这些方法可以帮助我们了解核酸和蛋白质之间的相互作用，以及它们在生物体中的功能。
核酸蛋白序列比对分析
核酸\蛋白序列比对分析生物技术02级021402198 曾彪摘要生物信息学——是一门新兴的交叉学科，是采用计算机技术和信息论方法研究蛋白质及核酸序列等各种生物信息的采集、存储、传递、检索、分析和解读的科学，是现代生命科学与计算机科学、数学、统计学、物理学和化学等学科相互渗透而形成的交叉学科。
核酸与蛋白质序列分析是生物信息学的基本研究方法。
核酸与蛋白质序列分析是生物信息学的基本研究方法。
关键词核酸/蛋白质序列分析生物信息数据与查询序列比较DNA芯片质谱隐马尔可夫模型正文人类基因组计划完成了人类基因组的测序与分析工作，也积累了大量的核酸和蛋白质序列数据，从而导致了分子数据库的建立。
分子生物学家在此基础上依靠计算机进行核酸和蛋白质序列分析。
大量生物学实验的数据积累，形成了当前数以百计的生物信息数据库。
它们各自按一定的目标收集和整理生物学实验数据，并提供相关的数据查询、数据处理。
这些生物信息数据库可以分为一级数据库和二级数据库。
一级数据库的数据都直接来源于实验获得的原始数据，只经过简单的归类整理和注释；二级数据库是在一级数据库、实验数据和理论分析的基础上针对特定目标衍生而来，是对生物学知识和信息的进一步整理。
国际上著名的一级核酸数据库有Genbank数据库、EMBL核酸库和DDBJ库等；蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR等；蛋白质结构库有PDB等。
国际上二级生物学数据库非常多，它们因针对不同的研究内容和需要而各具特色，如人类基因组图谱库GDB、转录因子和结合位点库TRANSFAC、蛋白质结构家族分类库SCOP等等。
要在如此庞大的数据库中找到所需要的目标序列，必须建立数据库查询系统。
数据库查询（也称为数据库检索）是指对序列、结构以及各种二次数据库中的注释信息进行关键词匹配查找。
常用的数据库查询系统有Entrez, SRS等。
数据库搜索是指通过特定的序列相似性比对算法，找出核酸或蛋白质序列数据库中与检测序列具有一定程度相似性的序列。
211141468_信息分析技术在生物医学领域的应用分析——以核酸和蛋白质为例
信息分析技术在生物医学领域的应用分析——以核酸和蛋白质为例◎ 冯瑾毅（西北政法大学 陕西 西安 710122）摘要：信息分析技术与生物医学领域充分融合，产生了新兴交叉学科——生物信息学。
生物信息学广泛渗透于生物医学研究，为其提供了数据查找、数据处理、功能及结构预测等技术支持。
文章就生物信息学所研究的主要内容加以梳理，从核酸和蛋白质两个方向对现有使用较多的数据库及分析方法分类逐层进行整理分析，发现信息分析技术应用于生物医学领域研究中在信息检索的检全率与检准率、衍生疾病的预测、寻找制药靶点、新研究方向的探索等方面起到了积极的作用。
引言一、基因序列分析随着信息技术的快速发展，出现了多种交叉学科，生物医学与信息分析技术交叉就产生了生物信息技术。
该学科主要是使用信息分析的方法来解决及预测生物医学方面的问题。
现代生物学从摩尔根提出了染色体遗传理论开始，人类对于人类生命的密码子——基因的探索就从未停止。
从上世纪八十年代第一个基因序列数据库Genbank 搭建开始，各种核酸及蛋白质数据库层出不穷，标志着生物学与计算机学科的交汇。
到今天，两个学科已经深度融合，在生物医学的研究中起到了十分重要的作用，本文将从生物医学基础研究的核酸及蛋白质两个方面进行分析。
基因序列本身十分繁杂，存储着生物的全部遗传信息，内含子、外显子等各种片段相互交错，对已知序列的查找很难从纸质资料上获得，数据库的建立为人们查找已知的基因序列提供了十分便捷的渠道。
现在已有的核酸数据库有很多，比较有代表性的有Genbank、ENA、DDBJ，这三大数据库组成了合作联盟INSDC，且数据相互交换更新，是较为权威的核酸数据库。
在这个数据库中可以输入相关基因名称或编号，即可获得该基因的相关信息，包括其已知的外显子和内含子位置长度。
单纯的基因序列的比对比较容易实现，但是生物本身变异比较多，同种生物基因也不完全相同，在此基础上就需要做相似性分析，通过分析得出多条核酸序列相互之间可能存在的关系。
电泳和法的名词解释
电泳和法的名词解释电泳是一种常用的生物化学实验技术，用于分离和分析带电分子，特别是蛋白质和核酸。
它依靠分子在电场中的运动速度差异，通过电极将带电分子从一个位置移动到另一个位置，从而实现分离和分析的目的。
电泳的原理简单易懂，但其中涉及的一些名词和概念可能对初学者来说有些难以理解。
本文将对电泳和相关名词进行解释，以帮助读者更好地理解和应用这一实验技术。
首先，让我们来了解一下几个电泳中常见的概念。
首先是电势差，它是电场力作用下单位电荷所具有的能量。
电势差决定了带电粒子在电泳过程中的迁移速度。
在实际操作中，通常将电泳仪的两个电极上的电势差设定为一定值，以控制分离的速度和分辨率。
接下来是几个与电泳介质有关的术语。
电泳介质是带电分子在电泳过程中移动的媒介物质。
其中最常见的电泳介质包括凝胶和液相。
凝胶电泳是通过在电场中使凝胶凝聚而形成的分离介质，用于分离和纯化蛋白质和核酸。
凝胶的选择取决于目标分离物的大小和所需分辨率。
常见的凝胶包括聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶。
液相电泳是通过在溶液中加入一定浓度的电泳介质，利用分子之间的碰撞来实现分离和分析。
常见的液相电泳介质有聚丙烯酰胺凝胶和聚乙烯亚胺。
此外，还有一种新兴的电泳介质是皂微泡凝胶，它具有高分辨率和较快的分离速度。
在电泳过程中，我们经常听到两个与电泳有关的重要名词：阻力和迁移率。
阻力是带电粒子在电泳介质中受到的阻碍力。
它与带电粒子的大小、形状和电荷密度有关。
迁移率是带电粒子在单位电势差下的移动速度，通常用电场强度来表示。
迁移率是分析和比较不同带电粒子的重要指标，也是确定电泳条件的一个关键因素。
此外，电泳中还涉及到几个与分离效果和质量评价有关的名词。
首先是分离效果，它衡量电泳结果中不同离子带电粒子之间的分离程度。
分离效果主要通过两个指标来评价：分辨率和分离系数。
分辨率是在电泳结果中两个离子带电粒子之间的距离的度量，即在电泳过程中两个峰的间隔。
好的分辨率意味着能够清晰地分离不同离子带电粒子。
核酸和蛋白质序列分析
核酸和蛋白质序列分析在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信息，从而指导进一步的实验研究。
通过染色体定位分析、内含子／外显子分析、ORF分析、表达谱分析等，能够阐明基因的基本信息。
通过启动子预测、CpG岛分析和转录因子分析等，识别调控区的顺式作用元件，可以为基因的调控研究提供基础。
通过蛋白质基本性质分析，疏水性分析，跨膜区预测，信号肽预测，亚细胞定位预测，抗原性位点预测，可以对基因编码蛋白的性质作出初步判断和预测。
尤其通过疏水性分析和跨膜区预测可以预测基因是否为膜蛋白，这对确定实验研究方向有重要的参考意义。
此外，通过相似性搜索、功能位点分析、结构分析、查询基因表达谱聚簇数据库、基因敲除数据库、基因组上下游邻居等，尽量挖掘网络数据库中的信息，可以对基因功能作出推论。
上述技术路线可为其它类似分子的生物信息学分析提供借鉴。
本路线图及推荐网址已建立超级链接，放在北京大学人类疾病基因研究中心网站（htt p://gene.b .cn/science/b ioinfomati cs.htm）,可以直接点击进入检索网站。
下面介绍其中一些基本分析。
值得注意的是，在对序列进行分析时，首先应当明确序列的性质,是m RNA序列还是基因组序列？是计算机拼接得到还是经过PCR扩增测序得到？是原核生物还是真核生物？这些决定了分析方法的选择和分析结果的解释。
（一）核酸序列分析1、双序列比对（pai rwise alig nment）双序列比对是指比较两条序列的相似性和寻找相似碱基及氨基酸的对应位置，它是用计算机进行序列分析的强大工具，分为全局比对和局部比对两类，各以N eedleman-W unsch算法和Sm ith-Waterm an算法为代表。
由于这些算法都是启发式（heuristic）的算法，因此并没有最优值。
第六章、核酸与蛋白质序列分析2
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第六章、核酸和蛋白质序列分析
（2）SIM4：http://pbil.univ-lyon1.fr/sim4.php
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第六章、核酸和蛋白质序列分析
6、CpG岛分析
CpG岛，是指哺乳动物基因启动子及其附近大 量的CpG位点(CpG表示指C、G以磷酸基连接)。 事实上基因组中60%～ 90% 的CpG 都被甲基 化, 未甲基化的CpG 成簇地组成CpG 岛, 位于结 构基因启动子的核心序列和转录起始点。有实验 证明超甲基化阻遏转录的进行。
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第六章、核酸和蛋白质序列分析
7、终止信号分析
r.it/~webgene/wwwHC polya.html
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第六章、核酸和蛋白质序列分析
8、基因定位分析
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第六章、核酸和蛋白质序列分析
1、遮蔽重复序列
在进行任何真核生物序列的基因辨识分析 之前,最好把散布和简单的重复序列找出来并 从序列中除去。虽然这些重复序列可能正好覆 盖了由RNA聚合酶Ⅱ转录的部分区域，它们几 乎不会覆盖启动子和外显子编码区。这样，这 些重复序列的定位能为其它基因特征的定位提 供重要的反面信息。 重复序列还常常会搅乱其它分析，特别是 在数据库搜索中。
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第六章、核酸和蛋白质序列分析
• 功能位点（functional site）
-与特定功能相关的位点，是生物分子序列上的一个功能 单元，或者是生物分子序列上一个较短的片段。 • 功能位点又称为功能序列（functional
sequence）、序列模式（motif）、信号 （signal）等。
蛋白质与核酸的定性与定量实验方法资料
蛋白质与核酸的定性与定量一、实验目的1、学习和掌握纯化蛋白质的原理和方法、蛋白质等电点的测量原理和方法。
2、进一步掌握使用双缩脲法对蛋白质的定性测定、利用定糖法对核酸的定性与定量测定二、实验原理1、蛋白质的定性测定：双缩脲法，课本P992、蛋白质的定量测定：Folin-酚法，实验P193、核酸的定性与定量测定：定糖法，课本P131、4、蛋白质等电点的测量在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。
如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动，直至某一pH位点时失去电荷而停止移动，此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点（pl）。
同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它们的等电点上聚焦为止。
可见在该方法中，等电点是蛋白质组分的特性量度，将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中，在电场内经过一定时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上，形成分离的蛋白质区带pH梯度的组成pH梯度的组成方式有二种，一种是人工pH梯度，由于其不稳定，重复性差，现已不再使用。
另一种是天然pH梯度。
天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物，在正极端吸入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在负极端引入碱液，如氢氧化钠、氨水等。
电泳开始前两性电解质的混合物pH为一均值，即各段介质中的pH 相等，用pH0表示。
电泳开始后，混合物中pH最低的分子，带负电荷最多，pI1为其等电点，向正极移动速度最快，当移动到正极附近的酸液界面时，pH突然下降，甚至接近或稍低于PI1，这一分子不再向前移动而停留在此区域内。
由于两性电解质具有一定的缓冲能力，使其周围一定的区域内介质的pH保持在它的等电点范围。
pH稍高的第二种两性电解质，其等电点为pI2，也移向正极，由于pI2＞pI1，因此定位于第一种两性电解质之后，这样，经过一定时间后，具有不同等电点的两性电解质按各自的等电点依次排列，形成了从正极到负极等电点递增，由低到高的线性pH梯度。
蛋白质与核酸的相互作用分析方法研究
蛋白质与核酸的相互作用分析方法研究蛋白质与核酸是生命体的两个最基本的分子，它们之间的相互作用是维持细胞生命活动的必不可少的一环。
在细胞过程中，这些相互作用发挥着至关重要的作用，如基因表达、DNA复制、RNA转录等等。
近年来，随着技术的不断发展，蛋白质与核酸的相互作用成为生物学研究的热点之一，同时也是药物研发的重要领域之一。
一、X射线晶体学X射线晶体学是一种传统的分析方法，是分析蛋白质与核酸相互作用的重要手段之一。
该技术的原理是利用X射线穿过晶体散射出的衍射图像推算晶体结构，从而确定蛋白质与核酸相互作用的结构。
该技术的最大优点是能够确定高分辨率的结构，而且对于已有结构的验证也非常有效。
但是，该技术需要获取具有高结晶度的蛋白质与核酸复合物晶体，所以在实际应用中遇到的问题较多。
二、核磁共振核磁共振技术（NMR）在蛋白质与核酸相互作用的研究中也有广泛的应用。
该技术是利用核磁共振现象，对样品中的不同核自旋状态进行分析，从而确定分子结构、动力学和相互作用模式。
与X射线晶体学相比，核磁共振技术能够在溶液状态下进行实验，无需晶体结晶，因此可以对真实的生物分子进行研究。
此外，核磁共振技术还可以进行动态分析，了解相互作用的过程和动力学响应。
但是，核磁共振技术也存在一些限制，比如只能分析较小的蛋白质与核酸分子，同时也需要高灵敏度的探测器和标准化的实验条件。
三、生物分子间的荧光共振能量转移荧光共振能量转移（FRET）是一种通过观察荧光分子之间的能量转移来研究生物分子相互作用的技术。
该技术利用的是荧光变色基团之间的能量传递，从而确定双分子间的距离和结构。
FRET技术应用广泛，可以测量小到纳米级别的相互作用距离，可以研究低亲和力相互作用，如蛋白质-蛋白质、DNA-DNA和RNA-RNA等。
此外，该技术还可以在非结晶化条件下进行实验，因此具有很高的时间和空间分辨率。
尽管FRET拥有诸多优点，但依然存在一些限制，如荧光探针的标记需要特定的条件和标记位置的选择等问题。
生物大分子的表征和分析方法
生物大分子的表征和分析方法生物大分子是指分子量较大的生物物质，如蛋白质、核酸、多糖等。
这些大分子在生命体系中发挥着重要的生物学功能，因此对它们的表征和分析显得尤为重要。
下面将对生物大分子的表征和分析方法做简要介绍。
一、色谱法色谱法是生物大分子分析中常用的技术之一。
根据不同的分离原理和分离介质，可以分为凝胶过滤色谱、离子交换色谱、逆相高效液相色谱、超高速离子层析等多种方法。
其中，凝胶过滤色谱可以分离分子量较大的生物大分子，如蛋白质、多糖等；离子交换色谱可以对带电的生物大分子进行分离和纯化，如核酸、蛋白质等；逆相高效液相色谱则可以分离非极性的生物大分子。
这些方法可以有效地分离目标物质，并提供其组成和结构信息。
二、质谱法质谱法是一种直接测定目标物质分子量和结构的方法。
对于生物大分子，常用的质谱技术包括质谱成像技术、毛细管电泳-质谱联用技术、液质联用技术等。
其中，质谱成像技术可以在分子分布不均的生物组织中对单个分子进行分析；毛细管电泳-质谱联用技术可以对带电的生物大分子进行分析；液质联用技术则可以对生物大分子进行全面的化学组分分析。
三、核磁共振法核磁共振法是一种通过分子核自旋的共振现象，获得分子结构和组成信息的方法。
对于生物大分子，常用的核磁共振技术包括核磁共振成像技术、核磁共振动力学技术等。
其中，核磁共振成像技术可以在体内直接对生物大分子进行结构和组成分析；核磁共振动力学技术可以对生物大分子进行动力学过程的研究。
总之，现代生物技术的迅速发展为生物大分子的表征和分析提供了越来越多的手段。
各种分析方法各有优缺点，选择合适的方法是确保获得可靠数据的关键。
同时，也需要在保证分析精准度的前提下，考虑到分析时间和费用等因素。
4_生物大分子相互作用分析技术
4_生物大分子相互作用分析技术生物大分子相互作用分析技术是一种用于研究生物大分子（如蛋白质、核酸等）相互作用的实验技术。
这些相互作用在生物体内起着关键的生理功能，包括信号传导、代谢调节、细胞凋亡等。
因此，研究这些相互作用对于理解生物体内的生物过程以及疾病的发生机制具有重要意义。
下面将介绍几种常见的生物大分子相互作用分析技术。
一、免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）免疫共沉淀是一种经典的生物大分子相互作用分析技术，主要用于检测蛋白质与其他生物分子（如蛋白质、核酸等）之间的相互作用。
该技术基于抗体的高专一性和亲和力，通过将要研究的蛋白质与特定抗体结合，然后利用这个抗体将目标蛋白质及其相互作用分子沉淀下来。
最后，通过Western blot等方法检测共沉淀样品中的相互作用分子。
免疫共沉淀技术已被广泛应用于研究蛋白质间的相互作用，例如信号通路中的蛋白质相互作用、蛋白质复合物的鉴定等。
二、蛋白质亲和纯化（Protein Affinity Purification）三、表面等离子体共振（Surface Plasmon Resonance）表面等离子体共振是一种利用金属表面等离子体共振现象研究生物大分子相互作用的实验技术。
该技术基于蛋白质与配体的结合可以改变金属表面的折射率引起共振波长的变化，通过监测这一共振波长变化得出生物分子相互作用的结果。
表面等离子体共振技术可以实时监测生物分子的结合动力学、测定亲合力常数等，因此被广泛应用于研究蛋白质与配体之间的相互作用和药物筛选等领域。
四、双杂交（Yeast Two-Hybrid）双杂交技术是一种用于研究蛋白质相互作用的方法。
该技术是基于酵母细胞内的转录激活子和DNA结合结构域的可分离性。
通过将要研究的两个蛋白质分别与转录激活子和DNA结合结构域融合，然后将这两个蛋白质结合到一起，重组构成转录激活子，从而诱导报告基因的表达。
通过检测报告基因的表达水平，可以推断两个蛋白质是否发生相互作用。
生物大分子的分析与鉴定技术
生物大分子的分析与鉴定技术生物大分子的分析与鉴定技术是现代生物学研究的基础。
其中，蛋白质、核酸是生命活动的主要载体，蛋白质是构成细胞、组织、器官的主要成分，而核酸是遗传信息的携带者。
因此，对蛋白质和核酸的分析与鉴定，是生物学研究中重要的一环。
本文将介绍生物大分子的分析与鉴定技术。
一、蛋白质分析与鉴定技术1. 色谱技术色谱技术是分离和纯化生物大分子的重要手段。
目前，常用的色谱技术有离子交换色谱、凝胶过滤色谱、透析色谱和亲和色谱等。
亲和色谱是利用分子的特异性相互作用，在含有特定结构的亲和剂的固定相上进行，分离目标蛋白质或受体。
亲和剂可以是抗体、低分子与蛋白质结合的配体等。
2. 电泳技术电泳技术是利用外部电场对生物大分子进行分离的方法。
目前常见的电泳方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳、等电点电聚焦等。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是通过蛋白质的大小和形状进行区分，而等电点电聚焦是通过蛋白质的电荷进行区分。
3. 质谱技术质谱技术是生物大分子分析和鉴定的重要方法之一。
质谱分析可以通过分析分子的质量和结构信息，来确定蛋白质的氨基酸序列、修饰和结构等。
常见的质谱方法有飞行时间质谱、电子喷雾质谱、反应性离子质谱等。
二、核酸分析与鉴定技术1. 原位杂交技术原位杂交技术是一种基因定位的方法，能够将特定的核酸序列准确地定位到细胞中某一特定结构上。
利用此技术，可以研究基因的表达和调控。
2. PCR技术PCR技术是一种快速的核酸扩增技术，可以在短时间内扩增细胞中非常少量的DNA或RNA。
通过PCR技术，可以检测DNA序列的变异、扩增、检测病原体等。
3. 显微切片技术显微切片技术是对细胞的核酸进行观察的技术。
通过染色剂对细胞核进行染色，并在显微镜下观察细胞核的形态和结构，从而研究基因的表达和调控。
总结生物大分子的分析与鉴定技术是生物学研究的重要手段。
对蛋白质和核酸的分析和鉴定，可以帮助研究者深入了解生命活动相关的机理和生物过程。
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第一节
核酸分析技术
讲述内容： 1、核酸电泳 2、杂交技术 3、PCR技术 4、基因芯片
一、核 酸 电 泳
Biblioteka （一）DNA的凝胶电泳凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。 1. 琼脂糖凝胶用于分离大于200～1000bp的片段; 操作简单、快速，且分离范围广，分辨率高 2. 聚丙烯酰胺凝胶用于分离5－500bp的片段; 效果好、分辨率极高，相差1bp的DNA片断就能分开， 能容纳相对大量的DNA
（5）primer
5’端增加碱基
①内切酶识别点：
（G）GAATTC GCTCCATGACCCAG ↑保护bp 对PCR产物cloning有很大好处 便于内切酶消化，不同内切酶需保护bP数量不同 EcoRI 1 BglII 2-3 XbaI 2-3 HindⅢ >3 BamHI 2-3 PstI >4 XhoI >4 NotI >10 如果所用保护bp数量不合适→影响内切酶消化→影响下步克隆 ∵未切开，连接不上
理论 模板扩增30轮 1ng-----------1g 实际 模板扩增30轮 1ng-----------10g
（二）基本要素
1 Taq DNA聚合酶：
水生栖热菌(thermus aquaticus,Taq)的DNA聚合酶 ①5’3’DNA聚合酶活性； ②无3’5’外切酶活性， 35轮0.25%错配，与原始模板有差别； 最适聚合酶 温度72℃，选择72℃延伸 半衰期：92.5℃ 130min 95℃ 40min 97.5℃ 5—6min 变性温度：≤95℃使其在整个扩增循环中保持足够活性
pfu DNA 聚合酶
耐热
5’3’DNA聚合酶活性
3’→5’外切酶活性 精确度：pfu >Taq 但pfu扩增效率通常比Taq酶略差 文献报道：Taq+pfu 会起到较好效果
¤
2 .引物
人工合成短寡核苷酸20bp-25bp→Tm=55℃-60℃， Tm值要相近，每条10-50pmol /100l ◆设计原则： （1）靠近5'上游Primer与双链DNA正链相同 3'下游Primer与双链DNA正链互补，与负链相同 正链5'————— 3' ——上游Primer ——下游Primer 负链 3'————— 5' 例如： IL-3正链 5'GCTCCATGACCCAG----------- GCGATCTTTTGAGTCCAA 3' 负链3'CGCTAGAAAACTCAGGTT 5' 上游~： 与其相同 下游~： 先写出相应负链3'→5'然后倒过来5'→3' 所以负链Primer：5'-TTg gAC TCA AAA gAT CgC -3'
操作流程
（1）探针的设计、合成与芯片的制作（商品化产品）； （2）靶基因样品的制备；
靶基因的制备：RT-PCR （设实验组和对照组） 标记方法：分别进行荧光素标记如：Cy3和Cy5
（3）生化杂交反应；与常规的分子杂交过程基本相似
封闭 预杂交 杂交 洗脱
（4）杂交信号的检测与结果的分析
（4）Primer 5’未端可修饰、突变:
修饰
如：32P、生物素、荧光素，不影响其效果
突变：
AGCTCCATGACCCAG 5'CGCTCCATGACCCAG 3'
注意：绝不可以在3'端进行上述改造 ∵DNA聚合酶是5'→3'聚合，若3'端改造→不能互补→不能延伸
1. 2. 3. 4.
基因检测： 基因克隆化 DNA突变 DNA序列分析
四、基因芯片
利用核酸杂交的原理，应用于DNA、RNA的研究
背景资料
基因芯片（Ｇｅｎｅ Ｃｈｉｐ）就是利用点样机等机械装置，在玻璃 等支持物表面整齐地点上高密度的、成千上万个“点”，每个“点”含有 可与一种基因杂交的一条ＤＮＡ探针。由于芯片上有序地排列着ＤＮＡ探 针，因此也被称为微阵列（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）。在芯片上滴加样品 后，在合适的条件下，样品中含有的各种核酸片段（ｃＤＮＡ或ｃＲＮＡ） 就与相应的探针杂交。由于核酸片段上已标记有荧光素，激发后产生的荧 光强度就与样品中所含有的相应核酸片段的量成正比，也就代表该基因的 表达量。经激光共聚焦扫描仪等装置扫描后，所获得的信息经专用软件分 析处理，即可获得成千上万种基因的表达情况。正因为这种特点，基因芯 片技术已成为当前生命科学研究的热点之一。
第二节
蛋白质分析技术
讲述内容：
一、Western Blot 二、ELISA 三、免疫荧光技术 四、免疫组织化学技术 五、蛋白质与蛋白质相互作用的研究技术
一 Western Blot
1
原理：
将通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤 维素或PVDF膜上，然后与能特异性识别待检蛋白的抗体 进行反应，洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入标 记的、能识别特异性抗体的种属特异性抗体，反应一段 时间后再次洗涤去除非特异性结合的标记抗体，加入适 合标记物的检测试剂进行显色或发光等，观察有无特异 性蛋白条带的出现，也可通过条带的密度大小来进行特 异性蛋白的半定量。
注意：溴化乙锭具有致癌性，操作时要带手套
不同浓度琼脂糖的凝胶分离范围
琼脂糖浓度（％，W/ V )
DNA分子的有效分离范围（kb)
0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
0.8-10 0.5-7 0.4-6 0.2-3 0.1-2
影响DNA在凝胶中迁移速率的因素：
1 2 3 4 5 DNA分子的大小 构象 凝胶浓度 电压 缓冲液
（一）原理：
双链DNA通过高温变性解离成互补单链DNA －－－变性 ↓ 与一对寡核苷酸引物（5’， 3’）降低温度退火 DNA加热变性+引物慢慢冷却使其结合，形象地称为退火 ↓ 适温延伸5’/3’引物形成新链变成4条链DNA －－延伸
↓
第二轮：变性—退火—延伸
呈指数增长
理论值：一轮一倍
10轮 103=1000倍 20轮 106 30 轮 109
三 PCR技术
PCR (Polymerase chain reaction) 是用一对寡聚DNA作 为引物，通过加温变性－退火－DNA合成这一周期的 多次循环，使目的DNA片段得到扩增。由于这种扩增 产物是以指数形式积累的，经25－30个循环后，扩增 倍数可达106。 Dr. Karry Mullis 1985年发明，获1993年度诺贝尔化学 奖； 目的: 用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡过程中 DNA Ladder的形成
PCR产物的琼脂 糖电泳
聚丙烯凝胶电泳的银染结果分析
特殊的凝胶电泳
倒转电场凝胶电泳（FIGE）：用于分 离分子量10～2000kb的DNA分子；
钳位均匀电场电泳（CHEF电泳）：可 分离大于107bp的DNA分子
（二）RNA 电 泳
二 核酸杂交技术
（一）Southern Blot 原理：
将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖 凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移 到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记 物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针 互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针 洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检 的片段及其相对大小。 用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有 点突变、扩增重排等。
Plasmid:lng
Chromosome:300-500ng 注意：
防止交叉污染
4.dNTP：
四种脱氧核苷酸，基本原料 终浓度：50M
注意：不稳定，保存时间长会失效
5.Mg2+
TaqDNA聚合酶作用时需要Mg2+
不同的酶需不同Mg2+ Taq：较少，Mg2+ 对反应影响很大，0.5-1.5mM终浓度
（1）变性温度：94-95℃ Templete：GC比例高、长度很长，则变性T↑ （2）退火：温度越高，扩增特异性越好 取决于Tm值：Tm↑退火T↑； Tm↓退火T↓ 若Tm较高，可使退火和延伸在同一温度 （3）延伸： 500nt---1min 500nt－－3min 一般：40－60sec
（三）PCR技术的应用
激光共聚焦荧光检测系统收集荧光信号，计算机分析
基因芯片的应用
用于基因转录水平的检测、基因组分析 和后基因组研究
举例：美国斯坦福大学Davis等用，然后与热处理的T淋 巴细胞和未处理的T细胞种提取的mRNA反转录出的单链cDNA片 段杂交，经激光共聚焦扫描系统分析，共发现17个差异表达的基 因，其中11个是被热诱导的，6个是被热抑制的。经序列分析证 实，其中3个是未报导的新基因。
（2）Primer 本身不要出现内部互补序列 形成loop环，内部二级结构 如： GGGTCGATTCCTACCCATGC （3）注意减少Primer间互补序列
导致2个Primer形成dimer
一般不要超过3个互补bp 如：CCCATGC : : : : GGGTCTA ATGGAGTC : : : : TCAGTAAGC
用于核苷酸多态性的分析
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
材料：电泳缓冲液（常用TAE或TBE）、电泳级琼脂糖、溴化乙锭溶