实验九脂肪酸β-氧化
生物化学实验脂肪酸β-氧化的改进
根据 滴定样 品与滴定 对 照所消 耗 的硫 代硫 酸
钠 溶液体 积之差 ， 以计算 由 丁酸 氧化 生 成 丙酮 可
的量 。
学 实验 教材 ， 现 各 版本 实验 教 材 中脂 肪 酸 ８ 发 一 氧 化实验 都存 在一 些 问题 ， 就这 些 问题 展开讨论 ，
并 提 出解 决方 案 。
可得 ， 要 使 碘 游 离 出来 ， 要 盐 酸 的量 是 ６ 若 需 × １ ～ｍｏ。如果按 照质 量体 积 比来配 制 １ 的氢 ０ ｌ Ｏ， ９ ６ 氧化钠 ， 那么氢 氧 化钠 的浓 度 是 ２ ５ ｍｏ／ ， 验 ． ｌ１实 中取 ３ ， ｍｌ即氢 氧 化 钠 的 物 质 的 量 是 ７ ５ １ ． × ０ ｍｏ。如果按 照体 积 比来 配 制 １ 的盐 酸 ， 么 ｌ Ｏ 那
化作 为必 修 的实验 收录 书 中。脂 肪酸 Ｄ 一氧 化 实 验材 料 容 易获 取 ，是 培 养 学生 实验 能力 ， 深 理 ， 加 论 知识 的一个 经典 实验 但 笔 者翻阅各 种生物 化
Ｉ＋２ ２ ２ 一 ２ Ｎａ Ｓ Ｏ３ Ｎａ Ｓ ＋ ２ Ｉ ２４ Ｏ６ Ｎａ
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由于脂 肪 酸 ８ 一氧化 在 生物 化 学 中 占有 重要
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剩余 的碘 ， 用标 准硫代 硫酸 钠溶 液滴定 。 可
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（） ３
地位 ， 多生 物 化 学实 验 教 材 都 把脂 肪 酸 Ｉ 氧 很 ３ 一
收稿 日期 ：０ ０１－７ ２ １ －２１
盐酸 的浓度 是 １ １ ｌ１实验 中取 ３ｍｌ即盐酸 ． ６ｍｏ／ ， ，
脂肪酸的β氧化
脂肪酸的β-氧化肝和肌肉是进行脂肪酸氧化最活跃的组织，其最主要的氧化形式是β-氧化。
此过程可分为活化，转移，β-氧化共三个阶段。
1活化脂肪酸活化和葡萄糖一样，脂肪酸参加代谢前也先要活化。
其活化形式是硫酯——脂肪酰CoA，催化脂肪酸活化的酶是脂酰CoA合成酶(acyl CoA synthetase）。
活化后生成的脂酰CoA极性增强，易溶于水；分子中有高能键、性质活泼；是酶的特异底物，与酶的亲和力大，因此更容易参加反应。
( 脂酰CoA合成酶：又称硫激酶，分布在胞浆中、线粒体膜和内质网膜上。
胞浆中的硫激酶催化中短链脂肪酸活化；内质网膜上的酶活化长链脂肪酸，生成脂酰CoA，然后进入内质网用于甘油三酯合成；而线粒体膜上的酶活化的长链脂酰CoA，进入线粒体进入β-氧化)2脂酰CoA进入线粒体催化脂肪酸β-氧化的酶系在线粒体基质中，但活化生成的长链脂酰CoA不能自由通过线粒体内膜，要进入线粒体基质就需要载体( 肉毒碱（carnitine），即3-羟-4-三甲氨基丁酸) 转运。
脂酰CoA转运过程：长链脂肪酰CoA和肉毒碱反应，脂肪酰基与肉毒碱的3-羟基通过酯键相连接，生成辅酶A和脂酰肉毒碱。
催化此反应的酶为肉毒碱脂酰转移酶（carnitine acyl transferase）。
线粒体内膜的内外两侧均有此酶，系同工酶，分别称为肉毒碱脂酰转移酶I和肉毒碱脂酰转移酶Ⅱ。
酶Ⅰ使胞浆的脂酰CoA转化为辅酶A和脂肪酰肉毒碱，后者进入线粒体内膜。
位于线粒体内膜内侧的酶Ⅱ又使脂肪酰肉毒碱转化成肉毒碱和脂酰CoA，肉毒碱重新发挥其载体功能，脂酰CoA最终由线粒体外进入线粒体基质，成为脂肪酸β-氧化酶系的底物。
长链脂酰CoA进入线粒体的速度受到肉毒碱脂酰转移酶Ⅰ和酶Ⅱ的调节，酶Ⅰ受丙二酰CoA抑制，酶Ⅱ受胰岛素抑制。
丙二酰CoA是合成脂肪酸的原料，胰岛素通过诱导乙酰CoA羧化酶的合成使丙二酰CoA浓度增加，进而抑制酶Ⅰ。
可以看出胰岛素对肉毒碱脂酰转移酶Ⅰ和酶Ⅱ有间接或直接抑制作用。
脂肪酸β氧化实验报告思考题
脂肪酸β氧化实验报告思考题脂肪酸β氧化实验报告引言：脂肪酸β氧化是一种重要的代谢途径，它能够将长链脂肪酸分解成较短的乙酰辅酶A，从而提供能量。
在这个实验中，我们将探究不同条件下对脂肪酸β氧化的影响，以更好地理解这一过程。
材料和方法：1. 材料：牛心、磷酸缓冲液、硫酸钠、钾氯化物、ATP、NADH、FADH2等。
2. 方法：首先将牛心切碎并加入磷酸缓冲液中制成匀浆。
然后将匀浆离心并取得上清液。
接着在不同条件下加入硫酸钠和钾氯化物，并观察其对脂肪酸β氧化的影响。
结果：1. 在添加ATP的情况下，脂肪酸β氧化速率明显增加。
2. 在添加NADH和FADH2的情况下，脂肪酸β氧化速率也明显增加。
3. 在添加硫酸钠和钾氯化物的情况下，脂肪酸β氧化速率有所降低。
讨论：1. ATP是细胞内能量的重要来源，添加ATP可以提供更多的能量，从而促进脂肪酸β氧化。
2. NADH和FADH2是细胞内电子受体，在脂肪酸β氧化过程中发挥重要作用。
添加这两种物质可以增加电子传递速率，促进脂肪酸β氧化。
3. 硫酸钠和钾氯化物是离子，它们的存在会对细胞内环境产生影响。
在高浓度下，它们可能会干扰脂肪酸β氧化过程，从而降低其速率。
结论：本实验结果表明，在不同条件下，脂肪酸β氧化速率会发生变化。
添加ATP和NADH/FADH2可以促进脂肪酸β氧化，而高浓度的硫酸钠和钾氯化物可能会干扰这一过程。
这些结果对于深入了解脂肪酸代谢途径具有重要意义。
思考题：1. 为什么ATP对脂肪酸β氧化有促进作用？2. 为什么硫酸钠和钾氯化物会影响脂肪酸β氧化速率？3. 脂肪酸β氧化在人体中的生理意义是什么？。
脂肪酸的β氧化实验报告
脂肪酸的β氧化实验报告
一、实验目的
本次实验旨在通过对脂肪酸的β氧化反应进行观察和分析，探究脂肪酸代谢途径，并深入了解该过程对人体健康的影响。
二、实验原理
脂肪酸是一种重要的营养物质，它们在人体内被分解成较小的分子，然后进入到线粒体中参与β氧化反应。
β氧化是指将脂肪酸分子中的碳-碳双键不断“切断”，最终产生出乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）和NADH等代谢产物。
三、实验步骤
1. 将适量的脂肪酸溶解在双氧水中。
2. 将反应液加入到已经装有过滤纸和NaOH溶液的漏斗中。
3. 在漏斗下方放置收集瓶，并使用防尘纱将其覆盖。
4. 开始进行反应，并观察收集瓶中是否有气泡产生。
5. 反应结束后，取出收集瓶并进行进一步检测。
四、实验结果与分析
通过本次实验我们可以发现，脂肪酸在双氧水的作用下，会发生β氧化反应，产生出二氧化碳和水。
这是因为脂肪酸中的碳-碳双键被不断
切断，最终产生出乙酰辅酶A和NADH等代谢产物。
而二氧化碳则通过呼吸排出体外。
此外，我们还可以进一步分析β氧化反应对人体健康的影响。
由于脂肪酸是人体内重要的营养物质之一，因此它们参与代谢途径对人体健康至关重要。
但如果脂肪酸代谢过程中发生异常，则可能会导致身体出现各种问题。
例如，当β氧化过程发生障碍时，可能会导致脂肪堆积在身体内部，从而引起肥胖、高血压等疾病。
五、实验结论
本次实验通过观察脂肪酸的β氧化反应，并分析该反应对人体健康的影响，深入了解了脂肪酸代谢途径。
同时也提醒我们要注意保持身体健康，并合理摄取脂肪酸等营养物质，以避免代谢过程中出现异常。
脂肪酸的β氧化实验
脂肪酸的β氧化实验
脂肪酸的β氧化实验是一种用来研究生物体内脂肪酸代谢过程
的实验方法。
该实验通过添加脂肪酸到体外细胞或组织中，利用脂肪酸的β氧化途径产生乙酰辅酶A及其他代谢产物，进而研究脂肪酸代谢的调控机制、代谢通路和生理功能等方面的内容。
在实验中，常用的脂肪酸有十六碳酸和十八碳酸等，并通常会同时加入放射性标记的底物，如3H-十六碳酸或3H-十八碳酸等，以便于通过放射性测定来检测β氧化产物的生成情况。
β氧化实验通常会在体外进行，利用细胞或组织的全细胞提取物或分离的线粒体等微粒体进行。
实验步骤包括细胞或组织的收集、制备及质量控制、β氧化反应的体外实现、β氧化产物的检测及分析等。
实验结果可通过放射性测定、肽质谱分析、高效液相色谱法等多种方法来获得。
脂肪酸的β氧化实验在生物医学研究中具有重要的应用价值，可用于探究脂肪酸代谢和能量代谢过程、肝脏疾病和代谢紊乱的发生机制、肥胖和糖尿病等慢性代谢性疾病的发病机理等方面的研究。
- 1 -。
脂肪酸的β氧化实验报告
β氧化实验报告背景脂肪酸是构成脂类的重要成分之一，储存在动物体内的肝脏细胞和脂肪细胞中。
脂肪酸分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸两大类。
饱和脂肪酸由单一键连接，不饱和脂肪酸则含有一个或多个双键。
β氧化是脂肪酸代谢的一部分，以使其能够提供能量给身体。
β氧化作用将长链脂肪酸分解为较短的酰辅酶A，并随后进入线粒体进行能量产生。
目的本实验旨在研究脂肪酸的β氧化反应，并通过对实验结果的分析，探讨β氧化对不同链长和饱和度脂肪酸的影响。
同时，通过优化反应条件和实验操作，提出相关建议以增加β氧化反应效率。
分析实验设计在β氧化实验中，我们使用了不同类型的脂肪酸作为底物，再利用适当的试剂和酶催化剂来触发β氧化反应。
实验设计如下：1.准备试液：制备适量的目标脂肪酸、辅酶A、辅酶Q、试剂和酶催化剂。
2.反应过程：按照实验设计加入试剂和酶催化剂，并进行恒温反应。
3.反应终止：根据实验需求，通过添加特定试剂或改变环境条件使反应终止。
4.实验结果分析：通过多种手段对反应产物进行分析，如质谱法、紫外可见光谱法、气相色谱法等。
结果在实验过程中，我们成功获取了脂肪酸的β氧化产物，并根据实验结果进行了分析。
脂肪酸长度对β氧化的影响我们选择了不同链长的脂肪酸作为底物，对其进行β氧化反应，并通过质谱法对反应产物进行分析。
实验结果表明，较短链长的脂肪酸在β氧化反应中更容易被分解，产生的辅酶A较多。
而较长链长的脂肪酸则具有较低的β氧化反应活性，产生的辅酶A相对较少。
这表明β氧化反应对脂肪酸链长的选择性较高。
脂肪酸饱和度对β氧化的影响另外，我们还研究了不同饱和度的脂肪酸对β氧化反应的影响。
通过调整实验条件，我们成功使饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸分别进行β氧化反应，并进行了比较。
实验结果表明，不饱和脂肪酸在β氧化反应中的活性较高，产生的辅酶A较多。
而饱和脂肪酸则具有较低的β氧化反应活性，产生的辅酶A相对较少。
这说明β氧化反应对脂肪酸饱和度的选择性较高。
建议根据实验结果分析，我们提出以下建议以增加β氧化反应的效率：1.优化反应条件：根据实验结果，适当调整反应温度、反应时间和试剂浓度，可以提高β氧化反应的效率。
脂肪酸β-氧化作用答案
1.什么是酮体？本实验如何计算样品中丙酮的含量？
答：在肝脏中，脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸A、β-羟基丁酸及丙酮，三者统称为酮体。
肝脏具有较强的合成酮体的酶系，但却缺乏利用酮体的酶系。
酮体是脂肪分解的产物，而不是高血糖的产物。
本实验是根据反应：
2NaOH+I2NaOI+H2O+NaI CH3COCH3+3NaOI CHI3+CH3COONa+2NaOH 而剩余I
可用标准硫代硫酸钠滴定：
2
NaOI+NaI+2HCl I2+2NaCl+H2O I2+2Na2S2O3Na2S4O6+2NaI
根据滴定的样品和滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算出由丁酸氧化生成的丙酮量。
2.为什么可以通过测丙酮的量来推算出细胞脂肪酸β氧化作用的强弱？
答：脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A。
二分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可以还原生成β-羟丁酸。
而本实验是脂肪酸的氧化作用，因此绝大部分的乙酰乙酸都氧化生成了丙酮，故可以用通过测丙酮量来推算其氧化强弱。
3.本实验为什么选用肝组织，选用其它组织是否可以，为什么？
答：是因为脂肪酸β-氧化只是发生在肝脏中，而其他组织中发生的很少或几乎不发生脂肪酸β-氧化，因此只能选取肝组织，而不能选其他组织.。
脂肪酸β氧化的整个过程
脂肪酸β氧化的整个过程
1、脂肪酸β氧化的整个过程
脂肪酸β氧化是指脂肪酸经过氧化反应，将碳链上取代氢原子的醛基，转变为更稳定的酮基，并放出大量的能量。
脂肪酸β氧化的过程是通过机体内的酶来完成的，其重要步骤有脱氢和氧化两部分组成。
（1）脱氢反应
在脱氢反应中，在脂肪酸的碳链上的末端的醛基被还原原子链上的氢原子取代，形成脱氢物，产物为醇，过程中需要NADH和FAD作
为因子，其反应方程式如下：
R-C=O + 2H+ + NADH+FAD –> R-CH2OH + NAD+ + FADH2 （2）氧化反应
在氧化反应中，醇会在碳链上的游离羰基环上产生双键，发生氧化反应，得到特定异构体的酮，过程中需要NAD+和FADH2作为因子，其反应方程式如下：
R-CH2OH + O2 + NAD+ + FADH2 –> R-CO-CH3 + H2O + NADH+FAD 完整的脂肪酸β氧化过程如下：
R-C=O + 2H+ + NADH+FAD –> R-CH2OH + NAD+ + FADH2
R-CH2OH + O2 + NAD+ + FADH2 –> R-CO-CH3 + H2O + NADH+FAD 该过程为一种动力学氧化过程，可以放出大量的能量，被广泛应用于机体内的能量收集和利用。
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脂肪酸的β氧化的实验报告
脂肪酸的β氧化的实验报告一、实验目的（1）了解脂肪酸的β-氧化；
（2）通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化的方法及原理。
二、实验原理
根据β―氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。
两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。
在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β- 羟丁酸。
乙酰乙酸、β- 羟丁酸和丙酮总称为酮体。
酮体为机体代谢的中间产物。
在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。
在本实验中，新鲜肝脏食糜用丁酸保温，产生的丙酮可通过碘仿反应测定。
在碱性条件下，丙酮与碘反应生成碘仿。
反应式如下:
2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2 O
CH3 COCH3+3NaOI→CHI3 +CH3 COONa+2NaOH
碘仿
剩余的碘可以用标准硫代硫酸钠滴定。
NaOI+NaI+2HCl→I2 +2NaCI+H2 O I2 +2Na2 S2 O3→Na2 S4 O6 +2NaI
根据滴定样品与滴定对照消耗的硫代硫酸钠的不同，可以计算出丁酸氧化生成丙酮的量。
三、试剂和设备恒温水浴、微量滴定装置、解剖仪器、玻璃器皿等。
Locke氏溶液、0.1mol/L碘溶液、pH7.6,mol/L的磷酸缓冲液、
0.2mol/L丁酸溶液、15%三氯乙酸溶液、10%氢氧化钠溶液、10%盐酸溶液。
四、操作方法处死动物→制备肝糜→丁酸氧化反应→碘仿反应→碘滴定
五、关键步骤与注意事项
① 用新鲜肝糜进行实验，确保肝内酶活力。
② 注意滴定终点的控制，保证实验的准确度。
实验九脂肪酸β-氧化
实验九脂肪酸β-氧化一、实验原理β-氧化是一种重要的生物氧化反应，它发生在肝、肌肉与心脏等细胞内。
β-氧化包括三个步骤:1. 脂肪酸启动反应:脂肪酸启动是由脂肪酸酯化酶催化的，将脂肪酸转化成酯类。
2. 脂肪酸的β-氧化反应:在肝脏中，脂肪酸的β-氧化反应从脂肪酸的末端开始，将每次切下一个乙酰基而释放出一分子乙酰CoA和一分子丙酮酸。
随着反应的进行，产生的乙酰CoA会继续参与β-氧化反应，直到所有的乙酰基被切除。
3.产生ATP的氧化解酸反应：丙酮酸在经过一系列酶的催化后，可产生一个分子ATP、一个分子乙酰CoA和一个二氧化碳。
二、实验目的通过观察L-丙氨酸和柠檬酸的代材参与β-氧化过程，了解β-氧化的基本原理，练习生物化学实验技能。
三、仪器与试剂仪器：分光光度计、蒸馏水机、恒温水浴器、冰浴器、离心机。
试剂：L-丙氨酸、柠檬酸、枸橼酸三钠、CoA-SH、ATP、NADH、空白酶、L-丙氨酸脱氢酶、乙酰CoA转酰酶、柠檬酸合成酶、Δ2-烯酰CoA还原酶、β-羟酰CoA裂解酶、羟戊酸脱氢酶、空白缓冲液、反应缓冲液。
四、实验步骤4.1.实验组成实验分两组进行表 1 实验组配方试剂名称用量/浓度L-丙氨酸100 μmol柠檬酸500 μmol枸橼酸三钠 1.8 mgCoA-SH 200 μmolATP 100 μmolNADH 20 μmol空白酶 0.1 U/mlL-丙氨酸脱氢酶 0.5 U/ml乙酰CoA转酰酶 0.5 U/ml柠檬酸合成酶 0.5 U/mlΔ2-烯酰CoA还原酶 0.5 U/mlβ-羟酰CoA裂解酶 0.5 U/ml羟戊酸脱氢酶 0.5 U/ml组二：将除L-丙氨酸外的组一所有试剂按照表2的配方加入一个新的实验管中，代替L-丙氨酸用等浓度的水置于其中。
1. 将两个实验管的温度调节至室温。
2. 分别加入10 μL乙酰CoA、10 μLL-丙氨酸脱氢酶、10 μL反应缓冲液到空白管中混合。
脂肪酸的β氧化实验
脂肪酸的β氧化实验β氧化是一种重要的代谢途径，它在生物体内起着至关重要的作用。
β氧化可以将脂肪酸分解为较短的链长，从而产生能量。
本文将介绍脂肪酸的β氧化实验。
脂肪酸是由长链脂肪酸和短链脂肪酸组成的，它们在生物体内起着不同的作用。
长链脂肪酸主要用于能量供应，而短链脂肪酸则主要用于合成其他物质。
脂肪酸的β氧化是一种将长链脂肪酸分解为较短链的过程，从而产生能量。
脂肪酸的β氧化过程主要发生在线粒体内。
首先，长链脂肪酸通过穿过线粒体双层膜的协助蛋白进入线粒体内。
然后，长链脂肪酸在线粒体基质中被酰辅酶A合成成酰辅酶A。
接下来，酰辅酶A进入β氧化通路。
在β氧化通路中，酰辅酶A首先通过脱氢酶的作用失去一个氢原子，生成不饱和酰辅酶A。
然后，不饱和酰辅酶A被水合酶水合成羟基酰辅酶A。
接着，羟基酰辅酶A通过脱羧酶的作用失去一个羧基，生成乙酰辅酶A和丙酮酸。
乙酰辅酶A可以进一步参与三羧酸循环产生更多能量。
脂肪酸的β氧化实验可以通过不同的方法进行。
其中一种常用的方法是使用放射性示踪剂。
实验者可以将放射性标记的脂肪酸添加到细胞培养基中，然后观察放射性示踪剂在细胞内的代谢过程。
这种方法可以帮助研究者了解脂肪酸的β氧化速率以及其对细胞功能的影响。
另一种常用的方法是使用荧光染料。
实验者可以将荧光染料与脂肪酸结合，并观察荧光染料在β氧化过程中的变化。
这种方法可以直观地显示脂肪酸的β氧化过程，并帮助研究者了解脂肪酸代谢的细节。
通过脂肪酸的β氧化实验，研究者可以进一步了解脂肪酸代谢的机制以及其对生物体的影响。
这不仅有助于我们更好地理解脂肪酸的功能，还有助于深入研究脂肪酸相关疾病的发生机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。
脂肪酸的β氧化是一种重要的代谢途径，它在生物体内起着至关重要的作用。
脂肪酸的β氧化实验可以帮助研究者了解脂肪酸的代谢机制以及其对生物体的影响，从而为相关疾病的治疗提供新的思路。
通过不同的实验方法，我们可以深入研究脂肪酸的β氧化过程，并为进一步的研究提供基础。
【医学课件大全】脂肪酸的β-氧化
➢ 10%氢氧化钠 ➢ 10%盐酸 ➢ 0.2M碘液：25.4gI2+50gKI定容到1000ml
用标准0.05M硫代硫酸钠标定 ➢ 标准0.01M硫代硫酸钠：
将已标定的0.05M硫代硫酸钠稀释成0.01M ➢ 1/15M PH7.6磷酸缓冲液：
1/15M Na2HPO4 86.8ml+1/15M NaH2PO4 13.2ml
➢ 用0.01M标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘。滴至浅黄色时， 加入3滴0.1%淀粉作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止。 记录所消耗的硫代硫酸钠液的ml数。
5、结果计算
肝脏的丙酮含量（mmol/g）
=（A—B）* CNa2S2O3 * 1/6 *5
A：滴定对照所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 B：滴定样品所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 CNa2S2O3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度（M） 1/6：1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量
I2+2NaCl+H2O Na2S4O6+NaI
根据滴定对照与滴定样品所消耗的 硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由 丁酸氧化生成丙酮的量。
三、实验器材
➢ 5ml微量滴定管 ➢ 恒温水浴 ➢ 吸管 ➢ 剪刀 ➢ 50ml 锥形瓶 ➢ 漏斗 ➢ 试管及试管架
四、试剂与材料
➢ 鲜猪肝：0.5g/ml ➢ 0.5%淀粉溶液 ➢ 0.9%氯化钠溶液 ➢ 0.5M丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml
五、操作步骤
➢ 肝糜制备：取肝用0.9%NaCl冲洗污血，用滤纸吸去表面 水分。称肝组织5g置研钵中，加少量的0.个50ml锥形瓶，各加入3ml 1/15M磷酸盐缓冲液 （pH7.6）。其中一个锥形瓶中加2ml正丁酸，另一个锥 形瓶中不加正丁酸（对照）。再各加入2ml肝糜。混匀于
脂肪酸的b氧化实验
The
end
肝糜制备
• 处死家兔，取出肝脏 • 用0.9％氯化钠溶液洗去血污，并吸去表面水分 • 取5g肝组织，少量0.9％氯化钠溶液在研钵中研磨 成细浆 • 用0.9％氯化钠溶液将细浆稀释至10ml
取样
取3ml
加入2ml正 丁酸
加入2ml肝 组织糜
1/15 mol/l pH7.6的磷酸 缓冲液
50ml锥形瓶（新）
摇匀，静置
50ml锥形瓶 锥形瓶 目的组） （目的组）
加入2ml肝组织糜
取3ml
50ml锥形瓶 锥形瓶 对照组） （对照组）
沉淀蛋白质
加入3ml15％ 三氯乙酸溶液 目的组 静置 15 分钟 后过 滤 对照组 加入3ml15％三 氯乙酸溶液 加入2ml正丁 正丁 加入 酸
酮体的测定
加入 目的组 取滤液 2ml
实验十二
脂肪 了解脂肪酸的β－氧化作用 实验目的： • 实验原理 实验原理：
脂肪酸
β－氧化 － 缩 合
乙酰辅酶A。 乙酰乙酸。
2乙酰辅酶A 乙酰乙酸
脱 羧
丙酮
还原
β－羟丁酸
• 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温， 与碘生成碘仿： 与碘生成碘仿： 2NaOH + I2 CH3COCH3 + 3NaOI NaOI + NaI +H2O CHI3 + CH3COONa +2NaOH
操作方法
• • • • 制备肝糜
取样（有对照组）
保温1.5小时（ 保温 小时（430C） 小时 ）
过滤
沉淀蛋白
滤液
酮体的测定（滴定）
计算丙酮含量
思考题
生化实验课件-脂肪酸的氧化
附：試劑、材料
雞 1％澱粉溶液 0.9％氯化鈉溶液 0.5當量/升 丁酸溶液 15％三氯乙酸溶液 10％氫氧化鈉溶液 20％鹽酸溶液 0.1M碘溶液 標準0.02M 硫代硫酸鈉溶液 1/15 mol/升 pH7.6磷酸鹽緩衝液
20ml 200ml 150ml 200ml 150ml 150ml
200ml 500ml
（二）脂肪酸的氧化及酮體生成
1/15mol/LpH7.6的 磷酸緩衝液取3mL
加入2mL肝組織糜
加入2mL 正丁酸
50mL錐形瓶 （對照組）
50mL錐形瓶 （實驗組）
-43℃保溫60分鐘
（三）沉澱去蛋白
加入3mL15％三氯乙酸溶液
加入2mL 正丁酸
50mL錐形瓶 （對照組）
50mL錐形瓶 （實驗組）
1.計算丙酮含量
樣品中丙酮的含量= (V1-V2) x C x 1/6 V1—滴定對照所消耗的Na2S2O3 的體積 V2—滴定樣品所消耗的Na2S2O3 的體積 C—Na2S2O3 的濃度 1/6-1mol丙酮 = 3molI2 = 6molNa2S2O3
2.對實驗結果進行分析
五.實驗注意事項
1. 肝組織在研缽中要研磨成細漿 2.蛋白質要充分變性
靜置5分鐘後過濾
（四）酮體的測定（滴定）
取濾液 2mL
50mL錐形瓶 （對照組）
取濾液 2mL
加入3mL0.1當 量/升碘溶液
3mL10％氫 氧化鈉溶液
50mL錐形瓶 （實驗組）
搖勻，靜置
加入3mL 10％鹽酸
用標準 硫代硫 酸鈉滴 定，滴 至淺黃 即加入 澱粉溶 液作指 示劑， 滴至藍 色消失
四.實驗結果與分析
脂肪酸的β-氧化
脂肪酸的β-氧化
脂肪酸的β-氧化脂肪酸β氧化是指脂肪酸发生氧化去除氢氧发热反应，通常发生在类脂质细胞膜上，是调控细胞生理活性的一个重要的步骤。
脂肪酸的氧化分为两个主要的步骤，一是氧化脂肪酸，当氧在脂肪酸表面发生反应时，就会形成脂肪酸的氧化产物，二是β-氧化，是脂肪酸的性质氧化反应，当脂肪酸与氧相反应时，就会形成α、β、ω等类型的产物，直到最后发生水解。
脂肪酸β-氧化是一种特殊形式的氧化反应，是由一系列化学反应所形成的。
当这些反应发生变化时，首先会发生α-氧化反应，它可以将一个脂肪酸分解成两个不同的亚酰胺。
在α-氧化的后续反应过程中，可以发生β-氧化反应，它可以将α-氧化后的亚酰胺再分解为更短的亚酰胺，从而实现脂肪酸的氧化分解，即形成短链脂肪酸和氧化产物，如乙酸、丙酸等。
脂肪酸β-氧化的反应依赖于一系列活性组分，包括把脂肪酸作为发生反应的物质、一个叫作脂肪酸氧化还原酶（FADH2）的酶以及一种叫作脂肪酰基转移酶（CPT）的酶。
脂肪酸氧化还原酶首先能把一氧化二氢（H2O2）转换为氢氧化物，并与FADH2反应后形成一种氧化物，可以把脂肪酸氧化分解，随后脂肪酰基转移酶则会对这种氧化物进行脱氢反应，从而实现β-氧化碳原料供体的脱氢，借助这些反应，长链脂肪酸就可以被氧化分解，形成各种短链的脂肪酸与氧化产物。
脂肪酸氧化反应较常见于动物细胞中，是维持能量代谢和细胞水平细胞生态系统的重要反应。
脂肪酸β-氧化的过程不仅是胆固醇水平的主要调节机制，而且可以促进来自膳食脂肪和内部脂肪库的胆固醇氧化，从而影响血液中胆固醇水平。
它同样可以调节细胞代谢中脂肪酸氧化产物的形成，如乙酸、丙酸和油酸等，能够促进细胞生物活性，促进细胞正常合成有机分子的正常功能。
脂肪酸贝塔氧化
脂肪酸贝塔氧化
脂肪酸贝塔氧化是一种利用氧化反应将有机物转化为富含能量的脂
肪酸的过程。
它可以用于生产柴油，天然气和脂肪酸醇等碳水化合物，以及为食品添加口感和营养成分。
一、氧化反应
脂肪酸贝塔氧化反应是一种氧化反应，其中一种有机物被氧化为另外
一种有机物。
在此反应中，脂肪酸被氧化为脂肪酸醇。
这种反应是由
一个特定物质，即贝塔积累物开始的，该物质将脂肪酸中的氢原子拆
下并形成一种有机物质。
二、过程
脂肪酸贝塔氧化的过程通常包括脂肪酸的氧化，杂质的去除和脂肪酸
醇的生成。
1．脂肪酸氧化：在此步骤中，首先用碱性溶液将愈创有机碳聚集起来，添加非饱和的油酸衍生物作为贝塔不断消耗的物质，形成一种纯净的
脂肪酸衍生物。
2．杂质的去除：在脂肪酸氧化之后，可以使用一种叫做沸石的介质来
去除有机物质中的杂质，如脂肪酸酯。
3．脂肪酸醇的生成：在杂质被去除之后，脂肪酸衍生物会被氧化，并转变成脂肪酸醇，生成来自有机物质的倍甲基胺。
三、应用
由脂肪酸贝塔氧化产生的贝塔衍生物是生产柴油、天然气和脂肪酸醇的主要原料。
脂肪酸醇也可以用作食品添加口感和营养成分的原料，被用于生产洗涤剂、化妆品、润滑剂等等。
总结
脂肪酸贝塔氧化是一种用氧化反应可以将有机物转化为富含能量的脂肪酸的过程。
它的过程包括脂肪酸氧化，杂质的去除和脂肪酸醇的生成。
该过程的应用涉及到柴油、天然气的生产，以及食品添加口感和营养成分的原料。
实验九脂肪酸β-氧化
实验九脂肪酸β-氧化目的要求：（1）了解脂肪酸的β-氧化作用。
(2) 掌握测定β-氧化作用的方法和原理。
实验原理:在肝脏中，脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A。
2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。
乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。
乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。
本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。
反应式如下：2NaOH +I2─→NaOI +NaI +H2OCH3COCH3 +3NaOI ─→CHI3（碘仿）+CH3COONa +2NaOH 剩余的碘，可以用标准硫代硫酸钠滴定。
NaOI +NaI +2HCl ─→I2 +2NaCl +2H2OI2 +2Na2S2O3─→Na2S4O6 +2NaI根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。
试剂和器材一、试剂0.1%淀粉溶液；0.9%氯化钠溶液；15%三氯乙酸溶液；10%氢氧化钠溶液。
10％盐酸溶液：浓盐酸一般浓度35%~37%，取浓盐酸277.8 mL定容到1000 mL。
0.5mol/L丁酸溶液：取5 mL丁酸溶于100 mL0.5mol/L氢氧化钠溶液中。
0.1mol/L碘溶液：称取12.7g碘和约25g碘化钾溶于水中，稀释到1000 mL，混匀，用标准0.05mol/L硫代硫酸钠溶液标定。
标准0.01mol/L硫代硫酸钠溶液：临用时将已标定的0.05mol/L硫代硫酸钠溶液稀释成0.01mol/L。
1/15mol/L pH7.6磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液86.8mL与1/15mol/L磷酸二氢钠溶液13.2mL混合。
二、材料新鲜猪肝。
三、器材锥形瓶50mL（⨯ 2）; 移液管5mL（⨯ 5），2mL（⨯ 45）；微量滴定管5mL（⨯ 1）;漏斗；恒温水浴。
操作方法一、肝糜的制备称取肝组织5g置于研钵中。
加少量0.9%氯化钠溶液，研磨成细浆。
脂肪酸β-氧化作用
实验注意事项
• 肝脏要用打碎机打碎前最好剪的碎点，打碎过程中转速不要太快， 可以中间停顿下 • 在低温下制备新鲜的肝糜，以保证 酶的活性。 • 滴定的速度是前快后慢，当溶 液变浅黄色后，加入指示剂就 要慢慢一滴一滴的滴。 • 滴定时淀粉指示剂不能太早 加入，只有当被滴定液变浅 黄色时加入最好，否则将影 响终点的观察和滴点结果。
?第四小组实验汇报?第四小组实验汇报?指导老师斯越秀实验目的?了解脂肪酸的氧化作用?通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量掌握测定氧化作用的方法及其原理实验原理在生物体内肝脏内脂肪酸经一氧化的作用生成乙酰辅酶a两分子的乙酰辅酶a可缩合生成乙酰乙酸
第四小组实验汇报 指导老师 斯越秀
实验目的
了解脂肪酸的β-氧化作用 通过测定和计算反应液内丁酸氧 化生成丙酮的量，掌握测定β-氧 化作用的方法及其原理
钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮 的量。 肝脏的丙酮含量（mmol/g） = （A—B）* CNa2S2O3 * 1/6 *5
A：滴定对照所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 B：滴定样品所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 CNa2S2O3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度（M） 1/6：1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量
3、什么叫酮体？为什么正常代谢时产生的酮体含量少？在什么情况下 血中酮体含量增高，而尿中也能出现酮体？ 答：酮体指在肝脏中，脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸、β -羟基 丁酸及丙酮，三者统称为酮体。代谢正常的情况下，血糖能够供给 人体足够的能量，满足机体的需要。这时就不需要脂肪大量分解来 提供能量。酮体的生成就是来自于肝内脂肪酸的分解。脂肪不大量 分解，自然没有大量脂肪酸分解成酮体。在糖尿病人尿液中可能出 现酮体。 5、查阅资料，介绍在哪些情况下会促进脂肪酸的氧化?。
脂肪酸β氧化
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总结：
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意义：
可知每进行一次循环，即脱氢、水化、再脱氢、硫解四 个步骤，脂肪酸失去两个碳，生成一分子乙酰CoA、 FADH2、NADH，它们经氧化磷酸化后每分子分别生成 10ATP 、1.5ATP 、2.5ATP。 所以1mol n个碳脂肪酸彻底氧化共可产生:
(n/2－1)*(1.5+2.5)+n/2*10=7n－4 mol ATP 因为脂肪酸活化消耗2个高能磷酸键，相当于2分子ATP， 所以1分子软脂酸彻底氧化净生成7n－6 mol ATP
脂肪酸β氧化过程和总结
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目录
1.部位 A 2.过程 C
B 3.总结 D 4.意义
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氧化部位：
除脑组织外,大多数组织均可进行 脂肪酸β氧化，其中肝、肌肉最活 跃。该过程起始在胞液，之后在线为脂酰CoA（胞液）
RCH2CH2COOH + CoA-SH
脂酰辅酶A合成酶
ATP AMP
1
RCH2CH2CO~SC oA
脂酰辅酶A PPi
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2. 脂 酰 CoA 经 肉 碱 转 运 进 入 线 粒 体
肉碱脂酰转移酶Ⅰ（carnitine
acyl transferase Ⅰ）为脂肪 酸β氧化的关键酶
2
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3. 脂酰CoA分解产生乙酰CoA、FADH2、NADH
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脂肪酸的β一氧化作用—酮体的生成及测定
脂肪酸的β一氧化作用—酮体的生成及测定徐云剑一、实验目的：1．了解脂肪酸的β一氧化作用2 . 过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量； 3. 掌握测定β一氧化作用的方法及其原理。
二、实验原理：在肝脏内脂肪酸经 β一氧化的作用生成乙酰辅酶A ，两分子的乙酰辅酶A 可缩合生成乙酰乙酸。
乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成 β一羟丁酸。
乙酰乙酸，β一羟丁酸和丙酮总称为酮体。
肝脏不能利用酮体，必须经血液运至肝外组织特别是肌肉和肾脏，再转变为乙酰辅酶A 而被氧化利用。
酮体作为有机体代谢的中间产物，在正常的情况下，其产量甚微，患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。
其反应历程如下：CH 3 | CH 2| CH 2 |COOH （丁酸）CH 3 | CH‖ CH |COOH （丁烯酸） CH 3 |CHOH| CH 2 | COOH（β-羟基酸） CH 3 | C=O —→ | CH 2 | COOH（乙酰乙酸）脱羧2乙酰辅酶ACH 3COCH 3 （丙酮）本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应滴定。
在碱性条件下，丙酮与碘生成碘仿。
反应式如下：2HaOH+I 2===NaOI+NaI+H 2OCH 3COCH 3+3NaOI===CHI 3+CH 3COONa+2NaOH剩余的碘可用标准Na2S2O3滴定NaOI+NaI+2HCl===I 2+2NaCl+H 2O I 2+2Na 2S 2O 3===Na 2S 4O 6+2NaI根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。
22H H -+−−−→←−−−2H -−−−→HOH−−−→三、实验材料、试剂和仪器：（一）实验材料家兔（或鸡或大鼠）的新鲜肝脏（二）实验仪器1、匀浆机2、剪刀、镊子、漏斗3、50毫升锥形瓶3个4、碘量瓶4个5、试管若干及试管架6、5毫升微量滴定管7、玻璃皿8、恒温水浴锅9、电子天平（三）实验试剂1．0.1%淀粉溶液（溶于饱和氯化钠溶液中）2．0.9%氯化钠溶液3．0.5mol/L正丁酸溶液：取4.5毫升正丁酸，用1N氢氧化钠溶液中和至pH=7.6,并稀释至100毫升。
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实验九脂肪酸β-氧化
目的要求：
（1）了解脂肪酸的β-氧化作用。
(2) 掌握测定β-氧化作用的方法和原理。
实验原理:
在肝脏中，脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A。
2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。
乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。
乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。
本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。
反应式如下：
2NaOH +I2─→NaOI +NaI +H2O
CH3COCH3 +3NaOI ─→CHI3（碘仿）+CH3COONa +2NaOH
剩余的碘，可以用标准硫代硫酸钠滴定。
NaOI +NaI +2HCl ─→I2 +2NaCl +2H2O
I2 +2Na2S2O3─→Na2S4O6 +2NaI
根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。
试剂和器材
一、试剂
0.1%淀粉溶液；0.9%氯化钠溶液；15%三氯乙酸溶液；10%氢氧化钠溶液。
10％盐酸溶液：浓盐酸一般浓度35%~37%，取浓盐酸277.8 mL定容到1000 mL。
0.5mol/L丁酸溶液：取5 mL丁酸溶于100 mL0.5mol/L氢氧化钠溶液中。
0.1mol/L碘溶液：称取12.7g碘和约25g碘化钾溶于水中，稀释到1000 mL，混匀，用标准0.05mol/L硫代硫酸钠溶液标定。
标准0.01mol/L硫代硫酸钠溶液：临用时将已标定的0.05mol/L硫代硫酸钠溶液稀释成0.01mol/L。
1/15mol/L pH7.6磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液86.8mL与1/15mol/L磷酸二氢钠溶液13.2mL混合。
二、材料
新鲜猪肝。
三、器材
锥形瓶50mL（⨯ 2）; 移液管5mL（⨯ 5），2mL（⨯ 45）；微量滴定管5mL（⨯ 1）;漏斗；恒温水浴。
操作方法
一、肝糜的制备
称取肝组织5g置于研钵中。
加少量0.9%氯化钠溶液，研磨成细浆。
再加入0.9%氯化钠溶液至总体积为10mL。
二、β-氧化作用
取2个50mL锥形瓶，各加入3mL 1/15mol/L pH7.6磷酸盐缓冲液。
向其中一个锥形瓶中加入2mL正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。
然后各加入2mL肝组织糜。
混匀，置于37℃恒温水浴中保温。
二、沉淀蛋白质
保温1小时后，取出锥形瓶，各加入3mL15%三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加2mL正丁酸，混匀，静置15分钟后过滤。
将滤液分别收集在两个试管中。
三、酮体的测定
吸取2种滤液各2mL分别放入另两个锥形瓶中，再各加3mL0.1mol/L碘溶液和3mL10%氢氧化钠溶液。
摇匀后，静置10分钟。
加入3mL10%盐酸溶液中和。
然后用0.01mol/L标准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。
滴定至浅黄色时，加入3滴淀粉溶液作为指示剂。
摇匀，并继续滴到蓝色消失。
记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠溶液的毫升数，并按下式计算样品中的丙酮含量。
四、计算
肝脏中的丙酮含量（mmol/g）=（A-B）×C Na
2S2O3×
1
6
式中：A为滴定对照所消耗的0.01mol/L硫代硫酸钠溶液的mL数；
B为滴定样品所消耗的0.01mol/L硫代硫酸钠溶液的mL数。
C Na
2
S2O3为标准硫代硫酸钠溶液的浓度(mol/L)。
注意事项
（1）肝糜必须新鲜，放置过久则失去氧化脂肪酸的能力。
（2）加盐酸溶液中和时一定要准确量取，确保酸碱中和。
思考题
1．什么是酮体？
2．本实验如何计算样品中的丙酮含量？。