高中生物第四章生物化学与分子生物学技术实践4.1蛋白质的分离与纯化方法教案(选修1)

高二生物生物成分的分离与测定技术导学案

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一、学习目标：

知道蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法，蛋白质抽提方法，掌握蛋白质的分离与纯化方法。

二、知识构成：

1．蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法有：根据蛋白质的不同特性，分别可选择哪些抽提方法？、

、

蛋白质的纯化主要是根据之间以及之间在、、、等方面存在的差异进行的。常用的方法包括、、等。

2．用电泳分离纯化蛋白质时，泳动速度主要取决于，即。此外，、等因素对泳动速度也有影响。

3．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤包括：、

、、、、

、、、、。

4．浸泡醋酸纤维薄膜前，用笔做记号是在 (填“光泽面”或“非光泽面”)；点样是在 (填“光泽面”或“非光泽面”)；平悬薄膜时，(填“光泽面”或“非光泽面”)朝上。

5．经电泳后，可以在薄膜上看到条色带，它们分别是、

、、、。

'6．植物芳香油的提取方法有和等。

三、学法和自检：

本节内容主要通过看书、分析蛋白质的提取、分离、纯化的不同方法。

动手试一试：

1]盐析法分离蛋白质的原理是 ( )

A．破坏蛋白质的一级结构 B．破坏蛋白质的二级结构 C．破坏蛋白质水化膜而改变溶解度 D．使蛋白质发生变性沉淀

2]利用透析法将蛋白质和其他小分子物质分离的原理是 ( )

A．利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性 B．利用蛋白质分子的水溶性

C．利用蛋白质分子的胶体性 D．利用蛋白质分子所带电荷

3]．下列关于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的说法不正确的是 ( )

A．实验所用的巴比妥缓冲液的pH为8．6 B．点样是在薄膜的光泽面上进行的C．实验后可以得到五条色带 D．整个实验最关键的步骤是点样

4]．有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pH分别为 4．5、5．2、6．6、7．2，电泳时欲使其中三种泳向正极，则缓冲液的pH应该是 ( )

A．2．0 B．5．0 C．6．0 D．7．0

课题生物成分的分离与测定技术

四、达标检测

1．(多选)在蛋白质粗提取时，破碎细胞的方法有 ( )

A．研磨法 B．超声波法 C．酶解法 D．机械破碎

2．分离水溶性蛋白质所选用的提取溶剂是( )

A．酸性溶液 B．碱性溶液 C．中性缓冲液 D．有机溶剂

3．(多选)纯化蛋白质的原理是根据不同蛋白质之间以及蛋白质与其他分子之间在哪些等方面存在的差异进行的 ( )

A．分子大，B．溶解度 C．所带电荷的多少 D．吸附性质

4．某蛋白质等电点为7．5，在pH6．O的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为 ( )

A．向负极移动 B．向正极移动 C．不运动 D．同时向正极和负极移动

5．在pH 5．12时进行电泳，哪种蛋白质既不向正极移动也不向负极移动 ( ) A．血红蛋白：pI(等电点)一7．07 B．鱼精蛋白：pI一12．20

C．a1一球蛋白：pI一5．06 D．B一球蛋白：pl=5．12

6．血清蛋白电泳时通常用pH 8．6的缓冲液，此时各种蛋白质所带的电荷为( )

A．清蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷 B．清蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷 C．各种蛋白均带正电荷 D．各种蛋白均带负电荷

7．(多选)支持物电泳常采用的支持物有 ( )

A．滤纸 B．醋酸纤维薄膜 C．大分子凝胶 D．纤维素

五、学习小结和课外作业：

1、学习小结：

2、上本作业：列举蛋白质粗提取时次报的破碎、蛋白质的抽提、纯化方法。

3、课本：64页1 2 3 4 5

4、补充练习：

8．请根据血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验回答下列问题：

(1)实验所用的主要试剂有：

(2)实验所用的缓冲液的pH为，因

为。

(3)点样应点在薄膜的面，方法是用在血清中蘸一下，在离薄膜一端

cm处轻轻按下，随即提起。

(4)实施电泳时，所用电压为，膜宽电流强度，时

间。

(5)实验结果时，薄膜上呈条色带，分别代

表。

9．选择正确答案的序号。、清蛋白一球蛋白、一球蛋白、一球蛋白、球蛋白

A．清蛋白 B．α1一球蛋白 C．α2--球蛋白 D．β一球蛋白 E．γ一球蛋白

(1)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最快的是 ( )

(2)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最慢的是 ( )

(3)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最深的是 ( )

(4)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最浅的是 ( )

(5)正常人血清中的各种蛋白质，在pH8．6的缓冲液中负电性最强的是 ( )

(6)正常人血清中的各种蛋白质，在pH8．6的缓冲液中负电性最弱的是 ( )

10．醋酸纤维薄膜电泳可把血清蛋白分成五条带，由负极数起它们的顺序是 ( ) A．γ一球蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、清蛋白

B．清蛋白、β一球蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、γ一球蛋白

C．γ-球蛋白、βB一球蛋白、α2一球蛋白、α1一球蛋白、清蛋白

D．清蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、γ一球蛋白