紫外可见分光光度计的曲线绘制(特选参考)
仪器分析课件 第3章 紫外分光光度法
检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制
和结果处理
记录装置
二、分光光度计的类型
（一）单光束分光光度计
光源 单色器
参比 样品
检测器
显示器
• 只有一条光路，通过变换参比池和样品池的位 置，使它们分别置于光路来进行测定
国产751型、752型、721型、722型、UV-1100 型、英国SP-500型
E2a ca E2b
(3) 图计算法----两组分吸收光谱完全重叠--混合样品测定 (3)图中，a,b 吸收光谱双向重迭，互相干扰，在最大波长处互相
吸收。处理方法如下：
解线性方程组 过程：
（三）示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量 较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。
第三节 紫外-可见分光光度计
依据朗伯-比尔定律，测定待测液吸光度A的仪器。（选择不同波
长单色光λ、浓度） 分光光度计外观 分光光度原理图:
0.575
光源
单色器
吸收池
检测器 信号处理及显示
信号处理 显示器
单色器
分光光度计外观
吸收池 检测器
光源
721型可见分光光度计
一、主要部件
1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光
浓度C及液层厚度L的乘积成正比。
注意! 适用范围
①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。 ③吸光度A具有加和性。Aa+b+c= Aa &光系数
A=k c L
k = A /c L
1、摩尔吸光系数或Em： 在一定λ下，c=1mol/L，L=1cm时的吸光度。单位：L/(mol.cm)
UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程
UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程1开机预热1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源，打开桌面上软件UVProbe2.21,单击，出现如下对话框（UV-2550PC Series-Rev.A(FD 00)）：仪器进入初始化状态。
1.2初始化大约需要5min，进行一系列的机械和光路的检查和初置，当所有项目初始化完毕后，单击OK。
1.3初始化完成后，需预热15min，即可往下操作。
2基线校正2.1选择中的（photometric光度），打开光度模块。
2.2单击光度计键条中的（baseline基线），启动基线校正操作。
2.3当基线参数对话框（baseline Parameters）弹出时：在开始波长和结束波长中分别输入实验所需的波长范围内进行基线校正,点击OK。
例如，在Start中输入700，在 End中输入300，点击OK，从700nm开始扫描。
2.4待扫描结束后，点击输出窗口Instrument History（仪器履历）标签。
查看列出的基线校正信息。
注意在基线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，读数变化≤3nm可接受。
当完成基线校正后，可进行以下操作。
3光度测定3.1首先选择测定方式，在主菜单的所示的各键中，选择（photometric 光度）。
3.2 参数的设置（以硝酸盐为例说明）：点击菜单栏中的键，出现图（photometric Method Wizard-[Wavelengths]：在wavelength(波长类型)中可供选择point（单点）和range（范围）,point表示测定单点波长； range表示测定波长范围。
例如选择Point,在Wavelength(nm)（波长）中输入538，则Column Name出现WL538.0，点击add（添加）加入，点下一步，出现图（photometric Method Wizard-[Calibration]）：在Type（Multi Point,Single Point，K-Factor，Raw date）中选择MultiPoint，在Formula（Fixed wavelength，Ratio，Different）中选择Fixed Wavelength,WL1选择上一步添加过的波长，例如WL538.0为上面添加过的。
紫外可见分光光度计的曲线绘制
一、测定溶液中物质的含量可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。
测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。
也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。
含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；⑵可以避免其它物质的干扰。
二、用紫外光谱鉴定化合物使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。
方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。
各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。
当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。
一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。
紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。
紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。
除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。
紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。
选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。
当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。
配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。
11-紫外分光光度法测定苯酚标准曲线
一、实验目的掌握紫外光谱法进行物质定性、定量分析的基本原理；2、学习紫外--可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。
物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。
其中，最大吸收波长λ、摩尔吸收系数ε及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。
由于在λmax处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出λmax，据此对物质进行定量分析。
用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=εbc。
三、主要仪器与试剂主要仪器：紫外-可见分光光度计；1cm石英吸收池2个；50mL比色管5支；5mL、1支；吸耳球1个。
试剂：苯酚标准溶液：100mg/L；四、实验步骤(1)、分析溶液的配制取5支50mL的比色管，用移液管分别准确加入0.5mL、1mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL浓度为100mg/L的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。
实验数据记录于标准表中。
(2)、确定最大吸收波长取稀释后浓度为8 mg/L的苯酚标准溶液，在紫外-可见分光光度计上，用1cm石英吸收池，去离子水作参比溶液，在200~330nm波长范围内进行扫描，绘制苯酚的吸收曲线。
在曲线上找出λmax1、λmax2。
(3)、标准曲线的制作各浓度的苯酚标准溶液，用1cm石英吸收池，去离子水作参比溶液，在选定的最大波长下，按顺序从低至高浓度依次测量各溶液的吸光度，实验数据记录于标准表中。
以吸光度对浓度作图，作出标准工作曲线。
五、数据记录及结果分析标准曲线图六、思考题紫外分光光度计的基本结构。
（完整版）仪器分析试题及答案
（完整版）仪器分析试题及答案复习题库绪论1、仪器分析法：采⽤专门的仪器，通过测量能表征物质某些物理、化学特性的物理量，来对物质进⾏分析的⽅法。
（ A ）2、以下哪些⽅法不属于电化学分析法。
A、荧光光谱法B、电位法C、库仑分析法D、电解分析法（ B ）3、以下哪些⽅法不属于光学分析法。
A、荧光光谱法B、电位法C、紫外-可见吸收光谱法D、原⼦吸收法（ A ）4、以下哪些⽅法不属于⾊谱分析法。
A、荧光⼴谱法B、⽓相⾊谱法C、液相⾊谱法D、纸⾊谱法5、简述玻璃器⽫的洗涤⽅法和洗涤⼲净的标志。
答：（1）最⽅便的⽅法是⽤肥皂、洗涤剂等以⽑刷进⾏清洗，然后依次⽤⾃来⽔、蒸馏⽔淋洗。
（3分）（2）玻璃器⽫被污染的程度不同，所选⽤的洗涤液也有所不同：如：①⼯业盐酸——碱性物质及⼤多数⽆机物残渣（1分）②热碱溶液——油污及某些有机物（1分）③碱性⾼锰酸钾溶液——油污及某些有机物（1分）（3）洗涤⼲净的标志是：清洗⼲净后的玻璃器⽫表⾯，倒置时应布上⼀层薄薄的⽔膜，⽽不挂⽔珠。
（3分）6、简述分析天平的使⽤⽅法和注意事项。
答：（1）⽔平调节。
观察⽔平仪，如⽔平仪⽔泡偏移，需调整⽔平调节脚，使⽔泡位于⽔平仪中⼼。
（2分）（2）预热。
接通电源，预热⾄规定时间后。
（1分）（3）开启显⽰器，轻按ON键，显⽰器全亮，约2 s后，显⽰天平的型号，然后是称量模式0.0000 g。
（2分）（4）称量。
按TAR键清零，置容器于称盘上，天平显⽰容器质量，再按TAR键，显⽰零，即去除⽪重。
再置称量物于容器中，或将称量物（粉末状物或液体）逐步加⼊容器中直⾄达到所需质量，待显⽰器左下⾓“0”消失，这时显⽰的是称量物的净质量。
读数时应关上天平门。
（2分）（5）称量结束后，若较短时间内还使⽤天平（或其他⼈还使⽤天平），可不必切断电源，再⽤时可省去预热时间。
⼀般不⽤关闭显⽰器。
实验全部结束后，按OFF键关闭显⽰器，切断电源。
把天平清理⼲净，在记录本上记录。
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
卫生化学笔记：紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计（一）概述一、光学分析法光是一种电磁辐射，电磁辐射是一种以巨大的速度通过空间而不需要任何介质作为传播媒介的光子流，具有波粒二象性电磁波谱：按波长顺序排列的电磁辐射近紫外区（200-400nm）和可见光区（400-780nm）能级跃迁类型为：原子的价电子或分子的成键电子能级二、光学分析法的分类1.光谱法与非光谱法当物质与电磁辐射相互作用时，若物质内部发生能级跃迁，记录由能级跃迁所产生的辐射能强度随波长的变化的图谱称为光谱（spectrum）,利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光谱分析法。
2.吸收光谱与发射光谱物质通过电致激发，热致激发或光致激发等过程获取能量，成为激发态的原子或分子，激发态的原子或分子极不稳定，它们可能以不同的形式释放能量，从激发态回到基态或低能态，如果是以电磁辐射的形式释放多余的能量就产生发射光谱。
吸收光谱是物质吸收相应的辐射能而产生的光谱。
其实质在于辐射使物质粒子发生由低能级（一般为基态）向高能级（激发态）的能级跃迁，被选择性吸收的辐射光子能量应为跃迁后与跃迁前两个能级间的能量差。
利用物质的吸收光谱进行定性，定量及结构分析的方法称为吸收光谱法。
3.分子光谱法与原子光谱法原子光谱法是测定气态原子（或离子）外层或内层电子跃迁所产生的原子光谱为基础的分析方法。
为线状光谱。
分子光谱法是以测定分子转动能级，分子中原子的振动能级（包括分子转动能级）和分子电子能级（包括振动-转动能级）跃迁所产生的分子光谱为基础的定性，定量和物质结构分析方法，为带状光谱。
三、紫外-可见分光光度计当辐射通过固体、液体或气体等透明介质分子时，物质分子选择性吸收紫外-可见光谱区的光辐射，根据吸收特征和吸收程度来研究物质组成和结构的定性、定量分析方法。
紫外可见分光光度法的特点：灵敏度较高；准确度较高；选择性较好；仪器设备简单；应用范围广。
（二）基本原理一、紫外-可见吸收光谱的形成1.分子的能级分布分子电子能级分子振动能级分子转动能级2.紫外-可见吸收光谱及其特征吸收峰谷肩峰末端吸收二、紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系1.有机化合物的电子跃迁类型σ → σ*跃迁：需能量最大，吸收峰波长一般小于150nm。
紫外可见分光光度法实验
紫外可见分光 光度法实验
实验2 鉴定和识别有机化合 物中的电子跃迁类型
实验3 紫外分光光度法同时测 定维生素C和维生素E
指导老师：马少妹
实验4 三氯苯酚存在时苯 酚含量的紫外分光 光度法测定
实验5 紫外可见吸收光谱法 测定双组分混合物
2020/9/30
仪器分析实验报告写法
1.每个实验于下个实验之前交，每人交一份。报告要书写整齐清楚。 2.报告不可剽窃或抄袭他人之作，更不可造假数据。 3.报告以A4大小纸张撰写，格式如下: 封面 : 记载实验序号、实验项目、实验日期及报告人姓名。 內容 : 按“前言→实验方法及步骤→实验結果→ 讨论→结语→参考文献→ 附录”等。 (I)在“前言”(或“绪论”)部份，扼要敘述实验目的，所使用之仪器的特 性，分析的基本原理，理论背景等，并用几句话归纳所作的实验项目及所 获得的结果。
2020/9/30
（6）气态苯和溶液中苯的吸收曲线有何个同？为什么？ （7）助色团—NH2将如何影响苯胺？质子化作用后，产高等教育出版社 赵文宽等编，《仪器分析实验》）
2020/9/30
实验3 同时测定维生素C和维生素E 2．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系[抗坏血酸(维生素C) 和α-生育酚(维生索E)的实验方法。 2．仪器和试剂 916型紫外-可见分光光度计； ，石英比色皿2只，容量瓶移和 液管若干。抗坏血酸（AR）：0.0132g／L在无水乙醇中(7.50 ×l0-5mol/L)；α-生育酚(维生素E)：0.0488g/L在无水乙醇中； 无水乙醇；未知溶液：在无水乙醇中含有抗杯血酸和α-生育酚 溶液。
2020/9/30
为292nm)，以吸光度对浓度作图。
（2）计算抗坏血酸和α-生育酚在最大吸收波长（246nm和 292nm）时的摩尔吸光系数：即标准曲线图的斜率。
紫外可见分光光度法题库（选择题）
紫外可见分光光度法题库（选择题）紫外可见分光光度法题库（选择题）1. 在紫外－可见光度分析中极性溶剂会使被测物吸收峰 ( C )A 消失B 精细结构更明显C 位移D 分裂2. ⽤⽐⾊法测定邻菲罗啉－亚铁配合物时,配合物的吸收曲线如图1所⽰,今有a、b、c、d、e滤光⽚可供选⽤,它们的透光曲线如图2所⽰,你认为应选的滤光⽚为 ( B )3. 欲测某有⾊物的吸收光谱，下列⽅法中可以采⽤的是 ( D )A ⽐⾊法B ⽰差分光光度法C 光度滴定法D 分光光度法4. 按⼀般光度法⽤空⽩溶液作参⽐溶液，测得某试液的透射⽐为 10%，如果更改参⽐溶液，⽤⼀般分光光度法测得透射⽐为 20% 的标准溶液作参⽐溶液，则试液的透光率应等于 ( C )A 8%B 40%C 50%D 80%5.邻⼆氮菲亚铁配合物，其最⼤吸收为 510 nm，如⽤光电⽐⾊计测定应选⽤哪⼀种滤光⽚？ ( C )A 红⾊B 黄⾊C 绿⾊D 蓝⾊6.下列化合物中，同时有 n→π*，π→π*，σ→σ*跃迁的化合物是( B )A ⼀氯甲烷B 丙酮C 1,3-丁⼆烯D 甲醇7. 双波长分光光度计的输出信号是 ( B )A 试样吸收与参⽐吸收之差B 试样在λ1和λ2处吸收之差C 试样在λ1和λ2处吸收之和 D 试样在λ1的吸收与参⽐在λ2的吸收之差8.在吸收光谱曲线中，吸光度的最⼤值是偶数阶导数光谱曲线的 ( D )A 极⼤值B 极⼩值C 零D 极⼤或极⼩值9.双光束分光光度计与单光束分光光度计相⽐，其突出优点是 ( D )A 可以扩⼤波长的应⽤范围B 可以采⽤快速响应的检测系统C 可以抵消吸收池所带来的误差D 可以抵消因光源的变化⽽产⽣的误差10. 在紫外光谱中，λmax 最⼤的化合物是 ( D)11. ⽤实验⽅法测定某⾦属配合物的摩尔吸收系数ε，测定值的⼤⼩决定于( B )A 配合物的浓度B 配合物的性质C ⽐⾊⽫的厚度D ⼊射光强度12. 下列结构中哪⼀种能产⽣分⼦荧光？ ( A)13. 有下列四种化合物已知其结构，其中之⼀⽤ UV 光谱测得其λmax 为 302nm ，问应是哪种化合物？ ( A ) OHNO 2COOHIA B C D14. 许多化合物的吸收曲线表明，它们的最⼤吸收常常位于 200─400nm 之间，对这⼀光谱区应选⽤的光源为 ( A )A 氘灯或氢灯B 能斯特灯C 钨灯D 空⼼阴极灯灯15.下列四种化合物中,在紫外光区出现两个吸收带者是 ( D )A ⼄烯 B1,4-戊⼆烯C1,3-丁⼆烯 D 丙烯醛16.助⾊团对谱带的影响是使谱带 ( A )A 波长变长B 波长变短C 波长不变D 谱带蓝移17. 对化合物 CH 3COCH=C(CH 3)2的n — *跃迁,当在下列溶剂中测定,谱带波长最短的是 ( D )B 氯仿C 甲醇D ⽔18.紫外-可见吸收光谱曲线呈⾼斯分布的是 ( C )A 多普勒变宽B ⾃吸现象C 分⼦吸收特征D 原⼦吸收特征19.指出下列哪种是紫外-可见分光光度计常⽤的光源？ ( D )A 硅碳棒B 激光器C 空⼼阴极灯D 卤钨灯20.指出下列哪种不是紫外-可见分光光度计使⽤的检测器？ ( A ) CH 3 CH CHCOCH3 CH 3CH 3 D CBBrOHOOCH 3CH 3 CH 3 AA 热电偶B 光电倍增管C 光电池D 光电管21.指出下列哪种因素对朗伯-⽐尔定律不产⽣偏差？ ( D )A 溶质的离解作⽤B 杂散光进⼊检测器C 溶液的折射指数增加D 改变吸收光程长度22.分⼦荧光过程是 ( A )B 能量源激光发光C 化学发光D 电致发光23.在分⼦荧光测量中, 在下列哪⼀种条件下, 荧光强度与浓度呈正⽐? ( B )A 荧光量⼦产率较⼤B 在稀溶液中C 在特定的激发波长下D ⽤⾼灵敏度的检测器24.下列哪种⽅法的测量灵敏度⾼? ( A )A 磷光分析法B 荧光分析法C 紫外-可见分光光度法D ⽬视⽐⾊法25.已知相对分⼦质量为320的某化合物在波长350nm处的百分吸收系数(⽐吸收系数)为5000, 则该化合物的摩尔吸收系数为 ( D )A 1.6×104L/(moL·cm) B3.2×105L/(moL·c m)C1.6×106L/(moL·cm) D 1.6×105L/(moL·cm)26.在310nm时, 如果溶液的百分透射⽐是90%,在这⼀波长时的吸收值是 ( D )A 1B 0.1C 0.9D 0.0527.荧光分析法和磷光分析法的灵敏度⽐吸收光度法的灵敏度 ( A )A ⾼B 低C 相当D 不⼀定谁⾼谁低28. 紫外-可见吸收光谱主要决定于 ( B )A 分⼦的振动、转动能级的跃迁B 分⼦的电⼦结构C 原⼦的电⼦结构D 原⼦的外层电⼦能级间跃迁29. 指出下列说法中哪个有错误? ( D )A 荧光和磷光光谱都是发射光谱B 磷光发射发⽣在三重态C 磷光强度I p与浓度c的关系与荧光⼀致D 磷光光谱与最低激发三重态的吸收带之间存在着镜像关系30. 指出下列不正确的说法？ ( B )A 分⼦荧光光谱通常是吸收光谱的镜像B 分⼦荧光光谱与激发波长有关C 分⼦荧光光谱较激发光谱波长长D 荧光强度与激发光强度呈正⽐31、⼀束( )通过有⾊溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正⽐。
上海元析UV5100紫外-可见分光光度计的使用
UV/VIS5100紫外-可见分光光度计的使用UV5100是由上海元析仪器有限公司生产的紫外-可见分光光度计，因波长范围是：200～1000nm的连续光谱，所以能在紫外、可见、近红外光谱区区域对样品物质作定性和定量分析。
一、UV/VIS-5100型分光光度计的性能指标波长范围：200nm-1000nm光谱带宽：4nm波长精度：≤±2nm波长重复性：≤0.5nm光度准确度：±0.5%T光度重复性：0.3%T稳定性：0.003A/h杂散光：≤0.2%T数据输出：USB打印输出：并行口显示系统：128×64位液晶显示器光源：钨灯、氘灯透射比范围：0.0－200%(T)吸光度范围：-0.3－3（A）浓度显示范围：0-9999（C）外形尺寸：430×300×160mm二、仪器的外部结构功能键描述：按钮功能用于测量模式（T，A，C，F）切换用于系统参数设定用于波长设置校空白键，用于调0.000Abs和100.0%T用于打印测试结果及数据删除上键，选择向上移动下键，选择向下移动返回上级菜单和停止键确认键，用于数据和菜单的确认三、仪器的基本操作1、开启和自检（1）仪器开启用电源线连接上电源，打开仪器开关（位于仪器的后右侧），仪器开机后进入系统自检过程。
（2）系统自检在自检状态，仪器会自动对滤光片、灯源切换、检测器、氘灯、钨灯、波长校正、系统参数和暗电流进行检测。
注：如果某一项自检出错，仪器会自动鸣叫报警，同时显示错误项，用户可按任意键跳过，继续自检下一项。
（3）系统预热仪器开机后，因电器件需要预热一定的时间后方可达到稳定状态；另外氘灯周围环境也需要一定时间方能达到热平衡，所以仪器需要预热约20分钟后，方可正常使用。
自检结果后，仪器进入预热状态，预热时间为20分钟，预热结束后仪器会自动检测暗电流一次。
预热时可以按任意键跳过。
（4）进入系统主菜单仪器自检结束后进入主界面。
《仪器分析—分光光度计》学科知识考试题库
《仪器分析—分光光度计》学科知识考试题库一、单选题1.在分光光度法中,应用光的吸收定律进行定量分析,应采用的入射光为()A、自然光B、单色光C、复合光D、互补光参考答案：B2.滴定分析中,若试剂含少量待测组分,可用于消除误差的方法是A、仪器校正B、空白试验C、对照分析参考答案：B3.721型分光光度计适用于()A、红外光区B、可见光区C、紫外光区D、紫外-可见光区参考答案：B4.用500ml容量瓶配制10㎎/ml的NACl溶液,需称取NACl多少A、1.25gB、5gC、10gD、2.5g参考答案：B5.树叶为什么显示是绿色()A、透射绿光B、吸收绿光C、折射绿光D、反射绿光参考答案：D6.下列说法正确的是()A、同等条件下,光的波长越大其能量就越大B、同等条件下,光的波长越小其能量就越大C、光的能量大小与波长无关D、同等条件下,光的能量大小与波长成正相关参考答案：B7.分光光度计使用时,绘制工作曲线的横坐标为A、吸光度B、浓度C、波长D、光程参考答案：B8.测定某有色溶液的吸光度为5A,若将该溶液稀释5倍,吸光度为?A、1AB、5AC、25AD、0.25A参考答案：A9.一束()通过有色溶液时,溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
A、平行可见光B、平行单色光C、白光D、紫外光参考答案：B10.测定某有色溶液的吸光度,用1Cm比色皿时吸光度为A,若用2Cm 比色皿,吸光度为?A、1.5AB、2AC、2.5AD、3A参考答案：B11.下列说法错误的是()A、溶液的吸光度与溶液浓度有关B、溶液的吸光度与溶液温度有关C、溶液的吸光度与光程有关D、溶液的吸光度与温度无关参考答案：D12.一个样品分析结果的准确度不好,但精密度好,可能存在A、操作失误B、记录有差错C、使用试剂不纯D、随机误差大参考答案：C13.吸光光度法测量时,入射光波长一般选在最大吸收波长处,因为这时测定有较高的()A、灵敏度B、选择性C、可信度D、重复性参考答案：A14.某分析工作者,在光度法测定前用参比溶液调节仪器时,只调至透光率为95.0%,测得某有色溶液的透光率为35.2%,此时溶液的真正透光率为多少?A、37.1%B、38.1%C、39.1%D、40.1%参考答案：A15.仪器在工作状态下,应按要求()后才可进行检定A、干燥B、清洗C、吹扫D、预热参考答案：D16.棱镜做为单色器是基于()A、光的干涉B、光的衍射C、光的折射D、光的透射参考答案：C17.待测溶液在检测前,应先将比色皿用待测溶液润洗()次A、1B、2C、3D、5参考答案：C18.某溶液中有AB两种物质,他们的吸光度分别为A1、A2,则该溶液的吸光度为()A、A1B、A2C、A1+A2D、A1-A2参考答案：C19.吸光度为()时,相对误差较小。
紫外可见分光光度计曲线设置已发布
紫外可见分光光度计曲线设置吸收曲线又称吸收光谱，是以波长λ（nm)为横坐标，以吸光度A为纵坐标所描绘的曲线。
曲线设置包括K系数法，单点标定和多点标定。
实际操作如下：（上海奥析科学仪器有限公司型号UV1700PC紫外可见分光光度计仪器开机自检进入定量分析，应用方法和曲线设置选择曲线设置。
）1.单点标定有两种方法实现单点标定。
一、直接输入法。
二、测量获得法。
使用直接输入法可以点击下方的浓度和吸光度文本框，分别输入浓度和吸光度即可。
使用测量获得法可以通过测量标准样品的吸光度来获得吸光度，同时输入标准样品的浓度即可获得一根标准曲线。
（CONC=Bconc/BABS)B代表标准样品。
操作如下：放入参比样品后，对该波长进行调满度，再单击【样品测试】键进入测量标准样品吸光度的画面。
进入样品测试画面后直接点击【测试】键获得吸光度。
获得吸光度后按【退出】键退出该画面并返回定量参数设置画面，在定量参数设置画面中的吸光度处自动更新为刚才测量获得得吸光度。
此时再按【确认】键即可开始测量被测样品。
2.K系数法在下面的斜率和截距文本框中分别输入斜率和截距即可。
此时的测量方法将封闭。
同时标准曲线建立。
（CONC=K*ABS+B)3 多点标定有两种方法实现多点标定。
一、直接输入法。
二、测量获得法。
本例以5个标样和建立1此方程曲线，以测量方式来获得吸光度。
操作如下：第一步：确定标准样品的个数，和所建立方程次方。
分别在标样个数和曲线次方后的文本框中输入5和1.第二步：选中测量方法中的测量数据。
第三步：放入参比样品单机调零键对参比样品在该波长下调满度。
第四步：按确认键进入建立方程阶段。
进入建立方程画面后首先输入标准样品的浓度，此时可以通过输入样品浓度的实际个数来修改标样的个数。
输入结束后，依次放入标准样品，再点击[读取标样值]按键。
分别读出标样的吸光度，经过几次平均后并自动写入相应浓度的吸光度中。
再点击[建立方程]按键，完成了方程的建立，同时可以看到方程的系数和相关系数及方程曲线。
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量一、实验目的1.了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。
2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。
3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。
二、实验原理为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。
根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。
三、仪器和试剂1.紫外可见分光光度计UV-2501（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。
2.NaOH溶液（0.1mol/L）3.苯甲酸钠标准溶液的配制(1)苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。
该贮备液可置于冰箱保存一段时间。
(2)苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。
(3)系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。
得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。
4.雪碧（500mL）5.蒸馏水四、实验步骤1.吸收曲线的绘制（1）系列标准溶液的配制50mL瓶编号 1 2 3 4 5 6 100.0mg/L苯甲酸钠标准溶液体积（mL）0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.000.1mol/L NaOH溶液体积（mL） 1.00用蒸馏水容量50.0系列标准溶液浓度（mg/L）0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 记录吸光度A值（2）吸收曲线的测定用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收曲线。
紫外可见分光光度计-测铅已发布
紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯一比耳定律( Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l（吸收光程）的函数。
其常用表达式为：A=∈×l×C （式中，∈为系数）紫外可见分光光度计广泛应用于冶金、机械、化工、医疗卫生、临床检验、生物化学、环境保护、食品、材料科学等领域的生产、教学和科研工作中，特别适合对各种物质进行定量及定性分析。
铅是一种具有蓄积性的元素，铅污染直接来源于饮用水、蔬菜、粮食、水果、肉类与畜产品，间接来源于食品的生产、包装、运输等过程。
铅危害主要表现为以下几个方面：影响脑、肾、神经系统和血红细胞等的功能；影响婴幼儿的生长和智力发育，损伤认知功能、神经行为和学习记忆能力等，严重者造成痴呆。
因此，对铅的有效检测一直备受关注。
本文采用紫外可见分光光度计法测定微量铅含量，通过正交实验研究了缓冲溶液PH值、显色剂二甲酚橙（XO）用量、表面活性剂氯代十六烷基吡啶（CPC）用量对铅含量测定的影响。
主要实验仪器：UV1902型双光束紫可见分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）以二溴羟基苯基卟啉为显色剂，配合物最大吸收波长为479nm，在最佳实验条件下绘制标准曲线，在0.06~1.00mg/ml范围内呈线性相关，线性回归方程为y=0.894x-0.022，相关系数为0.9994，摩尔吸光系数ε=2.8×105L·mol-1·cm-1，方法检出限为0.02ug/ml。
紫外可见分光光度法-第2章
基本原理：
荧光是由药物或代谢物等物质在吸收光能之后发射而出， 因此溶液的荧光强度和该溶液吸收光能的程度以及溶液中 荧光物质的荧光量子效率有关。溶液吸收光能，即被入射 光激发后，可以在溶液的各个方向观察荧光强度。由于激 发光的一部分被溶液吸收，一部分被透过。因此，在透射 光的方向观测荧光是不适宜的，一般是在与激发光源垂直 的方向观测荧光的强度。
3.要考虑成型工艺，合理计 算累积公差，以防按键手感 不良。
荧光分光光度法
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原理：
药物及代谢物在光照射下吸收紫外光或可见光的能量， 使外层电子由基态跃迁到较高能级的激发态。当处于激发 态的电子又回到基态时，可将这部分能量以光子形式发射 出而产生荧光。产生的荧光其能量比吸收光的能量小一 些．因此荧光的波长比照射光的波长要较长一些。
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根据光的吸收定律： A＝εCL，一阶导数dA／dλ＝dε／ dλ·C·L 二阶导数d2A／dλ2＝d2ε／dλ2·c·L，依次类推，在 任意波长处，导数光谱上的导数值与浓度成正比，这就是 导数光谱定量的理论依据据。20世纪60年代后期，有了双 波长分光光度计，20世纪70年代中期，微处理机被装配到 了分光光度计上，人们利用它的记忆及数据处理功能，可 以直接描绘出一阶、二阶、三阶、四阶等导数光谱，这样 就使得导数光谱的应用得到较快的发展。由于导数光谱灵 敏度高、分辨能力好，能消除杂质干扰，提高被测物光谱 的纯度，作为一种紫外分光光度法的定量方法，受到人们 越来越多的重视。
一般情况下二次萃取的回收率较一次萃取低但样本净化好并可以通过调节测定液的ph值改变被测物的吸收光谱使之避开干扰所以二次萃取的方法在hplc上及gc法中相对运用较少而在紫外可见分光光度法中相对应用较在应用紫外可见分光光度法测定体内药物分析时究竟采用一次提取还是二次提取应根据被测药物浓度所用有机溶剂提取能力的强弱分析方法的专属性等全面考虑
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一、测定溶液中物质的含量
可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。
测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。
也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。
含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：
⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；
⑵可以避免其它物质的干扰。
二、用紫外光谱鉴定化合物
使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。
方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。
各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。
当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。
一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。
紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。
紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。
除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。
紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。
选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。
当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。
配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。
那是否需要强制令A=0，再来进行拟合呢？如果y=A+Bx这样的形式可以，那么A需要多小才是可以接受的？
答：如果用样品空白溶液做参比，一般可以设置强制过零点；如果用蒸馏水做参比，一般不能强制过零点。
做曲线时一是要带双空白并减去空白A0, 二是应加0回归。
减去A0是希望消除试验方法固定偏倚对校准曲线的影响，当用校准曲线来估计未知样的浓度时，要考虑到试样的测量吸光度也会受到固定偏倚的影响，如果校准曲线和试样测定过程中出现的偏倚一样，偏倚是无需校正的，可有时两者的操作往往不是同时同批进行的，如由于时间或批次不同，固定偏倚有所变化，那么两者的吸光度就要做不同的校正。
即在每批分析时带空白，并对相应的信号进行校正。
试验证明加零回归的校准曲线与不加零回归校准曲线比较，两者的r和b值均无差异，但加零回归校准曲线截距a的绝对值明显变小，因此在作校准曲线的回归计算时必须加零回归，使回归线接近原点。
截距a对低浓度样品计算却影响甚大。
尤其是当样品浓度接近空白浓时，用回归方程计算时会出现负值，这是因为校准曲线回归后截距a>空白信号值所致，并非样品中存在产生负值的物质。
用回归方程计算结果将引入一个固定的误差，当a为正时，计算结果为负误差，当a为负时，计算结果为正误差。
本来样品的信号值>空白信号值，计算出来的结果却为负值，本来不可能检出的，却通过计算被检出了。
若将这些截然相反的结果上报将误导数据的后续应用工作。
因此应按规定将回归方程中的截距a与0作t检验，当取95％置信水平，经检验无显著性差异时，a作0处理，方程y=a+bx简化为y=bx后再投入使用，一般情况下a<0.005 和r≥0.999时可不必进行检验，a=处理(3)。
回归方程若不经过上述检验和处理而直接投入使用，必将使计算结果引入差值相当于截距a的系统误差。
肉桂醛-苯甲醛双组分体系的紫外光谱特性研究：标准曲线的绘制及检出限
分别用空白液配制桂醛标准质量浓度系列0.595mg/L、0.794mg/L、0.99211mg/L、2.013nmg/L、3.005mg/LL、3.997mg/L、4.990mg/L、6.010mg/L、7.003mg/L和苯甲醛标准质量浓度系列0.998mg/L、1.995mg/L、2.993mg/L、3.997mg/L、
5.986mg/L、7.981mg/L、10.026mg/L、12021mg/L.以空白液为参比，于249nm
和291nm处分别测定苯甲醛和桂醛的吸光度.以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，即得标准曲线，如图3所示.
经线性回归，得桂醛回归方程：A=01706x十0.004，A为吸光度，x为桂醛质量浓度(mg/L)，相关系数r＝0.9997，方法的线性范围0.8～8mg/L，检出限0.0352mg/L。
苯甲醛的回归方程为：A＝0.1169x+0.0007，x为桂醛质量浓度(mg/L)，相关系数：=0.9998，方法的线性范围1-12mg/L，检出限0.0796mg/L。
紫外可见分光光度计，先建立标准曲线，大概测多少个样比较准确？还有一般测的时候如何分布浓度会使得结果比较准确呢？
答：标准曲线的建立一般选取5个以上的浓度水平，浓度选取范围一般在方法规
定浓度的70%~130%，但紫外分光光度法还要考虑吸收值在0.2~0.6之间比较
好！物质的最大吸收峰是在可见光范围内的。
所以想问下那样的话最好在什么范围比较好呢？而且标准曲线的范围要包括
自己以后测样中的浓度才行吧？
答：不论是紫外还是可见，吸光度值最好在0.2-0.8之间。
样品浓度可以稀释。
最好是7个样，浓度前几个成倍数梯度分布，但是最大值不要太大，吸光度在0.
2到0.8之间，这是测样最可信的区域。