《中国药典》薄层色谱的基本要求精品PPT课件
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薄层色谱讲义ppt课件
氧化铝、离子交换纤维素、硅藻土、乙酰 化纤维素及聚酰胺等。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
《中国药典》薄层色谱的基本要求45页PPT
《中国药典》薄层色谱的基本要求
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
45
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
▪
27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
45
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
▪
26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
▪
27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
第二章鉴别薄层色谱法 ppt课件
一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱图象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱图象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
《中国药典》薄层色谱的基本要求
供起草标准用样品的要求 中成药薄层色谱鉴别 中药材薄层色谱鉴别
精品课件
中药标准制定技术要求
原则
保证用药安全
科学、先进、规范、适用
促进标准国际化
精品课件
中药标准制定技术要求
中药标准制定 《国家药品标准工作手册》中药质量标准
研究制定技术要求 方法学验证
中药质量标准方法学验证指导原则 （中国药典2010版一部）
尽量采用对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照
图谱清晰、斑点明显、分离度与重现性符合要求 根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显 色方法等色谱条件
色谱条件的优化应对三个以上的展开系统进行考察
确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件
选择合适的对照物质，确定对照物质用量、 浓度、溶剂、点样量等
阴性对照样品
生产单位应尽可能提供
研究单位自制
阴性样品系指按处方除去被测定的药味，按制法制备的 样品，注意应包括所有的辅料和工艺步骤，制成量应与 原标准相符
精品课件
鉴别
鉴别
显微鉴别 理化鉴别
色谱鉴别
特征图谱鉴别
一般理化鉴别 荧光鉴别 光谱鉴别
薄层色谱鉴别 液相色谱鉴别 气相色谱鉴别
精品课件
中药材薄层色谱鉴别
样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
精品课件
供起草用样品的要求
注意
中药材、饮片要求专家鉴定
对于具有多种不同规格的中成药，应收齐全部规格的样品
试验用样品必须采用合格原辅料依法生产的样品，收集的每批 样品均要有该企业的原辅料和成品的自检报告及详细生产工艺
精品课件
供起草用样品的要求
精品课件
供起草用样品的要求
精品课件
中药标准制定技术要求
原则
保证用药安全
科学、先进、规范、适用
促进标准国际化
精品课件
中药标准制定技术要求
中药标准制定 《国家药品标准工作手册》中药质量标准
研究制定技术要求 方法学验证
中药质量标准方法学验证指导原则 （中国药典2010版一部）
尽量采用对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照
图谱清晰、斑点明显、分离度与重现性符合要求 根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显 色方法等色谱条件
色谱条件的优化应对三个以上的展开系统进行考察
确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件
选择合适的对照物质，确定对照物质用量、 浓度、溶剂、点样量等
阴性对照样品
生产单位应尽可能提供
研究单位自制
阴性样品系指按处方除去被测定的药味，按制法制备的 样品，注意应包括所有的辅料和工艺步骤，制成量应与 原标准相符
精品课件
鉴别
鉴别
显微鉴别 理化鉴别
色谱鉴别
特征图谱鉴别
一般理化鉴别 荧光鉴别 光谱鉴别
薄层色谱鉴别 液相色谱鉴别 气相色谱鉴别
精品课件
中药材薄层色谱鉴别
样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
精品课件
供起草用样品的要求
注意
中药材、饮片要求专家鉴定
对于具有多种不同规格的中成药，应收齐全部规格的样品
试验用样品必须采用合格原辅料依法生产的样品，收集的每批 样品均要有该企业的原辅料和成品的自检报告及详细生产工艺
精品课件
供起草用样品的要求
精品课件
供起草用样品的要求
薄层色谱法PPT参考课件
17
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
18
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
18
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
第二章2 鉴别 薄层色谱法PPT课件
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点 样→展开→显色与检视
1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声 提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
11
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
A
B
W1
W2
d1
d2
5
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
2
1.出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
10
4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点 样→展开→显色与检视
1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声 提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
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2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
A
B
W1
W2
d1
d2
5
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
2
1.出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
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4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
薄层色谱法概述PPT课件【共52张PPT】
*
k 反映了两种溶质的平均迁移速度，其由流动相溶剂强度 决定 I0 -（ IR + IT ）=差为被介质吸收并转换为热的光强 4 丙酮 0. 氧化铝—有碱性、中性、酸性 放置时间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信噪比降低。 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 归一化法、内标法、外标法 这种影响一般使分配系数变小。 此外还有：化学键合相反相展开、化学键合相正相展开、离子交换、离子对色谱、凝胶、胶束、手性展开。 这类扫描仪技术上一些问题还未解决。 51 / 二氧六环 0. 展开距离一般为10-15cm。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用，选择的两个波长应接近些。 HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相色谱，色谱后衍生化受限制。
*
*
点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。
*
*
自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为cm。
*
薄层色谱参数
保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。，
《中国药典》薄层色谱的基本要求
薄层色谱技术在中药标准的优势
薄层色谱独有的特点是分析结果以直观的 彩色图像表达，为其它色谱技术所不能。 而图像给出的多层面的信息是文字难以表 达的，而且丰富多彩的图像可以给分析者 更多的思考判断的空间。
提供直观的彩色图像是薄层色谱独有的特点
离线操作的灵活性
各单元操作既有关联，又相互独立，点样 器材和方法、展开方式、显色试剂选择、 直观比较或扫描比较可根据需要灵活变通。 根据需要操作可以视实际需要和实验室条 件分层次进行和终止，节省分析时间和资 源。 由于是离线操作，所以个人占机时间短。
中成药薄层色谱鉴别
（1）薄层色谱具有分离与鉴别的特性，并具有直观、承载信 息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，是中成 药鉴别的首选方法。
（2）新建立的薄层色谱应该图谱清晰，斑点明显，分离 度、专属性、重现性与耐用性符合要求，并需要提供图谱；
（3）应尽量与该药材和饮片的薄层色谱鉴别方法一致，如因其他成分 干扰或制剂的提取方法不同，可增加提取纯化处理或展开剂优化。
展开剂的优化
主要考虑两方面：溶剂的极性和溶剂的选择性。
前者要求使待分离的主要物质的Rf值在0.3~0.7之间；当Rf值符合要求 后，进行等强度溶剂替换，直到分离度达到要求为止。
对于硅胶等吸附薄层和正相分配色谱来说，展开 剂的极性越大，溶剂强度就越大，洗脱能力就越 强，即同一物质在薄层板上的Rf值越大。 根据文献和样品所含化合物类型选择，并记录色 谱 纯溶剂→增减溶剂强度→混合，改性试剂，添加 酸碱、水等→获得最佳配比
新增薄层色谱鉴别要求
点样量选择：不同点样量的比较
展开剂选择：对三个以上的展开系统进行考察比较
中药材薄层层析ppt课件
3）对照品和对照药材同时对照(“双对照”) 为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照
品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。 例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品
来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
2）薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3）吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
中药材的薄层色谱法鉴别
薄层色谱法：在中药材及其制剂的定性鉴 别中得到广泛的应用，这主要是由于其具有分 离分析双重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏 度和专属性，成为中药鉴别的重要方法。
薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含 量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝薄层色谱
3、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体， 也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下三种方式： 1）对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制成 对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一颜 色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置一 种或数种对照品。 2）对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
《中国药典》薄层色谱的基本要求
.
同板多个样品平行比较
成本相对低廉、色谱生成快速、同板可以 同时产生多达16~18个样品色谱，共平行直 观地比较，色彩丰富的图像给人的视觉冲 击远远大于较为“呆板”的轮廓色谱图， 可以迅速地、粗略地，而且颇为有效地评 价样品色谱图像之间的相试程度。
.
《中国药典》薄层色谱的基本要求
供起草标准用样品的要求 中成药薄层色谱鉴别 中药材薄层色谱鉴别
由于是离线操作，所以个用性
薄层色谱最常用的是以硅胶板为基础固定相的正 相色谱，有多种组合的有机溶剂展开系统可供选 择；
甲苯系统；三氯甲烷系统；己烷系统；正丁醇系 统；乙酸乙酯系统等等。
酸性、碱性、中性。 高极性、中等极性、低极性。
.
色谱后衍生的专属性
对于多来源品种，每种收集3~5种；相关信息包括：产地 （如有可能表明野生或家种）、收集地、收集时间、收集人
独家生产的应不少于10批，多家企业生产的应尽量收集 每家企业的样品，5家以上企业生产的应至少收集5~10家 企业生产的样品
样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
不同温度、湿度考察，在5℃~35℃ 考察高低2个温度；在低相对湿度 （RH）15~30%和高相对湿度75~90% 各考察一个相对湿度
.
中成药薄层色谱鉴别
（1）薄层色谱具有分离与鉴别的特性，并具有直观、承载信 息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，是中成 药鉴别的首选方法。
（2）新建立的薄层色谱应该图谱清晰，斑点明显，分离 度、专属性、重现性与耐用性符合要求，并需要提供图谱；
《中国药典》薄层色谱的 基本要求
周兰 贵州省食品药品检验所中药（民族药）室
2014年5月
.
内容
同板多个样品平行比较
成本相对低廉、色谱生成快速、同板可以 同时产生多达16~18个样品色谱，共平行直 观地比较，色彩丰富的图像给人的视觉冲 击远远大于较为“呆板”的轮廓色谱图， 可以迅速地、粗略地，而且颇为有效地评 价样品色谱图像之间的相试程度。
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《中国药典》薄层色谱的基本要求
供起草标准用样品的要求 中成药薄层色谱鉴别 中药材薄层色谱鉴别
由于是离线操作，所以个用性
薄层色谱最常用的是以硅胶板为基础固定相的正 相色谱，有多种组合的有机溶剂展开系统可供选 择；
甲苯系统；三氯甲烷系统；己烷系统；正丁醇系 统；乙酸乙酯系统等等。
酸性、碱性、中性。 高极性、中等极性、低极性。
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色谱后衍生的专属性
对于多来源品种，每种收集3~5种；相关信息包括：产地 （如有可能表明野生或家种）、收集地、收集时间、收集人
独家生产的应不少于10批，多家企业生产的应尽量收集 每家企业的样品，5家以上企业生产的应至少收集5~10家 企业生产的样品
样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
不同温度、湿度考察，在5℃~35℃ 考察高低2个温度；在低相对湿度 （RH）15~30%和高相对湿度75~90% 各考察一个相对湿度
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中成药薄层色谱鉴别
（1）薄层色谱具有分离与鉴别的特性，并具有直观、承载信 息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，是中成 药鉴别的首选方法。
（2）新建立的薄层色谱应该图谱清晰，斑点明显，分离 度、专属性、重现性与耐用性符合要求，并需要提供图谱；
《中国药典》薄层色谱的 基本要求
周兰 贵州省食品药品检验所中药（民族药）室
2014年5月
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内容
《中国药典》薄层色谱的基本要求共45页PPT
END
《中国药典》薄层色谱的基本要求
•
6、黄金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
•
7、心急吃不了热汤圆。
•
8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
•
9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
•ห้องสมุดไป่ตู้
10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何恐 惧。因 为，请 记住， 除了在 脑海中 ，恐惧 无处藏 身。-- 戴尔． 卡耐基 。
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
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同板多个样品平行比较
成本相对低廉、色谱生成快速、同板可以 同时产生多达16~18个样品色谱，共平行直 观地比较，色彩丰富的图像给人的视觉冲 击远远大于较为“呆板”的轮廓色谱图， 可以迅速地、粗略地，而且颇为有效地评 价样品色谱图像之间的相试程度。
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《中国药典》薄层色谱的基本要求
供起草标准用样品的要求 中成药薄层色谱鉴别 中药材薄层色谱鉴别
对照。当对照品不易获得时，可采用对照提取物或对照药材为对照
薄层板的选择：吸附剂的比较，选硅胶G板还是GF254板
20
新增薄层色谱鉴别要求 点样量选择：不同点样量的比较 展开剂选择：对三个以上的展开系统进行考察比较 显色条件选择：日光、紫外光、显色剂 阴性空白试验：以证明其他药味无干扰 耐用性：不同厂牌的薄层板、温2度1 、相对湿度等
色谱后灵活方便的衍生技术，同一色谱薄层板可 生成可见光谱、紫外光谱、荧光淬灭光谱或荧光 光谱，给出丰富的检测成分的化学类别信息。如 三氯化铝试剂是黄酮类化合物的专属试剂；碘化 铋钾是生物碱类成分的专属试剂；三氯化铁是酚 类成分的专属试剂；醋酐硫酸是三萜类和甾醇类 成分的专属试剂等。硫酸则是许多成分激发产生 荧光的通用试剂，非常方便。
（4）对原方法的验证注意原标准点样量按手铺板制定，现用市售薄层板点 量过大分离度差，点样量可减少 22
3
薄层色谱技术在中药标准的优势
薄层色谱独有的特点是分析结果以直观的 彩色图像表达，为其它色谱技术所不能。 而图像给出的多层面的信息是文字难以表 达的，而且丰富多彩的图像可以给分析者 更多的思考判断的空间。
4
提供直观的彩色图像是薄层色谱独有的特点
5
离线操作的灵活性
各单元操作既有关联，又相互独立，点样 器材和方法、展开方式、显色试剂选择、 直观比较或扫描比较可根据需要灵活变通。 根据需要操作可以视实际需要和实验室条 件分层次进行和终止，节省分析时间和资 源。
注意
（1）使用对照药材应保证药材的主斑点在样品中均有对应斑点（可参 照制法对药材进行前处理），供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的 1~2个次要斑点相对应
（2）尽可能采取一个供试液多项多维鉴别使用的薄层色谱方法，达到 节约资源、保护环境、简便实用的目的
（3）注意”过柱“的影响，不同品牌、不同批号的吸附剂吸附能力有的不同
由于是离线操作，所以个人占时间短。
6
正相色谱流动相（展开剂）的广泛适用性
薄层色谱最常用的是以硅胶板为基础固定相的正 相色谱，有多种组合的有机溶剂展开系统可供选 择；
甲苯系统；三氯甲烷系统；己烷系统；正丁醇系 统；乙酸乙酯系统等等。
酸性、碱性、中性。 高极性、中等极性、低极性。
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色谱后衍生的专属性
（3）应尽量与该药材和饮片的薄层色谱鉴别方法一致，如因其他成分 干扰或制剂的提取方法不同，可增加提取纯化处理或展开剂优化。
19
新增薄层色谱鉴别要求
供试品溶液的制备：应尽可能除去干扰，同时方法尽量简便，
首先进行提取、纯化选择，如回流、超声提取方法，溶剂、时间， 酸碱处理，溶剂萃取，柱子纯化等的选择
对照品选择：尽量采用以对照品和对照提取物或对照药材同时进行
色谱条件的优化应对三个以上的展开系统进行考察
确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件
选择合适的对照物质，确定对照物质用量、 浓度、溶剂、点样量等
17
中药材薄层色谱鉴别
验证
专属性 重复性 耐用性 重现性
多来源药材、饮片的色谱行为是 否一致 混淆品的区别 斑点是否重叠
不同品牌的薄层板或自制薄层板考察 考察至少2~3个品牌或厂家的薄层板，
15
鉴别
鉴别
显微鉴别 理化鉴别
色谱鉴别 特征图谱鉴别
一般理化鉴别 荧光鉴别 光谱鉴别
薄层色谱鉴别 液相色谱鉴别 气相色谱鉴别
16
中药材薄层色谱鉴别
尽量采用对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照
图谱清晰、斑点明显、分离度与重现性符合要求 根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显 色方法等色谱条件
13
供起草用样品的要求
注意
中药材、饮片要求专家鉴定
对于具有多种不同规格的中成药，应收齐全部规格的样品
试验用样品必须采用合格原辅料依法生产的样品，收集的每批 样品均要有该企业的原辅料和成品的自检报告及详细生产工艺
14
供起草用样品的要求
阴性对照样品
生产单位应尽可能提供
研究单位自制
阴性样品系指按处方除去被测定的药味，按制法制备的 样品，注意应包括所有的辅料和工艺步骤，制成量应与 原标准相符
《中国药典》薄层色谱的 基本要求
贵州省食品药品检验所中药（民族药）室 2014年5月
1
内容
薄层色谱技术在中药标准的优势 《中国药典》薄层色谱的基本要求 薄层色谱应用的影响因素
2
薄层色谱技术在中药标准的优势
薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部 附录Ⅵ B），系将供试品溶液点于薄层板上， 在展开容器内用展开剂展开，使供试品所 含成分分离，将所得色谱图与对照物按同 法所得的色谱图比较，并可用薄层扫描仪 进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定的 方法。
对于多来源品种，每种收集3~5种；相关信息包括：产地 （如有可能表明野生或家种）、收集地、收集时间、收集人
独家生产的应不少于10批，多家企业生产的应尽量收集 每家企业的样品，5家以上企业生产的应至少收集5~10家 企业生产的样品
样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
不同温度、湿度考察，在5℃~35℃ 考察高低2个温度；在低相对湿度 （RH）15~30%和高相对湿度75~90% 各考察一个相对湿度
18
中成药薄层色谱鉴别
（1）薄层色谱具有分离与鉴别的特性，并具有直观、承载信 息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，是中成 药鉴别的首选方法。
（2）新建立的薄层色谱应该图谱清晰，斑点明显，分离 度、专属性、重现性与耐用性符合要求，并需要提供图谱；
10
中药标准制定技术要求
原则
保证用药安全
科学、先进、规范、适用
促进标准国际化
11
中药标准制定技术要求
中药标准制定 《国家药品标准工作手册》中药质量标准
研究制定技术要求 方法学验证
中药质量标准方法学验证指导原则 （中国药典2010版一部）
12
供起草用样品的要求
研究用样品应具有代表性，覆盖面要广， 一般至少收集15批以上样品供研究用；
同板多个样品平行比较
成本相对低廉、色谱生成快速、同板可以 同时产生多达16~18个样品色谱，共平行直 观地比较，色彩丰富的图像给人的视觉冲 击远远大于较为“呆板”的轮廓色谱图， 可以迅速地、粗略地，而且颇为有效地评 价样品色谱图像之间的相试程度。
9
《中国药典》薄层色谱的基本要求
供起草标准用样品的要求 中成药薄层色谱鉴别 中药材薄层色谱鉴别
对照。当对照品不易获得时，可采用对照提取物或对照药材为对照
薄层板的选择：吸附剂的比较，选硅胶G板还是GF254板
20
新增薄层色谱鉴别要求 点样量选择：不同点样量的比较 展开剂选择：对三个以上的展开系统进行考察比较 显色条件选择：日光、紫外光、显色剂 阴性空白试验：以证明其他药味无干扰 耐用性：不同厂牌的薄层板、温2度1 、相对湿度等
色谱后灵活方便的衍生技术，同一色谱薄层板可 生成可见光谱、紫外光谱、荧光淬灭光谱或荧光 光谱，给出丰富的检测成分的化学类别信息。如 三氯化铝试剂是黄酮类化合物的专属试剂；碘化 铋钾是生物碱类成分的专属试剂；三氯化铁是酚 类成分的专属试剂；醋酐硫酸是三萜类和甾醇类 成分的专属试剂等。硫酸则是许多成分激发产生 荧光的通用试剂，非常方便。
（4）对原方法的验证注意原标准点样量按手铺板制定，现用市售薄层板点 量过大分离度差，点样量可减少 22
3
薄层色谱技术在中药标准的优势
薄层色谱独有的特点是分析结果以直观的 彩色图像表达，为其它色谱技术所不能。 而图像给出的多层面的信息是文字难以表 达的，而且丰富多彩的图像可以给分析者 更多的思考判断的空间。
4
提供直观的彩色图像是薄层色谱独有的特点
5
离线操作的灵活性
各单元操作既有关联，又相互独立，点样 器材和方法、展开方式、显色试剂选择、 直观比较或扫描比较可根据需要灵活变通。 根据需要操作可以视实际需要和实验室条 件分层次进行和终止，节省分析时间和资 源。
注意
（1）使用对照药材应保证药材的主斑点在样品中均有对应斑点（可参 照制法对药材进行前处理），供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的 1~2个次要斑点相对应
（2）尽可能采取一个供试液多项多维鉴别使用的薄层色谱方法，达到 节约资源、保护环境、简便实用的目的
（3）注意”过柱“的影响，不同品牌、不同批号的吸附剂吸附能力有的不同
由于是离线操作，所以个人占时间短。
6
正相色谱流动相（展开剂）的广泛适用性
薄层色谱最常用的是以硅胶板为基础固定相的正 相色谱，有多种组合的有机溶剂展开系统可供选 择；
甲苯系统；三氯甲烷系统；己烷系统；正丁醇系 统；乙酸乙酯系统等等。
酸性、碱性、中性。 高极性、中等极性、低极性。
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色谱后衍生的专属性
（3）应尽量与该药材和饮片的薄层色谱鉴别方法一致，如因其他成分 干扰或制剂的提取方法不同，可增加提取纯化处理或展开剂优化。
19
新增薄层色谱鉴别要求
供试品溶液的制备：应尽可能除去干扰，同时方法尽量简便，
首先进行提取、纯化选择，如回流、超声提取方法，溶剂、时间， 酸碱处理，溶剂萃取，柱子纯化等的选择
对照品选择：尽量采用以对照品和对照提取物或对照药材同时进行
色谱条件的优化应对三个以上的展开系统进行考察
确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件
选择合适的对照物质，确定对照物质用量、 浓度、溶剂、点样量等
17
中药材薄层色谱鉴别
验证
专属性 重复性 耐用性 重现性
多来源药材、饮片的色谱行为是 否一致 混淆品的区别 斑点是否重叠
不同品牌的薄层板或自制薄层板考察 考察至少2~3个品牌或厂家的薄层板，
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鉴别
鉴别
显微鉴别 理化鉴别
色谱鉴别 特征图谱鉴别
一般理化鉴别 荧光鉴别 光谱鉴别
薄层色谱鉴别 液相色谱鉴别 气相色谱鉴别
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中药材薄层色谱鉴别
尽量采用对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照
图谱清晰、斑点明显、分离度与重现性符合要求 根据被测物的特性选择合适的固定相、展开剂及显 色方法等色谱条件
13
供起草用样品的要求
注意
中药材、饮片要求专家鉴定
对于具有多种不同规格的中成药，应收齐全部规格的样品
试验用样品必须采用合格原辅料依法生产的样品，收集的每批 样品均要有该企业的原辅料和成品的自检报告及详细生产工艺
14
供起草用样品的要求
阴性对照样品
生产单位应尽可能提供
研究单位自制
阴性样品系指按处方除去被测定的药味，按制法制备的 样品，注意应包括所有的辅料和工艺步骤，制成量应与 原标准相符
《中国药典》薄层色谱的 基本要求
贵州省食品药品检验所中药（民族药）室 2014年5月
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内容
薄层色谱技术在中药标准的优势 《中国药典》薄层色谱的基本要求 薄层色谱应用的影响因素
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薄层色谱技术在中药标准的优势
薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部 附录Ⅵ B），系将供试品溶液点于薄层板上， 在展开容器内用展开剂展开，使供试品所 含成分分离，将所得色谱图与对照物按同 法所得的色谱图比较，并可用薄层扫描仪 进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定的 方法。
对于多来源品种，每种收集3~5种；相关信息包括：产地 （如有可能表明野生或家种）、收集地、收集时间、收集人
独家生产的应不少于10批，多家企业生产的应尽量收集 每家企业的样品，5家以上企业生产的应至少收集5~10家 企业生产的样品
样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少 于3倍检验量的样品供复核用
不同温度、湿度考察，在5℃~35℃ 考察高低2个温度；在低相对湿度 （RH）15~30%和高相对湿度75~90% 各考察一个相对湿度
18
中成药薄层色谱鉴别
（1）薄层色谱具有分离与鉴别的特性，并具有直观、承载信 息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，是中成 药鉴别的首选方法。
（2）新建立的薄层色谱应该图谱清晰，斑点明显，分离 度、专属性、重现性与耐用性符合要求，并需要提供图谱；
10
中药标准制定技术要求
原则
保证用药安全
科学、先进、规范、适用
促进标准国际化
11
中药标准制定技术要求
中药标准制定 《国家药品标准工作手册》中药质量标准
研究制定技术要求 方法学验证
中药质量标准方法学验证指导原则 （中国药典2010版一部）
12
供起草用样品的要求
研究用样品应具有代表性，覆盖面要广， 一般至少收集15批以上样品供研究用；