藻蓝蛋白 实验报告
藻蓝蛋白的提取、纯化及紫外可见光谱仪检测蛋白纯度
藻蓝蛋白的提取、纯化及紫外可见光谱仪检测蛋白纯度谭一心一、实验目的学习并掌握提取、纯化藻蓝蛋白及紫外可见光谱仪检测纯度的方法。
二、实验原理1冻融法：将细胞置低温下冰冻一定时间，然后取出置室温下（或40℃左右）迅速融化。
如此反复冻融多次，细胞可在形成冰粒和增高剩余胞液盐浓度的同时，发生溶胀破碎。
2盐析法：蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升（盐溶），但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降，直至蛋白质析出（盐析）。
盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集，并从溶液中析出。
3DEAE—纤维素：二乙基胺乙基纤维素，总交换量0.9meq/g功能基：二乙基胺乙基，弱碱性阴离子交换剂。
原理：含有某些功能基团，可以进行离子交换，性能比一般离子交换树脂温和，适用于分离具有生物活性的大分子，可以将性质相近的大分子物质分开。
1.装柱：装柱前先将层析柱垂直固定在支架上。
装柱的方法分干装和湿装两种。
干装是直接加吸附剂到柱中，然后倒入溶剂，此法不易将气泡排尽。
湿装法是先加适量溶剂到柱中，排走其中的空气，然后把预先用溶剂浸泡好的吸附剂搅匀，随即将此悬浮液连续倾入柱中，打开柱下端出口，让溶剂慢慢流出，使柱上端悬浮液缓缓下降到需要的高度，吸附剂表面要平整，应使其一直浸没在溶剂中，以防气泡产生。
2.加样：经过平衡的层析柱当平衡液流到与固定相表面一致位置时，用滴管轻轻把分离样品的溶液加到固定相表面，要尽量避免冲动基质。
加入样品液的体积一般应小于床体积的1/2（体积越小越有利于提高分辨率）。
3.洗脱：待样品液的液面流到固定相表面时，用滴管加入洗脱剂（5cm），并在柱上端与装有洗脱剂的储液瓶连接开始洗脱。
同时在柱下端与部分收集器接通，立即进行分级收集（按体积或时间分管收集）。
4.测定：随后将收集的每管溶液进行浓度或活性测定。
藻蓝蛋白的提取、纯化及紫外可见光谱仪检测藻蓝蛋白纯度-2
藻蓝蛋白的提取、纯化及紫外可见光谱仪检测藻蓝蛋白纯度-23.结果分析:实验测得的藻蓝蛋白纯度只有0.509，比较我们班其他组的结果相差不算太大，但其他班有的组测得藻蓝蛋白得纯度可达到 1.7左右，相对于这个纯度，我们所提取得藻蓝蛋白纯度时偏低的，影响藻蓝蛋白纯度的原因主要有以下几个：1)冻融次数:本实验时采用冻融法破碎细胞，冻融法破碎细胞主要是因为藻体在冻结过程中，细胞内外的液态水形成冰晶体，造成体积膨大，对藻体细胞壁和细胞膜产生破坏作用，使其通透性加大，内容物流出。
藻体冻结过程中首先是从最容易生成细小冰晶体的地方开始，然后冰晶体逐渐变大，向四周扩展，将距这些地方比较近的细胞壁和细胞膜胀破，压破。
每次冻融最容易生成细小冰晶体的地方是不一样的，即在细胞内外形成冰晶的部位是不同的，这样就能对细胞不同部位的细胞壁和细胞膜产生破坏，因而多次冻融能使破碎效果提高。
冻融时间增加随能使冰晶体变大，但由于受细胞内外水分含量的限制，冰晶的长大使有限度的，因而对细胞壁和细胞膜破坏只是在原有基础上的破坏，破坏区域较少，效果较差，所以冻融时间对冻融效果影响不大。
可见，在冻融法中次数对藻蓝蛋白得率得影响比时间对它得影响大，多次反复冻融的细胞破碎效果比较好。
我们自己只冻融了一次，其余是老师整体冻融的，所以我们冻融方面应与其他组没有多大区别。
2)不同饱和度硫酸铵的盐析效果：实验过程中，饱和度在20％时，没有明显的沉淀，查资料得知，当饱和度在25％以下时，没有明显的沉淀，在25％以上后，随着硫酸铵饱和度的增加，提取率逐步升高。
从纯度看，随着饱和度的升高，纯度先降后升。
实验测得的结果偏低，可能是加入硫酸铵过程中，随着饱和度的增大，杂蛋白，藻红蛋白和别藻蓝蛋白沉淀出的量都在增大，藻蓝蛋白所占的比例减小，所以纯度减小。
由于我们过柱时取的样不是我们组的，所以无法考证是这两种原因引起我们结果偏低，只能说这两种原因对我们所得的藻蓝蛋白纯度会有影响。
天然藻蓝蛋白急性毒性实验
天然藻蓝蛋白动物急性毒性实验一目的24小时内单次或多次给药，给药后的14天内连续观察动物的情况，了解动物所产生的毒性反应及其严重程度，包括定性和定量两个方面，定性方面观察中毒表现、出现和消失时间以及可能的靶器官；定量方面求出致死剂量、最大给药量和半数致死量，为后续长毒实验和临床安全用药及监测提供参考。
二受试物1 名称天然藻蓝蛋白2 动物昆明小鼠（6~9周龄，体重18-20g），45只，雌雄各半。
实验前在动物房饲养一周。
实验开始时动物体重的差异不超过体重的±20%。
3 染毒途径经口染毒——灌胃，试验前空腹，即动物应隔夜空腹，禁食16h 左右，不限制饮水。
小鼠每次灌胃容量为0.4mL/20g。
4 预实验的剂量（霍恩氏法）小鼠4只，使用12g/kg体重的剂量组（天然藻蓝蛋白最大浓度）和一个蒸馏水对照组，每隔四小时灌胃一次，连续灌胃三次，观察一周，估计LD50的可能范围。
5 毒性作用观察主要从两个方面进行观察：A 中毒体征及发生过程（中毒体征的观察参考附表二）B 死亡情况和时间分布6 正式实验根据上述预实验数据结果，进一步细化剂量范围重新设置5个实验组重复上述实验，实验前将动物在实验动物房饲养观察3~5天后，随机分组，给予受试物后观察7-14天，记录死亡数、死亡时间及中毒表现等。
7 实验记录表格见附表一附表一数量体重死亡时间死亡数量中毒体征对照12g/kg附表二啮齿动物中毒表现观察项目附表三1.实验方法2.动物品系，来源，性别3.样品名称，形状及处理记录者：＿＿＿＿＿附录（规范性附录）急性毒性（LD50）剂量分级表。
藻蛋白提取实验报告
一、实验目的本实验旨在通过学习并掌握藻蛋白的提取方法，了解不同提取方法对藻蛋白提取效果的影响，并对提取得到的藻蛋白进行初步的纯化及鉴定。
二、实验原理藻蛋白主要存在于藻类植物中，如螺旋藻、小球藻等。
藻蛋白的提取方法主要有物理法、化学法和生物法。
本实验采用物理法中的冻融法提取藻蛋白，该方法操作简单，对藻类植物损伤小，提取效率较高。
三、实验材料与仪器材料：1. 螺旋藻粉2. 蒸馏水3. 0.1mol/L的KOH溶液4. 0.1mol/L的HCl溶液5. 95%乙醇6. 无水乙醇7. 丙酮8. 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）仪器：1. 电子天平2. 磁力搅拌器3. 超声波清洗器4. 高速离心机5. 蒸发皿6. 烧杯7. 离心管8. 吸管9. 滤纸四、实验步骤1. 藻蛋白粗提1. 称取10g螺旋藻粉，置于100ml离心管中。
2. 加入50ml蒸馏水，充分搅拌，使螺旋藻粉充分溶解。
3. 将混合液置于冰浴中冷却，每隔30分钟搅拌一次，共冷却2小时。
4. 冷却完成后，以4000r/min的转速离心10分钟，收集上清液。
5. 将上清液转移至烧杯中，加入95%乙醇，使蛋白质沉淀，静置30分钟。
6. 以4000r/min的转速离心10分钟，收集沉淀。
7. 将沉淀用蒸馏水洗涤三次，以去除杂质。
2. 藻蛋白纯化1. 将洗涤后的沉淀溶于适量的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中。
2. 将混合液通过DEAE纤维素层析柱，用磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱。
3. 收集含有藻蛋白的洗脱液，经浓缩、冷冻干燥后得到藻蛋白。
五、实验结果与分析1. 藻蛋白粗提通过冻融法提取的藻蛋白，在95%乙醇中沉淀，经离心后得到淡蓝色沉淀，表明藻蛋白提取成功。
2. 藻蛋白纯化通过DEAE纤维素层析柱纯化后，得到的藻蛋白在紫外-可见光谱上呈现出典型的藻蓝蛋白特征峰，表明纯化成功。
六、实验结论本实验采用冻融法和DEAE纤维素层析柱法成功提取并纯化了藻蛋白。
实验结果表明，冻融法是一种简单、高效的藻蛋白提取方法，而DEAE纤维素层析柱法可以进一步纯化藻蛋白，提高其纯度。
藻蓝蛋白浓度测定
藻蓝蛋白浓度测定
一、目的
1、掌握藻蓝蛋白测定方法。
2、掌握分光光度法测定藻蓝蛋白的操作技术。
二、原理
采用紫外－可见吸收光谱法测定藻蓝蛋白的浓度，螺旋藻中藻蓝蛋白吸收光谱的差异作为其测定标准，藻蓝蛋白在620nｍ处有最大吸收值，其含量测定参照Ｂennett的研究按照下式进行计算藻蓝蛋白含量。
式中：Ｃpc为样品溶液中藻蓝蛋白的浓度，ｍg／mL；
Ａ620为样品溶液在波长620nm下的吸光值；
Ａ652为样品溶液在波长652nm下的吸光值。
三、实验器材及试剂
1、实验仪器及工具：紫外可见光分光光度计、酸度计、漏斗、三角瓶、烧杯、
移液枪等。
2、实验原料及试剂
超净水、稀硫酸、稀碱等。
四、实验方法及步骤
1、分光光度计预热：打开分光光度计电源，预热半个小时。
2、藻蓝蛋白溶液制备：用漏斗过滤实验5破壁的螺旋藻溶液20毫升左右，去除细胞碎片的上清液就是藻蓝蛋白提取液。
3、分光光度计调零：用和提取体系相同pH的去离子水作为空白，分别调整620、652nm的吸光值为零。
4、藻蓝蛋白浓度测定：将上述藻蓝蛋白样品分别在调零后测定A620和A652的值，每个样品测定三次记录数值，算出平均值。
5、藻蓝蛋白浓度计算：按照上述公式计算出藻蓝蛋白溶液的藻蓝蛋白浓度，根据藻蓝蛋白浓度和体积判定提取效果。
五、实验结果记录
记录提取样品的A620和A652，计算出不同条件下提取的藻蓝蛋白浓度，确定所研究影响因素的最适水平。
六、实验结果分析
根据提取液藻蓝蛋白浓度分析所研究影响因素对提取率的影响规律。
钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究
ISSN 100020054CN 1122223 N 清华大学学报(自然科学版)J T singhua U niv (Sci &Tech ),1999年第39卷第6期1999,V o l .39,N o .66 3520～22钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究3殷 钢, 刘 铮, 刘 飞, 李 琛, 丁富新, 袁乃驹清华大学化学工程系,北京100084 收稿日期:1998208206 第一作者:男,1973年生,博士研究生 3基金项目:国家“九五”科技攻关项目,962C 03204205文 摘 为发展新型海洋药物,采用Sephacryl S 2200凝胶层析和羟基磷灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品。
测定了藻蓝蛋白的氨基酸组成和含量。
藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为278,360,620nm 。
得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为pH =4.3。
还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱。
研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品。
关键词 钝顶螺旋藻;藻蓝蛋白;分离;纯化分类号 Q 51 螺旋藻是一种丝状多细胞螺旋形藻类生物,藻体由于含有藻蓝素而使外观呈蓝绿色。
现已发现的螺旋藻共有36个个种,多数为淡水种。
它含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、叶绿素、Β2胡萝卜素及多糖类物质,是人类理想的食物及药物资源[1]。
目前用于工厂化生产的主要是钝顶螺旋藻和极大螺旋藻。
螺旋藻作为新型药物资源成为当前海洋药物研究的焦点之一。
螺旋藻中含有丰富的藻胆蛋白,藻胆蛋白中又包含藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白以及藻红蛋白等蛋白。
藻蓝蛋白是螺旋藻中重要的捕光色素蛋白,它以近乎100%的高效率把光能优先地传递给光系统 [2]。
研究表明,藻蓝蛋白具有提高人体免疫力,促进动物血细胞再生,抑制某些癌细胞等作用[3]。
临床实验证明藻蓝蛋白—铜激光对大肠癌细胞株有很强的杀伤效应[4],同时藻蓝蛋白还是一种无毒、无副作用的理想光敏剂[5]。
藻蓝蛋白浓度测定
藻蓝蛋白浓度测定
一、目的
1、掌握藻蓝蛋白测定方法。
2、掌握分光光度法测定藻蓝蛋白的操作技术。
二、原理
采用紫外－可见吸收光谱法测定藻蓝蛋白的浓度，螺旋藻中藻蓝蛋白吸收光谱的差异作为其测定标准，藻蓝蛋白在620nｍ处有最大吸收值，其含量测定参照Ｂennett的研究按照下式进行计算藻蓝蛋白含量。
式中：Ｃpc为样品溶液中藻蓝蛋白的浓度，ｍg／mL；
Ａ620为样品溶液在波长620nm下的吸光值；
Ａ652为样品溶液在波长652nm下的吸光值。
三、实验器材及试剂
1、实验仪器及工具：紫外可见光分光光度计、酸度计、漏斗、三角瓶、烧杯、
移液枪等。
2、实验原料及试剂
超净水、稀硫酸、稀碱等。
四、实验方法及步骤
1、分光光度计预热：打开分光光度计电源，预热半个小时。
2、藻蓝蛋白溶液制备：用漏斗过滤实验5破壁的螺旋藻溶液20毫升左右，去除细胞碎片的上清液就是藻蓝蛋白提取液。
3、分光光度计调零：用和提取体系相同pH的去离子水作为空白，分别调整620、652nm的吸光值为零。
4、藻蓝蛋白浓度测定：将上述藻蓝蛋白样品分别在调零后测定A620和A652的值，每个样品测定三次记录数值，算出平均值。
5、藻蓝蛋白浓度计算：按照上述公式计算出藻蓝蛋白溶液的藻蓝蛋白浓度，根据藻蓝蛋白浓度和体积判定提取效果。
五、实验结果记录
记录提取样品的A620和A652，计算出不同条件下提取的藻蓝蛋白浓度，确定所研究影响因素的最适水平。
六、实验结果分析
根据提取液藻蓝蛋白浓度分析所研究影响因素对提取率的影响规律。
《基于RNA-Seq技术分析藻蓝蛋白对自然衰老小鼠卵巢功能恢复的机理研究》范文
《基于RNA-Seq技术分析藻蓝蛋白对自然衰老小鼠卵巢功能恢复的机理研究》篇一一、引言随着人口老龄化问题日益突出，研究如何延缓卵巢功能衰退，恢复衰老小鼠卵巢功能，对保障女性健康具有重要意义。
近年来，藻蓝蛋白作为一种天然生物活性物质，在抗氧化、抗衰老等方面展现出潜在的应用价值。
本研究利用RNA-Seq技术，深入探讨藻蓝蛋白对自然衰老小鼠卵巢功能恢复的机理，以期为相关药物研发和临床治疗提供理论依据。
二、材料与方法1. 实验材料（1）藻蓝蛋白：选用纯度较高的藻蓝蛋白，用于实验。
（2）实验动物：选取自然衰老小鼠作为研究对象。
2. 实验方法（1）分组与处理：将小鼠分为对照组和实验组，实验组小鼠给予藻蓝蛋白处理。
（2）RNA提取与测序：收集小鼠卵巢组织，提取RNA，进行RNA-Seq测序。
（3）生物信息学分析：对测序数据进行处理和分析，包括基因表达谱分析、差异表达基因筛选、通路分析等。
（4）验证实验：通过荧光定量PCR和Western Blot等方法，对差异表达基因进行验证。
三、结果与分析1. 基因表达谱分析通过对测序数据进行分析，我们发现藻蓝蛋白处理后的小鼠卵巢组织中，基因表达谱发生了显著变化。
与对照组相比，实验组中许多与卵巢功能相关的基因表达水平发生了明显上调或下调。
2. 差异表达基因筛选我们筛选出了一批差异表达基因，这些基因主要涉及细胞增殖、凋亡、氧化应激、激素分泌等生物学过程。
其中，一些与卵巢功能恢复密切相关的基因表达水平发生了显著变化。
3. 通路分析通过对差异表达基因进行通路分析，我们发现藻蓝蛋白对自然衰老小鼠卵巢功能恢复的作用可能涉及多个生物学通路。
其中，一些与抗氧化、抗衰老、细胞保护等相关的通路发挥了重要作用。
4. 验证实验结果通过荧光定量PCR和Western Blot等方法，我们对部分差异表达基因进行了验证。
结果显示，这些基因的表达水平与RNA-Seq结果一致，进一步证实了我们的研究结果。
用含有0.25mg的藻蓝蛋白处理培养
用含有0.25mg的藻蓝蛋白处理培养
藻蓝蛋白（Phycocyanin）是一种具有高水溶性的复合蛋白，来源于藻类，具有蓝色
的色素，用于食品和药物中的添加剂，在食品领域中被广泛使用，比如作为细胞壁保护剂，用于抑制酒精的消化酶的活性和酒精的分解。
本次试验将使用含有0.25mg的藻蓝蛋白经
0.2% NaCl机械悬浊液处理培养。
要开始进行本次实验，首先需要准备一些必要的物品，比如0.2% NaCl机械悬浊液、0.25mg藻蓝蛋白样品、实验室消毒药水和PH值仪。
然后将0.2% NaCl机械悬浊液倒入实
验仪器中，配制含有0.25mg藻蓝蛋白的溶液。
此时将一定量的PH值仪测定溶液的PH，保证溶液处于正常PH范围，确保溶液的有效性。
接下来要开始进行培养。
在培养过程中，需要控制向培养液中添加的藻蓝蛋白的比例，以保证培养的细胞的繁殖和生长，并避免可能带来的不利影响。
因此，在添加藻蓝蛋白的
过程中，应使用比例微量秤进行精准控制，以确保藻蓝蛋白的比例达到精确的要求。
此外，藻蓝蛋白是一种易受热及溶解的物质。
因此，在进行培养液处理时，需要注意
控制处理温度，以防止藻蓝蛋白失去其活性，破坏培养细胞的形态和结构。
最后，在培养过程结束后，需要对处理的培养物进行核酸免疫灭活处理，以确保实验
室内的安全性。
然后要仔细观察处理后的培养物，以考察藻蓝蛋白对其形态和结构的影响
程度，检查处理过程中有无不良反应。
有了上述步骤，我们便可以完成使用含有0.25mg
的藻蓝蛋白处理培养的试验。
藻蓝蛋白的提取纯化与鉴定(实验教案)
藻蓝蛋白的提取纯化与鉴定(实验教案)藻蓝蛋白(phycocyanin , PC)是一种存在于蓝藻细胞内的光合色素 ,能高效捕获光能。
其分子质量在 40 ku 左右 ,由α、β两个亚基组成 ,亚基分子质量都在 20 ku 左右。
肽链上共价结合 1 个开链的四吡咯环辅基 ,类似动物红细胞的血红素结构。
天然存在的藻蓝蛋白通常以六聚体(αβ) 6的形式存在。
与之相近的别藻蓝蛋白(Anthocyanin ,APC)为三聚体( αβ) 3 ,在 650 nm 处有最大吸收峰。
分离纯化的水溶藻蓝蛋白在溶液中呈蓝色 ,并发出紫色荧光 ,在波长620 nm 具有特异吸收峰 ,可用吸光度 A 620 / A 280表示其纯度。
因其水溶性、无毒、清亮且着色力强等优点 ,藻蓝蛋白被广泛用于食品着色剂和化妆品的添加剂。
藻蓝蛋白带有荧光 ,可用作荧光标记物。
一、教学目的通过藻蓝蛋白的提取纯化与鉴定使学生学会生物大分子制备方案设计与实践研究，体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法。
整个实验过程学生独立完成，虽然操作难度较大，所需要的实间较长（64-80学时），但每一步单元操作的原理清晰，技术成熟，实验结果明显，能给学生较多的动手机会。
有利于培养学生的学习兴趣。
二、实验方案1材料与方法1. 1 实验材料钝顶螺旋藻粉产自中国科学院武汉植物所 ,其他无机盐和酸碱试剂均为国产分析纯试剂。
1. 2 分析方法1.2.1藻蓝蛋白浓度的测定方法一：【曲文娟等，钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的脉冲超声辅助提取技术，食品科学，2007年5期，135-138】用紫外分光光度计对粗提的藻蓝蛋白溶液进行全波段扫描, 可见藻蓝蛋白的特征吸收在620nm, 异藻蓝蛋白的特征吸收在:方法二：【刘杨等，水提分离钝顶螺旋藻藻蓝蛋白及其稳定性研究，天津师范大学学报(自然科学版)，Vol.28 No.3.11-14（2008）】 螺旋藻中以藻胆蛋白吸收光谱的差异作为其测定标准。
藻蓝蛋白的提取与纯化
螺旋藻粉提取藻蓝蛋白摘要：藻蓝蛋白是一种可用于配制化妆品及各种天然食品或荧光探针标记的多用途蛋白。
本实验旨在找出最适螺旋藻粉中提取藻蓝蛋白的工业提取工艺。
对藻蓝蛋白的提取，本课题组采用了反复冻融法、水提法、缓冲液法，以找出提取效率高，成本低的方法。
实验结果显示，反复冻融三次的藻蓝蛋白浓度A620/A280分别为：0.819/1.871、0.597/1.676、0.245/0.629;水提法三次的A620/280分别为：0.842/1.768、0.650/1.136、0.177/0.737;缓冲液提取三次的A620/A280分别为：1.040/2.102、0.260/0.630、0.052/0.247。
在蛋白质的分离时，采用两步盐析法，盐析前A620=1.143，A280=1.983；两步盐析后，A620=2.203，A280=1.492。
最后在纯化方法上选择了羟基磷灰石柱分离，得到蛋白样品A620=1.379，A280=0.528。
关键词：螺旋藻；藻蓝蛋白；二次盐析；柱分离介绍：藻蓝蛋白既是一种蛋白质，又是一种很好的天然食用色素，同时又是极好的保健食品。
藻蓝蛋白是自然界中少见的色素蛋白之一，不仅颜色鲜艳，而且本身是一种营养丰富的蛋白质，其氨基酸组成齐全，必需氨基酸含量高。
藻蓝蛋白具有抗癌、促进血细胞再生、养护卵巢、促使人体内合成弹力蛋白等功效。
21世纪初，在欧美、日本等国，藻蓝蛋白广泛用作食品和化妆品的高级天然色素，并被制成生化药品。
因为藻蓝蛋白为胞内蛋白，所以细胞破碎技术是直接影响蛋白提取得率的关键因素之一。
藻蓝蛋白的提取一般有超声波、高压均质、反复冻融、水提法、缓冲液提法等【1】。
本实验通过反复冻融、水提法和缓冲液法对螺旋藻细胞进行破碎提取藻蓝蛋白，对各条件下得到的蛋白溶出率进行了比较分析，确定了各条件下蛋白提取的最佳条件。
在藻蓝蛋白的分离时，主要是把蛋白质与提取液中其他物质分离。
可利用蛋白质的盐析【2】，和调节PH使蛋白变性等，使蛋白质从提取液中分离出来；最后，再把藻蓝蛋白从杂蛋白中分离出来，常用的方法有柱分离法等【3】。
《2024年基于转录组学和代谢组学分析藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制研究》范文
《基于转录组学和代谢组学分析藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制研究》篇一一、引言近年来，藻蓝蛋白作为一种天然的生物活性成分，其在生物医学领域的应用日益受到关注。
藻蓝蛋白不仅具有丰富的营养价值，还展现出对细胞生长、分化和重编程的潜在促进作用。
本文旨在通过转录组学和代谢组学的方法，深入探讨藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制，为进一步开发其生物医学应用提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料实验所用的藻蓝蛋白提取自特定种类的蓝藻，细胞系选择具有代表性的哺乳动物细胞。
实验所需试剂、培养基及其他材料均购自正规生物试剂供应商。
2. 方法（1）细胞培养与处理：将细胞接种于培养皿中，待细胞生长至对数期时，加入不同浓度的藻蓝蛋白进行处理。
（2）转录组学分析：采用RNA测序技术，对处理前后的细胞进行转录组学分析，比较基因表达差异。
（3）代谢组学分析：利用代谢组学技术，对处理前后细胞的代谢产物进行定量和定性分析。
（4）数据分析：采用生物信息学方法，对转录组学和代谢组学数据进行处理和分析，挖掘关键基因和代谢途径。
三、结果1. 转录组学分析结果通过对转录组学数据的分析，我们发现藻蓝蛋白处理后，细胞内基因表达发生显著变化。
其中，与细胞重编程相关的基因表达明显上调，如干细胞性相关基因、抗衰老基因等。
此外，我们还发现一些与能量代谢、信号传导等途径相关的基因表达也发生改变。
2. 代谢组学分析结果代谢组学分析结果显示，藻蓝蛋白处理后，细胞内代谢产物的种类和含量发生明显变化。
其中，与能量代谢、抗氧化、抗炎等途径相关的代谢产物含量上升。
这些变化可能与藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制密切相关。
3. 关键基因和代谢途径的挖掘结合转录组学和代谢组学数据，我们挖掘出一些与藻蓝蛋白促进细胞重编程密切相关的关键基因和代谢途径。
如某些参与调控干细胞性的关键转录因子、参与能量代谢的关键酶类等。
此外，我们还发现一些与抗氧化、抗炎等途径相关的代谢产物在藻蓝蛋白处理后含量上升，这些途径可能与藻蓝蛋白的生物活性密切相关。
反胶束水合萃取藻蓝蛋白研究的开题报告
反胶束水合萃取藻蓝蛋白研究的开题报告一、研究背景和意义藻蓝蛋白是一种具有重要应用前景的蓝色色素，广泛应用于生物医药、食品工业、环境监测等领域。
目前藻蓝蛋白的提取技术主要采用酸性溶液和有机溶剂萃取，但这些方法都存在着一定的缺陷和限制。
酸性溶液容易破坏蛋白质的分子结构，影响提取效果，并且还存在环境污染问题；有机溶剂萃取的过程中存在着剧毒、易燃等问题，同时也会产生大量的有机废水和工业废渣。
因此，研究一种高效、环保的提取方法是十分必要和重要的。
反胶束水合萃取是近年来发展起来的一种新型分离萃取技术，具有环保、简单、高效、易操作等特点。
与传统提取技术相比，反胶束水合萃取不需要使用有机溶剂，没有废弃物和污染问题，可以提高提取效率，同时不破坏蛋白分子结构和活性，具有更好的生物相容性和安全性。
因此，采用反胶束水合萃取技术提取藻蓝蛋白，具有较大的可行性和应用前景。
二、研究内容和方法1.反胶束水合体系的构建通过优化膜组成、表面活性剂种类和浓度等条件，构建适宜的反胶束水合体系。
研究反胶束水合体系在不同条件下的特征参数，如临界胶束浓度、氢化度、表面电荷等。
2.藻蓝蛋白的提取与分离通过将藻蓝蛋白与反胶束水合体系进行反应，利用磁性材料隔离纯化藻蓝蛋白。
通过紫外吸收光谱、红外光谱、分子量检测、电泳等方法，对藻蓝蛋白的结构和性质进行研究分析。
3.反胶束水合萃取方法的优化通过对反胶束水合萃取过程中不同因素的影响研究，找到适宜的操作条件和提取参数，提高提取效率和产品质量，探究反胶束水合萃取技术在藻蓝蛋白提取中的应用潜力。
三、研究预期结果1.建立一种高效、环保的藻蓝蛋白提取方法，提高提取效率和产品质量；2.对反胶束水合萃取技术的原理和性质进行探究，为该技术在其他生物大分子的提取中提供参考和借鉴；3.为藻蓝蛋白的应用开发提供更好的资源基础和技术支撑。
四、研究计划和进度安排1.前期准备：文献调研、实验室安全管理规定的学习等，时间预计1个月。
《藻蓝蛋白改善半乳糖致衰小鼠卵巢功能的转录组分析》范文
《藻蓝蛋白改善半乳糖致衰小鼠卵巢功能的转录组分析》篇一一、引言近年来，卵巢功能衰竭成为了全球许多女性面临的健康问题。
尽管科学界对于这一现象进行了深入的研究和探讨，但是尚未完全阐明其生理和病理机制。
在本研究中，我们试图利用半乳糖构建的衰老小鼠模型和藻蓝蛋白干预研究来进一步理解卵巢功能衰退的原因及治疗途径。
本文主要关注于利用转录组分析技术，对藻蓝蛋白改善半乳糖致衰小鼠卵巢功能的效果进行深入探讨。
二、材料与方法1. 实验材料本实验采用半乳糖致衰小鼠模型，以及不同剂量的藻蓝蛋白作为干预剂。
实验小鼠为成年雌性小鼠，由本实验室饲养。
2. 实验方法（1）小鼠模型构建：通过长期给小鼠喂食半乳糖，构建卵巢功能衰退的小鼠模型。
（2）藻蓝蛋白干预：将小鼠分为对照组、低剂量组和高剂量组，分别给予不同剂量的藻蓝蛋白进行干预。
（3）转录组分析：通过RNA测序技术对各组小鼠的卵巢组织进行转录组分析，对比各组间的基因表达差异。
三、结果1. 卵巢功能衰退表现经过半乳糖的长期喂养，小鼠卵巢功能出现明显衰退，主要表现为卵泡数量减少、卵泡发育障碍等。
2. 藻蓝蛋白干预效果通过对比不同剂量藻蓝蛋白干预后的卵巢组织，我们发现低剂量和高剂量组的卵巢功能均有显著改善。
高剂量组的改善效果更为明显，卵泡数量明显增加，卵泡发育障碍也得到改善。
3. 转录组分析结果转录组分析结果表明，半乳糖处理组中卵巢组织的基因表达有明显改变，涉及到卵巢功能的多种生物过程和分子网络；而在加入藻蓝蛋白后，这些基因表达得到了明显的调整和恢复。
其中，与细胞增殖、凋亡、代谢等相关的基因表达变化最为显著。
四、讨论通过本实验我们发现，半乳糖长期喂养能够引起小鼠卵巢功能的明显衰退。
这一发现支持了当前的观点，即不良的生活习惯和环境因素可能对卵巢功能产生负面影响。
然而，通过给予不同剂量的藻蓝蛋白进行干预，我们发现卵巢功能得到了显著的改善。
这表明藻蓝蛋白可能具有保护卵巢功能的作用。
转录组分析结果进一步揭示了这一现象的分子机制。
螺旋藻藻蓝蛋白的提取实验报告
螺旋藻藻蓝蛋白的提取实验报告嘿，大家好，今天我来跟你们聊聊螺旋藻和它的藻蓝蛋白，听起来有点复杂，其实不然！螺旋藻，这个名字一听就像是外星来的植物，其实它是一种超级食物，充满了营养，特别是它的藻蓝蛋白，简直是宝贝中的宝贝。
你知道吗？这玩意儿对我们的身体可是有大大的好处，像是增强免疫力、抗氧化、提高能量等等，简直是个“万金油”。
所以今天的任务就是提取这个神奇的藻蓝蛋白，准备好了吗？我们得准备好材料和工具，像是新鲜的螺旋藻、一些化学试剂和各种器具，光是想想就觉得兴奋。
把螺旋藻弄到手了，先得清洗干净，把那些杂质和污垢统统甩掉。
你想啊，谁想在实验中弄得一团糟呢？洗干净之后，我们就可以开始提取了。
这个过程可有意思了，像是做魔术一样，得用一些化学试剂。
我们要把螺旋藻和这些试剂混合，像是搅拌一锅美味的汤，看看能否从中提取出藻蓝蛋白。
在这个过程中，可不能马虎，一定要注意比例，太多或太少都会影响结果。
咕噜咕噜，搅拌得差不多的时候，就得让它静置一会儿。
你知道，这个时候就像是让面团醒发，静静等待它的变化。
这时候我们可以喝杯水，或者聊聊天，顺便期待一下最终的成果。
接下来就是过滤的环节，把混合物过筛，分离出固体和液体。
嘿，过滤的过程就像是在筛选宝藏，液体部分就是我们要的藻蓝蛋白啦！这时候得小心翼翼，不然可就把好东西给漏掉了。
过滤完了，我们得到了一些漂亮的液体，颜色鲜艳得像阳光下的蓝天，真是赏心悦目。
再来就是浓缩了，得把液体加热，去掉一些多余的水分。
这一步就像是在熬汤，慢慢浓缩，直到它的味道和色泽都变得更为浓厚。
浓缩完成后，我们得把它冷却，冷却的过程就像是在给它“降温”，让它更加稳定。
哇，真的是越看越有成就感，想想自己亲手提取的蛋白质，心里美滋滋的。
最后一步，就是检测一下这个藻蓝蛋白的质量。
我们得做些实验，看看它的浓度和活性，确保它真的是好东西。
哦，这时候就像是为自己的作品打分，心里小鹿乱撞。
结果出来后，哇，果然不负我所望，藻蓝蛋白的质量超赞，简直就像是发现了新大陆，心里那个高兴啊！整个提取过程，虽然有些繁琐，但每一步都充满乐趣。
纯化藻蓝蛋白的测定
纯化藻蓝蛋白的测定
一、目的
1掌握藻蓝蛋白色价指标。
2掌握藻蓝蛋白色价的测定方法。
3 熟练分光光度计测定光密度操作。
二、实验原理
藻蓝蛋白在620nｍ处有最大吸收值，普通蛋白在280nm处有最大吸收值，目前国内和出口螺旋藻藻蓝蛋白都是以A620/A280（色价）作为判定藻蓝蛋白纯度的指标。
根据硫酸铵分级沉淀纯化藻蓝蛋白的色价和提取液的色价比值可以计算出纯化比，表征沉淀沉淀的效果。
三、实验器材及试剂
1、实验仪器及工具：
紫外可见光分光光度计、量筒、透析袋、移液枪等。
2、实验原料及试剂
超纯水、稀酸、稀碱等。
四、实验方法及步骤
1 硫酸铵沉淀溶解：将获得的硫酸铵沉淀蛋白用适量水溶解。
2、分光光度计调零：用空白对照调节分光光度计吸光值为零。
3、藻蓝蛋白浓度测定：分别测定藻蓝蛋白的A620和A280，计算出它们的比值，表征藻蓝蛋白的纯度。
5、纯化度计算：用硫酸铵分级沉淀后的A620/A280除以提取液的A620/A280所得值即为纯化度。
五、实验结果记录
记录纯化后所得的藻蓝蛋白质量、纯化后藻蓝蛋白的色价，计算出纯化比和纯化收率。
六、实验结果分析及讨论
分析硫酸铵饱和度和藻蓝蛋白纯化之间的关联性。
《基于转录组学和代谢组学分析藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制研究》范文
《基于转录组学和代谢组学分析藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制研究》篇一一、引言随着生物科技的进步，对细胞重编程的深入研究已逐渐成为生物学领域的热点。
其中，藻蓝蛋白作为一种具有独特生物活性的天然生物分子，在促进细胞重编程方面表现出显著的潜力。
本文将通过转录组学和代谢组学分析手段，深入研究藻蓝蛋白促进细胞重编程的机制，以期为相关研究提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本实验采用人源细胞系作为研究对象，并使用藻蓝蛋白作为实验材料。
实验所需试剂、仪器等均经过严格筛选和质量控制。
2. 方法（1）转录组学分析：采用高通量测序技术，对细胞在加入藻蓝蛋白前后的基因表达谱进行测定和分析。
通过对比基因表达差异，寻找与细胞重编程相关的关键基因和信号通路。
（2）代谢组学分析：通过代谢组学技术，测定和分析细胞在加入藻蓝蛋白前后的代谢物种类和含量变化。
结合转录组学数据，探讨藻蓝蛋白对细胞代谢的影响及其与细胞重编程的关系。
（3）实验设计：将细胞分为实验组和对照组，实验组加入藻蓝蛋白进行处理，对照组加入等量生理盐水作为对照。
处理一段时间后，进行转录组学和代谢组学分析。
三、结果与讨论1. 转录组学分析结果通过转录组学分析，我们发现加入藻蓝蛋白后，细胞的基因表达谱发生了显著变化。
与对照组相比，实验组中与细胞重编程相关的关键基因表达上调，如某些干细胞相关基因、抗衰老基因等。
此外，我们还发现了一些与信号传导、细胞周期等相关的关键信号通路被激活。
这些结果表明，藻蓝蛋白可能通过调控这些关键基因和信号通路，促进细胞重编程。
2. 代谢组学分析结果代谢组学分析结果显示，加入藻蓝蛋白后，细胞的代谢物种类和含量发生了明显变化。
与对照组相比，实验组中某些与能量代谢、抗氧化等相关的代谢物含量上升，而某些与衰老相关的代谢物含量下降。
这些变化可能与藻蓝蛋白的生物活性有关，表明其可能通过调节细胞代谢，促进细胞重编程。
3. 机制探讨结合转录组学和代谢组学分析结果，我们提出以下机制：藻蓝蛋白通过调控关键基因和信号通路的表达，激活细胞的自我修复和再生能力，促进细胞重编程。
R-藻蓝蛋白亚基折叠解折叠研究的开题报告
R-藻蓝蛋白亚基折叠解折叠研究的开题报告题目：R-藻蓝蛋白亚基折叠解折叠研究一、研究背景藻蓝蛋白是一种在许多种不同生命体中都可以发现的蛋白质，其独特的结构和生理功能一直受到科学家们的关注。
藻蓝蛋白的结构由两个亚基组成，其中一个亚基中含有带有铜原子的中心结构，另一个则为小型辅因子，两个亚基之间通过金属配位键结合在一起。
大量的实验证明，R-藻蓝蛋白具有类似激活体系的特性，其对于氧气和氮氧化物的高效转化在植物的呼吸和光合作用中起着关键性的作用。
因此，研究R-藻蓝蛋白的折叠解折叠过程对于揭示蓝藻的生理机制和植物的生长调控等方面具有重要的实际意义。
二、研究目的本项目旨在通过从分子层面上研究R-藻蓝蛋白亚基的折叠解折叠机制，深入解析其结构与功能之间的关系，为揭示R-藻蓝蛋白在植物呼吸和光合作用中发挥的生理作用提供理论基础。
三、研究内容1. 理论分析：通过分析已有的文献和资料，深入探究R-藻蓝蛋白亚基的结构和生理功能等方面的相关信息，为后续的实验研究做好充分的理论准备。
2. 实验设计：通过预先设计不同的实验方案，包括折叠条件的设定、样品处理方法的优化等，确保实验结果的准确性和可靠性。
3. 实验操作：根据预设方案进行实验操作，包括表达目标蛋白、纯化、晶体生长以及折叠和解折叠操作，同时记录和分析实验数据。
4. 数据分析：对实验数据进行统计和分析，确保实验结果的客观性和科学性。
四、研究意义本项目的研究成果将有助于深入探索R-藻蓝蛋白的结构和功能之间的关系，进而揭示蓝藻的生理机制和植物的生长调控等方面的实际意义。
该研究成果对于推动植物生物技术的发展和促进对生物体和生态环境的保护都具有重要的推动作用。
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藻蓝蛋白的分离与纯化姓名：郭均学院：食品与生物工程班级：食安 09-2学号：200906041069藻蓝蛋白的分离与纯化一、实验目的和要求1、了解藻蓝蛋白的生理意义及功能，藻蓝蛋白的一般提取和纯化的方法；2、掌握蛋白含量测定方法；3、掌握盐析和离子交换层析纯化蛋白的分析技术。
二、实验原理藻蓝蛋白（PC）是一类普遍存在于藻蓝蛋白中的光合辅助色素，也是一种天天然色素蛋白，具有水溶性，可用作视频着色剂。
此外，它具有强烈的荧光，在分子生物学上被制成荧光探针，是一种无毒、无副作用的理想光敏剂。
藻蓝蛋白还具有重要的医疗价值，不但能提高机体的非特异性免疫功能，而且对特异性免疫功能有促进作用。
另外它还有清除自由基的能力，可以抗疲劳，延缓衰老，对人体的生理功能有重要的生物学意义。
利用盐析沉淀蛋白质的基本原理：盐在水溶液中电离所形成的正负离子可吸收水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可以中和部分电荷，致使蛋白质聚集，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于各种蛋白颗粒大小、所带电荷的多少及亲水程度不同，当使用某种中性盐对其进行盐析时，所需的最低盐浓度各不相同。
研究表明可用25%硫酸铵饱和度沉淀除去杂质，55%硫酸铵沉淀藻蓝蛋白。
盐析出来的蛋白质，需通过脱盐以除去硫酸铵等盐类物质。
最常用脱盐的方法是透析。
蛋白质是大分子物质，它不能透过半透膜，故不断更换蒸馏水或缓冲液可将盐类等小分子杂志透析掉。
蛋白质含量测定有紫外分光光度计法和显色法（Folin-酚法、考马斯亮蓝法等），本实验采用考马斯亮蓝法测定提取藻蓝蛋白的含量，考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用后变为蓝色，最大光吸收由465nm变为595nm，在一定范围内，蛋白质含量与595nm处吸光值成正比。
离子交换层析法纯化蛋白质，常用的阳离子交换剂有弱酸性的羧甲基纤维素（CM纤维素），阴离子交换剂有弱碱性的二乙胺基乙基纤维素（DEAE-纤维素）。
蛋白质的混合物与纤维素离子的交换剂的酸性基团或碱性基团结合，结合力的大小取决于彼此间相反基团的静电引力，这又与溶液的pH有关,因为pH决定离子交换剂和蛋白质的解离程度。
盐类的存在可以降低离子交换剂的解离基团与蛋白质相反电荷之间的静电引力。
因此，被吸附的蛋白质的洗脱通过改变pH或离子强度来实现，与离子交换剂结合力小的蛋白质先从层析柱中洗脱下来。
本实验以蓝藻为材料，采用反复冻融、分步盐析法对藻蓝蛋白进行提取和初步纯化，采用考马斯亮蓝法测定提取藻蓝蛋白的含量，然后使用DEAE-纤维素柱层析对提取的藻蓝蛋白进一步纯化（由于来源不同和种类的差别，目前研究报道的藻蓝蛋白等电点尚无一致结论，但都在3.4-4.8之间，其中钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的等电点为4.3，在pH6.5磷酸盐缓冲液中带负电，所以选择DEAE-纤维素阴离子交换柱）。
预期得到纯度较高的藻蓝蛋白。
三、试剂与仪器1、试剂螺旋藻藻粉0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH6.5）: 配置0.2 mol/L pH6.5硫酸缓冲液；称取磷酸二氢钠32.21g溶于蒸馏水稀释至1000 mL为A液。
称取磷酸二氢钠71.64g溶于蒸馏水稀释至1000 mL为B液。
取A液68.5mL,B 液31.5mL,混匀后即可。
稀释0.2 mol/L pH6.5硫酸缓冲液20倍得0.01 mol/L pH6.5硫酸缓冲液。
标准蛋白（0.1mg/mL）:结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度配制成0.1mg/mL的蛋白质标准溶液。
考马斯亮蓝G-250：称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇中，加入100ml 85%磷酸，加蒸馏水稀释至1000mL。
0.5 mol/L NaOH0.5 mol/L HCINaCl硫酸铵透析袋DEAE-纤维素奈氏试剂：将10g碘化汞和7g碘化钾溶于水中，另将24.4氢氧化钾溶于内有70mL水的100mL容量瓶中，并冷却至室温。
将上述碘化汞和碘化钾溶液注入容量瓶中，边加边摇动。
加水至刻度，摇匀，放置2天后使用。
试剂保存在棕色试剂瓶中，暗处。
四、实验步骤（一）藻蓝蛋白的提取及初步纯化1、藻蓝蛋白抽提：采用反复冻融法破碎细胞，磷酸盐缓冲液浸提蛋白。
具体操作：取螺旋藻粉1g，加入0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液10ml，充分搅拌均匀。
室温浸泡30min-1h后，在-20℃和38℃之间反复冻融数次（3-5次）。
细胞破碎后，将悬浮液移入离心管，加入10mL 0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液，混匀，静止30min，4000r/min离心20min，上清液即为抽提得到的藻蓝蛋白混合液。
2、分步盐析：采用不同浓度的硫酸铵分步盐析初步纯化出藻蓝蛋白。
具体操作：取上清液，用25%饱和度的硫酸铵4℃盐析30min，然后4000r/min 离心20min，所得上清液用55%饱和度的硫酸铵4℃盐析24h，4000r/min离心20min，弃去上清液，离心收集得到的沉淀即为藻蓝蛋白。
3、透析去盐得到的沉淀用10ml 0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液溶解，然后将藻蓝蛋白粗提液置于透析袋（截留分子质量为10kD）中在500mL 0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液（或H0）中透析袋中倒出纯化后的藻蓝蛋白，于4℃下保存备用。
2（二）藻蓝蛋白含量测定1、制作标准曲线；2、样品含量测定；3、计算结果。
具体操作步骤如下：取洁净干燥的试管若干，按表1-1比例配置标准蛋白溶液。
原始标准蛋白的浓度为0.1mg/mL。
表1-1 标准溶液配置混匀此6组试管中的标准蛋白溶液，分别加入4mL 考马斯亮蓝G-250，摇匀（充分混合），室温放置5min 后在595nm 波长处比色，以1号管调零点，得到5组标准蛋白溶液在595nm 处的吸光值A 595。
以标准蛋白浓度（mg/mL ）为横坐标，以A 595值为纵坐标作图，得到的趋势线即标准曲线。
将提取的藻蓝蛋白溶液1mL 适当稀释（6-10倍左右），再取0.2mL ，补充水到1mL ，同上进行比色操作，得到其595nm 处的吸光值，通过标准曲线推算其含量。
（三）藻蓝蛋白纯度的测定测定A 620和A 280值，纯度可以用A 620/A 280来表示。
将上述稀释后的样品，用可见分光光度计，测定其在620nm 波长处的吸光值A 620；再将样品转出，装入石英比色皿，放入紫色分光光度计，测定其在280nm 波的吸光值A 280。
由于藻蓝蛋白在620nm 波长处有特征吸收峰，其纯度可以用A 620/A 280来表示。
因此，根据在可见和紫外分光光度计中得到的数据就可以用推算出提取的藻蓝蛋白样品的纯度。
（四）藻蓝蛋白的进一步纯化 1、DEAE-纤维素处理、装柱和平衡 2、上样、洗脱3、测定纯化的蛋白浓度和纯度，并分别计算回收率和纯化倍数。
具体操作：称取所需DEAE 纤维素用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。
抽干，改用0.5mol/L NaOH 溶液浸泡30min ，抽干（可用布氏漏斗），用无离子水漂洗，使pH 至8左右（用pH 试纸检查）。
再改用0.5mol/L HCL 溶液浸泡30min ，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。
脱气后装柱，用三倍柱床体积的0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液平衡。
将初步纯化得到的藻蓝蛋白液上DEAE-纤维素柱，采用0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液洗脱（含0.4mol/L NaCL ）进行洗脱，柱上层的深蓝色部分大多被迅速洗脱下来，只残留少量蓝色。
流速控制在10d/min ，用小试管收集洗脱液，每管收集2mL（或30滴），收集10-12管（呈现蓝色的液体内含有目的蛋白）。
测定每管样品的A620，横坐标洗脱体积、纵坐标A620值，绘制洗脱曲线。
合并所有的管中的样品，A620和A280值，计算纯度。
（注意：开始洗脱时就需要收集洗脱液，测量洗脱液体积，用于绘制洗脱曲线）然后用0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液（含0.6mol/L NaCL）洗脱，洗脱下的是别藻蓝蛋白。
柱料的再生：用0.5ml/L HCL溶液处理柱料，洗2-3倍柱床体积，用H20洗至pH6.0，0.01mol/L Ph6.5的磷酸盐缓冲液平衡。
五、数据处理和实验结果1.标准曲线的绘制表1-2 标准蛋白溶液吸光度所测样品吸光度A595= 0.706，可推算出样品中藻蓝蛋白含量m = 0.917 g2.洗脱曲线的绘制表 1-3 柱层析洗脱液吸光度3.藻蓝蛋白纯度计算盐析后蛋白纯度 = A620/A280= 0.385 / 0.517 = 0.745柱层析后蛋白纯度 = A620/A280= 0.226 / 0.103 = 2.1944.回收率和纯化倍数计算蛋白得率 = 盐析后蛋白含量/ 1g 藻粉 = 0.917 / 1.00 = 91.7%纯化倍数 = 柱层析后蛋白纯度/ 盐析后纯度 = 2.194 / 0.745 = 2.94六、思考题1. 蛋白含量测定的方法有哪些？各有什么特点？（1）.凯氏定氮法：是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被作为法定的标准检验法。
适用范围广泛，测定结果准确，重现性好，但操作复杂费时，实际消耗量大。
(2). 双缩脲法：试剂单一，方法简便，但灵敏度差，测定范围为1~20mg蛋白质。
适用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白测定，常用于谷物蛋白的含量测定。
(3).紫外吸收法：简单灵敏快速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定，测定后仍能回收使用。
但准确度较差，干扰物质较多，适用于与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
(4).考马斯亮蓝法：方法简便，易于操作，所用试剂少，显色剂易于配置，且干扰物质少。
但用于不同蛋白测定时有较大偏差。
适用于要求灵敏度高、快速定量测定微量蛋白质。
(5). Folin-酚试剂法: 优点是灵敏度高，缺点是费时较长，要精确控制操作时间，标准曲线不是严格的直线形式，且专一性差，干扰物质较多。
2. 盐析分离蛋白的原理是什么？其原理：当一定高浓度的中性盐加入到蛋白质溶液中时，因中性盐与水的亲和力大，又是强电解质，一方面结合大量自由水，降低水分活度；一方又夺取蛋白质表面的水化膜，增大蛋白质之间相互作用的机会，还可以中和部分电荷，使其聚集絮结成沉淀析出，从而使蛋白质分离。
3. 离子交换层析纯化蛋白质的原理其原理：离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。
由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。
阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。
结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。