细胞化学成分显示
生物显微技术 第三章 细胞化学和组织化学
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩
细胞化学实验
在保持细胞结构完整的条件下，通过细胞化学反应 研究细胞内各种成分（主要是生物大分子）的分布情 况以及这些成分在细胞活动过程中的动态变化。
1. Feulgen反应显示细胞中DNA的分布 2. Brachet反应显示DNA和RNA在细胞中的分布 3. PAS反应显示细胞中糖原的分布
实验目的
1.了解Feulgen、Brachet、PAS反应的原理， 掌握有关的操作方法。
Brachet反应
甲基绿－派洛宁为碱性染料，它能分别与细胞 内的DNA、RNA结合而呈现不同颜色。当其作为混合 染料时，甲基绿和DNA选择性结合显示绿色或蓝色； 派洛宁与RNA选择结合显示红色。其原因可能是两种 染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子 都是多聚体，而其聚合程度有所不同。甲基绿易与 聚合程度高的DNA结合呈现绿色，派洛宁则与聚合程 度较低的RNA结合呈现红色，但解聚的DNA也能和派 洛宁结合呈现红色。
3.试剂 1mol/l盐酸、Schiff试剂、亚硫酸水、甲基绿－ 派洛宁染色液（ unna试剂 ）、 1mol/l乙酸缓 冲液（PH4.8）、过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、 亚硫酸水溶液、70%乙醇
Feulgen反应
1. 将 洋 葱 鳞 茎 内 表 皮 放 在 1 mol/l 盐 酸 中 ， 6 0 ℃ 水 解 10min。
2.了解细胞内DNA、RNA、多糖等化学成分的 分布情况。
Feulgen反应
组成DNA的单核苷酸由脱氧核糖、碱基和磷酸根构 成。经盐酸水解，嘌呤碱和脱氧核糖之间的糖苷键打 断，并使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基， 与Schiff试剂反应。
Feulgen反应
Schiff试剂是由碱性品红、盐酸、偏重亚硫 酸钠配制而成，碱性品红因其结构中含有发色基 团-醌基显示紫红色；与盐酸、偏重亚硫酸钠反应 后，醌基两端的双键被打开，形成无色品红溶液， 很不稳定，需要避光密闭保存；在和醛基反应后， 重新生成醌基结构，故有DNA的部位被染成紫红色。
细胞的化学成分
稳定蛋白质三维结构的 作用力 疏水键 二
盐 键 氢键
硫 键
范德华力
蛋白质的理化性质 1、蛋白质自溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉 淀。高浓度盐、有机溶剂、重金属盐、生物碱试 剂都可沉淀蛋白质。盐析沉淀蛋白质不变性，是 分离制备蛋白质的常用方法。如血浆中的清蛋白 在饱和的硫酸铵溶液中可沉淀。乙醇、丙酮均为 脱水剂，可破坏水化膜，降低水的介电常数，使 蛋白质的解离程度降低，表面电荷减少，从而使 蛋白质沉淀析出。低温时，用丙酮沉淀蛋白质， 可保留原有的生物学活性。但用乙醇，时间较长 则会导致变性。重金属盐、生物碱试剂（苦味酸 、鞣酸）与蛋白质结合成盐而沉淀，是不可逆的
有些氨基酸如精氨酸和组氨酸对成人是非必需的，但对婴 儿必需在食物中加以补充，只是需注意适量。
4、 氨基酸的功能
（1）组成蛋白质 （2）一些aa及其衍生物充当化学信号分子 （3）氨基酸是许多含N分子的前体物 （4）代谢中间物
5、氨基酸的旋光性
Gly(甘氨酸)是唯一不含对称碳原子的氨基 酸，因此不具旋光性 因为其R=H
pH > pI 时 ， 氨 基 酸 带 负 电 荷 ， COOH解离成-COO-，向正极移动。 pH = pI时，氨基酸净电荷为零 pH < pI时，氨基酸带正电荷，-NH2 解离成-NH3+，向负极移动。
等电点的计算：
不带电荷的氨基酸的pI是由α -羧基和
α -氨基的解离常数的负对数pK1和pK2决
甘油（丙三醇）
H2C OH HC OH C OH H2
H 2O
H2 C HO C O C H2 C H2
H2 C C H2
H2 C C H2
H2 C C H2
H2 C C H2
植物细胞的各部分化学成分及作用简析
植物细胞的各部分化学成分及作用简析The chemical composition of plant cells can be divided into several parts.1. Cell Wall: The primary component of the cell wall is cellulose, which is a complex carbohydrate made up of long chains of glucose molecules. Other components of the cell wall include proteins, hemicellulose, pectin, and lignin.2. Cell Membrane: The cell membrane is composed of a phospholipid bilayer, which consists of two layers of phospholipid molecules. It also contains proteins, cholesterol, and carbohydrates.3. Cytoplasm: The cytoplasm contains various organic compounds such as sugars, amino acids, proteins, and nucleic acids. It also contains inorganic ions such as potassium, calcium, and magnesium.4. Nucleus: The nucleus contains DNA, which is the genetic material of the cell. It also contains proteins and RNA.5. Chloroplasts: Chloroplasts are responsible forphotosynthesis and contain chlorophyll, which is a pigment that captures light energy. They also contain proteins, lipids, and nucleic acids.6. Vacuoles: Vacuoles are storage compartments in plant cells and contain water, sugars, ions, pigments, and other substances.中文回答:植物细胞的化学组成可以分为几个部分：1. 细胞壁：细胞壁的主要成分是纤维素，它是由葡萄糖分子链构成的复杂碳水化合物。
植物细胞化学组成
多肽
折 叠 盘 旋
蛋白质
氨基酸的数目不同
氨基酸排列顺序不同
多肽的空间结构不同
导致
结构多样性
导致
功能多样性
构成生物体，如结构蛋白 运输作用，如血红蛋白 催化作用，如酶 调节作用，如胰岛素
免疫作用，如抗体
链接生活
实践经验告诉我仧，吃鸡蛋前要将鸡蛋煮熟，幵且知道煮熟 的鸡蛋，蛋白会发成固态，丌再溶于水； 实践经验还告诉我仧，为了防止病人丌叐感染，必须对医疗 器具迚行消毒。 我仧为什么要对鸡蛋和医疗器具迚行这样的处理？
免疫功能，如免 疫球蛋白、抗体
输入标题文本
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组成元素 C、H、O、N（P、S）
构成
种类：20种 必需氨基酸：10种 非必需氨基酸：10种
HO
小 结
氨基酸
通式： H2N C C OH
脱 水 缩
R 特点：至少都含有……并且都有……
合
组成蛋白质的氨基酸不同
使蛋白质的变性
5、蛋白质的发性
利用蛋白质分子在物理或化学因素的影响下， 原有的空间构象发生改变，从而造成蛋白质分 子原有的理化性质和生物活性的改变。
文字 内容
文字 内容
蛋白质变性后首先是失去原有的生物活性，如 酶失去催化能力、激素失去激素活性等。蛋白 质生物活性的丧失是蛋白质变性的主要特征。
发性后的蛋白质还表现出各种理化性质的改发， 如溶解度降低，易形成沉淀析出。
多糖植：淀粉、纤维素（细胞壁癿主要成分）
三、糖类
⒊功能:主要能源物质 查阅资料
提示：糖类丌是用来长身体（如肌肉、骨骼），而是用来消耗。 分析：哪两类糖丌是用来作为能源物质？（纤维素和核糖、脱氧核糖）
实验8 考马斯亮蓝染色显示细胞骨架
荧光、免疫酶标的方法显示细胞骨架
免疫荧光染色
2020/8/20
7
左：微丝，中：微管 ，右：中等纤维
三、实验用品
2020/8/20
8
复式显微镜（带油浸物镜） 擦镜纸（lens paper）；记号笔；小片滤纸；载玻 片；盖玻片；剪刀；镊子；洋葱鳞茎 ①1% TritonX-100； ②M缓冲液； ③3%戊二醛； ④pH6.8 磷酸缓冲液； ⑤0.2%考马斯亮蓝R-250染色液
• 非肌细胞中的微丝是动态结构，肌动蛋白单体（Gactin）与纤维（F-actin）在一定条件下互相转化。 本实验中M-缓冲液提供的离子条件可使F-actin稳定。
中等纤维
微管
2020/8/20
3
微丝
2020/8/20
6
显示细胞骨架成分的特异性方法
1、特异性的药物结合反应： 如罗丹明标记的鬼笔环肽，可以显示微丝
2020/8/20
9
四、实验步骤
1．用镊子撕取洋葱鳞茎内侧的表皮，剪成约1cm见方。 置于pH6.8的磷酸缓冲液中，使其下沉（每人做2片， 不要太大，否则不易展开）。
2．吸弃磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20 mins。 对照组使用M缓冲液处理。
3．M缓冲液洗5 mins X 3 times 4．3%戊二醛固定30 min（或Carnoy固定液） 5．磷酸缓冲液洗5 mins X 3 times 。 6．0.2%考马斯亮蓝染色30 mins，蒸馏水冲液洗一次，
5分钟。然后将表皮（带少量液体）平铺在载玻片上，加 盖玻片，显微镜下观察。
五、实验结果
2020/8/20
10
细胞的化学组成
核糖 （C5H10O5）
五碳醣
核糖核苷酸的组成成分
脱氧核糖（C5H10O4）脱氧核糖核苷酸的组成成分
葡萄糖
大部分生物的主要能量来源
六碳醣
果糖
—
半乳糖
—
1-2 细胞的 化学组成
双醣（C12H22O11）
课本 P18 讲义 P14
由两个单醣分子经脱水反应结合而成
C6H12O6＋C6H12O6 → C12H22O11＋H2O 常见的双醣
1-2 细胞的 化学组成
三酸甘油酯的构造
课本 P23 讲义 P17
3R─COOH＋C3H5（OH）3 →（RCOO）3C3H5＋3H2O
1-2 细胞的 化学组成
三酸甘油酯主要分类
课本 P22 讲义 P17
大多数动物性脂质的饱和脂肪酸含量高，常温 下呈固态 植物及鱼类的脂质中不饱和脂肪酸含量高，常 温下呈液态 功能：
冰浮于水上，有利于水生生物的生存
1-2 细胞的 化学组成
有机物 ── 醣类
课本 P17 讲义 P14
组成元素：C、H、O 一般可用分子式 Cn（H2O）m 表示 通常 H：O＝2：1，故称为碳水化合物 并非所有碳水化合物的 H、O 比均为 2：1
例如：脱氧核糖（C5H10O4）
1-2 细胞的 化学组成
种类 比较 组成的单醣
特性
麦芽糖
葡萄糖＋葡萄糖
(1) (2)
淀粉水解的部分产物 常见于萌发的种子内
蔗糖
葡萄糖＋果糖
(1) 甘蔗和甜菜中含量较多 (2) 植物筛管内养分的运输型式
乳 糖 葡萄糖＋半乳糖
乳汁中主要的醣类
1-2 细胞的 化学组成
寡醣
课本 P18 讲义 P15
细胞的化学组成和成分
（一)、水
在细胞中含量最多。 在细胞中含量最多。
1. 不同种类的生物体中，水的含量不同 不同种类的生物体中， 2. 不同组织器官中水的含量不同
(二)、无机盐
细胞中的无机盐大多数以离子 状态存在、 状态存在、含量少 主要功能: 主要功能 1．是某些化合物、细胞结构的组成成分 ．是某些化合物、细胞结构的组成成分; 组成成分 2．参与生命活动的调节，维持生物体的 ．参与生命活动的调节， 生命活动; 生命活动 3．维持细胞内的平衡：渗透压平衡、酸碱 ．维持细胞内的平衡：渗透压平衡、 平衡、离子平衡。 平衡、离子平衡。
【例1】 血液中的 2+含量太低时，神经肌肉的兴 】 血液中的Ca 含量太低时， 奋性升高而出现抽搐，这一事实说明Ca 奋性升高而出现抽搐 ， 这一事实说明 C 2+ 的生理功 能之一是( 能之一是 ) A构成细胞结生理功能 D调节渗透压和酸碱平衡
组成细胞的化学元素 组 成 细 胞 的 化 学 元 素 大量元素： 大量元素 C H O N P S K Ca Mg等 （含量较多） 微量元素： 微量元素： Fe Mn Cu B Mo等 （含量很少） 基本元素： 基本元素： C （干重含量最多，达48.4%）
组成生物体的化合物 水 无机化合物 构成细胞 的化合物 有机化合物 无机盐 糖类 脂质 蛋白质 核酸
【解析】 神经肌肉的应激性，需要体液中各种无机盐离子 解析】 神经肌肉的应激性， 维持一定的比例。 浓度增高时， 维持一定的比例。当Na+、K+浓度增高时，神经肌肉的应激 性增高，而当Ca2+、Mg+、H+浓度增高时，应激性降低。 性增高，而当 浓度增高时，应激性降低。 当血液中的Ca 过低时，应激性增高，手足抽搐， 当血液中的 2+过低时，应激性增高，手足抽搐，这一事 实说明Ca 对于维持细胞的正常生理功能有重要作用。 实说明 2+对于维持细胞的正常生理功能有重要作用。
细胞生物学-第3章-细胞生物学研究方法(翟中和第四版)
基础上，添加 “环状光阑”和
“相差板”，将光程差或相位差， 转换成振幅差。 • 这是在构造上，相差显微镜不同于 普通光学显微镜两个特殊之处。
体外培养MDCK 细胞在普通（明视场）光学显微镜（A） 和相 差显微镜（B）下拍摄图像效果的比较
（二）相差显微镜和微分干涉显微镜
（一）普通复式光学显微镜——样品制备
甲醛
石蜡
5μm
（二）相差显微镜和微分干涉显微镜
相差显微镜
发明： 1934~1935 荷兰物理学家Zernike 设计和发明相差显微 镜，并获得诺贝尔奖。
原理：利用光线干涉的原理把透过标本的可见光的光程差变 成振幅差，表现为明与暗的对比，从而提高了各种结构之间 的对比度，使标本的各种结构变得更清晰。
（Байду номын сангаас）荧光显微镜——基本原理
特点： 1. 利用汞灯或氙灯作为荧光激 发光源，波长较短，分辨 率高于普通显微镜； 2 . 核心部件是滤光片系统及专 用物镜镜头； 3. 滤光片系统由激发滤光片和 阻断滤光片组成。 应用： 对细胞内生物大分子进行 定性、定位研究。
520~560nm的 绿色荧光透过
阻断滤光片
用超速离心技术分离细胞组分
组织匀浆
差速离心
密度梯度离心
分离出各组分
用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物 差速离心：分离密度不同的细胞组分
密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离
二、细胞成分的细胞化学显示方法
• 显色剂与细胞组分中特殊基团的结合 • 通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断蛋白质、 核酸、多糖和脂质在细胞中的分布和相对含量
福尔根反应 Feulgen stain
组成细胞的化学元素及无机物
组成细胞的化学元素及无机物细胞是生命的基本单位，组成细胞的化学元素和无机物对于细胞的结构和功能都至关重要。
下面将详细介绍组成细胞的化学元素和无机物。
化学元素是构成物质的基本单位，有多种不同的化学元素存在于细胞中。
其中最丰富的元素是碳、氢、氧和氮，它们被称为生物元素或生物基元素。
这四种元素在有机物的构成中起着关键的作用。
碳是所有有机化合物的基础，包括蛋白质、核酸、脂类和多糖类等。
氢和氧通过与碳结合形成水，是细胞内许多反应的媒介。
氮是构成蛋白质和核酸的重要元素。
除了碳、氢、氧和氮之外，还有许多其他的化学元素存在于细胞中，虽然它们的含量较少，但对细胞的结构和功能也非常重要。
微量元素和必需元素是指身体只需要以微量摄入但又不能合成的元素。
其中最重要的微量元素包括钙、磷、钾、钠、镁、氯和硫。
这些元素参与细胞内的许多生物化学反应，例如细胞膜的稳定性、神经传导和酶的催化作用等。
无机物是指除碳之外的元素构成的物质。
细胞内的无机物主要包括水、无机盐和酸碱等。
水是细胞内最重要的无机物，它占细胞质的大部分，并参与细胞内许多反应，例如溶解物质、稀释和水解等。
细胞内的水通过细胞膜的渗透调节来维持细胞内外水分的平衡。
无机盐是细胞内的重要无机物之一，包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、磷盐等。
这些无机盐参与细胞内许多生理过程，例如细胞膜潜在电位的调节、酶催化反应和细胞骨架的稳定等。
酸碱是细胞内另外一类重要的无机物，它们对细胞内pH的调节非常重要。
细胞内的pH值的变化会影响许多细胞内的生化反应。
细胞通过酸碱平衡系统来维持细胞内的pH值的稳定。
细胞内的化学元素和无机物共同构成了细胞内的生化环境和分子结构。
它们通过相互作用和反应来维持细胞的正常运作。
对组成细胞的化学元素和无机物的深入了解，有助于理解生命的基本单位的结构和功能，从而有助于研究生命科学和生物医学领域的各种问题。
生物学研究方法,考研
生物学研究方法一、细胞形态结构的观察方法肉眼的分辨率一般只有0.2mm，很难识别单个细胞；光学显微镜的分辨能力达0.2 m，借此发现了细胞；电子显微镜分辨能力高达0.2nm，将细胞的超微结构展现在人们面前。
光学显微镜1.普通复式光学显微镜2.相差显微镜和微分干涉显微镜3.荧光显微镜4.激光扫描显微镜电子显微镜基本步骤1.固定2.脱水（清洗后用系列梯度丙酮或乙醇浸泡）3.包埋4.置温箱中聚合5.修块6.切片7.收集切片于载网上8.染色9.电镜观察负染色技术经纯化的细胞组分或结构，如线粒体基质、核糖体、蛋白颗粒及细胞骨架纤维甚至病毒等可以通过电镜负染色技术显示其精细结构，分辨率可达1.5nm左右。
负染色是用重金属盐，如吴磷钨酸或醋酸双氧铀溶液对铺展在载网上的样品进行染色。
吸去多余染料，样品自然干燥后，整个载网都铺上了一薄层重金属盐，从而衬托出样品的精细结构。
冷冻刻蚀技术冷冻刻蚀技术的样品制备过程包括冰冻断裂与蚀刻复型两步，因此又称冰冻断裂-蚀刻复型技术。
用快速低温冷冻法，在液氮或液氦中将样品迅速冷冻，然后再低温下进行断裂。
这时冷冻样品往往从其结构相对“脆弱”的部分（即脂膜双分子层的疏水端）裂开，从而显示出镶嵌在膜脂中的蛋白颗粒。
经过一段时间的冰的升华（又称蚀刻），进一步增强“浮雕”样的效果。
再用铂等金属进行倾斜喷镀，以形成对应于凹凸断裂面的电子反差，接着用碳进行垂直喷镀，在断裂面上形成一层连续的碳膜。
最后用消化液吧生物样品消化掉，将复型膜移到载网上，并在电镜下进行观察冷冻蚀刻几乎是主要用来观察膜断裂面上的蛋白质颗粒和膜表面形貌表征，图像附有立体感，样品不需要包埋甚至不需要固定，因而能够更好的保持样品的真实结构。
扫描隧道显微镜（STM）二、细胞及其组分的分析方法用超离心技术分离细胞组分用低渗匀浆、超生破碎或研磨等方法可使细胞质膜破损，形成细胞核、线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器和细胞组分组成的混合均桨，再通过差速离心，即利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种质量和密度不同的亚细胞组分和各种颗粒组分分开。
常用的五种细胞化学染色方法
常用的五种细胞化学染色方法一、细胞化学染色方法概述细胞化学染色是生物学和医学研究中常用的技术手段，通过对细胞内各种化学成分的染色，可以揭示细胞的结构、功能以及病变过程。
根据染色原理和目的的不同，细胞化学染色方法有多种分类。
本文将介绍五种常用的细胞化学染色方法，分别是：吉姆萨染色、瑞氏染色、巴氏染色、苏木素-伊红染色和福尔根染色。
二、常用的五种细胞化学染色方法1.吉姆萨染色吉姆萨染色是用于显示细胞内蛋白质和核糖体的方法。
该方法使用含有天青、伊红、酸性品红等染料的吉姆萨染液对细胞进行处理，使蛋白质和核糖体呈现紫红色或蓝紫色。
吉姆萨染色在免疫学和寄生虫学等领域有广泛应用。
2.瑞氏染色瑞氏染色是一种用于显示细胞内颗粒物质的染色方法，如细胞内酶、核酸等。
该方法使用含有伊红和天青染料的瑞氏染液对细胞进行处理，使颗粒物质呈现蓝紫色或红色。
瑞氏染色常用于病理学和血液学中的骨髓涂片检查。
3.巴氏染色巴氏染色是一种用于显示细胞内糖原的染色方法。
该方法使用含有苏丹III 或苏丹IV染料的巴氏染液对细胞进行处理，使糖原呈现红色或橙色。
巴氏染色在妇科和肿瘤学等领域有重要应用，常用于检查宫颈脱落细胞中的糖原含量。
4.苏木素-伊红染色苏木素-伊红染色是一种显示细胞核和细胞质的染色方法。
该方法使用含有苏木素和伊红染料的染液对细胞进行处理，使细胞核呈现蓝色，细胞质呈现红色或橘黄色。
苏木素-伊红染色在病理学中广泛用于组织切片的诊断。
5.福尔根染色福尔根染色是一种用于显示DNA的染色方法。
该方法使用含有品红和苦味酸的福尔根染液对细胞进行处理，使DNA呈现蓝色。
福尔根染色在遗传学和肿瘤学研究中常用作显示肿瘤细胞的DNA含量。
三、结论细胞化学染色在生物学和医学研究中具有重要价值，有助于揭示细胞的结构、功能和病变过程。
常用的五种细胞化学染色方法各有其特点和适用范围，可以根据研究目的和需求选择适合的方法。
这些常用的细胞化学染色方法在实验操作和试剂选择等方面有一定的标准和要求，熟练掌握这些方法有助于提高实验结果的可靠性和准确性。
细胞内化学成分的检测实验优秀文档
2、材料中不含有对实验结果产生影响的其他有色的物 不1、同选物用质的与实特验定材的料化含学有试相剂关的物特质定且显量色高反。应。
三不、同实 物验质的与共特性定操的作化过学程试：剂的特定显色反应。
物质检测类实验总结：
一、实验的共性原理：
生物组织中成分的不检测同实验物质与特定的化学试剂的特定显色反应。
三、实验的共性操作过程：
材料切薄二片后、染色实，洗验去浮选色后材再制的装片共显微性观察原则：
加三碘、液 实到验待的测共液性（操物作）过中程：
1、选用的实验材料含有相关物质且量高。 2生、物材组料织中中不成含分有的对检实测验实结验果产生影响的其他有色的物质。
感谢观看
质。 甲涂基片绿 、—水派解洛（宁盐酸（破吡坏罗膜红，）便染于液染液染色）、漂洗（洗去酸液）、染色、显微观察
材不料同切 物薄质片与后特染定色的，化洗学去试浮剂色的后特再定制显装色片反显应微。观察 不加同碘物 液质到与待特测定液的（化物学）试中剂的特定显色反应。
三、实验的共性操作过程： 不2、同材物料质中与不特含定有的对化实学验试结剂果的产特生定影显响色的反其应他。有色的物质。
生物组织中成分的检测实验
物质 检测用试剂
检测条件与过程颜色反应淀粉 碘液加碘液到待测液（物）中 蓝色
还原糖
斐林（本尼 迪特）试剂
加试剂后水浴加热
砖红色沉 淀
蛋白质 双缩脲试剂 先加A液再加B液
紫色溶液
脂肪 苏丹Ⅲ
材料切薄片后染色，洗去浮 色后再制装片显微观察
橙黄
细胞生物学实验-细胞化学
细胞化学是细胞形态学与化学、生物化学之间的边缘科学。
其特点是利用已知的化学反应，在保持细胞原有的形态结构上，以化学反应的方法显示出细胞中的化学成分，然后通过光学显微镜进行定性、定位和定量分析。
细胞化学不但有利于研究细胞的形态联系功能与代谢，定位显示化学性质和化学成分，而且还有利于确定细胞的特征及化学成分的变化规律、细胞损伤状态的诊断、病因机制和预后治疗等。
随着现代科学技术的发展，细胞化学除了普通染色及光学显微镜基础上的细胞化学外，电镜细胞化学、荧光细胞化学、免疫细胞化学等现代细胞化学技术正在广泛应用，这些技术不但丰富了细胞化学的研究内容，而且进一步加深了我们对细胞结构及活动规律的了解。
实验目的：1.了解并掌握Brachet反应的原理和操作方法2.了解并掌握细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法实验器材：DNA和RNA的Brachet染色普通光学显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、洋葱鳞茎表皮（1）Unna试剂：甲基绿派洛宁染色液甲液：5％派洛宁水溶液6 ml，2％甲基绿水溶液6 ml，蒸馏水16 ml 乙液：1 M乙酸缓冲液（pH 4.8）16 ml甲、乙两液分别置4℃冰箱备用，用时甲乙两液混匀。
（2）1 M乙酸缓冲液（pH 4.8）：A液：冰醋酸6 ml加蒸馏水至100 mlB液：乙酸钠13. 5g加蒸馏水至100 ml取A液40 ml＋B液60 ml混匀后pH为4.8。
实验器材：细胞中多糖和过氧化物酶反应普通光学显微镜、镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、洋葱鳞茎、马铃薯块茎（1）高碘酸溶液：高碘酸（HIO4·2H2O）0.4 g，蒸馏水10 ml、95％乙醇35 ml，1/3 M乙酸钠溶液（2.72 g乙酸钠溶于100 ml H2O）5 ml，。
（2）Schiff试剂：称取0.5 g碱性品红加入到100 ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮5 min（勿使之沸腾），使之充分溶解。
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-COOH
-NH2
Methyl green-pyronin
整个蛋白质所带的正电荷多（NH3+），就为碱性蛋白， 其主要分布在细胞核内。
标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同pH值的固绿 染液分别染色，使细胞内的碱性蛋白与酸性蛋白质显示 出来。
步骤：
处死蟾蜍，制作三张蟾蜍血涂片，晾干。
两张 70%乙醇固定6min
90℃、5%三
氯醋酸、15min 冲洗 一张酸定6min 晾干 甲基绿-派罗宁滴染20min 冲洗，吸干 丙酮分色（沾2-3次）晾干观察
一小块洋葱表皮 观察
甲基绿-哌罗宁滴染30-40min
滴水冲洗
盖片、
DNA, RNA
洋葱内表皮细胞甲基绿-哌罗宁染色 DNA被甲基绿染成绿色 RNA被哌罗宁染成红色
1.细胞组织化学法：在保持细胞结构的基础上，利用某些 化学试剂与细胞内的一些物质发生化学反应，从而在细 胞局部形成有色沉淀在通过显微镜对细胞内的化学成分 进行定位定性的检测方法。
甲基 丙酮分
一小块洋葱表皮 甲基绿-哌罗宁滴染3040min 滴水冲洗 盖片、观察
蟾蜍血涂片：细胞质红色、核蓝绿色、核仁紫红
洋 葱 表 皮：细胞质红色、核绿色
处死蟾蜍，制作三张蟾蜍血涂片，晾干。
两张 70%乙醇固定6min
90℃、5%三氯醋酸、15min
冲
洗 一张酸性固绿5-10min、另一张碱性固绿30-40min 冲洗晾干、
实验目的：
1.了解细胞化学反应基本原理 2.了解细胞内酸性蛋白和碱性蛋白、DNA
和RNA分布状况 3.熟练血涂片技术
实验准备
1、材料 蟾蜍 洋葱 2、仪器和器材 光学显微镜 解剖器械
载玻片 染色缸 水浴箱 3、试剂 70%乙醇
5%三氯醋酸 0.1%碱性固绿染液 0.1%酸性固绿染液 丙酮 甲基绿-哌罗宁染液
实验内容：
细胞内酸性蛋白、碱性蛋白的显示
细胞内DNA和RNA分布
蟾蜍红细胞 洋葱表皮细胞
一、酸性蛋白质、碱性蛋白质的显示
原理：
细胞内不同蛋白质分子中所带的碱性基团(-NH2)和酸性 基团(-COOH)的数量不同，在不同PH溶液中，整个蛋白质 所带静电荷多少也不同。
在一定生理条件下：
整个蛋白质所带的负电荷多（-COO-），就为酸性蛋白； 其主要分布在细胞质中。
10min、另一张碱性固绿30-40min 冲洗晾干、
观察
酸性蛋白：细胞质、核仁区域内的蛋白 碱性蛋白：细胞核内组蛋白
处死蟾蜍的方法：
左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着 掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在 头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)， 右手持解剖针直插入此凹陷约2 mm，将针尖转 向头侧插入颅腔捣毁脑组织。将解剖针向尾侧刺 入脊椎管内捣毁其脊髓。直至其四肢伸直、肌肉 松驰为止。
2.三氯醋酸的作用：抽提DNA 、RNA，使蛋白质与DNA 、 RNA分开。
3.固定：将细胞杀死，使其仍然保持原来的结构和形态。
4.甲基绿-哌罗宁染色原理：核酸是强性酸，甲基绿-哌罗 宁是碱性染料，具有亲和力，这两种碱性染料有选择的 特异染色，甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染成 红色。
Fast green
将推片自血滴左 侧向右移动
当血滴均匀地附着在两片之间后，再将推 片向左平稳地推移 将推片自血滴左 侧向右移动
二.细胞内的DNA、RNA分布
原理：
核酸是呈酸性，与碱性染料甲基绿-哌罗宁 是具有亲和力，这两种碱性染料有选择的特异染 色，甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染 成红色。
步骤：
血涂片，70%乙醇固定6min 晾干 绿-派罗宁滴染20min 冲洗，吸干 色（沾2-3次）晾干观察