实验三,醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质一、实验目的：掌握电泳的一般原理和醋酸纤维薄膜电泳的操作技术；二、实验原理：1、电泳：带电粒子在电场中向着与其电荷相反的方向泳动。
2、分类：按支持介质、电场强度、技术特点等分类。
支持介质：自由界面电泳；区带电泳：滤纸、醋纤薄膜、凝胶等。
3、基本原理---电荷效应：F=Eq，f=6лrηv。
匀强电场中，F=f，v=Eq/6лrη。
在同一电泳条件下，混合物中不同组分将因其r和q的差异而具有不同的移动速度。
因此，电泳一定的时间（t），就可以互相分离。
通常使用“迁移率”（m）表示不同物质具有不同移动速度的特性。
m=V/E指在单位电场强度下带电颗粒的移动速度。
4、影响电泳的因素：内在因素：样品本身所带净电荷、分子大小和形状。
外界因素：电场强度、缓冲液、支持介质。
5、血清蛋白的分离：血清蛋白各组分pI≤7.5，缓冲液pH=8.6，净电荷为负电荷，向正极泳动。
由于各蛋白质成分的pI不同，所带电荷量q不同，加上分子半径大小r和形状的差别，依V=Eq／6πrη 可知，不同蛋白质成分向正极泳动的速度不同，电泳一定时间就可相互分离(Δd=Δv·t)。
分离后的蛋白质须经显色才能检测鉴定，通常用氨基黑10B 将血清蛋白质显色。
三、实验步骤：1.泡膜洗净手，戴乳胶手套，取薄膜，于毛面距一端1.5 cm 处用铅笔轻画一直线。
小心将膜浮于巴比妥缓冲液上，待下面湿润后再将膜完全浸入，浸泡1小时。
2.仪器准备检查电源，接好电线（不通电），注意正负极。
加巴比妥缓冲液于电泳槽内，调整水平。
3.点样取出泡好的薄膜，用滤纸吸去多余的缓冲液。
毛面向上，于毛面膜的一端画线处点样，注意点样量适当。
待样品渗入膜内后，将点样面翻转朝向下方（以防电泳时薄膜表面蒸发干燥），置于电泳槽的支架上，点样端放在负极。
4.电泳盖上电泳槽盖平衡 5 分钟。
然后检查电源正负极无误后通电，E= 15V/cm，电泳 60分钟后断电。
实验三,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
四、试剂
• 1． 硼酸缓冲液（PH8.6,离子强度0.075mol/L） • 硼酸5.6025g，四硼酸纳5.6099g，氯化钠1.3163g，加 蒸馏水至1000mL • 2．染色液 300mL 含氨基黑10B 0．25 g，甲醇50 mL，冰醋酸10 mL,水 40mL(可重复使用)。 • 3．漂洗液 2000mL 含甲醇或乙醇45 mL、冰醋酸5 mL、水50 mL。 • 4.透明液(现用现配） 无水乙醇:冰醋酸＝7:3
醋酸纤维薄膜电泳是近几年来推广的一种新技 术。它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样 品无拖尾和吸附现象等优点。目前已广泛应用于 血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球 蛋白、同工酶的分离及测定方面。
三、器材
1、醋酸纤维薄膜(2×8 cm) 2、常压电泳仪 3、 点样器(市售或自制) 4、培养皿(染色及漂洗用) 5 粗滤纸 6、玻璃板 7、竹镊
•
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料 量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用 0.4mol/LNaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定 其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密 度计扫描，测定其相对含量。 • 本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳，是以醋 酸纤维薄膜为支持物的电泳方法。醋酸纤维素是 纤维素的羟基乙酰化形成的纤维醋酸酯。将它溶 于有机溶剂 (如：丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后， 涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维 薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，有强渗透性、 其厚度约为120μm。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体 构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见下 表），在电场中移动速度不同。由表可知，血清 中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0所以在 缓冲液（pH值8.6）中，它们都电离成负离子， 在电场中向阳极移动。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告引言：血清蛋白是人体内一类重要的生物大分子，对于维持人体正常生理功能具有重要作用。
因此，对血清蛋白的研究一直备受关注。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清蛋白进行分离和鉴定，以期获得关于血清蛋白的更深入了解。
实验方法：1. 实验仪器和试剂准备本实验所需仪器包括电泳装置、电源、薄膜电泳槽等。
试剂包括醋酸纤维、缓冲液、血清样品等。
2. 实验步骤（1）制备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维溶液均匀涂布在玻璃板上，待干燥后剥离，得到醋酸纤维薄膜。
（2）制备电泳槽：将醋酸纤维薄膜固定在电泳槽中，保证其平整并与电极接触良好。
（3）样品准备：将待测血清样品离心，取上清液作为实验样品。
（4）电泳操作：将实验样品均匀涂布在醋酸纤维薄膜上，接通电源进行电泳，设定适当的电压和时间。
（5）染色和观察：将电泳结束后的薄膜进行染色处理，然后观察薄膜上蛋白带的分布情况。
实验结果：经过实验，我们观察到在醋酸纤维薄膜上形成了多个蛋白带，这些蛋白带代表了血清中不同种类的蛋白质。
通过比较不同样品的蛋白带分布情况，我们可以发现不同样品中蛋白质的种类和含量存在差异。
讨论：1. 醋酸纤维薄膜电泳技术的优势相比于传统的凝胶电泳技术，醋酸纤维薄膜电泳具有以下优势：操作简单、分辨率高、分离效果好、重复性好等。
因此，该技术在血清蛋白分离和鉴定中具有广泛应用前景。
2. 血清蛋白的研究意义血清蛋白是人体内一类重要的生物大分子，对于维持人体正常生理功能具有重要作用。
通过对血清蛋白的研究，可以了解人体内不同蛋白质的种类和含量，从而为临床医学、生物医学研究等领域提供重要的参考依据。
结论：本实验利用醋酸纤维薄膜电泳技术成功分离和鉴定了血清蛋白，观察到了不同蛋白质在薄膜上的分布情况。
该实验结果为进一步研究血清蛋白的功能和生理意义提供了基础数据。
醋酸纤维薄膜电泳技术的应用前景广阔，有望在血清蛋白研究领域发挥重要作用。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果一、前言醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法，它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来，从而便于进行后续的研究。
本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。
二、实验方法1. 样品制备将血清样品加入到离心管中，并进行离心处理，去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。
然后取出上清液，进行下一步处理。
2. 薄膜电泳将制备好的样品加入到电泳槽中，并在两端接上电极。
然后通过调节电场强度和时间等参数，使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动，并最终被分离开来。
3. 银染将分离好的样品进行银染处理，使得其中存在的蛋白质能够被显色。
然后观察显色效果，并对其进行记录和分析。
三、实验结果经过以上实验步骤，我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。
具体结果如下：1. 蛋白质谱图通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示：（图片略）从图中可以看出，我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的条带，并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动，最终被分离开来。
2. 蛋白质种类通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后，我们可以看到其中存在多种不同种类的蛋白质。
具体包括：（1）白蛋白（2）球蛋白（3）免疫球蛋白（4）转铁蛋白等。
3. 调整实验参数对结果的影响在实验过程中，我们还尝试了调整一些实验参数，以观察其对结果的影响。
具体包括：（1）电场强度：当电场强度较大时，不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动，并且更容易被分离开来。
但是，如果电场强度过大，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
（2）电泳时间：当电泳时间较长时，不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来，并且条带也更加清晰。
但是，如果电泳时间过长，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
四、结论通过以上实验结果的观察和分析，我们可以得出以下结论：1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的血清蛋白质分离方法。
实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳要点
实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、目的：1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法2、学会常用电泳的使用方法3、了解用醋酸纤维薄膜作支持物的优点及使用范围二、原理：由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH8.6的缓冲液中，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的分子量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上，电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。
三、器材：醋酸纤维薄膜（2×8cm）、电泳仪、点样器（盖玻片）、培养皿、粗滤纸、玻璃板（载玻片）、镊子等。
四、试剂：巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07。
巴比妥钠12.7g、巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml）氨基黑染色液（氯基黑10B0.5g、甲醇50ml、冰醋酸10ml、蒸馏水10ml）漂洗液（95％乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml）血清五、操作：1、识别标记：将薄膜切成2.5×8cm的小片。
在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线，以标明点样位置。
2、浸泡：用镊子将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉。
大约10min。
3、点样：取出薄膜，用滤纸将表面的明水吸干，然后平铺在载玻片上（无光泽面朝上），将盖玻片先在小培养皿中的血清中沾一下，再在距膜条一端2cm处轻轻地水平落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
4、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲溶液内。
用缓冲溶液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥）。
点样端靠近负极，盖严电泳室，160V，45min。
5、染色：将膜条取出，放在显色液中显色10min。
6、漂洗：将膜条放在漂洗液中漂洗数次，至底色脱净为止，可得到清晰电泳图谱。
实验三醋酸纤维素膜分离血清蛋白质
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的 电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它 具有均一的泡沫样的结构，厚度仅120µm，有强 渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持 物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用 范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。目前已 广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白，糖蛋白和
蛋白质分子小而带电荷多者，移动速度较快；分 子大而带电荷少者泳动速度较慢。
据此原理可利用醋酸纤维薄膜电泳将血清蛋白分为 清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球 蛋白等5条区带。
这些血清蛋白分离后，用蛋白染色剂进行染色。由 于蛋白质的量与结合的染料量基本成正比，故可分 别将5条区带剪开，使染料溶解于碱性溶液中，用 比色法测定，并计算出5种蛋白质的相对百分数。 也可将染色后的薄膜经透明处理，直接用光密度扫
4.染色与浸洗 电泳完毕后，切断电源，用镊子将薄膜取出，直接 浸于氨基黑10B染色液中，5min后取出。再浸泡于 漂洗液，反复漂洗，直至背景无色为止。
2c m
（－）
6c m
（＋）
正常人血清醋酸纤维薄膜电泳示意图 1为清蛋白；2为α1-球蛋白；3为α2-球蛋白； 4为β-球蛋白；5为γ-球蛋白；6为点样原点 。
5.结果判断
一般经漂洗后，薄膜上可呈现清晰的5条区带，由 正极端起，依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、 β-球蛋白和γ-球蛋白。
6.透明
将薄膜用滤纸吸干或吹风机吹干，浸入透明液中， 2min立即取出，紧贴：在载物片上，赶走气泡。 完全干燥后，薄膜完全透明，可作扫描描或照相， 将该玻璃板浸入水中，则透明的薄膜可脱下，吸干 水分，可长期保存。
同工酶的分离及用在免疫电泳中。
操作方法
实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白
实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离⾎清蛋⽩⼭东⼤学实验报告2011年3⽉27⽇姓名张⾏润系年级2009级⽣科4班学号200900140177 同组者于潜科⽬⽣物化学实验题⽬醋酸纤维素薄膜电泳法分离⾎清蛋⽩仪器编号105⼀、实验⽬的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离⾎清蛋⽩的原理和⽅法。
⼆、实验原理蛋⽩质是两性电解质。
在pH值⼩于其等电点的溶液中，蛋⽩质为正离⼦，在电场中向阴极移动；在pH值⼤于其等电点的溶液中，蛋⽩质为负离⼦，在电场中向阳极移动。
⾎清中含有数种蛋⽩质，它们所具有的可解离基团不同，在同⼀pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利⽤电泳法将它们分离。
⾎清中含有清蛋⽩、α-球蛋⽩、β-球蛋⽩、γ-球蛋⽩等，各种蛋⽩质由于氨基酸祖坟、⽴体构象、相对分⼦质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，⾎清中5种蛋⽩质的等电点⼤部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离⼦，在电场中向阳极移动。
在⼀定范围内，蛋⽩质的含量与结合的燃染料量成正⽐，故可将蛋⽩质区带剪下，分别⽤0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进⾏⽐⾊，测定其相对含量。
也可以将染⾊后的薄膜直接⽤光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性⾻髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使⽩蛋⽩下降。
肾病时α1、α2、β球蛋⽩升⾼，γ-球蛋⽩降低。
肝硬化时α2、β-球蛋⽩降低，⽽α1、γ-球蛋⽩升⾼。
三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120µm）2、⼈⾎清；3、烧杯及培养⽫数只；4、点样器；5、⽵镊⼦；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温⽔浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、剪⼑实验试剂1.电极缓冲液2.染⾊液（可重复使⽤，使⽤后回收）3.漂洗液（100ml每组）：95%⼄醇45ml，冰醋酸5ml，⽔50ml。
4.透明液（20ml每组）：⽆⽔⼄醇：冰醋酸=7：3。
实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法;具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点..醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理;便于照相和扫描计算结果..广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定..目的1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法..2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义..原理带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳..血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0～7.3之间;在pH8.6的缓冲液中均带负电荷;在电场中都向正极移动..由于血清中各种蛋白质的等电点不同;因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同;又由于其分子大小不同;所以在电场中泳动速度也不同..分子小而带电荷多者;泳动速度较快；反之;则泳动速度较慢..因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区带;从正极端依次分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等;经染色可计算出各蛋白质含量的百分数..器材醋酸纤维素薄膜2cm×8cm、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器可用盖玻片或或微量加样器、直尺、铅笔、玻璃板8cm×12cm、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计..试剂1. 巴比妥缓冲液pH8.6;0.07mol/L;离子强度0.06称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g;加500毫升蒸馏水;加热溶解..待冷至室温后;再加蒸馏水至1000毫升..2. 氨基黑10B染色液称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml;混匀;加蒸馏水至100ml..3. 漂洗液甲醇45ml、冰醋酸5ml;混匀后加蒸馏水至100ml..4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液..5. 透明液称取柠檬酸21g;N-甲基-2-吡咯烷酮150g;以蒸馏水溶解并稀释至500ml..操作1. 准备将缓冲液加入电泳槽的两槽内;并使两侧的液面等高..裁剪尺寸合适的滤纸条;叠成四层贴在电泳槽的两侧支架上;一端与支架前沿对齐;另一端侵入电泳槽的缓冲液内;使滤纸全部湿润;此即“滤纸桥”图3-1..将醋酸纤维素薄膜切成2cm×8cm大小;在无光泽面的一端约1.5cm处;用铅笔轻划一直线;作为点样位置..然后将无光泽面向下;置于盛有巴比妥缓冲液的培养皿中浸泡;待充分浸透约20分钟即无白色斑点后取出;用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液..2. 点样取少量血清于玻璃板上;用加样器取少量血清约2～3μl;加在点样线上;待血清渗入膜内;移开加样器..点样时应注意血清要适量;应形成均匀的直线;并避免弄破薄膜图3-2..3. 平衡与电泳将点样后的薄膜有光面朝上;点样的一端靠近负极;平直地贴于电泳槽支架的滤纸上;平衡约5分钟..盖上电泳槽盖;通电进行电泳..调节电压为100～160伏;电流0.4～0.6mA ／cm 宽;夏季通电45分钟;冬季通电60分钟;待电泳区带展开2.5～3.5cm 时断电..4. 染色用无齿镊小心取出薄膜;浸于染色液中1～3分钟以清蛋白带染透为止..染色过程中应轻轻晃动染色皿;使薄膜与染色液充分接触;薄膜量较多时;应避免彼此紧贴而影响染色效果..5. 漂洗准备3个培养皿;装入漂洗液..从染色液中取出薄膜;依次在漂洗液中连续浸洗数次;直至背景无色为止..将漂净的薄膜用滤纸吸干;从正极端起依次为清蛋白A 、α1、α2、β及γ-球蛋白图3-3..6.定量1洗脱法：取6支试管;编号;分别为A 、α1、α2、β、γ和空白管..于清蛋白管加入0.4mol/LNaOH 溶液4ml;其余5管加2ml..剪下各条蛋白区带;另于空白部分剪一条与各蛋白区带宽度近似的薄膜作为空白;分别浸入各管中;振摇数次;置37℃水浴20分钟;使色泽完全浸出..用620nm 波长以空白管调零比色;读取各管吸光度;按下式计算：T = A ×2 + α1 + α2 + β + γ清蛋白% ＝ 清蛋白管吸光度×2/T ×100α1-球蛋白% ＝ α1-球蛋白管吸光度/T ×100α2-球蛋白% ＝ α2-球蛋白管吸光度/T ×100β-球蛋白% ＝ β-球蛋白管吸光度/T ×100γ-球蛋白% ＝ γ-清蛋白管吸光度/T ×1002扫描法：待染色的醋酸纤维素薄膜完全干燥;置透明液中约3分钟;取出贴于玻片上;薄膜完全透明..将已透明的薄膜放入全自动光密度计中;对蛋白区带进行扫描;自动绘出电泳图;并直接打印出各区带的百分含量..注意事项1. 标本不能溶血;否则;β球蛋白浓度偏高..2．每次电泳时应交换电极;以使两侧电泳槽内缓冲液的正负离子相互交换;使缓冲液的pH维持在一定水平..3．电泳槽缓冲液的液面要保持一定高度;过低可能出现了球蛋白的电渗现象向阴极移动..同时;电泳槽两侧的液面应保持在同一水平面;否则;通过薄膜时有虹吸现象;将会影响蛋白质分子的泳动速度..4．电泳时电泳槽要密闭;以保持湿度;否则;薄膜水分蒸发干燥;使电流下降;分离不佳..5．电泳失败或图谱不理想的常见原因..1电泳图谱不整齐：①点样不均匀；②薄膜未完全浸透或温度过高致使膜面局部干燥或水分补给不足；③缓冲液变质；④电泳时薄膜放置不正;与电流方向不平行..2各蛋白区带分离不清晰：①点样过多；②电流过低;多由薄膜过于致密、吸水性差、导电能力差引起；③膜面干燥；④薄膜过薄..3清蛋白中间着色浅：①染色时间不够或染色液陈旧；②清蛋白含量过高;可减少血清用量或延长染色时间..4电泳速度慢：①电流过低；②供给薄膜的缓冲液不足;连接薄膜与缓冲液的滤纸或纱布过薄一般需4层；③温度过低;冬季电泳速度较夏季慢；④薄膜结构过于致密;导电性差；⑤缓冲液中水分蒸发;致使离子强度增大..6．样品要求点在粗糙面无光泽面;否则;样品很难吸人膜内..电泳时最好将点有样品的一面朝下;以防电泳过程中水分蒸发;影响电泳结果..7．染色时间以2分钟为佳室温低时;时间可稍长;若时间过长;可使α1球蛋白与染料结合率增加;导致α1球蛋白百分比上升..正常参考值清蛋白： 57.45～71.73%α1-球蛋白： 1.76～4.48%α2-球蛋白： 4.04～8.28%β-球蛋白： 6.79～11.39%γ-球蛋白： 11.85～22.97%A/G 1.24～2.36临床意义急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭时;清蛋白降低;α1、α2和β-球蛋白升高；慢性活动性肝炎、肝硬化时;清蛋白降低;β、γ-球蛋白升高；急性炎症时;α1、α2-球蛋白升高；慢性炎症时;清蛋白降低;α2、γ-球蛋白升高；红斑狼疮、类风湿关节炎时;清蛋白降低;γ-球蛋白显着升高；多发性骨髓瘤时;清蛋白降低;γ-球蛋白升高;于β和γ-球蛋白区带之间出现“M ”带..结果及分析思考题1.血清蛋白质电泳时为什么要将点样的一端靠近负极端2.醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条区带;有哪些临床意义。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告引言：血清蛋白是人体内一种重要的生物大分子，它在维持人体正常生理功能中起着至关重要的作用。
因此，对血清蛋白的研究一直备受科学家的关注。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清蛋白进行分离，以期进一步了解血清蛋白的组成和功能。
实验方法：1. 准备样品：从健康人体中提取血清样品，将其离心，得到血清上清液。
2. 制备醋酸纤维薄膜：将醋酸溶液倒入玻璃容器中，将玻璃容器放置在恒温槽中，使醋酸溶液温度保持在60℃左右。
然后，将玻璃容器从恒温槽中取出，迅速浸入冷水中，使醋酸溶液迅速凝固形成醋酸纤维薄膜。
3. 实验操作：将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液，使醋酸纤维薄膜完全浸泡其中。
然后，将血清样品均匀涂抹在醋酸纤维薄膜上，并连接电源进行电泳分离。
4. 电泳条件：设置电泳电压和时间，一般情况下，电泳电压为100V，电泳时间为30分钟。
5. 实验结果：观察电泳结束后的醋酸纤维薄膜，记录血清蛋白的分离情况。
实验结果与讨论：经过电泳分离后，观察到醋酸纤维薄膜上出现了多个带状条纹，这些条纹代表了不同的血清蛋白组分。
根据条纹的迁移距离和形状，我们可以初步判断血清蛋白的分子量和电荷特性。
通过对实验结果的分析，我们可以发现，血清蛋白主要可以分为白蛋白、球蛋白、半胱氨酸蛋白和β-球蛋白等几个主要组分。
白蛋白是血清蛋白中含量最高的成分，迁移速度最快；球蛋白次之，迁移速度较慢；半胱氨酸蛋白和β-球蛋白迁移速度最慢。
这些血清蛋白的分离结果与其分子量和电荷特性有关。
白蛋白分子量较小，电荷较弱，因此迁移速度最快；球蛋白分子量较大，电荷较强，迁移速度较慢；半胱氨酸蛋白和β-球蛋白分子量更大，电荷更强，迁移速度最慢。
结论：本实验利用醋酸纤维薄膜电泳技术成功地对血清蛋白进行了分离，并初步了解了血清蛋白的组成和特性。
通过观察醋酸纤维薄膜上的带状条纹，我们可以对血清蛋白的分子量和电荷特性进行初步判断。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告实验室报告
题目：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
一、实验目的
本实验旨在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白，并分析其分离效果。
二、实验原理
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种利用薄膜作为电泳载体，在交流电场中将带电微粒体分离的方法。
其分离原理在于不同电动力学直径的带电微粒体在局部电场中受到的电离流和离子机动力学的影响不同，导致粒径较小的微粒体在电场中移动的速度较快，粒径较大的微粒体则移动较慢，从而实现了分离。
三、实验步骤
1.将5μL血清样品加入凝胶载体中。
2.在醋酸纤维薄膜电泳仪中进行样品电泳分离，设置电场参数：电压300 V，电泳时间30分钟。
3.将分离后的血清蛋白样品涂在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳定
量和分析。
四、实验结果
通过电泳定量和分析，我们可以得到血清蛋白的分离效果。
我
们发现，血清蛋白样品在30分钟内可以被醋酸纤维薄膜电泳技术
有效地分离，分离效果良好，明显区分了不同种类的蛋白。
五、结论
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种非常有效的血清蛋白分离方法。
通过本次实验，我们得到了良好的分离效果和明确的蛋白种类区分。
这种技术具有高分离效率、高通量、简单易行等特点，可以
在临床医学、药物研发、生命科学等领域得到广泛应用。
此外，在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白时，需要注意控制一定的电场参数，以确保实验效果。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
为了研究血清蛋白的分离和鉴定，我们进行了醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
的实验。
本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清蛋白进行有效的分离和检测，为进一步的蛋白质研究提供可靠的技术支持。
实验方法：
1. 样品制备，取血清样品，并进行蛋白质浓缩处理。
2. 醋酸纤维薄膜电泳，将处理后的血清样品加载到醋酸纤维薄膜电泳仪中，进
行电泳分离。
3. 凝胶染色，对电泳分离后的蛋白进行凝胶染色处理。
4. 结果分析，观察电泳结果，分析血清蛋白的分离情况。
实验结果：
经过醋酸纤维薄膜电泳分离，我们成功地将血清蛋白分离成多个明显的条带，
这表明醋酸纤维薄膜电泳技术能够有效地实现血清蛋白的分离。
通过凝胶染色后，我们观察到不同条带对应的蛋白质成分，为后续的蛋白质鉴定和研究奠定了基础。
实验结论：
醋酸纤维薄膜电泳技术能够有效地分离血清蛋白，为血清蛋白的研究提供了重
要的技术手段。
通过本实验的分离和分析，我们成功地获取了血清蛋白的组成信息，为进一步的蛋白质研究提供了可靠的数据支持。
总结：
本实验通过醋酸纤维薄膜电泳技术，成功地分离了血清蛋白，并对其进行了初
步的鉴定分析。
醋酸纤维薄膜电泳技术具有分离效率高、操作简便等优点，适用于
血清蛋白等复杂蛋白质混合物的分离和分析。
希望本实验的结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法别离血清蛋白目的和要求把握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方式原理带电质点在电场中向着反向电极移动的现象称为电泳，其移动方向及速度取决于本身所带电荷的性质和数量、电场强度和溶液pH等因素。
蛋白质分子在溶液中的电泳是因其分子具有一些游离的可解离基团如-COOH、-NH2、-OH等，因此在某种pH值溶液中蛋白质分子带有必然的电荷。
混合蛋白样品中由于各蛋白质的等电点不同，在同一pH溶液中所带的电荷性质及电荷数量不同，因此在电场中各类蛋白质泳动的方向和速度也不同，从而使蛋白质混合样品得以别离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等，其氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状等均有所不同。
由下表可见，血清中5种蛋白质的等电点大多低于，在的缓冲液中都电离成负离子(羧基解离)，故在电场中均向阳极移动。
蛋白质种类等电点(pI) 相对分子量(Mr)清/白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白~ 69 000200 000300 00090 000~150 000 156 000~300 000在必然范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，别离用mol/L NaOH溶液浸洗下来，通过比色法或将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，以测定特定电泳区带的蛋白质相对含量。
本实验采纳的醋酸纤维薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物。
醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化后形成的纤维醋酸酯，将其溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后于聚乙烯材料上涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后即可。
该膜具有均一的泡沫状构造，有强渗透性、其厚度约为120 μm 。
醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优势，目前已普遍应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白和同工酶的别离及测定。
操作步骤㈠预备醋酸纤维薄膜的润湿和选择：将薄膜裁成8×2cm状，使其漂在缓冲液液面上(假设迅速湿润，整条薄膜一致而无白点，那么说明薄膜质地均匀，可用于电泳实验)，然后用竹夹/镊子轻轻地将薄膜完全浸入缓冲液中，待薄膜完全渗透后利用(约。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
标题：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的：
1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和方法。
2.了解血清蛋白质的组成和分布。
二、实验原理：
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和鉴定蛋白质的方法。
其原理基于不同蛋白质分子在电场中的迁移率不同，从而实现对蛋白质的分离。
这种电泳方法具有快速、简便、分辨率高等优点。
三、实验步骤：
1.准备试剂和器材：醋酸纤维素薄膜、电极缓冲液、血清样
品、水浴锅、电泳仪、计时器、移液管、剪刀、镊子等。
2.加样：将适量血清样品用移液管加到醋酸纤维素薄膜上，
注意不要形成气泡。
3.电泳：将加好样的醋酸纤维素薄膜放入电泳仪中，接通电
源，开始电泳。
记录电泳时间和电流强度。
4.染色：电泳结束后，将醋酸纤维素薄膜取出，放入染色液
中染色。
5.观察和拍照：观察染色后的醋酸纤维素薄膜，记录各蛋白
带的颜色和位置。
用相机拍摄结果。
四、实验结果：
五、实验结论：
通过本次实验，我们成功地分离了血清中的各种蛋白质，并观察到了它们在醋酸纤维素薄膜上的分布情况。
实验结果表明，血清中含有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等多种蛋白质。
这种方法有助于我们进一步了解血清蛋白质的组成和分布，为临床诊断和治疗提供参考。
同时，本实验也锻炼了我们实际操作的能力和对醋酸纤维素薄膜电泳原理的理解。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果引言醋酸纤维薄膜电泳是一种常用于生物分离和分析的技术，可以通过电场作用将带电粒子在纤维薄膜上移动，实现对混合物的分离。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术对血清蛋白进行分离，以便进一步研究其组成和功能。
实验方法1.准备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维薄膜切割成所需尺寸，并在实验室条件下保持干燥。
2.准备电泳槽：将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中，确保其与电极接触良好。
3.准备样品：采集血清样品，并将其稀释至适当浓度。
4.进行电泳分离：将稀释后的血清样品均匀地涂抹在醋酸纤维薄膜上，然后施加适当电场使样品在薄膜上移动。
5.停止电泳：根据需要的分离程度，适时停止电泳过程。
6.分析结果：观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的分离情况，并记录相关数据。
实验结果血清蛋白分离图谱根据实验结果，我们观察到在醋酸纤维薄膜上成功地分离了血清蛋白。
下图展示了血清蛋白分离图谱，其中纵轴表示电迁移率，横轴表示时间。
1.血清蛋白A的电迁移率为X，迁移时间为Y。
2.血清蛋白B的电迁移率为X，迁移时间为Y。
3.血清蛋白C的电迁移率为X，迁移时间为Y。
4.…血清蛋白组成分析根据血清蛋白分离图谱，我们可以进一步分析血清蛋白的组成。
通过与已知标准品进行比对，我们确定了以下血清蛋白的组成及相对含量：1.血清蛋白A占总蛋白的X%。
2.血清蛋白B占总蛋白的X%。
3.血清蛋白C占总蛋白的X%。
4.…血清蛋白功能研究根据血清蛋白的组成分析结果，我们可以进一步研究血清蛋白的功能。
以下是我们对某些血清蛋白功能的初步研究结果：血清蛋白A的功能1.血清蛋白A在某种生理过程中起到重要的调节作用。
2.进一步研究表明血清蛋白A可能与X疾病的发生和发展有关。
血清蛋白B的功能1.血清蛋白B与免疫系统的调节密切相关。
2.研究发现血清蛋白B在X疾病的治疗中具有潜在的应用价值。
血清蛋白C的功能1.血清蛋白C参与了血液凝固过程的调控。
2.进一步研究表明血清蛋白C可能与X疾病的预后有关。
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实验3 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
一、实验目的
学习醋酸纤维薄膜电泳法的原理及操作。
测定人血清中各种蛋白质相对百分含量。
二、基本原理
蛋白质是两性电解质。
在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，分别为白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白,它们所具有的可解离基不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，因此在电场中移动速度不同，故可利用电泳法将它们分离。
醋酸纤维(二乙酸纤维素)薄膜具有匀一的泡沫状结构 (厚约120 µm)，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用，应用范围广和快速简便等优点。
目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
三、试剂与器材
1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH 8.6，0.075 mol／L)：
称取巴比妥钠(A．R)15.4g和巴比妥(A．R．)2.76g，溶于蒸馏水，稀释至1000mL。
用酸度计校测后使用。
2．染色液：
氨基黑10B 0.2g、甲醇(A．R)20mL、冰乙酸(A．R.)4mL，加蒸馏水16mL，混匀即可。
3. 漂洗液：
乙醇(A．R)90mL、冰乙酸(A．R)10 mL，加蒸馏水100mL，混匀即可。
（现配现用）4．透明液：
冰乙酸(A．R)10mL、无水乙醇30mL（1：3），混匀即得。
（现配现用）
5．人血清(新鲜、无溶血现象)。
6．器材：
醋酸纤维薄膜(12×8cm，2×8cm)；厚度120μm；培养皿直径Ф10cm(×8)；点样器(或载玻片)；直尺；铅笔；竹镊子；玻璃棒；烧杯50ml(×2)，200ml (×1)；试管1．5×15cm(×8)；吸管5mL(×1)；水浴锅；电泳槽；直流稳压电泳仪；分光光度计；剪刀。
三、操作步骤
1．搭滤纸桥：
取干净滤纸，折两次使之成为三层滤纸，再折一次，然后附着在电泳槽的支架上，使它一端支架的前沿对齐，而另一端浸入电泳槽的缓冲液中，用缓冲液将滤纸全部湿润驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上。
2．点样：
将醋酸纤维薄膜切成8×2cm条状(或根据需要决定薄膜的大小)，在距一端1.5cm处用铅笔轻轻划一直线，然后浸入缓冲液中，完全浸透后（大约30min），用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在于净滤纸上，薄膜上再放一张干净滤纸，吸去多余的
缓冲液。
用玻棒蘸取少量血清，将此血清均匀地涂在载玻片的一端截面上(玻片宽度应小于薄膜) (或用点样器点样)，然后轻轻与距纤维薄膜一端画线处接触，样品即呈一条状涂于纤维膜上。
待血清透入膜内，移去载玻片，将薄膜平贴于已放在电泳槽上，并已浸透缓冲液的滤纸上，点样面向下，点样端为阴极，进行电泳。
3．电泳条件：电压90～110V，电流0.4～0.6mA，通电1.0h。
4．染色：电泳完毕，将薄膜浸于染色液中5min，取出，用漂洗液漂洗至背景无色(约4～5次,每次10min)，再浸于蒸馏水中。
5．制作图谱：待薄膜完全干燥后，浸入透明液中约5min，取出，平贴于干净玻璃片上，干燥，即得背景透明的电泳图谱，可用光吸收计测定各蛋白斑点。
此图谱可长期保存。
6．定量：
将上述漂净的薄膜用滤纸吸干,剪下各种蛋白质色带，分别浸于 4.0mL 0.4mo1／LNa0H溶液中(37℃)5～10min，色泽浸出后，比色(590 nm)。
设各部分的光吸收分别为:A白、Aα1、Aα2、Aβ、Aγ。
则光吸收总和(A总)为：A总=A白+Aα1+Aα2+Aβ+Aγ
白蛋白％＝A白/ A总×100
α1球蛋白%＝Aα1/ A总×L00
α2球蛋白%＝Aα2/ A总×L00
β球蛋白%＝Aβ/ A总×100
γ球蛋白％＝Aγ/ A总×100
四．预习题：
1.为什么说蛋白质是两性电解质？
2．为什么要用PH=8.6的缓冲液？它的作用是什么？
五．思考题：
1.电泳法为什么能把血蛋白分成若干带？
2.为什么将薄膜的点样端放在滤纸桥的负极那端？。