氧化型型谷胱甘肽(Glutathione Oxidized,GSSG)含量测定试剂盒使用说明
氧化型谷胱甘肽测定方法
氧化型谷胱甘肽测定方法引言：氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione, GSSG）是一种重要的抗氧化物质，它在细胞内起到清除自由基和保护细胞免受氧化损伤的作用。
因此，准确测定氧化型谷胱甘肽的含量对于了解细胞氧化状态和维持细胞正常功能具有重要意义。
本文将介绍几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
一、梅尔二硫代苯酚法梅尔二硫代苯酚法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用氧化型谷胱甘肽与2,2'-二硫代苯酚反应生成深黄色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法简单、快速，且具有较高的灵敏度和准确性。
二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用高效液相色谱仪对氧化型谷胱甘肽进行分离和测定。
首先将样品中的氧化型谷胱甘肽与还原剂还原生成还原型谷胱甘肽，然后通过高效液相色谱仪进行分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性高的优点，但操作复杂，需要专门的仪器设备。
三、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法是一种基于酶标记技术的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用特异性抗体与氧化型谷胱甘肽结合，然后通过酶标记的二抗与抗体结合，最后通过底物的酶促反应生成产物，通过测定产物的光吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法具有高灵敏度、高特异性和较强的抗干扰能力，但需要较长的操作时间。
四、电化学法电化学法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用电极对氧化型谷胱甘肽进行氧化还原反应，并通过测定电流的变化来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点，但需要专门的电化学仪器设备和操作技术。
结论：氧化型谷胱甘肽测定方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
选择合适的测定方法需要根据实际需求和条件来决定。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验条件和操作步骤，以确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法对读者有所帮助。
检测谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用
检测谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）是一种重要的酶，属于还原酶家族，它在细胞内参与谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）系统的正常运转。
这一系统在维持细胞内氧化还原平衡中发挥着关键的作用，对于细胞的生存和代谢起着非常重要的作用。
GR在此过程中作为重要的辅助酶，能够还原氧化型的谷胱甘肽(GSSG)为还原型的谷胱甘肽(GSH)，从而维持GSH/GSSG的平衡。
近年来,相关研究表明检测GR活性水平有望成为乙型肝炎辅助诊断的新方法。
乙型肝炎（HBV）是一种由乙型肝炎病毒引起的疾病，在我国致病率较高，给人们的生活和健康带来了很大危害。
目前临床上常用的诊断方法包括HBV标志物的检测、肝脏超声检查、肝组织活检等。
这些方法都存在一定的局限性，如HBV标志物检测的敏感性和特异性不高，肝脏超声检查容易受到操作者技术水平的影响，而肝组织活检则存在较为严重的创伤和风险。
寻找新的乙型肝炎辅助诊断方法显得尤为重要。
近年来，国内外的研究者对GR活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用进行了深入的探讨。
一些研究者发现，HBV感染患者的血清中GR活性水平明显降低，这与正常人群相比存在显著的差异。
这一降低的趋势与HBV感染的程度呈现出一定的相关性，即随着肝炎病情的加重，GR活性水平的降低趋势也会逐渐加重。
GR活性水平的检测可以作为乙型肝炎患者肝脏炎症程度的一个指标，这对于临床上的诊断、鉴别诊断和治疗具有重要的指导意义。
一些研究者还发现，HBV感染对GR活性水平的影响不仅限于肝细胞，同时它还会对全身的氧化还原平衡产生一定的影响。
HBV感染引起的氧化还原平衡失衡不仅表现在肝脏内，同时也会直接对全身的氧化还原平衡产生影响，这也为利用GR活性水平进行乙型肝炎辅助诊断提供了可能。
尽管GR活性水平检测对于乙型肝炎辅助诊断具有潜在的应用前景，但是也需要注意到目前在治疗过程中的一些建议。
谷胱甘肽含量测定
0.1mol/L(ｐＨ６.８)磷酸钠缓冲液：配制方法见附录。
4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（5，5’-dｉthiobis-2-nitｒobｅnoｉc acid，ＤＴNB)溶液:称取1５．8mg DTNB，用0.1mol／L、pＨ6.8磷酸缓冲液溶解,定容至10ml，混匀,4℃保存。现用现配。
另取２支试管,分别加入1mｌ上清液、1ml 0.1mｏl/L磷酸缓冲液(pH7.７)。向一支试管加入０.５ml4mmoｌ/LDTNB溶液,另一支试管中加入0.５ｍl0.1moｌ/L磷酸缓冲液（pH6.8）,将两支试管置于25℃保温１0miｎ。按照制作标准曲线的方法,迅速测定显色液在波长412nm处的吸光度,分别记作ODs和ODｃ。重复3次。
0
2.提取
取材后,称取2.5g样品置于研钵中，加入5mｌ经4℃预冷的50g／L三氯乙酸溶液(含5mmol／L Na2-EDＴA）,在冰浴条件下研磨成匀浆后，于4℃、１2000g离心20min。收集上清液来测定谷胱甘肽含量，测量提取液体积。
3.测定
取1支试管,依次加入1ml蒸馏水、1ｍl０.１mol/L磷酸缓冲液（ｐH7.7)和０.5ml 4mmol/L DTNB荣毅仁，混匀,即为绘制标准曲线的0号管液。以此溶液作为参比,在波长41２ｎm处对分光光度计进行调零。
项目
试管号
０
1
２
3
4
5
100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液/ｍl
0
０.2
0．4
0．6
0．8
1．0
蒸馏水/ml
１.0
0.8
０．６
0.4
0．2
0
０.1ｍol／LｐH7.7磷酸缓冲液／ml
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定
还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的测定关键词：还原型谷胱甘肽GSH氧化型谷胱甘肽GSSG测定2009-04-24 00:00 来源：互联网点击次数：6147GSH和GSSG 参照Anderson等（1992）。
取0.5 g样品，加入3 mL冰冷的6%的偏磷酸（含1 mmol•L-1 EDTA ，pH 2.8），冰浴研磨，匀浆液以20,000 g，4 ℃离心15 min，取上清液来马上测定GSH和GSSG的含量或储存在-20 ℃下等待测定。
总的GSH和GSSG含量测定如下：200 μL提取液加 1.2 mL反应液包含400 μL反应液1（110 mmol•L-1 Na2HPO4•7H20，40 mmol•L-1NaH2PO4•H2O，15 mmol•L-1EDTA，0.3 mmol•L-15,5‘-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）DTNB，0.04% BSA）、320 μL反应液2 （1 mmol•L-1 EDTA，50 mmol•L-1 imidazole 咪唑solution and 0.02% BSA）、400 μL反应液3（5% Na2HPO4，pH 7.5的溶液稀释50倍）、80 μL 9.0 mmol•L-1 NADPH。
测定OD412下的吸收值。
GSSG 含量测定如下：200 μL提取液加入1 mL的2-2乙烯嘧啶（稀释50倍）在25°C下水浴1 h再测定OD412下的吸收值。
GSH的含量可以从总的GSH和GSSG含量中减去GSSG含量获得。
GSH测定方法：取样品0.5 g，加入预冷的5%磺基水杨酸2.5 ml和少许石英砂，充分冰预研磨，转入离心管中，于4℃下20,000×g离心20min，将上清液分装，液氮冷冻后于-20℃保存或直接进行抗氧化剂分析。
取50 μL上清液，用5% 磺基水杨酸定容至100 μL （即加入5% 磺基水杨酸50 μL），加入24 μL 1.84 mol•L-1三乙醇胺triethlene diamine以中和样液，加入50 μL 10% 乙烯吡啶Polyvinyl pyridine （用70% 乙醇配制），25℃水浴1 h，以除去GSH，到时加入706 mL 50 mmol•L-1磷酸缓冲液，pH 7.5，内含2.5 mmol•L-1 EDTA，加入20 μL 10 mmol•L-1 NADPH 和80 μL 12.5 mmol•L-1 DTNB（二硫硝基苯甲酸），混匀，25℃保温10 min，到时加入20μL 50 U•mL-1 GR，总体积为1 mL，立即混匀，读出3 min时的OD值。
谷胱甘肽含量测定即制备
生素C可以使氧化型谷胱甘肽转变为还原型谷胱甘肽（GSH ），使机体代谢产生的过氧化氢（H2O2）还原；维生素C还 可保护维生素A、E及某些B族维生素免受氧化。因此，运用 谷胱甘肽时，与维生素C并用，能够提高其功效。
食品
添加谷胱甘肽可起到意想不到的作用 1、加入到面制品中，可起到还原作用。不仅使制造面 包的时间缩短至原来的二分之一或三分之一，劳动 条件大幅度改善，并起到食品营养的强化作用及其 他功能。
mol/L的碘酸钾滴定至溶液由无色变为蓝色为止。 KIO3+5KI+6HPO3 →3I2 +6KPO3 +3H2O
由于实验室条件所限be米试验采用第一种方法：
【提取工艺】干酵母破碎含谷胱甘肽的抽提液离子交换 层析洗脱液中和真空浓缩干燥 1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸 腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃， 沸腾5min。放置冰水中速冷。
项目三 谷胱甘肽的制备及含量测定（第六组）
谷胱甘肽名片
谷胱甘肽是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，
由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于
几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保 持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作 用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其 活性基团（故常简写为G-SH），易与某些 药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、碘 乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属）等结 合，而具有整合解毒作用。
而水溶液在空气中则易被氧化，两分子还原型谷胱甘肽的
活泼巯基氧化缩合为二硫键，即得到氧化型谷胱甘肽。
谷胱甘肽主要来源
谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的
作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高， 达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～34mg/100g， 鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g,在 西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～33mg/100g)，而 在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较低(0.06～0.7mg/ 100g)。故其主要来源是通酵母加20ml 2%偏磷酸，60℃水浴中搅拌抽提15min，
还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。
谷胱甘肽过氧化物酶的检测及意义
等)在技术上比较困难.而通过检测血液中抗氧物
(酶)及FR氧化产物的含量(酶活力)，来间接反映
氧白由从的存在，则比较容易，这也是当前氧白由从
研究中最普遍应用的方法.本文重点介绍一种抗过氧
化物酶—谷眺甘肤过氧化物酶的检测及意义.l谷胶甘肚过级化物酶及其盆要生理功能〔，·2，
GSH的消耗量，以反映酶活性.ZGSH+DTNB一卜
GssG+ZTNB.Gross〔5〕首先报道osH一PX宁舌力以
每克Hb每分钟GSH以一级反应速度(K)表示，
即
K一〔，·，‘忿2一:)·，二(GSHGSH
Haffcman〔‘，以单位时间内一09〔GsH〕降低量表示加
46
GsH中X活性，称为Haffeman单位.唐琼华等在
生一系列血液流变学的改变.
2.GSH一PX的检测
GSH一PX活性检测有直接法和问接法两种.
2.1直接法即测定GSH一PX的墓质GSH的消耗
量或GSSG的生成量.以反映其活性.
2.1.1紫外分光度法〔，，osH在波长255nm处呈
最大吸收，通过酶与基质作用，从255nm吸光度的
降低计算GSH的消耗量，从而判断酶活性.此法仅
成，在GSH一PX作用下，LOOH转化为无活性的
LoH.osH一px参与前列环素(，GIZ)和血栓素
(TxAZ)的合成，而LooH抑制pGI:合成酶的活
性，从而破坏了PGT:和TxA:之介，]的平衡.Lo0H
与TxA:呈正相关，PGI:与LooH呈负相关.将引
起血小板聚集和血管收缩，红细胞膜通透性降低，发
Faraji(.)对几种osH甲X测定方法进行T比
谷胱甘肽-S-转硫酶法快速测定红细胞GSH和其氧化产物
谷胱甘肽-S-转硫酶法快速测定红细胞GSH和其氧化产物赵利娜;李生兵;郭睿;王佚;廖飞【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2006(22)7【摘要】红细胞谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）及蛋白结合谷胱甘肽（PSSG）是反映氧化溶血的指标。
Ellman试剂测定GSH干扰多。
高效液相层析测定GSH及其衍生物受仪器和效率限制。
谷胱甘肽-S-转硫酶（GST）法测定GSH干扰少，但从未用于测定红细胞GSH或其衍生物。
本文尝试改进GST法并用于测定红细胞GSH及其衍生物。
【总页数】2页(P893-894)【作者】赵利娜;李生兵;郭睿;王佚;廖飞【作者单位】重庆医科大学,生物化学教研室,重庆,400016;重庆医科大学,生物化学教研室,重庆,400016;重庆医科大学,生物化学教研室,重庆,400016;重庆医科大学,附属儿科医院,重庆,400016;重庆医科大学,生物化学教研室,重庆,400016【正文语种】中文【中图分类】R331.122;R341.6;R345.46;R345.5;R977.3;R977.6【相关文献】1.分析谷胱甘肽-S-转硫酶的产物抑制反应过程测定还原型谷胱甘肽 [J], 赵利娜;陶佳;赵运胜;廖飞2.慢型克山病患者红细胞谷胱甘肽硫转移酶活力测定 [J], 李立;薛建斌3.测定谷胱甘肽-S-转硫酶动力学参数的变化表征其抑制剂 [J], 张灵;杨晓兰;白婧;廖娟;刘红博;廖飞4.联用酶反应过程分析法和初速度法测定谷胱甘肽-S-转硫酶活性 [J], 廖娟;赵利娜;龙高波;杨晓兰;蒲军;廖飞5.融合标签谷胱甘肽S-转硫酶高亲和配体的设计与筛选 [J], 杨宪峰;张灵;杨晓兰;龙高波;张奕;廖飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
谷胱甘肽氧化型和还原型
谷胱甘肽氧化型和还原型1. 谷胱甘肽的基本概念大家好，今天咱们来聊聊一个在生物化学里可算是“明星”的家伙——谷胱甘肽（Glutathione），听起来是不是很高大上？实际上，它就是咱们身体里的小帮手，能保护细胞、清除自由基，简直是个小超人！谷胱甘肽有两种状态：氧化型和还原型，咱们今天就来聊聊它们之间的那些事儿。
1.1 什么是还原型谷胱甘肽？先说说还原型谷胱甘肽，也就是咱们常说的GSH。
这个小家伙就像是个“清道夫”，负责把身体里的毒素和废物处理掉。
你想想，生活中不也是需要有人来打理卫生吗？GSH就是那个给咱们的细胞打扫卫生的好帮手！它能和自由基“较量”，把它们中和掉，让咱们的身体保持“整洁”。
换句话说，有了它，咱们就不怕那些坏家伙来捣乱。
1.2 氧化型谷胱甘肽的角色然后咱们再看看氧化型谷胱甘肽，叫做GSSG。
哎，这个名字听起来就有点“高冷”的感觉。
它的作用主要是在GSH参与反应之后出现的，换句话说，就是GSH在忙完之后会变成GSSG。
你可以把它想象成一个“退休工人”，虽然不再是“第一线战斗员”，但依然在背后发挥着重要的作用。
它会和其他还原型谷胱甘肽结合，帮助恢复平衡，确保细胞里的环境稳定。
就像我们生活中，有些人虽然不出风头，但背后默默付出的精神，是不可或缺的。
2. 它们之间的关系2.1 氧化与还原的较量说到这儿，大家可能会问了：这两者之间到底是什么关系呢？其实，它们就像是阴阳两面，相辅相成。
GSH可以转变成GSSG，而当身体需要更多的抗氧化能力时，GSSG又可以被转化回GSH。
就像是一个循环，一直在运转。
这个过程就叫做“氧化还原反应”，听起来很复杂，其实就是“换工作”的过程而已。
2.2 生活中的重要性在我们的日常生活中，这个过程可重要了。
想象一下，如果你天天吃垃圾食品，身体里的自由基就像无头苍蝇一样到处飞。
这个时候，GSH就会加倍努力，拼命清理，但如果它用完了，GSSG又无法及时转变回GSH，身体就容易受到伤害。
还原型谷胱甘肽检测标准
还原型谷胱甘肽检测标准
谷胱甘肽（glutathione，GSH）是一种重要的细胞内抗氧化剂，它能够清除自由基，保护细胞免受氧化应激的损伤。
谷胱甘肽检测是衡量体内谷胱甘肽水平的一种方法，可以评估体内抗氧化能力和氧化应激状态。
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）是谷胱甘肽的活性形式，其浓度的改变反映了细胞内氧化还原平衡的变化。
还原型谷胱甘肽检测标准是指确定衡量还原型谷胱甘肽浓度的实验方法和结果解读的参考范围。
常见的还原型谷胱甘肽检测方法包括高效液相色谱法（HPLC）、光度法、流式细胞术和电化学法等。
在进行谷胱
甘肽检测时，可以根据实验方法的要求，采集样本、提取还原型谷胱甘肽、加入标准品进行定量测量，并根据标准品的浓度范围进行结果解读。
通常情况下，人体血液中还原型谷胱甘肽的标准浓度范围是
2-20 μM。
这个范围是通过大量的临床研究得出的，可以用作
评估人体抗氧化能力和氧化应激状态的参考。
需要注意的是，不同实验室可能会使用不同的标准浓度范围或检测方法进行谷胱甘肽检测。
因此，在具体的实验室中进行检测时，应该参考该实验室所使用的标准范围和方法进行结果解读。
同时，还应该综合考虑个体差异以及其他临床指标，来评估谷胱甘肽水平的意义和临床价值。
还原型谷胱甘肽(GSH)检测
还原型谷胱甘肽（GSH）检测
谷胱甘肽（Glutathione，GSH）是由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，含有巯基的三肽，广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用，如抗氧化作用、整合解毒作用。
谷胱甘肽在体内以还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）两种形式存在，其活性成分为还原型谷胱甘肽，可参与体内三羧酸循环，激活各种酶，对不稳定的眼晶状体蛋白质巯基有抑制作用，从而抑制白内障的发展，抑制角膜及视网膜病变，在角膜损害时能促进上皮组织的修复。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)法，可高效、精准的检测还原型谷胱甘肽的含量变化。
此外，我们还提供其他氨基酸及其代谢物检测服务，以满足您的不同需求。
HPLC和LC-MS测定还原型谷胱甘肽样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 还原型谷胱甘肽含量信息。
谷胱甘肽
药品 基本信息 谷胱甘肽 谷胱甘肽：还原型谷胱甘肽、阿拓莫兰、古拉定 CAS号：70-18-8 EINECS200-725-4 [1] 分子式：C10H17N3O6S 分子量：307.32348 熔点：为189～193°C，晶体呈无色透明细长拉状，等电点为 5.93。 药理作用：本品可促进糖、脂肪及蛋白质代谢，加速自由基排泄， 保护肝脏的合成、解毒、灭活激素等功能。
谷胱甘肽不仅能消除人体自由基，还可以提高人体免疫力。谷胱甘肽维护 健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上所发挥的功效比年轻人大。 谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢氧化、自由基等氧化从而 使它持续正常发挥运输氧的能力。红细胞中部分血红蛋白在过氧化氢等氧 化剂的作用下，其中二价铁氧化为三价铁，使血红蛋白转变为高铁血红蛋 白，从而失去了带氧能力。还原型谷胱甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂 结合，生成水和氧化型谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 人体红细胞中谷胱甘肽的含量很多，这对保护红细胞膜上蛋白质的巯基处 于还原状态，防止溶血具有重要意义。 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被 破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性。谷胱甘肽还可以抑 制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减少等症状，有强 有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体的有毒化合物、重金属离子或致 癌物质等相结合，并促进其排出体外，起到中和解毒作用。
生理作用或功能 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。在面包酵 母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g,在人体血液中 含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g,在西 红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、 香菇中含量较低(0.06～0.7mg/100g)。 机体新陈代代谢产生的过多自由基会损伤生物膜，侵袭生命大分子，加快 机体衰老，并诱发肿瘤或动脉粥样硬化的产生。谷胱甘肽在人体内的生化防御 体系起重要作用，具有多方面的生理功能。它的主要生理作用是能够清除掉人 体内的自由基，做为体内一种重要的抗氧化剂，保护许多蛋白质和酶等分子中 的巯基。GSH的结构中含有一个活泼的巯基-SH，易被氧化脱氢，这一特异结 构使其成为体内主要的自由基清除剂。例如当细胞内生成少量H2O2时，GSH在 谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把H2O2还原成H2O，其自身被氧化为GSSG， GSSG由存在于肝脏和红细胞中的谷胱甘肽还原酶作用下，接受H还原成GSH， 使体内自由基的清除反应能够持续进行。
氧化型谷胱甘肽说明书
氧化型谷胱甘肽说明书
中文名称：氧化型谷胱甘肽
英文名称：Glutathione oxidized；GSSG
其他名称：N-(N-L-γ-谷胺酰基-L-半胱胺酰基)甘氨酸-2,2-二硫化物；L-谷胱甘肽(氧化型)；氧化谷胱甘肽
CAS号：27025-41-8
C20H32N6O12S2=612.63
含量：≥98.0%
比旋光度：-96～-106º
鉴别：合格
重金属：≤20ppm
性状(以下信息仅供参考)：白色或微黄色粉末。
溶于水，不溶于乙醇和乙醚。
本品1分子能结合约2分子的溶剂(水、乙醇和丙酮)。
在高真空、高温(大于100℃),能除去结合的溶剂，同时部分分解，冷冻不能除去结合的溶剂。
熔点182～185℃。
有刺激性
用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。
(以下用途仅供参考)酶法测定NADP和NADPH的氢受体。
保存：RT。
GSH含量测定
GSH含量测定一、原理还原性谷胱甘肽(GSH)是植物细胞重要的抗氧化剂之一，是一个良好的表示氧化胁迫的指标。
GSH+TDBN在pH=7时生成黄色物质，其颜色深浅与GSH的浓度成线性关系。
即：在巯基化合物的存在下，无色的DTNB将被转变成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。
由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收，DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。
二、材料、试剂、仪器1、材料：小麦叶片2、试剂(1）GSH标准溶液：称取10mg 分析纯GSH，溶于蒸馏水中，并定容于10ml，即为1mg/ml 之标准母液，用稀释10倍（0.1mg/ml GSH）；(2）5%偏磷酸；(3）0.2mol/L 磷酸钾缓冲液，pH7.0；(4）TDNB试剂：称取39.6mg二硫代双-二硝基苯甲酸（TDNB），用0.2mol/L磷酸钾缓冲液溶解并定容于100ml；(5）1mol/L NaOH溶液。
2、仪器（1）可见分光光度计：4台；（2）离心机：1台（10000转/分）；（3）1/千天平-2台；（4）离心管：3支×16（10ml）（5）刻度试管：4×16支；（10或15ml）（6）普通试管（刻度试管）：7支×4（15*150 标准曲线）（7）刻度吸管：0.5ml-8支； 1ml-8支; 2ml-16支; 5ml-8支；（8）研钵：1×16个；（9）比色杯4套；（10）吸水纸适量；（11）剪刀8把；（12）玻棒8支；三、方法步骤：1、制作标准曲线：取7支刻度试管，编号，按表加入试剂：将上述溶液混合均匀，在室温下显色5min。
在412nm波长下测定吸光度。
以标准溶液中GSH浓度为X，吸光度为y，制作标准回归方程，（并求出GSH含量。
）2 、样品测定：称取植物鲜样0.204g加入少量5%偏磷酸研磨提取，并用5%偏磷酸定容到10ml。
10000rpm 离心10min。
离心后取上清液2 ml，同标准曲线操作。
草鱼氧化型谷胱甘肽(GSSG)酶联免疫分析
草鱼氧化型谷胱甘肽(GSSG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.2 nmol/mL - 12nmol/mL使用目的：本试剂盒用于测定草鱼组织样本中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中草鱼氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平。
用纯化的草鱼氧化型谷胱甘肽(GSSG)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氧化型谷胱甘肽(GSSG)，再与HRP标记的氧化型谷胱甘肽(GSSG)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的氧化型谷胱甘肽(GSSG)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中草鱼氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
HPLC法测定氧化型和还原型谷光甘肽
HPLC法测定氧化型和还原型谷光甘肽孙伟张;于波涛;蒋燕;周毛仔【摘要】目的建立同时测定谷光甘肽原料及制剂中氧化型和还原型谷光甘肽的反相高效液相色谱法.方法采用外标法,以Hypersil C18为色谱柱,25 mmol/LKH2PO4(pH2.5)∶四氢呋喃(100∶1)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长230 nm,进行分离测定.结果在3.12 ～2 490.0μg/ml间,GSH线性关系良好(r=0.999 9),测得回收率为101.84％.在3.25～975.0μg/ml间,GSSG线性关系良好(r=0.9999),测得回收率为97.84％.结论所用方法准确可靠、专属性强,可用于GSH和GSSG的同时测定.%Objective To establish a method to determine GSH and GSSG by HPLC. Method The analytical column was HypersilC18.The mobile phase consisted of 25m mol/L KH2PO4 ( pH2.5 ) :tetrahydrofuran( 100 :1 ). The flow rate was 1.0 ml/ min. Column temperature was 30℃ and the detective wavelength was 230 nm. Result The calibration curve of GSH was linear within the range of 3. 12 |xg/ml~2490. 0 μg/ml(r =0. 999 9) and the average recovery was 101. 84% . The calibration curve of GSSG was linear within the range of 3. 25 μg/mi～975.0 u,g/ml( r = 0. 999 9) and the average recovery was 97. 84% . Conclusion The method was proved to be reliable and accurate, which could be used to determinate GSH and GSSG simultaneously.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2012(030)004【总页数】3页(P305-306,315)【关键词】还原型谷胱甘肽;氧化型谷胱甘肽;高效液相色谱法;含量测定【作者】孙伟张;于波涛;蒋燕;周毛仔【作者单位】成都军区总医院ET-CT中心,四川成都610083;成都军区总医院药剂科,四川成都610083;成都军区总医院药剂科,四川成都610083;成都军区总医院ET-CT中心,四川成都610083【正文语种】中文【中图分类】R917谷胱甘肽(glutathion)是由谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸组成的三肽，是体内最重要的抗氧化剂和自由基清除剂。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
氧化型型谷胱甘肽（Glutathione Oxidized,GSSG）含量测定试剂盒使用说明货号:BC1180常量法50T/48S
一、试剂盒组成：
试剂Ⅰ液体1瓶50ml（4℃保存）
试剂Ⅱ液体1支170l（4℃保存）
试剂Ⅲ液体1瓶60ml（4℃保存）
试剂Ⅳ液体1瓶8ml（4℃避光保存）
试剂Ⅴ粉剂4℃保存，用前8ml蒸馏水溶解
试剂Ⅵ液体1支40l用前0.8ml蒸馏水稀释
标准品粉剂1mg（4℃避光保存）
说明书一份
二、实验原理
氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。
GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH,因此机体中大多数是以还原型方式存在。
测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
三、实验仪器
分析天平、微量匀浆器（规格2ml）、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1ml比色皿。
四、操作步骤
1、样品的处理
组织处理
新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。
加入用试剂Ⅰ润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1ml试剂Ⅰ（组织/试剂Ⅰ比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；10000rpm4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
血液处理
血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂Ⅰ,4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，弃去上层血浆用3倍体积的PBS 清洗3次（用PBS重悬血细胞，600g离心10分钟），加入等体积试剂Ⅰ，混匀后4℃放置10分钟，8000g离心10分钟，吸取上清放于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
细胞处理
收集不少于108个细胞，首先用PBS清洗细胞2次（PBS重悬细胞，600g离心10分钟），加入3倍细胞沉淀体积的试剂Ⅰ重悬细胞，反复冻融2-3次（可在液氮中冻结，37℃水浴中溶解），8000g离心10分钟，收集上清于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
2、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
3、试剂Ⅱ放置37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）水浴中保温30min。
4、标准品的稀释：将标准品用1ml蒸馏水溶解(4℃保存)，浓度为1mg/ml。
取适当溶液配制浓度为25g/ml、20g/ml、12.5g/ml、6.25g/ml、3.125g/ml、0g/ml的标准品（试剂Ⅰ十倍稀释后进行稀释）。
5、取1.5ml离心管，加入100L稀释好的标准品或样品，加入2L试剂Ⅱ，混匀后37℃孵育30分钟。
6、制作标准曲线
孵育完成后标准管依次加入700μL试剂Ⅲ，100μL试剂Ⅳ，100μL试剂Ⅴ，10μL试剂Ⅵ，迅速混匀后，测定412nm处30s和150s光吸收A1和A2。
吸光度（A2-A1）为横坐标，浓度为纵坐标做标准曲线。
7、样品管依次加入700μL试剂Ⅲ，100μL试剂Ⅳ，100μL试剂Ⅴ，10μL试剂Ⅵ，迅速混匀后，测定412nm处30s和150s光吸收A1和A2。
五、GSSG含量计算
将样品△A（即A2减去A1）带入标准曲线公式，即可计算出每0.1g组织或相应血液、细胞样品中氧化型谷胱甘肽的含量。
六、注意事项
1、样品处理需匀浆完全，若当天不能完成测量，可放-80℃保存。
2、若不确定样品中GSSG含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。
3、此方法利用酶促反应速率计算底物浓度，尽量准确在30秒和150秒处完成读数。
4、因为试剂Ⅰ中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。
5、本试剂盒所配制的试剂除测定48个样品外，至少可做4次标准曲线。