培养基制作
培养基制备的流程
培养基制备的流程
培养基制备的流程主要包括以下几个步骤：
1.计算配方：根据所需培养基的种类和实验需求，计算各成分的比例和用量。
2.称量：准确称取各种成分，如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等。
3.溶解：将称取的成分放入适量的水中，搅拌均匀，使其充分溶解。
对于一些
不易溶解的物质，如琼脂，可能需要加热辅助溶解。
4.调pH：根据微生物的生长需求，调整培养基的pH值。
一般而言，细菌培养
基的pH值范围在6.5-7.5，真菌培养基的pH值范围在4.8-5.8。
5.过滤：将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除可能存在的杂质。
6.分装：将过滤后的培养基倒入无菌的培养皿或瓶子中，注意留出适当的空隙，
以利于蒸汽的排出。
7.灭菌：将分装好的培养基进行灭菌处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌和干热
灭菌。
灭菌过程中要注意保持培养基内部的温度和压力，确保微生物被有效杀灭。
8.检验：对制备好的培养基进行质量检验，如观察培养基的外观、透明度、pH
值等，确保符合实验要求。
9.储存：将检验合格的培养基在适当的条件下储存，如4℃冰箱或阴凉干燥处。
在使用前，如需再次检验，可进行细菌或真菌的接种试验。
需要注意的是，在培养基制备过程中要严格遵循无菌操作规程，避免微生物污染。
同时，根据实验需求选择合适的培养基类型和配方，以满足不同微生物的生长需求。
培养基制作注意事项
培养基制作注意事项1.材料准备：-选择基质：根据实验需要选择适当的培养基配方，包括碳源、氮源、无机盐、维生素等。
可以参考已有的文献或实验室的经验。
-材料质量：选择高质量的培养基原料，如需要使用蛋白胨、酵母浸膏、琼脂等，要确保它们的质量纯度高，无污染。
-消毒处理：所有使用的材料和容器都需要在制备前进行处理，通常是使用高压蒸汽灭菌或化学消毒剂（如乙醇）进行消毒。
2.操作环境：-操作室和操作台面要保持清洁，并经常进行消毒，避免杂菌污染。
-操作过程要注意无菌操作，使用消毒的工具（如无菌钳子、无菌吸管）取用试剂和培养基。
-打开试剂瓶盖或容器盖时，要迅速而轻柔地操作，避免空气中的微生物进入。
3.培养基制备过程：-称量准确：使用精准的天平称量培养基原料，尽量避免误差。
-溶解均匀：将固体培养基原料加入适量的去离子水或缓冲液中，充分搅拌溶解，确保溶液均匀。
-调节pH值：使用pH计测量培养基的pH值，需要根据不同的菌株或实验需求进行调节，使用适当的酸碱缓冲剂来调节pH值。
-煮沸消毒：将调好pH值的培养基溶液煮沸约15-30分钟，以杀死在材料中的细菌和真菌。
-灭菌过滤：煮沸的培养基溶液如果含有热敏感的物质，可以使用0.22微米的过滤器进行灭菌过滤，以去除残留的微生物。
4.培养基保存和贮存：-分装保存：将制备好的培养基分装到无菌的培养皿或试管中，每份适量，以备后续使用。
-贮存条件：培养基应保存在干燥、阴凉的地方，防止受潮发霉，避免阳光直射、高温或极低温等极端条件。
-有效期：定期检查和更新培养基的有效期，过期的培养基不应使用。
在培养基制作过程中，要持续监测和评估培养基的质量。
可以通过进行对照实验、培养基附着菌和平板计数等方法来评估培养基的质量，确保实验结果的准确性和可重复性。
同时，制作培养基的操作人员应具备一定的培养基制备知识和技能，并严格遵守实验室的操作规范和安全规定。
培养基制作实训报告总结
一、实训目的通过本次培养基制作实训，使学生掌握培养基的配制、灭菌、接种、培养等基本操作技能，提高学生对微生物实验操作的熟练程度，培养学生的实验操作规范和科学思维。
二、实训内容1. 培养基的配制（1）原料的选择与称量：根据培养基配方，选择合适的原料，使用电子天平准确称量。
（2）混合溶解：将称量好的原料放入烧杯或其他容器中，加入适量的水，加热溶解，不断搅拌。
（3）调整pH值：用pH试纸或pH计测定培养基的pH值，用NaOH或HCl溶液调节至所需范围。
（4）加指示剂：对某些培养基，按要求加入一定量的指示剂。
2. 培养基的灭菌（1）高压蒸汽灭菌：将培养基分装于试管或三角瓶内，塞好棉塞，用牛皮纸包扎好，放入高压蒸汽灭菌锅中，121-126℃灭菌30分钟。
（2）干热灭菌：将培养基放入干燥箱中，160℃灭菌2小时。
3. 培养基的接种与培养（1）接种：用无菌接种环或接种针，将菌株接种到培养基上。
（2）培养：将接种好的培养基放入恒温培养箱中，根据菌株生长条件进行培养。
三、实训结果与分析1. 培养基的配制通过本次实训，我们掌握了培养基的配制方法，包括原料的选择、称量、混合溶解、调整pH值等步骤。
在操作过程中，我们注意了无菌操作，确保了培养基的质量。
2. 培养基的灭菌在灭菌过程中，我们使用了高压蒸汽灭菌和干热灭菌两种方法。
高压蒸汽灭菌效果较好，能够有效杀灭培养基中的细菌、芽胞等微生物。
干热灭菌适用于不耐高温的培养基。
3. 培养基的接种与培养在接种过程中，我们注意了无菌操作，防止了污染。
在培养过程中，根据菌株的生长条件，我们成功培养出了所需的微生物。
四、实训体会与收获1. 通过本次实训，我们掌握了培养基的配制、灭菌、接种、培养等基本操作技能，提高了实验操作规范和科学思维能力。
2. 实训过程中，我们学会了如何根据实验目的选择合适的培养基，以及如何调整培养基的配方。
3. 在操作过程中，我们注意了无菌操作，防止了污染，保证了实验结果的准确性。
培养基的制作过程
培养基的制作过程培养基是细菌、真菌、细胞等生物体在实验室中进行培养和繁殖所必需的营养物质和环境条件的混合物。
制作培养基是生命科学实验中非常重要的一步，下面将从原材料、制备步骤、注意事项等方面详细介绍培养基的制作过程。
一、原材料1. 离子交换水或双蒸水：用于配制培养基时稀释各种试剂，保证试剂的纯度。
2. 蛋白胨：是从动物肉类或鱼虾等蛋白质含量高的食品中提取出来的，是常用的一种氮源，可供微生物生长使用。
3. 酵母提取物：是从酵母菌体中提取出来含有丰富氮源和多种维生素B族成分的营养液，常用于培养真菌和酵母等微生物。
4. 葡萄糖：是微生物进行代谢反应所必需的碳源。
5. 磷酸盐缓冲液：用于调节培养基pH值，以维持适宜的生长环境。
6. 硫酸镁：是微生物进行代谢反应所必需的微量元素，同时也可用于调节培养基pH值。
7. 染色剂：如溴甘酚、溴蓝等，用于检测微生物在培养基上的生长情况和形态特征。
二、制备步骤1. 称取所需试剂：按照配方要求，精确称取每种试剂，并将其分别加入离子交换水或双蒸水中。
2. 搅拌溶解：将试剂加入水中后，使用磁力搅拌器将其充分搅拌溶解，直至无明显沉淀出现。
3. 调节pH值：使用磷酸盐缓冲液调节培养基的pH值，通常在7.0-7.4之间为宜。
如果pH值过高或过低，会影响微生物的生长和代谢反应。
4. 灭菌：使用高压灭菌器或自制压力锅对培养基进行灭菌处理。
灭菌时间一般为20-30分钟，在121℃下进行高温高压处理。
灭菌后要及时冷却到室温。
5. 包装保存：将制好的培养基分装到无菌瓶中，并在瓶口处加上无菌棉塞或铝箔封口，避免外界污染。
储存温度通常为4℃，可保持较长时间的稳定性。
三、注意事项1. 原材料质量要求高：制备培养基的原材料必须是纯度较高、无污染的试剂，以避免影响微生物的生长和代谢反应。
2. 操作要严谨：在制备过程中要注意操作规范，遵守无菌操作规程，防止微生物污染。
3. 灭菌时间和温度要控制好：灭菌时间和温度是保证培养基无菌的关键因素之一，必须严格按照标准化程序进行操作。
培养基的制作方法
培养基的制作方法
制作培养基的方法通常包括以下步骤：
1. 准备试剂和仪器：根据需要制备所需的试剂，例如生长因子、胰蛋白胨、蔗糖等。
同时准备好所需的培养基制备器具，如烧杯、量筒、pH计等。
2. 称量试剂：按照所需培养基的配方称取所需量的试剂。
不同的培养基配方有不同的要求，需要根据具体情况进行称量。
3. 溶解试剂：将试剂依次加入一定量的蒸馏水中，并充分搅拌溶解。
有些试剂需要加热或调整pH值来促进其溶解。
4. 调整pH值：使用pH计测量培养基的pH值，并根据需要加入一定量的酸或碱来调整pH值。
大多数细胞培养基的pH值在7.2-7.4之间。
5. 灭菌：将制备好的培养基装入培养皿或试管中，并密封。
然后使用高温高压灭菌器或滤器灭菌，以杀灭可能存在的细菌、真菌、病毒等微生物。
6. 储存：待培养基冷却至室温后，可以存放在冰箱中长期保存，或在无菌条件下立即使用。
以上是培养基的基本制作方法，不同种类的培养基可能有一些特殊要求。
在制作
时，需要严格遵循相关的操作规程，确保培养基的质量和无菌性。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
培养基的制作方法
培养基的制作方法培养基是一种用于细胞、组织或微生物的生长和繁殖的营养物质基质。
它提供了生物所需的营养物质和环境条件，促进了其正常生长和增殖。
下面我将详细介绍培养基的制作方法。
1. 确定培养基类型和配方：首先，我们需要确定所需的培养基类型，例如细菌培养基、真菌培养基、细胞培养基等。
根据所需种类的细菌、真菌或细胞的特性和营养需求，选择适当的基础配方。
基础配方包括碳源、氮源、无机盐、维生素、矿物质等。
此外，根据具体需要，还可以添加抗生素、血清或其他生物因子。
2. 准备所需材料和设备：准备所需的原料和试剂，例如葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、无机盐、琼脂等。
同时，准备好称量器具、培养皿、试管、搅拌器、pH计等实验室设备。
3. 材料消毒和培养基制备：将所需材料消毒，可以通过高压蒸汽灭菌或其他合适的方法进行。
然后，按照制定好的配方将各种原料溶解于适量的蒸馏水或磷酸缓冲液中。
使用电子天平确保准确称量。
溶解后，使用滤器或高温高压灭菌的方法将溶液过滤或灭菌，以确保去除可能存在的微生物污染。
4. pH调节和琼脂凝固：根据所需的培养基pH值，使用pH计调节溶液的酸碱度。
一般来说，细菌培养基的pH约为7.2至7.4。
调节完成后，加入适量的琼脂固化剂。
将试管或培养皿安置于冷却台上，使溶液缓慢冷却至约50-60C，然后倒入培养皿中。
5. 培养基灭菌和保存：将培养皿或试管盖紧，使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌，通常在121C下加压15-20分钟。
待冷却后，培养基便可用于细胞、组织或微生物的培养。
为了保存，可以将制备好的培养基存放在冰箱中，避免阳光直射和细菌污染。
6. 培养基质量控制：制备好的培养基需要进行质量控制，包括菌液和培养皿的无菌性检测。
通过无菌培养技术，将制备好的培养基接种细菌或真菌，观察是否出现任何微生物生长。
同时，还要检查培养基的pH值是否正常，并进行营养成分的定性和定量分析。
总结起来，培养基的制备过程包括确定配方、准备材料、消毒和制备培养基、调节pH值和固化琼脂、灭菌和保存、质量控制等步骤。
培养基的制作方法
培养基的制作方法引言培养基是用于细菌、真菌、植物、动物等微生物和细胞的生长和繁殖的基础物质，它提供了微生物和细胞所需的营养物质和环境条件。
制备培养基是微生物学和细胞生物学研究中必不可少的一步，合理选择培养基成分和制作方法对于获取可靠的实验结果至关重要。
本文将介绍一种常用的培养基制作方法，并给出一个示例配方，以供参考。
材料和试剂准备1.蒸馏水：用于制备培养基和试剂溶液。
2.琼脂：用于固化培养基。
3.食物提取物：如酵母粉、肉膏粉等，提供细菌或真菌所需的氨基酸和营养物质。
4.磷酸盐缓冲液：用于调节pH值。
5.防腐剂：如青霉素、链霉素等，用于抑制细菌和真菌的生长。
6.其他特定试剂：根据不同实验需要，可能需要添加其他特定的成分，如抗生素、营养物质等。
步骤1. 食物提取液的制备食物提取液是培养基中提供营养物质的重要成分之一。
根据实验需要选择合适的食物提取物，并按照其推荐的用量将其溶解在蒸馏水中。
例如，制备酵母提取物，可以按照以下步骤进行： - 称取20g的酵母粉加入500ml的蒸馏水中。
- 放入磁力搅拌器中搅拌，直至酵母粉完全溶解。
- 使用滤纸过滤，去除残留的固体颗粒。
2. 琼脂的制备琼脂是用于固化培养基的重要成分。
按照琼脂的推荐用量将其溶解在蒸馏水中。
例如，制备2%琼脂培养基，可以按照以下步骤进行： - 称取20g的琼脂加入1L的蒸馏水中。
- 在加热板上加热搅拌，直至琼脂完全溶解。
- 使用自动化缓慢搅拌器将溶液搅匀，避免气泡进入溶液中。
- 将溶液倒入培养瓶或琼脂平板中，待其凝固后即可使用。
添加其他成分根据实验需要，可以添加其他特定的成分。
例如，如果需要抑制细菌和真菌的生长，可以添加适量的防腐剂。
如果需要培养特定的细菌菌株，还可以添加抗生素。
调节pH值根据需要，使用磷酸盐缓冲液来调节培养基的pH值。
将缓冲液逐滴加入培养基中，同时使用pH计检测pH值，直至达到目标pH值。
灭菌将制备好的培养基装入培养瓶或琼脂平板中，并密封。
培养基制作方法
(一)肉汤培养基肉汤培养基是常用的液体培养基，也是制备常用的细菌分离培养基及其他某些培养基的基础。
【材料】鲜牛肉(去脂肪和肌腱)、蛋白胨、氯化钠、pH试纸、10％碳酸氢钠、试管、三角烧瓶、蒸馏水等。
【方法】1．将新鲜牛肉500g切碎或搅碎，加水1000ml，放4℃冰箱或冷处浸泡过夜，然后煮沸30min，放凉，使残余的脂肪凝固，再用绒布或滤纸过滤，将滤液补足为原量。
此溶液称为肉水或肉浸液。
2．1000ml肉水中加入蛋白胨10g、氯化钠5g，加热溶解，放凉。
3．用精密pH试纸测酸碱度，用10％碳酸氢钠校正pH为7.2左右。
过碱时，可用10％醋酸校正之。
4．分装于试管中或三角烧瓶中，15磅(121℃)高压蒸气灭菌20～30min。
如用市售的牛肉膏代替新鲜肉水时，可将牛肉膏溶成0.3～0.5％的水溶液，再如上法制成培养基。
(二)普通琼脂培养基普通琼脂培养基是常用的固体培养基，包括普通琼脂平板和普通琼脂斜面两种，前者用于分离纯种细菌，后者用于增殖纯种细菌或保存菌种。
【材料】①肉水200ml ②蛋白胨2g ③氯化钠1g ④琼脂5g ⑤无菌平皿、灭菌试管、三角烧瓶等。
【方法】1．按上记数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧瓶中，加热溶化。
2．趁热用pH试纸测酸碱度，用10％碳酸氢钠校正pH为7.2左右。
3．15磅高压蒸气灭菌20～30min。
4．趁热将溶化的培养基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约15ml，凝固后即成普通琼脂平板培养基；如趁热将培养基倒入灭菌试管内，再将试管斜放试验台上，凝固后即成普通琼脂斜面培养基。
琼脂系由海藻中提取的一种多糖，俗称洋粉，具有100℃溶化，40℃凝固的特性。
细菌不能分解琼脂，故无营养作用，仅是固体培养基的赋形剂。
普通琼脂培养基也可用市售的营养琼脂粉(含有普通琼脂培养基的各种成分并已调好pH)制备，用法见产品说明书。
(三)血液琼脂培养基有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂培养基上生长不良，可用血液琼脂培养基进行培养。
培养基制备
微生物的接种技术
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研 究的基本操作技能。 无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接 种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获 得生长良好的纯种微生物为目的。 由于接种方法不同，采用的接种工具也有区 别，如固体斜面培养体转接时用接种环；穿刺接 种时用接种针，液体转接用移液管等。
试管拔塞后过火灭菌和取菌
8)塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火 塞管塞 取出接种环，灼烧试管口， 焰旁将管塞旋上。 不要用试管去迎棉塞， 焰旁将管塞旋上 。 不要用试管去迎棉塞 ， 以免试管在移动时纳入不洁空气。 以免试管在移动时纳入不洁空气。 9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉 将接种环灼烧灭菌。 将接种环灼烧灭菌 放下接种环， 花塞旋紧。 花塞旋紧。
分装量的要求
• 琼脂平板： 脂平板： –先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌 先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右， 先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右 操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿， 操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼 脂凝固后将平皿翻转， 4℃保存备用。 脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。 保存备用
消毒和灭菌
采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微 生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌。 生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌 。 灭菌是要进行微生物纯培养的需要。 灭菌是要进行微生物纯培养的需要。 实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到 杀菌效果。 杀菌效果 。 高温主要是使微生物的蛋白质和核酸等 重要生物大分子发生变性。 重要生物大分子发生变性 。 高温灭菌分为干热灭菌 和湿热灭菌两大类。 和湿热灭菌两大类 。 湿热灭菌的效果比优于干热灭 湿热下热量易于传递， 菌 。 湿热下热量易于传递 ， 更容易破坏保持蛋白质 稳定性的氢键等结构， 加速其变性。 此外， 稳定性的氢键等结构 ， 加速其变性 。 此外 ， 过滤除 射线灭菌和消毒、 菌 、 射线灭菌和消毒 、 化学药物灭菌和消毒等也是 微生物学操作中不可缺少的常用方法。 微生物学操作中不可缺少的常用方法。
培养基制作流程
培养基制作流程
培养基制作是微生物学实验室中常见的操作之一，以下是一个常用的培养基制作流程：
1.准备所需的原料和仪器设备：包括葡萄糖、琼脂、氨基酸、
无菌试剂瓶、试剂架、电子天平、移液器、自动移液器、电磁加热板等。
2.称取原料：按照特定的配方，按照一定比例称取所需的原料。
3.混合溶解：将称取好的原料放入无菌试剂瓶中，加入适量的
蒸馏水，混合搅拌溶解。
4.调节pH：使用pH计测量溶液的pH值，根据实验需要，调
节溶液的pH值。
5.均匀加热：将配制的溶液倒入适量的琼脂培养基瓶或琼脂平
板上，放入电热器或电磁加热板上，用适当的温度加热，直至琼脂完全融化。
6.灭菌：将加热好的培养基进行灭菌处理，常用的灭菌方法包
括高压蒸汽灭菌和滤过灭菌。
7.培养基包装：将灭菌后的培养基倒入装有无菌琼脂培养皿中，使用无菌包装袋密封或使用密封无菌瓶盖。
8.质量控制：对制作好的培养基进行质量控制，如检测无菌性、
水分含量、pH值等。
以上是一个常规的培养基制作流程，根据实验的具体要求和不同的培养基种类，操作步骤和原料配方可能会有所不同。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础，它们提供了养分和条件，促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种，以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦－鲍德尔培养基（Luria-Bertani agar）配方：成分：1.蛋白胨：10克2.酵母提取物：5克3.食盐：10克4.琼脂：15克5.蒸馏水：1000毫升6.高氯酸钠（0.1M）：2毫升（pH7.2）制备方法：1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中，加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀，再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。
注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基（Nutrient agar）配方：成分：1.蛋白胨：5克2.细胞色素：1克3.维生素B1：0.1克4.卵黄：10克5.食盐：5克6.琼脂：15克7.蒸馏水：1000毫升制备方法：1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。
注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长，但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基（MacConkey agar）配方：成分：1.蛋白胨：17克2.硼砂：1.5克3.细胞色素：2.5克4.氯化钠：5克5.水合甲基红：0.03克6.钴绿：0.015克7.红绿二色砂：0.15克8.琼脂：13.5克9.蒸馏水：1000毫升制备方法：1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。
注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文，供参考使用。
在制备培养基时，需要注意消毒操作，以防止污染。
另外，不同微生物对培养基的要求也有所不同，可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
各种培养基的制作方法
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。
1. 营养肉汤培养基牛肉膏0.3克蛋白胨1.0克NaCI 0.5 克水100毫升pH 7.0 〜7.2在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCI，加热溶化后，调节pH值至7.0〜7.2。
分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2. 营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
常用于培养细菌。
3. 肉汁蛋白胨液体培养基牛肉500克蛋白胨10克NaCl 5 克pH 7.1 〜7.2取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15C下放置12小时或50C下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤，补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨和食盐。
将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。
分装，高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。
常用于培养细菌。
4. 高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉2克K s HPO 0.05 克MgSQ 7f0 0.05 克KNO 0.1 克NaCI 0.05 克FeSQ 0.001 克琼脂2克水100毫升pH 7.2 〜7.4在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。
再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2〜7.4。
分装后，高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5. 马铃薯蔗糖培养基马铃薯200克蔗糖10克琼脂20克水1000毫升自然pH称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。
各种培养基的制作方法
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。
1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克NaCl 0.5克水 100毫升pH 7.0～7.2在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。
分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
常用于培养细菌。
3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克NaCl 5克pH 7.1～7.2取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤，补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨和食盐。
将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。
分装，高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。
常用于培养细菌。
4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉 2克K2HPO4 0.05克MgSO4·7H2O 0.05克KNO3 0.1克NaCl 0.05克FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升pH 7.2～7.4在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。
再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。
待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。
分装后，高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。
培养基的制作过程
培养基的制作过程培养基是生物学实验中常用的一种基质，用于培养和繁殖各种微生物、细胞和组织。
它提供了生长微生物所需的营养物质和生长条件。
下面将介绍培养基的制作过程。
一、准备原料制作培养基的首要步骤是准备所需的原料。
常用的培养基原料主要包括蛋白胨、葡萄糖、氨基酸、维生素、盐类等。
这些原料可以在实验室的化学试剂供应商处购买得到。
二、称量和混合将所需的原料按照一定比例称量，并混合均匀。
在称量过程中，需要注意使用准确的称量工具，并遵循实验室的操作规范。
混合时可以使用搅拌器或摇床来加快混合速度，确保各种原料充分混合。
三、加热和溶解混合好的原料需要加热溶解，以便使各种成分充分溶解并杀灭可能存在的细菌和其他微生物。
加热可以使用电热板或水浴进行，温度一般控制在80-100摄氏度之间。
加热时间视情况而定，一般需要持续加热15-30分钟。
四、调整pH值加热溶解后的培养基需要调整pH值，以适应不同微生物的生长需求。
调整pH值可以使用酸碱溶液，如盐酸或氢氧化钠。
在调整pH值时，需要注意逐渐加入酸碱溶液，并不断搅拌和测量pH值，直到达到目标范围。
五、灭菌调整好pH值的培养基需要进行灭菌处理，以杀死可能存在的细菌和其他微生物。
常用的灭菌方法包括高温灭菌和滤器灭菌。
高温灭菌可以使用高压灭菌器或自动灭菌器，温度和时间根据需要进行调整。
滤器灭菌则是通过将培养基过滤，使用孔径较小的滤膜来去除微生物。
六、装瓶和保存经过灭菌处理的培养基需要装入无菌瓶中，并密封保存。
装瓶时需要注意保持无菌操作，避免外界的污染。
保存时可以放置在阴凉干燥的地方，或者使用冰箱冷藏保存。
以上就是培养基的制作过程。
制作培养基需要仔细操作，保持无菌操作和正确的实验室操作规范。
制作好的培养基可以用于各种生物学实验，为研究微生物、细胞和组织提供必要的条件。
通过不断改进和优化制作过程，可以得到更适合特定实验需求的培养基，提高实验的可靠性和重复性。
制作培养基的注意事项
制作培养基的注意事项制作培养基是微生物学实验中非常重要的一步，对于培养基的制备需要严格的操作和注意事项，以确保实验结果的可靠性。
下面是一些制作培养基的注意事项：1. 保持实验环境清洁：制作培养基的实验室环境需要干净整洁，避免杂质的污染。
实验器具应当提前清洗干净，并且在操作过程中尽量减少和外界环境的接触。
2. 使用纯净的试剂和培养基成分：培养基成分的质量和纯度对实验结果有重要影响。
应当选择经过检验和认证的高质量试剂，并使用纯水或蒸馏水溶解试剂。
3. 称量准确：制备培养基时，称量所需试剂应准确，避免误差的产生。
使用准确的天平称重，并按照实验方案中指定的比例加入各个成分。
4. 调整pH值：培养基的pH值对于微生物的生长和培养非常重要。
应当在制备过程中测量和调整培养基的pH值，确保其处于适合微生物生长的范围内。
5. 检查透明度和溶解度：制作培养基后，应进行透明度和溶解度的检查。
培养基应透明无悬浮物，溶解度良好，避免在后续实验中影响结果。
6. 严格操作无菌技术：制备培养基的过程需要严格遵守无菌技术，以避免细菌、真菌等微生物的污染。
实验过程中应使用丙酮或酒精消毒操作台面和实验器具，并使用无菌工具进行操作。
7. 贮存和保存：制备好的培养基应先进行高温高压灭菌，然后储存在无菌器皿中，并在低温下保存。
贮存时间不宜过长，以免培养基成分发生变化。
8. 记录和标记：制备培养基的过程中，应详细记录使用的试剂、配方和操作步骤，并在培养基瓶上进行标记，以便后续使用和追溯。
制作培养基是微生物学研究中的重要环节，严格的操作和注意事项可确保培养基的质量和可靠性。
遵守上述注意事项，可以提高培养基的成活率和稳定性，从而获得准确可靠的实验结果。
培养基制作的原理及步骤
培养基制作的原理及步骤培养基是一种用于培养和繁殖微生物的营养物质，它提供了微生物生长所需的主要营养物质和环境条件。
培养基制作的原理是根据微生物的营养需求和生长条件来选择合适的成分，并通过一系列步骤进行配制和消毒。
培养基制作的步骤主要包括选择培养基类型、选择成分、配制培养基、消毒和灭菌。
选择培养基类型：根据需要培养的微生物种类和目的选择合适的培养基类型。
常见的培养基类型有固体培养基、液体培养基、选择性培养基和特殊培养基等。
不同类型的培养基适合于不同的实验要求。
选择成分：根据微生物的生理特点和代谢需求选择合适的成分。
培养基成分主要包括碳源、氮源、无机盐和辅助因子等。
碳源是微生物生长所需的能量来源，如葡萄糖、木糖等；氮源是微生物合成蛋白质和核酸的主要来源，如氨基酸、胺类等；无机盐提供微量元素和离子平衡，如钙离子、镁离子等；辅助因子则是一些微量的生长因子，如维生素、酶等。
配制培养基：根据选择的培养基类型和成分，按照一定比例将各种成分溶解在适量的蒸馏水中，配制成液体培养基。
固体培养基则需要将配制好的液体培养基加入适量的琼脂（或者其他凝胶物质），并在高温条件下搅拌均匀，使其凝固成为固体。
消毒：配制好的培养基需要进行消毒，以杀死或去除其中的微生物。
消毒的方法有多种多样，常用的包括高温灭菌、滤过灭菌和化学消毒等。
高温灭菌是将培养基加热到一定温度，如121，在一定时间内保持高温，以达到消毒的目的。
滤过灭菌则是通过微孔过滤膜将培养基中的微生物过滤掉。
化学消毒则是将消毒剂加入培养基中，通过化学作用杀死微生物。
灭菌：消毒后的培养基需要进行灭菌，以避免在培养过程中混入其他微生物。
灭菌的方法有干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是将消毒后的培养基在高温下进行加热，以达到灭菌的目的。
湿热灭菌则是将消毒后的培养基装入无菌瓶中，利用高温高压蒸汽进行灭菌。
总结来说，培养基制作的原理是根据微生物的营养需求和生长条件来选择合适的成分，并通过一系列步骤进行配制和消毒。
制作培养基的一般步骤
制作培养基的一般步骤
1、配料：在容器中加入少量水，按照配方称取各种药品，加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。
2、溶解：淀粉溶解：少量冷水调成糊状，加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3、调PH：用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4、过滤：滤纸或棉花进行过滤。
5、分装：一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml 的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml 培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5ml，约试管的1/4高度。
固体斜面培养基一般装3-4ml，约试管的1/5高度。
6、包扎：分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7、灭菌：按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。
如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8、摆斜面：灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。
9、贮存：培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。
一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
四、培养基的制备（一）背景知识介绍细菌和其它生物体一样，在进行培养增殖的过程中，需要一个营养丰富、环境条件适宜的场所。
培养基是由适合于细菌生长繁殖的营养物质配制而成的营养基质。
制备培养基的目的在于给细菌创造良好的营养条件。
由于细菌具有不同的类型，人们对细菌的研究目的也不同，应配制适合不同细菌生长以及按实验要求设计的不同培养基。
但从营养角度分析，培养基一般均应含有满足细菌生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐类等。
另外，培养基还应具有适宜的酸碱度（pH值）和一定的缓冲能力。
1.培养基的类型由于培养基名目繁多，种类各异。
一般按培养基的成分、培养基的外观状态、培养基的功能把培养基分为不同的类型。
按培养基成分的了解可分为：（1）天然培养基：（基本培养基）是指利用动、植物或其提取物制成的培养基，例如，培养细菌的肉膏蛋白胨培养基、培养酵母菌的麦芽汁培养基等。
此种培养基取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便。
但是其中的成分不甚清楚，不利于做精确的科学实验。
我们的实验常使用此类培养基。
（2）组合培养基：（合成培养基）是指用多种高纯化学试剂配制成的、各成分的量都确切知道的培养基。
例如培养细菌的葡萄糖铵盐培养基；培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基。
此培养基价格较贵，配制较烦琐，有利于做精确的科学实验。
我们的实验一般都不用。
（3）半合成培养基：是在天然培养基中加入少量已知的化学物质配制而成的。
如培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基。
按培养基外观的物理状态，可分为：（1）固体培养基：在液体培养基中加入1％～2％琼脂作凝固剂，就可以制成遇热可融化、冷却可凝固的固体培养基。
琼脂又名洋菜，其熔点是96℃，凝点是40℃，所以在一般细菌培养温度下呈固体状态。
固体培养基在微生物的科研和实验中，具有极其广泛的用途，如菌种的分离鉴定、菌落计数、菌种的保存等。
前面的细菌实验研究中，我们主要用此培养基。
（2）液体培养基：是指未加凝固剂、呈液态的培养基。
其组成成分均匀，细菌能充分接触和利用养料，适宜作生理研究用。
（3）半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％～0.5％的琼脂制成的培养基，可用于观察细菌的运动。
按培养基的特殊用途可分为：（1）加富培养基：是指在培养基中加入人血、血清、动植物组织提取液，培养要求比较苛刻的细菌。
（2）选择培养基：根据某一种微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学条件的抗性设计的培养基。
利用这种培养基可以将所需的微生物从混杂的微生物中分离出来。
如根据某菌对碳源、氮源等营养物质的特殊要求设计的培养基，可以分离到能分解某些物质的微生物；在培养基中加入某种化学物质，可以抑制不需要的微生物生长繁殖，如青霉素、四环素、链霉素能抑制细菌和放线菌的生长，结晶紫抑制革兰氏阳性细菌的生长等。
选择培养的理化因素有温度、氧气、pH值等。
（3）鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。
2.配制培养基的注意事项首先应注意营养成分的配比要恰当。
我们一般按照培养基的配方进行配制即可；其二要注意控制培养条件。
各类微生物所要求的pH值不同，细菌生长所需pH值在中性或微碱性（pH在7.0～7.5）。
由于微生物代谢引起培养基酸碱度的变化，往往会造成对生长的抑制。
因此，为了保持培养基pH值的相对稳定，要在培养基中加入一些缓冲剂，由K2HPO4和KH2PO4组成的混合物是常用的缓冲剂。
其三配制培养基时注意营养物质要有适合的浓度。
浓度太低时不能满足生长需要；太高由于渗透压太大，也能抑制生长。
3.配制培养基的过程称量→溶化→调节pH值→过滤→分装→塞棉塞和包扎→灭菌。
（1）称量：按照培养基配方，准确称取各成分放入烧杯中。
有些原料用量少，不易称量，可先配成高浓度溶液，再按比例换算后，取一定量加入烧杯中。
（2）溶化：加入所需要的水量搅匀，然后加热使其溶解。
有些原料不易溶解，如蛋白胨、牛肉膏等，可先在小容器中加水少许，加热溶解后倒入烧杯中。
配制固体培养基时，在琼脂熔化过程中要不断搅拌，并控制火力，防止培养基溢出或烧焦。
当培养基完全熔化后要补足水分。
（3）调酸碱度（pH值）：先用pH试纸进行比色。
如果偏酸或偏碱，可用10％HCI和10％NaOH调整pH值至所需范围。
（4）过滤：培养基中有些成分没完全溶解，则需过滤。
常用滤纸、纱布（叠成6层）或纱布间加脱脂棉花过滤。
加琼脂的培养基要趁热过滤。
（5）分装：根据需要将培养基分装各种不同的容器中。
固体培养基都要趁热分装，各容器的量如下：三角瓶：一般不超过1/2；试管：视需要而定，若制斜面一般装管高的1/5或1/4；倒平板一般是用时再倒。
分装时应避免培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞而引起污染。
（6）塞棉塞和包扎：分装后试管口及瓶口都要塞好棉塞。
做棉塞用普通棉花，其形状、大小、松紧与管口和瓶口要吻合，棉塞1/3露于管外，2/3塞进管内。
棉塞的制作和塞入的正确方法见图4-7。
棉塞塞好后，外包厚纸（牛皮纸一层或用旧报纸二层），用绳捆扎。
包扎的作用是避免灭菌时冷凝水淋湿棉塞，并防止接种前培养基的水分散失或污染杂菌。
（7）灭菌：经过分装、包扎的培养基应立即进行灭菌。
灭菌的方法一般采用高压蒸汽灭菌，如果没有高压灭菌锅，可采用间歇灭菌法。
高压蒸汽灭菌：是常用的灭菌方法，一般培养基、水、玻璃器皿、用具都可用此方法灭菌。
其灭菌的原理是：水的沸点可随压力的增加而提高，当水在密闭的高压锅中沸腾时，其蒸汽不能溢出，致使压力增加，水的沸点和温度也随之增高。
高压蒸汽灭菌时蒸汽压与温度的关系如下表。
在热蒸汽的条件下，细菌的芽孢在120℃，经20～30分钟可全部被杀死。
因此，一般培养基灭菌时，在15磅/英寸2蒸汽压、121℃温度下，30分钟即可达到灭菌目的。
如果培养基中有葡萄糖、乳糖、牛奶等不耐高温的物质时，可在8磅/英寸2经15～20分钟也可使用，但这样灭菌的培养基，应经过保温培养，检查无菌生长后，及时使用，不宜存放。
间歇灭菌：在没有高压灭菌锅时，可采用此方法。
其方法是在普通蒸锅中放入培养基，在100℃的温度下蒸30～60分钟。
然后放入25～30℃环境中24小时后，再蒸第二次；蒸后再放入25～30℃环境中24小时，然后再蒸第三次。
（二）课题提出细菌是单细胞，其个体又小，所需营养并不多，但非常容易受环境影响。
又由于微生物除了细菌外，还有放线菌、真菌等，它们和细菌混杂在一起，构成自然界的微生物群。
这几种微小生物对营养物质的要求、培养所需的pH值等都有较大的差异。
如营养物质中的碳源和氮源的比例上（碳/氮），细菌约为碳5/氮1，而霉菌则为碳10/氮1。
而且碳源和氮源的物质也有区别。
细菌所需酸碱度为中性或微碱性（7.0～7.5），霉菌偏酸牲（4.5～6.0）。
我们可以根据细菌对营养等方面的要求和与其它微生物的区别，配制不同的培养基，选择我们需要的菌种。
就细菌本身来讲，在营养、温度等方面，不同的细菌也有区别。
现在对食用细菌的研究、病原细菌的研究及与工业农业有关的细菌研究上，科研人员都是利用细菌的这些特点，培养和筛选出对人们有利的细菌。
我们也可以围绕这方面设计一些课题进行研究。
如进行水质调查时和土壤细菌的分离时，能否配制不同的培养基，观察哪种对细菌有利；还可以配制不同的酸碱度，了解细菌最适的pH值是多少；还可以改变培养条件如温度、氧气浓度等，都能作为课题进行研究。
（三）活动范例1.活动范例1【活动课题】鉴别细菌培养基的配制。
【课题概述】土壤中微生物的种类、数量都很多，其中细菌的量是最多的。
那么土壤细菌在哪一种培养基中容易生长呢？【活动过程】（1）样品的采集：在肥沃的土壤据地表3～5cm深度采集新鲜土壤，放入干净的容器中。
（2）制备培养基：按下面配方称量。
培养基①：牛肉膏0.3g 蛋白胨1gNaCI0.5g 琼脂2gpH7.0～7.5 水100ml培养基②：（高氏1号）可溶性淀粉2g 硝酸钾0.1g磷酸氢二钾0.05g 硫酸镁0.05g氯化钠0.05g 硫酸亚铁0.001g琼脂2g 水100mlpH7.0～7.5培养基③：（察氏）蔗糖2g 硝酸钠0.3g磷酸氢二钾0.1g 氯化钾0.1g硫酸镁0.05g 硫酸亚铁0.001g琼脂2g 水100mlpH4.5～6.0备注：量太少无法称的，可先按现量的10倍或100倍配制，再从中取一定量加入培养基中即可；称牛肉膏、蛋白胨时，可先将玻璃棒和一小烧杯称重，然后用玻璃棒沾取后一起称即可。
将上面三种培养基各按配方称量好后，分别放入烧杯中，在酒精灯上分别加热至完全溶化后再放琼脂。
继续加热至琼脂溶化（边加热边搅拌）。
然后，趁热放入三角瓶中，塞好棉塞，标明是哪种培养基，用牛皮纸或两层旧报纸包好瓶口准备灭菌。
将九套培养皿用牛皮纸包好；接种及稀释土壤用的移液管和无菌用水都包好装好；包装好的、七支各装有9ml水的试管；装有99ml水的三角瓶（包装好）和培养基一起进行灭菌。
（3）灭菌：①打开灭菌锅盖，向锅内加入适量水。
②将制备好的培养基和需要灭菌的其它用品，一起放入高压灭菌锅中（装有培养基和水的注意要立着放稳）。
不要放得太挤，以免影响蒸汽流通。
③盖好锅盖，采用对角形式均匀拧紧盖上的螺旋，使锅密闭。
打开放气阀，开始加热。
④当锅内产生蒸汽后，放气阀开始有热气排出，自开始产生热气后约3分钟（锅内冷空气已排尽），再关闭放气阀。
此时锅内温度随蒸汽压力增高而上升。
待压力上升到15磅/英寸2，温度达到120～121℃时，要控制热源，恒温20～30分钟，此时必须注意勿使压力继续上升或下降。
⑤停止加热，待压力下降至零时，打开放气阀，排出残留蒸汽，打开锅盖，取出灭菌物品。
注意事项：灭菌过程中，一定注意排净锅内的冷空气，冷空气排不净时，锅内温度达不到灭菌温度，会影响灭菌效果；操作时，必须严格按操作规程操作，否则容易发生意外事故，应在教师指导下操作。
（4）菌悬液的制备：方法按细菌的分离范例中10倍稀释方法，将土壤稀释成10-5、10-6、10-7的菌悬液。
（5）接种：将9套培养皿按下面编号。
培养基①：10-5、10-6、10-7培养基②：10-5、10-6、10-7培养基③：10-5、10-6、10-7在酒精灯火焰旁，按编号的稀释浓度用移液管吸取1ml菌悬液，放入相应的培养皿中。
然后各倒入15ml温度在50℃（手模瓶壁感到热但不烫手）的培养基，迅速摇动培养皿，使菌液与培养基混均匀，然后平放待其凝固成平板。
（6）培养观察：将制好的平板倒置放在35～37℃的恒温箱中，培养18～24小时，待平板上长出菌落后，进行观察。
从三种培养基平板上的菌落数和菌落的特点进行观察，看哪一种培养基细菌的菌落数多，哪一种细菌的菌落数少。
观察结果统计如下：（7）结果的分析。
（8）结论。
2.活动范例2【活动课题】水中大肠杆菌的检查。