生物化学实验课件讲解
生物化学试验基础PPT课件
（3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为 学习设计或验证一个试(实)验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
以λ~A作图 最常用的目视比色法是标准系列法:
5 实验须知
实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明 确实验目标，能简述实验内容及主要的操作 步骤。
实验过程中，应根据实验指导及老师的要求， 认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造 实验数据，提倡实事求是的科学态度，实验 做错应要求重做，反对弄虚作假。
实验结束后，要认真书写实验报告，及时交 老师批阅。
当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时溶液的吸光度与吸光吸光物质的稀溶液时溶液的吸光度与吸光物质浓度液层厚度乘积成正比即物质浓度液层厚度乘积成正比即式中比例常数式中比例常数kk吸光系数吸光系数与吸光物质的本与吸光物质的本性入射光波长性入射光波长单色光纯度单色光纯度及温度等因素有及温度等因素有c为吸光物质浓度为吸光物质浓度ll为透光液层厚度
•测定方法 吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
值日生要负责打扫实验室的卫生，整理实验室。 去离子水不是没有离子的水，而是经过离子交换得到的没有干扰离子，PH值中性的水，干扰离子一般指钙、镁、碳酸根、硫酸根等， 但是去离子水一般含有的有机物质是不能去除的。
通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸 收曲线。 在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。
图示
吸收曲线的讨论：
（1）一种吸光物质对不同波长的光吸收程度不同。
《生物化学实验》PPT课件
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24
四.几种常见电泳的比较
类型
优点
缺点
纸电泳
设备操作简单
分辨率差，电渗现 象
醋酸纤维薄膜电 设备操作简单，样品
泳
用量少
分辨率差
琼脂糖凝胶电泳 快速，分辨率高
电渗现象严重
聚丙烯酰胺凝胶 电泳
可调节凝胶孔径，样 品用量少分辨率高，
无电渗现象
高浓度凝胶难剥离
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25
五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理
A.凝胶层的不连续性
浓缩胶T=2.8％ C=20%；分离胶T=7％ C=2.5%
B.缓冲液成分的不连续性：
凝胶缓冲液Tris-HCl,含Cl－，电极缓冲液Tris-Gly,Gly
－
C.pH的不连续性：
浓缩胶pH6.7,分离胶pH8.9，电极缓冲液pH8.3
D.电位梯度的不连续性
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30
五. 盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 （2）盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应
样品的浓缩效应
电荷效应
分子筛效应
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A. 样品的浓缩效应
缓冲液成分及pH的不连续性 浓缩胶pH6.7 缓冲液 浓缩胶Tris-HCl, 电极缓冲液Tris-Gly
解离度 ：Cl> 蛋> Gly mcl cl>m蛋 蛋>m Gly Gly 凝胶中Cl－为快离子， Gly－为慢离子，
蛋白质从“－”极向“＋”极移 动，从浓缩胶进入分离胶，速 度变慢，堆积浓缩。
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缓冲 液
浓缩胶 分离胶
40
B.电荷效应
蛋白质样品进入分离胶后 pH增大(pH 8.9)，Gly－解离度增 大，不存在快、慢离子之分， 蛋白质样品在均一电场强度和 pH条件下泳动。
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》课件第一章：生物化学实验基本原理1.1 实验目的了解生物化学实验的基本原理和方法，掌握实验操作技巧。
1.2 实验原理介绍生物化学实验的基本原理，如光谱原理、色谱原理、电泳原理等。
1.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
1.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
1.5 实验注意事项提醒实验过程中需要特别注意的事项，以确保实验顺利进行。
第二章：蛋白质实验2.1 实验目的学习蛋白质的提取、分离和纯化，了解蛋白质的性质。
2.2 实验原理介绍蛋白质提取、分离和纯化的原理，如盐析、凝胶色谱等。
2.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
2.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
2.5 实验注意事项第三章：酶实验3.1 实验目的学习酶的活力测定和性质研究，了解酶的作用机制。
3.2 实验原理介绍酶活力测定和性质研究的基本原理，如动力学方法、抑制剂作用等。
3.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
3.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
3.5 实验注意事项提醒实验过程中需要特别注意的事项，以确保实验顺利进行。
第四章：糖类实验4.1 实验目的学习糖类的提取、分离和鉴定，了解糖类的性质和功能。
4.2 实验原理介绍糖类提取、分离和鉴定的原理，如糖的降解、糖醇的鉴定等。
4.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
4.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
4.5 实验注意事项第五章：脂质实验5.1 实验目的学习脂质的提取、分离和鉴定，了解脂质的性质和功能。
5.2 实验原理介绍脂质提取、分离和鉴定的原理，如脂质的水解、脂肪酸的鉴定等。
5.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。
5.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。
生物化学试验课件
目录
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 (操作性) 4学时 实验二 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 (操作性) 3学时 实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (验证性) 5学时 实验四 动物肝肝脏DNA的分离与鉴定 (操作性) 3学时 实验五 血液中葡萄糖的测定 (操作性) 3学时 实验六 血清中总胆固醇的测定 (操作性) 4学时 实验七 唾液淀粉酶活性的观察 (综合性) 4学时 实验八 维生素C的定量测定 (操作性) 4学时 实验九 脂肪酸的β-氧化 (操作性) 4学时
【注意事项】
1．醋酸纤维素薄膜的质量对结果影响很大，最好选用 同一批号、薄膜厚度均匀、质量良好的醋酸纤维素薄膜。 2．血清或其他电泳样品应新鲜。 3．点样应细窄、均匀、集中。点样量不宜过多，点样 位置要合适。 4．盐桥要放置平整，保证电场均匀。 5．电泳槽盖应密封，盖内空间不宜过大。 6．较低温度下电泳一般能获得较好的图谱，故室温不 宜过高。 7．选择合适的缓冲液离子强度。
【实验步骤】
1．薄膜准备 2．点样
3．电泳
4．染色和漂洗 +
白蛋白(A)
α2
β
γ
α1
5．薄膜和透明
6．定量
（1）洗脱法
每种蛋白占总蛋白量的
百分数（%）
该种蛋白管光密度读数 各管光密度读数之和
100 %
注意！白蛋白因加入NaOH的量比其他管多，其光密度值 应乘以稀释倍数，得到数值再代入上式中计算。
8．两电泳槽内缓冲液面应在同一水平。 9．要控制好电流，电压和电泳时间。 10．电泳槽内缓冲液可以多次使用。但操作时应尽量减 少缓冲液的污染、水分蒸发、pH及离子强度的改变， 并应防止霉菌的滋长。 11．染色、漂洗及洗脱时间要控制好，才能获得重复性 良好的定量结果。
临床生物化学检验实验课件
实验室评估指标体系建立
评估指标的选择
根据实验室工作特点和质量控制要求，选择具有代表性的指标，如实验结果的准确性、精 密度、可比性等。
评估方法的确定
采用定量和定性相结合的方法，对各项指标进行客观、公正的评价。例如，通过计算标准 差、变异系数等统计量来评价实验结果的精密度；通过比对实验、方法学评价等手段来评 价实验结果的准确性。
排除检测误差、个体差异等因素， 确认结果是否真实异常。
分析异常原因
结合患者临床表现、病史等信息， 分析异常结果的可能原因。
进一步检查建议
根据异常结果及其可能原因，提 出进一步检查以明确诊断的建议。
临床案例讨论
案例选择
选择具有代表性的临床案例，涉及不同疾病类型、不同生化指标异 常等。
案例讨论
分析案例中的异常生化指标，讨论其可能原因、诊断意义及治疗方 案。
实验室安全是实验工作的重要保障， 必须严格遵守实验室安全规定，注意 防火、防爆、防毒、防辐射等安全事 项。
实验过程中应穿戴实验服和防护用品， 避免直接接触有毒有害物质，注意个 人卫生和实验废弃物的处理。
实验前应认真检查实验仪器和试剂是 否完好，熟悉实验操作流程和注意事 项，确保实验过程的安全和顺利进行。
05 实验结果解读与临床应用
正常参考范围及意义
正常参考范围的确定
基于大量健康人群的检测数据，采用统计学方法确定。
正常参考范围的意义
为临床诊断和治疗提供依据，帮助医生判断患者生化指标是否正常。
注意事项
不同实验室、不同检测方法可能有不同的正常参考范围，需结合具 体情况进行解读。
异常结果分析思路
确认异常结果
根据实验需求选择合适的 样本类型，如血液、尿液、 组织液等。
生物化学实验技术PPT课件
特定DNA片段
农业生物学实验教学中心
耐热DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)
(%)
100
酶 80 活 性 60
40
20
40 50 60 70 80 90 100
温度(℃)
Saiki（1988）将耐热DNA聚合酶引入PCR，使利用热变性解链DNA模板可行。
PCR反应循环
Taq
P2
Mg2+
2021/3/12
P1
dATP dCTP
dTTP
dGTP
农业生物学实验教学中心
PCR反应条件
1）PCR反应成分
（1）模板 单、双链DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA
结合蛋白类。 DNA模板一般100ng /100L。 模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。
5’ 3’
SG SG SG
Emission
3’ 5’
SG
农业生物学实验教学中心
梯度PCR仪
实时荧光定量PCR仪
普通PCR仪
2021/3/12
农业生物学实验教学中心
一、实验目的
PCR示例
学习PCR分析的原理与技术。
2021/3/12
农业生物学实验教学中心
二、实验材料、仪器和试剂
1、材料：含1Kb插入片段的克隆载体
基因组DNA结构功能的研究
农业生物学实验教学中心
低浓度引物
高浓度引物
2)反向PCR (reverse PCR)
用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段， 对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。
未知序列
已知序列
生物化学实验ppt-new全
淀粉在酸催化下加热，逐渐水解成分子较小的糖，最后水解 成葡萄糖，其过程如下：淀粉--各种糊精—麦芽糖—葡萄糖。淀 粉完全水解后，失去与碘的作用，同时出现单糖的还原性。
五、操作
1、RNA的提取 称取5g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶
液30ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。冷却，加入乙酸 数滴，使提取液呈酸性（PH5-6，用试纸试之），离心1015min（1000r/min）,取上清液，加入两倍体积的95%乙醇， 边加边搅拌。加毕，静置，待完全沉淀，离心5min （1000r/min），取沉淀物，沉淀物即为粗RNA，可作鉴 定和测定含量用。 2、鉴定
试剂
管号 0 1
2
4
6
2mg/ml卵清蛋白质/ml
0.0 0.3 0.6 1.2
1.8
蒸馏水/ml
3.0 2.7 2.4 1.8
1.2
双缩脲试剂/ml
2.0 2.0 2.0 2.0
2.0
充分混合，在540nm比色
蛋白质浓度/(mg/ml)
0.0 0.2 0.4 0.8
1.2
A540nm
需于显色后30min比色测定，30min后可能有雾状沉淀产生。各管由显色到比色的时间应尽 可能一致。
一、目的 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
二、原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使 其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的降解。
生物化学实验课件ppt课件
（9）如有突发事件（起火、试剂腐蚀伤人）发生，不要惊 慌失措，应妥善处置（使用灭火机、关闭电源等）。
实验一 糖类的性质实验
ppt课件
9
糖类的重要鉴别方法是 Ｍｏｌｉｓｈ反应和Ｓｅｌｉ ｗａｎｏｆｆ反应。糖类、苷类及其他含糖物质与α 萘酚和 浓硫酸呈紫红色的环的反应称为 Ｍｏｌｉｓｈ反应，该反应 可用于糖类和非糖物质的鉴别。酮糖糖加入间苯二酚和６ｍ ｏｌ／Ｌ盐酸能产生红色的反应称为Ｓｅｌｉｗａｎｏｆｆ 反应，该反应可用于酮糖和醛糖的鉴别。如己酮糖加入间苯 二酚和浓盐酸，加热后迅速产生红色，而同样条件下己醛糖 的反应速度要慢得多。
ppt课件
17
四、实验步骤
1、α-萘酚反应
1%葡萄溶液
观
1%果糖溶液 各加1ml
★各加2滴
★各加1ml
察
5
记
1%蔗糖溶液
支
莫氏试剂 混
浓硫酸
录
试
各
1%淀粉溶液
管
匀
管
0.1%糠醛溶液
颜 色
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18
Molisch反应（-萘酚反应）
界面：显色------鉴定：所有的糖类均可显色
浓H2SO4
糖 α -萘酚+酒精
ppt课件
11
一、实验目的：
1、了解糖类某些颜色反应的原理； 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法； 3、学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及
其原理。
ppt课件
12
二、实验原理
(一)颜色反应
1. α-萘酚反应
糖在浓无机酸（硫酸或盐酸）作用下，脱水生
生物化学实验课件[1]
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生物化学实验课件[1]
2.实验原理
o 过氧化氢酶广泛分布于生物体内，能将代谢中产生的 有 剂害铁的粉高H21O02分个解数成量H级2。O和O2，其催化效率比无机催化
o 酶的另一特点是具有高度的特异（专一）性，淀粉酶 和蔗糖酶虽然都催化糖苷键的水解，但是淀粉酶只对 淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它 与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在 0~1000μg 范 围 内 ， 蛋 白 质 - 色 素 结 合 物 在 595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用 比 色 法 进 行 定 量 分 析 。 考 马 斯 亮 蓝 G-250 法 （Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合 方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种 较好的蛋白质常用分析方法。
在蛋白质溶液中存在着下列平衡：
阴离子
两性离子
pH＞pI
pH = pI
电场中： 移向阳极
不移动
阳离子 pH＜pI
移向阴极
调节溶液的pH使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相等， 净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI)。
在等电点时，蛋白质溶解度最小，溶液的混浊度最大。配制不同pH的缓冲液， 观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情况即可大致确定蛋白质的等电点。在pH 梯度电泳中，蛋白质泳动到其相应的等电点时则停止泳动，据此可分离等电 点不同的蛋白质。
2.实验原理
o 淀粉酶广泛存在于植物中，特别是萌发的禾谷类种子淀粉酶活 力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶随机地作 用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、糊精等； β-淀粉酶从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽糖、极限 糊精等。
生物化学实验课件讲解
⽣物化学实验课件讲解实验⼀⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法测定总糖含量（4学时）⼀、实验⽬的（1）掌握⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法测定总糖的原理。
（2）学习分光光度计的使⽤⽅法。
（3）掌握⽐⾊定糖法操作技术。
⼆、实验原理在碱性条件下，还原糖与3，5-⼆硝基⽔杨酸共热，3，5-⼆硝基⽔杨酸被还原为3-氨基-5硝基⽔杨酸（棕红⾊物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊深浅的程度成⼀定⽐例关系，在540nm波长下测定棕红⾊物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。
总糖可在强酸条件下⽔解，得到还原糖，从⽽间接求出样品中总糖的含量。
三、实验仪器（1）刻度试管：25 mL；（2）烧杯：100 mL；（3）三⾓瓶：100 mL；（4）容量瓶：100 mL；（5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL；（6）恒温⽔浴；（7）沸⽔浴；（8）离⼼机（过滤法不⽤此设备），离⼼管或玻璃漏⽃，电⼦天平，分光光度计。
四、实验试剂（1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘⾄恒重），置于⼩烧杯中，⽤少量蒸馏⽔溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏⽔定容⾄刻度，摇匀，冰箱中保存备⽤。
（2）3，5-⼆硝基⽔杨酸试剂：将6.3 g 3，5-⼆硝基⽔杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000 mL，贮于棕⾊瓶中备⽤。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，⽤蒸馏⽔溶解⾄100mL。
（4）酚酞指⽰剂：称取0.1 g酚酞溶于70%⼄醇⾄250 mL。
（5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。
（6）⼩麦淀粉，⾷⽤⾯粉。
五、实验操作1．制作葡萄糖标准曲线取7⽀刻度试管，按下表操作。
管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏⽔/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-⼆硝基⽔杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃⽔浴中加热5 min，取出冷却⾄27~30 ℃后以蒸馏⽔定容⾄25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调⾄540 nm 波长，⽤零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。
生物化学实验图文新版PPT课件
莫氏反应：糖经无机酸脱水产生糠醛或糠醛衍生 物，后者在浓无机酸作用下，能与1-萘酚生成紫 色的缩合物，可用于鉴定糖的存在。
塞氏反应：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟 基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色，可用于 鉴定酮糖的存在。
杜氏反应：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后 者与间苯三酚作用生成桃红色物质，可用于鉴定 戊糖的存在。
8
实验试剂：
Molish（莫氏）试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇 溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存； Sediwanoff（塞氏）试剂：0.5g 间苯二酚溶于 1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配 制； 杜氏试剂：称取2g间苯三酚，溶于250mL95%乙 醇中。临用时取此液3mL，缓缓加入15mL浓盐酸 及9mL蒸馏水，临用时配制。
Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶 剂前沿
的距离
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•
试剂与器材：
氨基酸液（5种）、正丁醇、冰醋酸、水、茚三酮、 层析滤纸、层析缸、吹风机、喷瓶、铅笔、直尺、 分液漏斗
各 式 各 样 的 喷 瓶
层析缸
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实验步骤 实验准备 点样 展层 显色 记录 计算Rf 值 结论
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实验准备
层析液配制: 正丁醇:冰醋酸:水= 5:3:2 (体积比)置分液漏斗中静置分层，取上清 液约60ml 倒于层析缸中静置到液面不动为 止。
展层：
在层析缸上口处中央，平行的贴上透明胶纸，胶 纸要绷紧。在点了样品的滤纸上端中点处垂直贴 上透明胶，将滤纸上的透明胶贴在缸口的透明胶 上。
注意：滤纸点样端朝下，刚好接触缸底，垂直悬 于缸中。当溶剂前沿展到距滤纸上端约1.0cm时 取出滤纸，用吹风机吹干。
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》PPT课件第一章：生物化学实验基本原理与技能1.1 生物化学实验的目的与意义解释生物化学实验在生物学和医学研究中的重要性强调实验对于理论知识的巩固和应用的作用1.2 生物化学实验的基本原则介绍实验设计的科学性和合理性强调实验操作的准确性和可重复性1.3 生物化学实验的基本技能介绍实验室安全操作规程演示实验室常用仪器的使用方法第二章：生物化学实验数据处理与分析2.1 实验数据的记录与处理讲解实验数据的记录方法和注意事项介绍数据处理的基本原则和方法2.2 实验数据的分析与解读讲解实验结果的统计分析方法强调数据分析在实验结果解释中的重要性第三章：生物化学实验操作技巧与实例3.1 生物化学实验操作技巧讲解实验操作中的注意事项和技巧强调实验操作的精确性和规范性3.2 生物化学实验实例解析介绍经典生物化学实验案例分析实验操作步骤和结果的关联性第四章：生物化学实验常用仪器与设备4.1 生物化学实验常用仪器介绍实验室常用仪器的作用和操作方法强调仪器使用中的注意事项和维护保养4.2 生物化学实验常用设备讲解实验室常用设备的结构与功能强调设备操作的安全性和正确性第五章：生物化学实验安全与环保5.1 生物化学实验安全知识讲解实验室安全的基本原则和措施强调实验操作中的安全意识和风险控制5.2 生物化学实验环保知识介绍实验室废物的分类和处理方法强调实验室环保的重要性和责任意识第六章：蛋白质实验6.1 蛋白质的提取与分离介绍蛋白质提取和分离的基本原理演示蛋白质提取和分离的实验步骤6.2 蛋白质的纯化与鉴定讲解蛋白质纯化方法和技术介绍蛋白质鉴定的方法和原理第七章：酶实验7.1 酶的提取与纯化讲解酶提取和纯化的方法和原理强调酶活性检测的重要性7.2 酶活性的测定与分析介绍酶活性测定的方法和原理讲解酶活性数据分析的方法和技巧第八章：碳水化合物实验8.1 碳水化合物的提取与分析介绍碳水化合物提取和分析的方法强调碳水化合物在生物体中的重要性8.2 碳水化合物的代谢实验讲解碳水化合物代谢的实验方法和原理介绍碳水化合物代谢产物的检测方法第九章：脂质实验9.1 脂质的提取与分析讲解脂质提取和分析的方法强调脂质在生物体中的功能和作用9.2 脂质代谢实验介绍脂质代谢的实验方法和原理讲解脂质代谢产物的检测方法第十章：核酸实验10.1 核酸的提取与纯化介绍核酸提取和纯化的方法和原理强调核酸在生物体中的重要性10.2 核酸的检测与分析讲解核酸检测和分析的方法和原理介绍核酸序列测定和分析的方法重点和难点解析1. 生物化学实验基本原理与技能：理解实验设计的原则和实验操作的准确性是进行生物化学实验的基础。
第二章--生物化学检验基本知识PPT课件
2024/10/16
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二、生物化学检验报告单的发放
即使是临床医护人员能够通过“医院信息系统（HIS）”在医生 工作站直接读取检验结果的临床科室或医疗单位，实验室也 应该用电话向临床报告，这是考虑到临床一线医护人员可能 会忙于抢救而不能及时观察到检测结果需要提醒的缘故。
“危急值”报告不同于“急诊检验”报告，是两个完全不同
4．技术要求高的检测项目 检测系统本身的不稳定因素，影响检验结果可靠性的检
验项目，或者检测系统本身存在着影响检验质量的诸多人
为环节，对检验人员的理论和技能要求较高的检验项目。
（三）急诊生化检验
急诊检验是实验室为了配合临床对危、急、重症患者的诊 断和抢救而实施的一种特需检验。如血气分析、电解质、 淀粉酶、心肌标志物、血糖等。
2．标本难以获得的检测项目
某些检验项目的标本获得比较困难，或者因为标本数 量极少，对标本的处理和保存都不能按规定要求和程序 进行，甚至不能进行复检的检验项目。
2024/10/16
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一、生物化学检验的项目
3．发病率低或成本高的检测项目 由于某疾病的发病率很低造成标本数量过少或检验成 本过高的检验项目。
2024/10/16
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第二节 生物化学检验的标本
一、标本的采集
生物化学检验最常用的标本是血液，其次是尿液，此外还有 脑脊液、浆膜腔积液、羊水等各种体液。 正确采集标本是获得准确、可靠检验结果的关键。
标本采集时应尽可能避免一切干扰因素，选择最佳的采集时 间，减少饮食和药物影响，减少昼夜节律带来的干扰。对于 有创伤性的操作，操作前应先与患者沟通建立互信，消除患 者的恐惧和紧张情绪。
剂及抗凝原理；尿液标本的采集方法；标本收检、分离、储存和转运；生物 化学检验项目类型；危急值、危急值报告的概念；检验报告单的发放方式。
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实验一二硝基水杨酸比色法测定总糖含量（4学时）一、实验目的（1）掌握二硝基水杨酸比色法测定总糖的原理。
（2）学习分光光度计的使用方法。
（3）掌握比色定糖法操作技术。
二、实验原理在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量。
总糖可在强酸条件下水解，得到还原糖，从而间接求出样品中总糖的含量。
三、实验仪器（1）刻度试管：25 mL；（2）烧杯：100 mL；（3）三角瓶：100 mL；（4）容量瓶：100 mL；（5）刻度吸管：1 mL，2 mL，10mL；（6）恒温水浴；（7）沸水浴；（8）离心机（过滤法不用此设备），离心管或玻璃漏斗，电子天平，分光光度计。
四、实验试剂（1）1 mg/mL葡萄糖标准液：准确称取0.250 g分析纯葡萄糖（预先80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到250 mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3，5-二硝基水杨酸试剂：将6.3 g 3，5-二硝基水杨酸和262 mL 2mol/L的NaOH溶液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5.0 g碘、10 .0g碘化钾，用蒸馏水溶解至100mL。
（4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞溶于70%乙醇至250 mL。
（5）6 mol/L HCl，6 mol/L NaOH。
（6）小麦淀粉，食用面粉。
五、实验操作1．制作葡萄糖标准曲线取7支刻度试管，按下表操作。
管号0 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3，5-二硝基水杨酸/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管内液体混匀，在100 ℃水浴中加热5 min，取出冷却至27~30 ℃后以蒸馏水定容至25 mL，将各管摇匀，将分光光度计调至540 nm 波长，用零号管调零，再读取1~6号管的吸光度，然后将读取的吸光度为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制出标准曲线。
2．还原糖及总糖的待测液的制备（1）还原糖待测液的制备：取3.0 g 小麦淀粉，置于100 mL 三角瓶内，缓缓加入50 mL 蒸馏水，边注水边搅拌，直至均匀溶解，将溶液置于于50 ℃恒温水浴加热20 min ，离心机过滤5 min ，用20 mL 蒸馏水清洗残液，再用离心机过滤，然后将2次上清液集中于100 mL 容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1.0 g 食用面粉，放在100 mL 的三角瓶中，加入10 mL 6 mol/L HCl 及15 mL 蒸馏水，置于沸水浴中加热水解30 min ，取1~2滴水解液于白瓷板上，加1 滴碘-碘化钾溶液，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显蓝色。
待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH 中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤液全部收集在100 mL 的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，混匀。
精确取10mL 定容过的水解液，移入另一个100mL 的容量瓶，以水稀释定容，作为总糖待测液。
（3）显色和比色，取4支25 mL 刻度试管，编号，按下表所示的量操作。
管号还原糖测定管号 总糖测定管号 ① ② Ⅰ Ⅱ 还原糖待测液/mL 2 2 0 0 总糖待测液/mL 0 0 1 1 蒸馏水/mL0 0 1 1 3,5-二硝基水杨酸/mL1.51.51.51.5将各管内液体混匀，在沸水浴中加热5 min ，取出冷却至36 ℃，蒸馏水定容至25 mL 。
将分光光度计调至540 nm 波长，以葡萄糖零号管调零，在分虽读取①、②、Ⅰ、Ⅱ4个管的吸光度。
3．还原糖及总糖的测定以管①、②的吸光度平均值和管Ⅰ、Ⅱ的吸光度平均值，分别是在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的含量。
(mg)ω()/%=100(mg)提取液总体积查曲线所得还原糖质量测定时取用体积还原糖样品质量(mg)ω()/%=0.9100(mg)查曲线所得还原糖质量稀释倍数总糖样品质量六、结果处理（1）标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
（2）用其他含糖材料，以试验材料比较其含糖量的差异。
（3）小麦淀粉中含有何种糖？在提取总糖时，其他杂质是否会影响到测定？实验一 二硝基水杨酸比色法测定总糖含量 1、实验操作第一步省略，见板书2、还原糖待测液的制备选用漏斗，不用离心机 显色和比色时，加一个空白，见板书实验二酶的生化基础实验（3学时）一、实验目的（1）加深对酶的性质的认识。
（2）了解酶特性的实验原理。
（3）掌握温度对酶活力的影响，pH对酶活性的影响，唾液酶活化和抑制的三个实验。
（4）了解酶催化的高效性，特异性，进一步掌握酶的代谢反应及其调控机理。
二、实验原理酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异（专一）性，即一种酶只能对一种或一类化合物起催化作用，例如，淀粉酶和蔗糖酶虽然都催化糖苷的水解，但是淀粉酶只对淀粉起作用，蔗糖酶只水解蔗糖，还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或者激活剂时水解淀粉的差异，说明这些环境因素对酶活性的影响。
1．温度对酶活力的影响酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。
大多数动物酶的最适温度为37~40℃，植物酶的最适温度为50~60 ℃。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。
有些酶的干燥制剂，即使加热到100 ℃，其活性并无明显改变，但在100 ℃的溶液中却很快地完全失去活性。
低温能降低或抑制酶的活性，但不能推动酶活性。
2．pH对酶活性的影响酶的活性受环境pH的影响极为显著，不同酶的最适应的pH不同，本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。
3．唾液酶的活性和抑制酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
三、实验仪器（1）分光光度计（722型或最新型），恒温水浴；（2）锥形瓶：50 mL；（3）量筒：100 mL；（4）漏斗：φ4 cm；（5）温度计：0~100 ℃；（6）滴管；（7）吸量管：0.2 mL，0.5 mL，1 mL，2 mL，5 mL；（8）试管：1.5 cm×1.5 cm。
四、实验试剂（1）Fe粉；（2）ω(淀粉)=1%的溶液，用ω(NaCl)=0.3%的溶液配制；（3）ω(淀粉)=0.5%的溶液，用ω(NaCl)=0.3%的溶液配制；（4）唾液淀粉酶溶液：先用蒸馏水漱口，再含10 mL左右蒸馏水轻轻漱动，数分钟后吐出，收集在烧杯中，过滤，得到清澈的唾液淀粉酶原液，稀释100~200倍，混匀备用；（5）碘化钾-碘溶液：将碘化钾20 g及碘10 g溶于100 mL水中，使用前稀释10倍；（6）浓度为0.1 mol/L柠檬酸溶液；（7）浓度为0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液；（8）pH试纸（pH=4.9~8）；（9）ω(氯化钠)=1%的溶液；（10）ω(CuSO4·5H2O)=1%的溶液；（11）ω(硫酸钠)=1%的溶液；（12）本乃狄（Benedict）试剂：17.3 g CuSO4·5H2O加100 mL蒸馏水加热溶解，冷却，173 g柠檬酸钠和100 g Na2CO3·2H2O，以600 mL蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢倒入柠檬酸钠碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000 mL，过滤除去深沉；（13）ω(蔗糖)=2%的溶液：用分析纯蔗糖新配制；（14）磷酸缓冲液：A液（0.2mol/L Na2HPO4）：称取28.40 g Na2HPO4溶于1000 mL 蒸馏水中；B液（0.1 mol/L 柠檬酸）：称取21.01 g柠檬酸溶于1000 mL蒸馏水中；（15）实验材料：马铃薯；（16）ω(H2O2)=2%。
五、实验操作1．酶催化的高效性酶催化的高效性实验：取4支试管，按下表操作。
操作项目管号1 2 3 4ω(H2O2)=2% /mL 3 3 3 3生马铃薯小块/块 2 0 0 0熟马铃薯小块/块0 2 0 0 铁粉0 0 小匙0现象解释实验现象2. 酶催化的专一性蔗糖酶溶液的制取：取1 g干酵母，放入研钵中，加少量石英砂和水研磨，加蒸馏水50 mL，静置片刻，过滤即得。
酶催化的专一性实验：取6支干净试管，按下表操作。
操作项目管号1 2 3 4 5 6ω(淀粉)=1% /mL 1 1 0 0 1 0 ω(蔗糖)=2%/mL 0 0 1 1 0 1唾液淀粉酶原液/mL 1 0 1 0 0 0 蔗糖酶溶液/mL 0 1 0 1 0 0 蒸馏水0 0 0 0 1 1酶促水解摇匀，37 ℃水浴中保温10 min 本乃狄试剂/mL 2 2 2 2 2 2 反应摇匀，沸水浴中保温5~10 min现象解释实验现象3．温度对酶活力的影响淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。
最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈的颜色来判断。
（1）温度对酶活力的影响1取3支试管，按下表操作。
操作项目管号1 2 3唾液淀粉酶溶液/mL 1 1 1pH=7.0磷酸缓冲液/mL 2 2 2在一定温度下预处理5min 0 ℃37 ℃70 ℃ω(淀粉）=1%的溶液/mL 2 2 2摇匀，保持各自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2 min，各加1滴碘液，混匀，观察并记录各管反应现象。
（2）温度对酶活力的影响2取3支试管，编号后按下表加入试剂。
管号 1 2 3 淀粉溶液/mL 1.5 1.5 1.5稀释唾液/mL 1 1 －煮沸过的稀释唾液/mL －－ 1摇匀后，将1号和3号两个试管放入37 ℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中，10 min 后取出，将2号试管内液体分为两半，用碘-碘化钾液来检验1、2、3号试管淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，记录并解释结果。