四大经典核酸纯化方法
核酸纯化
Code No. 27104 D6943-01 U0588A DP103-02 9760
Price/Kit (RMB) 964 224 676 152 350
Price/rxn (RMB) 19.28 2.24 13.52 3.04 7
RNaseA 冻干粉/室温 液态/室温 冻干粉/室温 液态/室温 液态/-20℃
Y Y Y Y N
Recovery 70~80% 50~80% 70~90% 70~85% 70-90%
Price/reac (RMB)
18.88 4.48 9.6 4.32 7
Fragment Size
70bp~10k 50bp~40k 50bp~20k 100bp~10k 50bp~50k
TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0 (50)
收率
Conclusion：
1.DNA回收率优于或与其它公司相当。
2.与其它公司相比较，价格合理。
DNA片段长度
11
9762市场竞争情况
Product QIAquick Gel Exteaction Kit (50) Gel Extraction Kit(50) NucleoSpin® Gel and PCR clean up TIANgel Mini Purification Kit(50) Company Qiagen Omega MN Tiangen Takara
8
片段回收纯化-9761、9762
片段直接纯化 切胶回收纯化 回收率计算： 9761 9762 TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit Ver.4.0 TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0
核酸分离纯化的原则
磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。
硅磁（Magnet ic Silic a Partic le）就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。
离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料（如DEAE，COO H）等，从而达到吸附核酸目的。
不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。
使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。
磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。
Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。
核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。
核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。
在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性;排除其他分子污染。
核酸分离与纯化的步骤大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。
每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。
1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。
细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。
(1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。
这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。
有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～> 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。
(2) 化学作用:在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相。
上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、Triton X-100 、Tween 20 、NP-40 、CTAB、sar-cosyl 、Chelex-100 等) 或强离子剂(异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍) 而获得。
核酸分离纯化-经典版
（五）核酸的鉴定与保存
2. 核酸的保存——RNA的保存
➢RNA样品溶于0.3 mol/L NaAc (pH5.2)或双蒸灭菌 水中，-70℃保存 ➢长期保存可以沉淀形式贮于乙醇中; ➢在RNA溶液中，加1滴0.2 mol/L VRC(氧钒核糖核苷 复合物)冻贮于-70℃,可保存数年。
➢ 保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
（五）核酸的鉴定与保存
2. 核酸的保存——DNA的保存
➢DNA样品溶于pH8.0的TE缓冲液中，4℃或-20℃保存， -70℃冰箱可保存数年。
➢TE的pH为8.0时，DNA的脱氨反应减少，pH低7.0时 DNA易变性
➢分离核酸最困难的是将与核酸紧密结合的蛋白质分 开，同时避免核酸降解。
（三）核酸的分离纯化
应该清除的杂质主要包括: 1.非核酸的大分子污染物
蛋白质、多糖及脂类物质等大分子物质 2.非目的的核酸分子
分离某一核酸分子时，其它核酸皆为杂质 3.加入的有机溶剂和某些金属离子
核酸分离纯化的基本方法
1.加入浓盐溶液（如NaCl）
（一）保持核酸分子一级结构的完整性
4.RNA酶（RNAase)抑制剂 （3) 肝素 （4）复合硅酸盐（Macaloid) （5）RNase阻抑蛋白（RNasin） （6）氧钒核糖核苷复合物 (Vanadyl-Ribonucleoside
Complex, VRC)
一、核酸分离、纯化原则
(二)尽量排除其它分子的污染，保证核酸样品的纯度 纯化的核酸样品不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂 或过高浓度的金属离子，蛋白质、脂类、多糖分子的 污染应降低到最低程度；无其它核酸分子的污染，如 提DNA分子时，应去除RNA分子。
核酸的分离纯化技术
核酸的分离纯化技术从细胞中提取核酸后，仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。
除去这些“杂质”的过程，也就是核酸提纯过程。
在核酸的分离纯化时，为防止核酸大分子的变性降解，必须在0～4℃的低温条件下操作。
核酸酶的水解作用，是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍，现普遍采用加入去污剂或加入EDTA、8-羟基喹啉、柠檬酸钠以除去核酸酶的激活剂Mg2+，就可以抑制核酸酶的活性，保证在提纯过程中核酸大分子的完整。
关于核酸分离纯化阶段中除去多糖、蛋白质及不同类型核酸之间分离的一些方法，分别介绍如下：（1）肝糖元、淀粉及粘多糖，由于其物理化学性质与核酸有许多相似之处，常在提取液中残存下来。
除去的方法常有：①取材前尽量减少组织中多糖的含量，如先使动物饥饿数天然后杀死，可使细胞内肝糖元大大减少。
②加入淀粉酶，将大分子多糖分解为小分子，在以后纯化步骤中逐渐被除去。
③在浓磷酸盐存在下，以2-甲氧基乙醇抽提核酸提取液，使多糖溶于下层水相，核酸在上面有机层中。
④以钙盐沉淀DNA，再以草酸钾处理，使之形成DNA钾盐回收，然后用离子交换法吸附DNA，使之与多糖分离。
（2）蛋白质的除去：由于核酸在细胞内以核蛋白体形式存在，不论采用哪种方法提取核酸，蛋白质都不同程度地存在于体系中。
因此，除去蛋白质是核酸分离纯化不可避免的步骤。
常用方法有下列几种：①加入去污剂如硫酸十二脂钠，从提取到分离纯化各阶段均可反复使用此法。
去污剂与氯仿法或苯酚法结合使用，效果更加理想。
②氯仿-戊醇或辛醇对提取液摇荡抽提，蛋白质在氯仿-水界面形成凝胶，离心后除去，核酸留在水溶液中。
此法在分离纯化中也常反复使用。
③苯酚水溶液抽提，在对氨基水杨酸等阴离子化合物存在下，DNA或RNA都可以进入水相，蛋白质则沉淀于酚层，然后取水相加入乙醇或2-乙氧基乙醇沉淀RNA 或DNA，残余的酚可用葡聚糖凝胶G-10或G-25除去。
（3）不同类型核酸的分离：两种类型核酸的制备过程中，DNA制品中混杂着少量RNA或RNA制品中混杂着少量DNA是经常发生的。
核酸提取纯化方法
核酸提取纯化方法
1. 电泳法：利用电泳技术将核酸从混合物中分离出来，再用某种方法将它从电泳胶中分离出来，从而获得纯化的核酸。
2. 离心分离法：利用离心力将核酸从混合液中分离出来，再用某种方法将它从离心液中分离出来，从而获得纯化的核酸。
3. 水解法：利用酶将核酸水解成小分子片段，再用某种方法将它们分离出来，从而获得纯化的核酸。
4. 硅胶柱法：将核酸溶液中的成分通过硅胶柱分离，从而获得纯化的核酸。
5. 氯仿沉淀法：将核酸溶液中的成分用氯仿沉淀，从而获得纯化的核酸。
核酸纯化方大全
核酸纯化方大全一：酚氯仿抽提—经典的纯化技术酚氯仿抽提可算得上是核酸分离纯化技术中最经典的方法之一，该方法是由冷泉港实验室中的研究人员首先提取的，并被大量的科研究工作者进行改良使用。
其原理是：在酚氯仿的共同作用下，蛋白质会被变性，形成不溶解的物质。
由于蛋白质的密度小于酚而大于水，所以离心后，会在酚相和水相于之间，形成蛋白质中间层，从而有效地将蛋白质和核酸分离开来。
由于DNA的抽提方式有很多，这个技术并没有被试剂公司接受。
但是另一方面，使用酸性酚氯仿抽提RNA的纯化方式却被广泛接受（因为有效的RNA纯化方式并不多），其纯化原理为：在酸性酚的条件下，DNA溶解于有机相，RNA溶解于水相，而蛋白质则在中间相；从而有效地将DNA，RNA和蛋白质一起分开。
该技术的创始人是Chomczynski。
RNA-Solv Reagent （Omega Bio Tek）就是这一技术的改良产品。
这一技术的最大优点就是经济，灵活。
二：盐析法—经济型核酸抽提技术该技术原理是在组织或细胞裂解液中，加入高浓度盐（NaCl或NH4Cl，KI，KAC）来沉淀去除蛋白质，从而得到高纯度的基因组DNA。
Omega公司在这一方面有着非常卓越的产品。
基于这一技术的产品，其名称都有’SQ’。
该系列的产品最大的优点就是：经济和灵活，是目前提取基因组DNA最经济的试剂盒。
此外，Omega在首次研发了基于这一技术的DNA，RNA和蛋白质共提取的试剂盒，这一个目前最方面最快速的DNA，RNA和蛋白质共提取的试剂盒。
三：玻璃珠—第一个固液相核酸纯化技术在高离液盐（盐酸胍，异硫氰酸胍，NaI）条件下，玻璃珠会同核酸发生吸附反应，而在低盐条件下，核酸又可以被洗脱下来。
但是玻璃珠的残留以及干燥问题影响了这一技术的运用。
至目前为止，大部分的公司已经去除这个纯化技术。
早期的Omega也有许多基于这个技术的试剂盒，但是今天Omega公司只在凝胶回收中保留了这个试剂盒（Ultra-Sep Gel Extraction Kit）。
核酸的纯化
核酸的纯化核酸的纯化在分子克隆的所有操作中，最基本的操作也许要算核酸的纯化了。
其关键步骤是去除蛋白质，通常只要用酚：氯仿抽提核酸的水溶液即可。
每当在进行下一步操作之前需要把这一步克隆操作所用的酶灭活并去除时，都可采用这种抽提的方法。
然而如果要从各种复杂分子的混合物如细胞裂解液中纯化核酸，则需一些附加办法。
在这些情况下，通常是在有机溶剂抽提之前先用某些蛋白水解酶去掉大部分蛋白质，这些广谱的蛋白水解酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K .用酚：氯仿抽提从核酸溶液中去除蛋白质的标准方法是先用酚：氯仿(可含有0.1%的8-羟基喹啉)抽提后再用氯仿抽提。
这个方法的好处是使用两种不同有机溶剂去除蛋白质比用单一有机溶剂效果更佳。
此外，酚虽能有效地使蛋白质变性，却不能完全抑制RNA酶的活性，酚还能溶解带有长poly(A)的RNA分子(Brawerman et al.1972)。
用酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)混合液抽提能够使这两个问题同时得以解决。
随后用氯仿抽提则可去除残留在核酸制品中痕量的酚。
通过乙醚抽提去除酚已广泛沿用多年，看来在目前的常规操作中已不必要或者不推荐使用。
(1)将样品转移到一只聚丙烯离心管中，加入等体积的酚：氯仿。
如果酚未被充分平衡至pH值为7.8-8.0，核酸将趋于分配到有机相。
(2)混合管中的内容物使之成为乳浊液。
(3)室温下用离心管可承受最大转速的80%的速度离心1min，若有机相与和水相不能充分分开，延长时间重新离心。
一般情况下水相处于上层，然而当水相中盐浓度(>0.5mol/L)或蔗糖浓度(>10%)过高而密度较大时，水相可能会在下层。
由于在平衡酚时加了8-羟基喹啉(见附录1)，其黄颜色可使有机相易于辨别。
(4)用移液管把水相转移到另一离心管中，体积较小(<200ul)时可用带一次性吸头的自动移液器操作。
弃去两相间的界面层和有机相。
为了获得最高的收率，可按下法对有机相和介面层进行“回提”：按上述方法第一次移出水相后，在剩余的有机相和介面层中加入等体积TE(PH7.8)，充分混匀，按第3步离心分离两相，合并两次得到的水相，继续按第5步操作。
核酸试剂操作方法
核酸试剂操作方法核酸试剂是用于提取、纯化和测定核酸分子的化学试剂。
核酸试剂的操作方法可以大致分为以下几个步骤：样品处理、溶解、纯化、测定等。
下面我将详细介绍每个步骤的操作方法。
1. 样品处理：在进行核酸提取前，首先需要对样品进行处理。
根据实验的目的和样品的性质，可以选择不同的样品处理方法。
比较常见的样品处理方法包括：细胞裂解、血浆或血清的凝固、骨髓抽提等。
在样品处理过程中要注意采用无菌操作，避免污染。
2. 溶解：将处理后的样品或沉淀加入适当的溶解液中，使核酸完全溶解。
常用的核酸溶解液包括：TE缓冲液、含EDTA的去离子水等。
在样品溶解时，需轻轻摇晃或轻轻慢搅拌，避免生成气泡。
3. 核酸纯化：核酸溶解后，需要进行纯化以去除与核酸有关的杂质，如蛋白质、盐类和酶等。
常用的核酸纯化方法有酚-氯仿法、硅胶柱法、离心柱法等。
不同的纯化方法适用于不同的样品类型和实验需求。
在纯化过程中，需要根据试剂的使用说明进行操作，以保证纯化效果。
4. 核酸测定：核酸纯化后，可以通过一系列测定手段来确定核酸的浓度和纯度。
测定核酸浓度和纯度的方法有：比色法、荧光法、紫外吸收法等。
在进行核酸测定时，需要根据试剂的使用说明和仪器的操作步骤进行操作，确保结果的准确性。
除了上述操作步骤外，核酸试剂的操作还需要注意以下几点：1. 实验室条件：进行核酸实验需要在洁净、无菌的实验环境下进行，避免外源性DNA和RNA的污染。
2. 消毒处理：实验前需要将操作台面、试剂瓶盖、离心管等实验器材进行消毒处理，以避免细菌、病毒的污染。
3. 无菌操作：在进行核酸提取和纯化操作时，需采用无菌技术，包括用纯化的试剂和器皿、带手套、使用滤芯枪头等。
4. 试剂保存：核酸试剂的保存条件需根据试剂的要求进行，常见的存储条件包括-20保存、避光保存等。
5. 操作技巧：在进行核酸试剂操作时，需熟悉试剂的用途和使用方法，并掌握相关实验技巧，以保证试剂的有效使用。
总之，核酸试剂的操作方法涉及样品处理、溶解、纯化和测定等步骤。
核酸的纯化主要方法
分离纯化核酸时的注意事项：防止物理因素的降解：1.尽量简化操作步骤，缩短提取时间，以减少变性机会。
2.防止热变性，避免高温。
一般0-4℃。
3.防止机械剪切作用动作轻缓；搅拌温和；加山梨醇等增加渗透压。
防止化学因素的降解：1.避免强酸强碱作用，抽提液pH要保持在4-10之间。
2.保持提取液一定的离子强度，以调节核酸的溶解度和保持二级结构的稳定性。
防止核酸酶的降解防止DNA酶的降解：通常加入酶的抑制剂、蛋白质的变性剂和去垢剂来实现。
1.加入金属离子螯合剂抑制DNA酶2.去垢剂及某些RNase抑制剂，对DNA酶也有一定抑制作用。
防止RNA酶的降解：RNase很难抑制，且无处不在，汗液、唾液中均有。
很耐热，80℃处理15分钟不能灭活。
操作注意事项：1.带一次性手套、口罩；2.器皿试剂高压灭菌或用DEPC（乙二基焦炭酸）处理。
但含有Tris的试剂不宜用，因DEPC可与胺类迅速发生化学反应。
3.尽早除去蛋白质（含RNase）,并加抑制剂。
常用的抑制RNase活性的方法有：1.核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin,人胎盘中分离的一种蛋白）优点：效果好，不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
使用注意事项：（1）置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DDT）的50%甘油中，-20℃储存。
（2）最大活性的发挥要求有巯基试剂。
（3）冻融数次后应弃之不用。
（4）在变性裂解哺乳动物细胞提取RNA的初始步骤中不宜使用，在其后RNA纯化步骤中应用。
用酚抽提可除去蛋白质抑制剂，故纯化过程中应补加。
2．糖核苷复合物（vanadyl-ribinucleaside complex）由氧钒（IV）离子和4种核糖中的任意一种形成的复合物，是一种过渡态类似物，它能与多种RNase结合并几乎能百分百地抑制RNA酶的活性。
缺点：强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译。
可用0.1%羟基喹啉的苯酚（用0.01mol/L E(pH>7.8)平衡）多次抽提除去。
4种常用抗体分离纯化工艺介绍
4种常用抗体分离纯化工艺介绍抗体分离纯化的主要目的是将抗体与工艺相关杂质和产品相关杂质分离，最终获得高纯度、低潜在危害的抗体药物。
纯化过程中需要去除的工艺相关杂质包括细胞、细胞碎片、宿主细胞蛋白、宿主细胞核酸及培养基与加料液成分，需去除的产品相关杂质主要包括抗体片段和聚集体。
纯化过程还需具备足够的病毒灭活去除能力，以去除宿主细胞自身表达的内源病毒样颗粒和未及时发现的外源病毒。
大多数工艺利用ProteinA来捕获抗体，并利用了至少1个离子交换层析作为精纯步骤，仅少数工艺使用了疏水、羟基磷灰石和分子筛层析等步骤。
下图中显示了一个常见的抗体纯化工艺。
反应器收获液首先经过离心和过滤，去除细胞和细胞碎片，然后经过ProteinA层析捕获抗体,捕获后的抗体经低pH孵育后，通过两个离子交换层析进行精纯,然后进行病毒过滤，最后换液并调整抗体浓度，得到抗体原液。
工艺中的低pH孵育和病毒过滤是两个正交的专属病毒去除灭活步骤。
这两个专属步骤与层析步骤一起，可大大降低原液中可能存在的病毒数目。
工艺中的低pH孵育和病毒过滤是两个正交的专属病毒去除灭活步骤。
这两个专属步骤与层析步骤一起，可大大降低原液中可能存在的病毒数目。
抗体分离纯化工艺其中最常用的四种纯化方法，也就是今天的主角“四大名捕”。
我们接着往下看吧。
1、Protein A从原核金黄色葡萄球菌细胞壁分离的结合受体Protein A(~56kDa)与不同免疫球蛋白同型的Fc区以及人VH3家族的Fab区具有高度的亲缘关系。
进一步研究表明，Protein A仅限于与IgG亚类IgG1、IgG2和IgG4结合，与IgG3的反应性很低，约占总IgG的8%。
天然的Protein A有5个IgG结合结构域和未知功能的非Fc结合域，结构示意图如下：Protein A的结构域示意图此结构的Protein A大量结合IgG的同时，其非Fc结合域能结合部分杂蛋白，导致洗脱下来的IgG纯度不够，因此科学家利用基因工程的方法克隆Protein A 的基因并进行改造，得到重组型Protein A，其非特异性结合明显降低。
简述核酸分离纯化的主要步骤。
简述核酸分离纯化的主要步骤。
在生物实验中，核酸分离纯化可谓是一个神奇的过程，像是把“混乱的书房”整理成一间“整洁的书房”，让我们能从一堆杂乱的物质中找出我们需要的那一部分。
要想搞清楚这个过程，我们得从头说起。
先别急，跟我来，我们一块儿来聊聊这些神奇的步骤。
1. 核酸提取的开篇首先，我们得“扒拉扒拉”样品。
也就是说，要从样本里提取出核酸。
这一步就像是把原料放到面粉筛里筛选一样，我们得把细胞破坏开，释放里面的核酸。
这里用的工具有点像“万用刀”，既可以是研磨机，也可以是液氮冷冻破碎机，总之就是要让细胞壁的“防线”彻底崩溃。
像打破冰层一样，把里面的核酸暴露出来。
1.1 细胞破碎：好比“猛兽入笼”细胞破碎的过程，听起来就像是猛兽入笼，猛烈而直接。
为了完成这个步骤，我们可以使用各种各样的试剂，比如说细胞裂解液。
这个液体就像是一把万能钥匙，能把细胞膜一举撬开，释放里面的核酸。
当然，有时候我们也可以用物理手段，比如说搅拌、超声波破碎等，像摇晃沙袋一样，把核酸搞出来。
1.2 去除杂质：清除“杂草”一旦细胞壁被破坏，里面的核酸和其他成分混杂在一起。
接下来，我们要做的就是清除那些“杂草”。
这时候我们会用到一些化学试剂，比如说酚/氯仿混合液。
这些试剂像是高效的“除草剂”，能够把蛋白质和其他杂质从核酸中分离出来。
我们会把样品离心分层，这样就能把核酸分离出来。
记得，离心就像洗衣机的脱水功能，快速旋转让东西分开。
2. 核酸纯化的妙招接下来是核酸纯化的部分了。
这个过程可以说是给核酸做一个“美容”，让它看起来干净又光鲜。
纯化的方式有很多，其中最常用的是柱子纯化。
我们把样品经过特制的柱子，就像是把泥土过滤掉，把精华留下来一样。
柱子的材料有一种特殊的性质，能吸附核酸，而把其他杂质排除在外。
2.1 柱子纯化：像“过滤咖啡”柱子纯化的过程其实就像是过滤咖啡。
你把咖啡粉放到过滤纸里，然后慢慢滴下清水，最终只剩下干净的咖啡液。
类似地，我们把核酸溶液通过柱子，里面的核酸会被柱子吸附，而其他的杂质会被洗掉。
四大经典核酸纯化方法
四大经典核酸纯化方法核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。
目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法，这几种方法各有其优势和劣势。
一、PC抽提法PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。
且每次抽提都会损失部分核酸。
另外，体系太粘稠的坏处是，蛋白质难以彻底去除，以及基因组DNA 会断裂得更厉害，所以要注意裂解液与样品的比例。
PC 抽提的另外一个用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA 的特点，在RNA 抽提时获得DNA 残留极少的RNA。
不过有一点要提醒的是，某些植物样品，在去除某些杂质之前，是不能使用PC 抽提的，否则核酸必定降解。
PC抽提最大的优势是成本低廉，对实验条件要求较低，对于经费紧张的实验室较为实用。
二、高盐沉淀法高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法，同样也是一个非常不错的方法。
与PC 抽提方法相比，除了纯度的稳定性可能要低一点外，该方法几乎克服了PC 抽提的所有缺点。
更快、更轻松的去除蛋白质所可以用于大规模抽提，但其不足之处是纯度(蛋白质残留) 不够稳定，蛋白质的沉淀效率在4℃会更好一些。
三、离心柱法离心柱纯化法，是目前试剂盒提取广泛应用的方法。
其最大特点是受人为操作因素影响小，纯度的稳定性很高(虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。
加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中，与含有核酸的柱子完全是分开的，所以洗涤更彻底。
其致命弱点是样品过量，提取效率较低，且需要反复离心，操作复杂，成本也较高。
四、生物磁珠法生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面，通过介质对核酸的吸附，在外加磁场下使核酸附着于磁珠定向移动，从而达到固液分离纯化的作用。
威斯腾生物400-675-6758。
核酸分离纯化的基本方法和原理
核酸分离纯化的基本方法和原理嘿，朋友们！今天咱就来聊聊核酸分离纯化这档子事儿。
你说这核酸啊，就像是一个神秘的小宝贝，藏在各种细胞啊、组织啊里面，咱们得想办法把它给找出来，还得弄得干干净净的。
那怎么弄呢？这就好比你要从一堆乱七八糟的杂物里找出你最喜欢的那个小玩具。
首先呢，得把细胞啥的给弄破，让核酸能跑出来。
这就像是打开一个装满宝贝的盒子，得有个办法把盒子弄开才行。
然后啊，就有各种方法来把核酸和其他那些杂七杂八的东西分开。
比如说，有的方法就像一个超级厉害的筛子，能把核酸给筛出来，把其他的都挡在外面。
你想想看，是不是很神奇？这里面还有些窍门呢！就像你挑苹果，得挑又大又红的。
咱们分离核酸也得选对方法，不然可就弄不好啦。
而且啊，不同的样本，就像是不同口味的糖果，处理起来还不太一样呢。
比如说，从血液里分离核酸和从植物里分离就差别挺大。
这就好像你要从一碗汤里捞东西和从一堆沙子里找东西，能一样吗？当然不一样啦！在这个过程中，可不能马虎。
就像你搭积木，一块没放好，整个就可能垮掉。
每一步都得小心翼翼的，不然得到的核酸就不纯净啦，那可就白忙乎了。
而且啊，这技术就像我们的生活一样，在不断进步呢！以前可能得费好大的劲才能做到的事儿，现在有了新的方法、新的工具，变得容易多啦。
咱再想想，要是没有这些厉害的核酸分离纯化技术，那好多研究啊、诊断啊不都没法进行啦？就好像你没有了眼睛，还怎么看清楚这个世界呀。
所以说呀，核酸分离纯化可真是个了不起的事儿呢！它让我们能更好地了解生命的奥秘，能帮助医生更快地诊断疾病，能让科学家们做出更多的发现。
这难道不是很神奇、很厉害吗？咱可得好好感谢那些研究这些技术的人，是他们让我们的生活变得更美好呀！总之，核酸分离纯化就是这样一个充满挑战又超级有趣的领域，等着我们去探索、去发现呢！。
核酸纯化方法评价
核酸纯化方法评价核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取的核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。
目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法，这几种方法各有其优势和劣势。
PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。
且每次抽提都会损失部分核酸。
另外，体系太粘稠的坏处是，蛋白质难以彻底去除，以及基因组 DNA 会断裂得更厉害，所以要注意裂解液与样品的比例。
PC 抽提的另外一个用途是，利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特点，在 RNA 抽提时获得 DNA 残留极少的 RNA。
不过有一点要提醒的是，有些植物样品，在去除某些杂质之前，是不能使用 PC 抽提的，否则核酸必定降解。
PC抽提最大的优势是成本低廉，对实验条件要求较低，对于经费紧张的实验室较为实用。
高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法，同样也是一个非常不错的方法。
与 PC 抽提方法相比，除了纯度的稳定性可能要低一点外，该方法几乎克服了 PC 抽提的所有缺点。
更快、更轻松去除蛋白质所伴随的好处是，可以用于大规模抽提，不足是纯度 (蛋白质残留) 不够稳定。
蛋白质的沉淀效率在 4℃会更好一些。
离心柱纯化法，是目前试剂盒提取广泛应用的方法。
其最大特点是受人为操作因素影响小，纯度的稳定性很高 (虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。
加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中，与含有核酸的柱子完全是分开的，所以洗涤更彻底。
其致命弱点是样品过量，提取效率较低，且需要反复离心，操作复杂，成本也较高。
生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面，通过介质对核酸的吸附，在外加磁场下使核酸附着于磁珠定向移动，从而达到固液分离纯化的作用。
与其他几种方法相比，生物磁珠法具有很多无法比拟的优势，如提取效率高（微量材料即可提取）、纯化纯度高（完全与蛋白盐等杂质分离）、分离快速（磁分离只需几秒）、可自动化操作（加液后完全机器自动化操作，无需人力）、高通量提取（可同时完成几十甚至几百个样品提取）等。
核酸的分离与纯化
实验室常见样本核酸提取方法
——全血样本核酸提取方法：
1、 酚氯仿法； 纯度好，产量较高，完整性高 2、磁珠法； 纯度好，产量较高，完整性较高 3、 硅胶柱吸附法； 纯度好，产量较低，完整性一般 4、加热煮沸法 纯度差，产量较低，完整性差 前处理：红细胞裂解液or低渗液去除红细胞 应用于：融合基因检测，遗传病检测等
——盐析法-NaAC
1、细胞裂解同前述；并加入蛋白酶K消化 2、加入1/10体积的3mol/L的NaAC，与1体积的细胞裂解液混合，震 荡混匀，-20℃孵育 ~15 min；台式离心机最大速度离心15— 20min； 3、小心转移上清，同前步骤用乙醇沉淀法进一步纯化。
核酸提取方法——分离与纯化
——盐析法
产量较低，但方法简单，比较酚氯仿方法无化学危害；
同样不适合大规模自动化提取。
提取好的DNA用蛋白酶处理纯度会提高。
核酸提取方法——分离与纯化
——硅胶吸附法
1、细胞裂解和酶处理同前述；
2、处理好的裂解液转入硅胶离心柱，高速离心，利用硅胶可以吸附核酸 而不能与其它物质如蛋白质，脂类等结合的特点，洗脱这类杂质；
一般需要0.2-1ml的血清进行核酸提取。
实验室常见样本核酸提取方法
——血清样本核酸提取方法：
血清中微生物来源DNA提取方法： 1、 加热煮沸法； A、 高速离心富集病原体颗粒； B、弃上清，加入表面活性剂等，95-100℃10分钟； C、高速离心，DNA游离于上清，蛋白质等杂质位于管底。 纯度极差，但成本很低，手工操作重复性在临床可接受范围。 2、磁珠法； 成本较高
——酚氯仿法
◦ 酚的准备 重蒸酚(去除可引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA 的交联的醌类氧化物）； 加入8一羟基喹咛，以防止酚氧化，（酚氧化发黄，而 氧化的酚可引起核酸链中磷酸二酯键断裂或使核酸链交 联）； 水饱和酚、平衡PH（大于7.8）（不饱和的酚能与15%其 提及的水互溶，从而降低水相中核酸产量）
核酸提取与纯化
核酸提取与纯化引言核酸提取与纯化是生物学研究中常用的操作步骤之一。
核酸提取是指从生物样本中分离出DNA或RNA分子，纯化则是指将提取得到的核酸分子除去杂质，获得纯净的核酸样品。
本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项。
核酸提取原理核酸提取的基本原理是利用生物样本中DNA和RNA分子与其他组分（如蛋白质、细胞壁等）之间的化学或物理性质的差异，将核酸分子从样本中分离出来。
常见的提取方法有有机溶剂法、盐析法和离心法等。
有机溶剂法有机溶剂法是一种常用的核酸提取方法。
其原理是利用有机溶剂（如酚-氯仿混合液）与生物样本中的其他组分之间的亲和性差异，将核酸分子从样本中提取出来。
这种方法操作简单，适用于提取DNA和RNA。
具体操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞培养物或组织样本。
2.加入细胞裂解缓冲液，破坏细胞膜、核膜等结构，释放核酸分子。
3.加入酚-氯仿混合液，与细胞裂解液混合，形成两相体系。
4.离心分离两相，核酸分子会在有机相中分配到有机相中，而其他杂质会在水相中。
5.取出有机相，加入异丙醇或乙醇等沉淀剂，沉淀核酸分子。
6.离心沉淀，弃去上清液。
7.用乙醇洗涤沉淀，去除残留的盐和有机溶剂。
8.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
盐析法盐析法是利用核酸分子与盐溶液中的离子交互作用的原理进行分离。
该方法适用于高含量的核酸样本（如DNA或RNA）。
其操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入适量的盐溶液，使盐浓度达到一定程度。
3.离心分离沉淀，核酸分子会与高浓度盐溶液结合形成沉淀，而其他杂质会在上清液中。
4.取出沉淀，用盐溶液洗涤核酸，去除杂质。
5.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。
离心法离心法是一种快速分离核酸的方法。
其原理是利用离心力将核酸分子从样本中沉淀下来。
离心法适用于小样本量和快速提取的情况。
具体步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。
2.加入高盐缓冲液，增加核酸与其他组分之间的亲和性差异。
体外诊断中的核酸提取纯化方法及原理介绍
体外诊断中的核酸提取纯化⽅法及原理介绍⽬前，新冠疫情在全球席卷开来，对于如何确认是否感染，使⽤体外诊断核酸检测⽅法仍是不可或缺的⼿段。
体外诊断，是指在⼈体之外，通过对⼈体样本(⾎液、体液、组织等)进⾏检测⽽获取临床诊断信息，进⽽判断疾病或机体功能的产品和服务。
⽽检测⼈体样本的关键步骤之⼀，即是样本中的核酸（DNA和RNA）纯化。
核酸纯化的⽅法是影响所提取核酸质量的重要因素，只有⾼质量的核酸才能满⾜下游的各种应⽤。
核酸是分⼦⽣物学的基础，⽽核酸提取是核酸检测，乃⾄于整个分⼦⾏业绕不过去的门槛，很多时候⼀份样本的核酸提取的好坏直接决定了检测结果的有效性。
01核酸的基础知识核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），其中RNA⼜可以根据功能的不同分为核糖体RNA(r RNA)，信使RNA（m RNA）和转移RNA（t RNA）。
DNA主要集中在细胞核内，线粒体和叶绿体中，⽽RNA主要分布在细胞质当中。
02为什么需要核酸提取？核酸提取为⼤量⼴泛研究和应⽤提供了答案（例如：克隆、qRT-PCR和全基因组、转录组范畴中的⼆代测序技术），获得的核酸可以多种⽅式进⾏应⽤。
准确的研究⽬的，决定了要提取的核酸类型；核酸的应⽤往往影响提取⽅法的选择。
（例如：标准的End-point PCR反应，不需要与全基因组测序实验相同的DNA质量）为了确定最佳的研究⽅法，有必要清楚了解核酸的下游应⽤以及任何与样品类型相关的潜在限制。
（例如，临床样品采集量往往有限，核酸提取存在挑战。
）虽然依据样品类型，细胞裂解⽅式不同，但整体的核酸提取核⼼原则不变：细胞或组织样品裂解，去除⾮核酸污染物（例如，蛋⽩质等）。
03核酸提取纯化原则和要求1、保证核酸⼀级结构的完整性2、排除其它分⼦的污染（如提取DNA时排除RNA的⼲扰）3、核酸样品中不存在对酶有抑制作⽤的有机溶剂和过⾼浓度的⾦属离⼦；4、其它⽣物⼤分⼦如蛋⽩质、多糖和脂类分⼦的污染应降到最低程度；5、排除其它核酸分⼦的污染，如提取DNA分⼦时应去除RNA，反之亦然。
核酸的分离与纯化
By Piotr Chomczynski and Nicoletta Sacchi 1987
核酸提取方法——分离与纯化
——盐析法-miller
1、细胞裂解同前述；
2、加入2体积的6mol/L的NaCl，与3体积的细胞裂解液混合，震荡混匀， 2500rmp离心15—20min，此时DNP溶解于上清中，蛋白质、RNA 等位于离心管底部；
——RNA提取应该注意的问题：
无处不在的RNase，比较耐高温，不易失活；
解决的办法： 1、用于分离RNA的耗材，如有可能必须采用高压灭菌；
2、用于分离RNA的试剂尽量采用DEPC水配制，（DEPC是RNase的强 烈抑制剂）
3、操作人员务必佩戴一次性乳胶手套操作RNA的提取。
4、RNA提取体系中两种著名的RNA酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基 乙醇
核酸提取方法——分离与纯化
——盐析法
产量较低，但方法简单，比较酚氯仿方法无化学危害； 同样不适合大规模自动化提取。 提取好的DNA用蛋白酶处理纯度会提高。
核酸提取方法——分离与纯化
——硅胶吸附法
1、细胞裂解和酶处理同前述；
2、处理好的裂解液转入硅胶离心柱，高速离心，利用硅胶可以吸附核酸 而不能与其它物质如蛋白质，脂类等结合的特点，洗脱这类杂质；
RNA：细胞质中，mRNA，rRNA， tRNA
通常与蛋白质结合，形成RNP
核酸的理化性质
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水， 不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离 酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中， DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
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四大经典核酸纯化方法
核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。
目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法，这几种方法各有其优势和劣势。
一、PC抽提法
PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。
且每次抽提都会损失部分核酸。
另外，体系太粘稠的坏处是，蛋白质难以彻底去除，以及基因组DNA 会断裂得更厉害，所以要注意裂解液与样品的比例。
PC 抽提的另外一个用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA 的特点，在RNA 抽提时获得DNA 残留极少的RNA。
不过有一点要提醒的是，某些植物样品，在去除某些杂质之前，是不能使用PC 抽提的，否则核酸必定降解。
PC抽提最大的优势是成本低廉，对实验条件要求较低，对于经费紧张的实验室较为实用。
二、高盐沉淀法
高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法，同样也是一个非常不错的方法。
与PC 抽提方法相比，除了纯度的稳定性可能要低一点外，该方法几乎克服了PC 抽提的所有缺点。
更快、更轻松的去除蛋白质所可以用于大规模抽提，但其不足之处是纯度(蛋白质残留) 不够稳定，蛋白质的沉淀效率在4℃会更好一些。
三、离心柱法
离心柱纯化法，是目前试剂盒提取广泛应用的方法。
其最大特点是受人为操作因素影响小，纯度的稳定性很高(虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。
加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中，与含有核酸的柱子完全是分开的，所以洗涤更彻底。
其致命弱点是样品过量，提取效率较低，且需要反复离心，操作复杂，成本也较高。
四、生物磁珠法
生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面，通过介质对核酸的吸附，在外加磁场下使核酸附着于磁珠定向移动，从而达到固液分离纯化的作用。
威斯腾生物400-675-6758。