高效液相色谱仪的综述
论文 高效液相色谱在药物分析中的应用
高效液相色谱法在药物分析中的应用与发展摘要：色谱分析作为重要的分离分析技术，已成为药物研制开发、生产单位、药品检验部门及医院临床检验等各个领域中药物质量控制必不可少的方法和技术。
高效液相色谱法是20世纪60年代末70年代初出现的分析速度快、分离效率高、操作自动化的新型色谱分析方法。
它已逐渐成为药物分析领域中重要的分析手段及主要制备方式之一。
关键词：高效液相色谱法药物分析1.前言高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography , HPLC），又称“高压液相色谱法”或“高速液相色谱法”，是20世纪60年代末，在经典液相色谱的基础上引入气相色谱的理论与实验方法，并加以改进而发展起来的一种重要分离分析方法。
HPLC采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度在线检测器等技术，具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高、色柱可以反复使用、流动相可选择范围宽、流出组容易收集、适用范围广和安全等优点，特别适合挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物的分离分析测试，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域错误!未找到引用源。
近年来，高效液相色谱法在药物分析中发挥着越来越重要的作用，主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度以及测定有效成分或主要成分含量，世界各国已将该法收载于药典。
本文就高效液相色谱法在药物分析研究中的应用和发展综述如下。
2.高效液相色谱法在药物分析中的应用2.1高效液相色谱法在药物鉴别中的应用在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。
如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。
头孢拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。
王维剑[7]王维剑,张军仁,庞华.替莫唑胺含量测定方法的研究[J].药物分析杂志,2003 ,23 (5) :344.等以ODS柱，甲醇-0.5%乙酸(1:9)为流动相，DVD检测器，波长329 nm测定了一种新型抗肿瘤药替莫唑胺(temzolo-mide)，为申报新药提供了数据。
高效液相色谱法在药品检验中的特点和价值分析
高效液相色谱法在药品检验中的特点和价值分析摘要：高效液相色谱法是一种广泛应用的检测方法，它使得总体检测更加灵敏、高效、检测效果明显，具有广泛的应用前景。
为推动药品生产的规范化，本文对高效液相色谱法的原理、特性、高效液相色谱法技术在药品检验中的应用进行了综述。
关键词：高效液相色谱；药品检验；特点；定价；目前，我国药品生产企业的质量管理受到了较大的制约。
随着现代医学的迅速发展，各种药物检测技术也随之产生。
药品检验是药品安全管理的重要环节，它涉及药品质量、成分、不良反应、理化、安全、缺陷等方面的检测。
目前，常用的方法有：毛细管电泳法、薄层扫描法、分光光度法、高效液相色谱法等。
其中，高效液相色谱法以可操作性强、适用范围广、灵敏度高、结果测定速度快等优势得到了快速发展和应用【1】。
本文主要介绍 HPLC技术在药品检验中的应用，以提高检测效率，减少误差。
高效液相色谱法属于色谱法中的一种，主要将液体作为流动相，将其泵入到装有固定相的色谱柱之中，通过对比色谱柱信息，检验出药品中的各种成分，并实现对各成分的化学分析，这一技术被广泛应用于药品检测中，极大地缩短检测时间。
1高效液相色谱法原理及特点与以往常规液相色谱法相似，但其在操作时引入高压输液泵，相较于常规液相色谱法来讲，能有效地提高检测的准确度和工作效率，有效提升药学检验水平。
此外，高效液相色谱法采用同一个色谱条件对药品中的多个成分进行分析，不易受外部因素影响，有效提高了分离效率，同时，该方法具有快速、高效、经济、成本低廉、适用范围宽、误差小等特点，能有效地提高测试精度，满足不同的测试要求，具有很好的推广价值【2】。
2高效液相色谱法在药品检验中的应用价值2.1药品中有效成分的测定药品成分是影响药品价格的主要因素，由于药品中的活性成分种类繁多，它们的药理作用机制也各不相同，因此在检测过程中要确定其有效成分，而常规的方法由于操作复杂、工作压力大，很容易产生误差。
高效液相检验法的应用与开展，能够通过信息技术手段对药品进行批量处理，提高药效，并通过对比色谱柱信息，正确测定出药品有效成分，减少了人工差错，提高了测定的准确性，为今后的检验工作提供了便利【3】。
高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用
食品科技高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用刘 姝（江苏省生产力促进中心理化测试服务中心，江苏南京 210042）摘 要：近年来，我国食品安全问题日益突出，食品农兽药残留检测作为保证食品安全的重要手段，具有十分重要的作用。
高效液相色谱法是一种迅速、灵敏、选择性高的检测方法，因操作简便、分离效率高等特点，在食品农兽药残留分析中得到广泛应用。
本文综述了高效液相色谱法在农药兽药残留分析中的应用，主要介绍了高效液相色谱在食品中农兽药残留检测中的作用和检测方法，以供相关人员参考。
关键词：高效液相色谱；食品；农兽药残留；检测Application of High Performance Liquid Chromatography in the Detection of Agricultural and Veterinary Drug Residuesin FoodLIU Shu(Jiangsu Provincial Productivity Promotion Center Physical and Chemical Testing Service Center,Nanjing 210042, China)Abstract: In recent years, China’s food safety issues have become increasingly prominent, the detection of residues of agricultural and veterinary drugs in food plays a very important role as an important means to ensure food safety. High performance liquid chromatography is a rapid, sensitive and selective detection method. It is widely used in the analysis of agricultural and veterinary drug residues in food because of its simple operation and high separation efficiency. This paper reviewed the application of high performance liquid chromatography in the analysis of pesticide and veterinary drug residues, mainly introduced the role and detection methods of high performance liquid chromatography in the detection of agricultural and veterinary drug residues in food, for the reference of relevant personnel.Keywords: high performance liquid chromatography; food; residues of agricultural and veterinary drugs; detection近年来，随着人们对食品安全关注度的不断提高，食品中农兽药残留问题成为公众关注的焦点。
综述-高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展
高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展摘要：代谢组学是对一个生物系统的细胞在给定时间和条件下所有小分子代谢物质的定性定量分析, 从而定量描述生物内源性代谢物质的整体及其对内因和外因变化应答规律的科学。
而高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）作为代谢组学中一种重要的分离检测方法，在代谢组学中有着方方面面的应用。
本文介绍代谢组学中的高效液相色谱-质谱联用技术，并从药物分析、生理病理代谢、临床诊断标志物和细胞鉴定等方面介绍高效色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用。
关键词：高效液相色谱-质谱联用技术；代谢组学代谢组学的研究目的就是从尿液、血浆、血清、唾液和胆汁等生物体终端样本中检测代谢物，或跟踪代谢水平整体的动态变化，提取“组学”信息，以此来反映生物体在外源刺激作用下的体内生物学过程变化情况。
代谢组学研究的基本流程包括样品采集、预处理、代谢组分析、数据分析以及研究结果的解释与应用等。
1.检测工具其中的样品采集分离与分析离不开分离检测工具。
常用的分离检测工具包括色谱(Chromatography)、质谱(Mass Spectrometry，MS)、核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)等。
【1】1.1核磁共振（NMR）NMR快速、选择性好,其样品处理简单且不造成破坏,只要含氢的代谢物都可以被检测,即可以对所有的分析对象达到无歧视分析。
对样品无损伤且重复性好,能够广泛应用于药物工业和病人的尿、血样分析。
样本制备简单且易自动化。
但是复杂混合物的NMR谱的解析非常困难。
对全面的代谢谱图分析, NMR最大的缺陷是灵敏度相对较低, 从而使得它不适合分析大量的低浓度代谢物。
【2】所需硬件投资也比较大1.2色谱（Chromatography）气相色谱(Gas Chromatography，GC)广泛用于微量、痕量组分的分析。
但是，气相色谱受组分挥发性和热稳定性的限制，需对样品进行衍生化处理。
高效液相色谱分离与检测技术的进展与创新
高效液相色谱分离与检测技术的进展与创新概述高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分离与检测技术，已经在广泛的科学领域中得到了广泛的应用。
本文将对高效液相色谱分离与检测技术的进展与创新进行综述，并探讨其在不同领域中的应用。
一、高效液相色谱的基本原理高效液相色谱是以液相作为固定相的分离技术。
其基本原理是将样品溶解在流动相中，通过与固定相之间的相互作用来实现样品的分离。
高效液相色谱的固定相种类繁多，不同种类的固定相可以实现对不同性质样品的选择性分离。
二、高效液相色谱的发展与创新1. 色谱柱技术的发展：随着材料科学与合成化学的不断进步，新型的色谱柱材料如亲水性、疏水性、离子交换、手性等材料相继出现。
这些材料可以提供更高的分离效率和选择性。
2. 检测器技术的创新：传统的高效液相色谱检测器主要有紫外检测器、荧光检测器和电化学检测器等。
随着科学技术的发展，新型的检测器如质量分析检测器（Mass Spectrometry, MS）和电喷雾检测器（Electrospray Ionization, ESI）等被引入到高效液相色谱中，提高了检测灵敏度和选择性。
3. 色谱分离模式的创新：除了传统的反相色谱分离模式，还出现了离子交换色谱、手性色谱、亲水色谱等新的分离模式。
这些分离模式可以对特定问题提供更好的解决方案。
三、高效液相色谱在不同领域中的应用1. 制药工业：高效液相色谱在制药工业中起着至关重要的作用。
它可以用于药物分析、药物代谢物分析和质量控制，以确保药物的质量和安全性。
2. 环境监测：高效液相色谱在环境监测领域中广泛应用，例如水质监测、土壤污染分析和空气污染物检测等。
它可以快速、准确地测定各种环境污染物。
3. 农业食品安全：高效液相色谱在农业食品安全领域中也发挥着重要作用。
它可以用于农药残留分析、食品添加剂检测和农产品质量控制等方面。
高效液相色谱仪法检测乳酸链球菌素含量的研究
《高效液相色谱仪法检测乳酸链球菌素含量的研究》一、引言在当今的生物医药领域，乳酸链球菌素（Lactobacillus）作为一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗氧化和抗炎等多种生物功能，因此备受关注。
为了更好地研究和应用乳酸链球菌素，科研人员需要一种准确、快速、稳定的检测方法。
而高效液相色谱仪法（HPLC）作为一种常用的分析方法，在乳酸链球菌素含量检测中具有广泛的应用前景。
二、乳酸链球菌素的生物活性及检测方法综述1. 乳酸链球菌素的生物活性乳酸链球菌素是一种由乳酸链球菌产生的多肽类物质，具有多种生物活性，包括抗菌、调节免疫功能、抗氧化等，因此被广泛应用于食品、药品和保健品等领域。
2. 乳酸链球菌素检测方法综述目前常用的乳酸链球菌素检测方法包括生物学法、免疫学方法和色谱法等。
其中，色谱法中的HPLC方法因其检测灵敏度高、分离效果好、定量准确等优点，成为乳酸链球菌素检测的首选方法之一。
三、HPLC方法在乳酸链球菌素检测中的应用1. 样品前处理在使用HPLC方法检测乳酸链球菌素含量时，首先需要对样品进行前处理。
常见的前处理方法包括提取、浓缩和净化等，通过前处理可有效提高样品中乳酸链球菌素的浓度，提高检测灵敏度。
2. 色谱条件优化在乳酸链球菌素的HPLC检测中，色谱条件的优化对于检测结果的准确性和稳定性至关重要。
包括流动相的选择、柱温、流速、检测波长等参数的优化，都能够有效地提高检测效果。
3. 标准曲线的建立为了定量分析样品中乳酸链球菌素的含量，需要建立标准曲线。
通过制备不同浓度的乳酸链球菌素标准溶液，利用HPLC方法测定其峰面积，建立标准曲线并进行定量分析。
四、乳酸链球菌素HPLC检测方法的优势与挑战1. 优势HPLC方法在乳酸链球菌素检测中具有灵敏度高、分离效果好、定量准确等优点，能够满足科研和生产中的实际需求。
2. 挑战在实际应用中，乳酸链球菌素的HPLC检测也面临着样品前处理复杂、色谱条件优化难度大等挑战，需要科研人员不断进行改进和优化。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是指由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的碳水化合物，是生物体中的重要成分之一，在食品工业、医药和生物技术领域具有重要的应用价值。
对多糖含量进行准确的测定是非常重要的。
目前，针对多糖含量测定的方法有很多种，包括光度法、比色法、高效液相色谱法、质谱法等。
本文将对多糖含量测定的方法进行综述，并对各种方法的原理、优缺点以及适用范围进行分析。
一、光度法光度法是一种常用的多糖含量测定方法，其原理是通过测定多糖在特定波长下的吸光度来确定其含量。
常用的方法有邻苯二甲酰氯法、硫酸-安替土林蓝法等。
邻苯二甲酰氯法是一种简便快速的多糖含量测定方法，其原理是多糖与邻苯二甲酰氯在酸性条件下反应生成二糖苷，然后与二甲基氨基苯酚生成有色产物，利用紫外分光光度计在510nm处测定吸光度。
该方法操作简便、灵敏度高，但只适用于测定淀粉样品。
硫酸-安替土林蓝法是一种比色法，通过多糖与硫酸反应产生的酸性羟乙基酚与安替土林蓝在酸性条件下产生有色产物，利用紫外分光光度计在620nm处测定吸光度。
该方法适用于多种多糖的含量测定，但操作相对复杂，且对于含有还原糖的多糖测定结果会存在误差。
二、比色法三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种准确快速的多糖含量测定方法，其原理是通过高压注射将多糖样品进样到色谱柱中，利用高效液相色谱仪分离多糖，并通过紫外检测器在270nm处检测吸光度，从而确定多糖的含量。
该方法准确性高，适用范围广，但需要专用的设备和耗材，成本较高。
四、质谱法根据实际需要和条件，选择合适的多糖含量测定方法非常重要。
对于一般实验室而言，光度法和比色法是常用的方法，操作简便、成本低，适用于大多数多糖的含量测定。
对于要求准确性和高通量的实验室而言，高效液相色谱法和质谱法是更好的选择，能够满足实验需要。
不同的方法可以组合使用，以提高测定准确性和可靠性。
在实际操作中，需要根据样品的性质和含量范围，综合考虑方法的原理、操作难易度和设备条件，选择合适的多糖含量测定方法。
高效液相色谱(文献综述)
高效液相色谱结合化学发光的简要介绍（孙鑫环境学院Z1009006）摘要：目前，高效液相色谱(HPLC)法由于对复杂样品中的分析物具有极高的分离效率而成为最有效的分离方法。
将具有高灵敏度的化学发光分析法和具有高分离效率的高效液相色谱分离法相结合已引起了国内外分析化学家的极大兴趣。
本文简单概述了高效液相色谱化学发光的特点、发展史、检测原理、化学发光反应体系以及发展前景。
1.引言高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是一种具有高效、快速及应用广泛的现代分离技术，它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论和技术，以高压输送流动相，采用高效固定相及较高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法己经成为有机物质分析的支柱技术，在生物化学、临床医学、食品检验、石油化工及环境污染监测等领域得到广泛的应用，成为分析化学家和生物化学家用以解决他们面临各种实际分析和分离必不可缺的工具。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
高效液相色谱仪是由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
从上个世纪70年代以来，人们经过努力已研究和开发了多种检测器，如紫外-可见光检测器(UV一Vls)、光电二极管阵列检测器(PDA)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、电化学检测器(ECD)、蒸发激光散射检测器(ELSD)、光电导检测器(PCD)、磁旋光检测器(MDR)、放射性检测器(RD)、热离子化检测器(TID)、化学发光检测器(CLD)和质谱(Ms)检测器等等。
随着色谱技术的发展，结合计算机各种软件的开发，使HPLC与各种检测仪器联用。
高效液相色谱的发展及现状【文献综述】
毕业论文文献综述应用化学高效液相色谱的发展及现状1. 色谱技术的发展历程色谱技术的研究起步于20世纪初，俄国植物学家M.S.Tswett发表了题为“一种新型吸附现象在生化分析上的应用”的研究论文中提到了一种用吸附原理分离植物的方法，并将其命名为色谱法。
但由于这种色谱分离技术速度慢且效率低，没有受到科学界重视。
1938年获得诺贝尔化学奖的德国化学家Kuhn采用Tswett色谱分离技术，在维生素和胡萝卜素的分离和结构的分析中取得了重大成果，色谱法因此得到各国科学家的关注[1]。
可以预想到，在接下来的几十年中，色谱技术更是飞速发展。
随着1940年Martin 和Synge提出液液分配色谱法后，1952年James和Martin发明了气相色谱因此获得1952年诺贝尔化学奖[2]。
紧接着，通过各国科学家的努力，还分别开创了毛细管气相色谱法、毛细管超临界色谱、毛细管电泳和电色谱等分析分离技术，使色谱技术的应用日益广泛。
高效液相色谱出现于20世纪60年代末，由高压泵和键合固定相应用于液相色谱，导致了高效液相色谱的出现。
直至今日，高效液相色谱技术不断发展，并广泛应用在各个领域，成为分析、分离技术中不可或缺的一种尖端科技。
2.高效液相色谱的构成高效液相色谱是近几十年来分析化学中最活跃的领域之一。
这种将分离手段及检测系统相连接的分析分离技术，逐步成为在生化药物、精细化工产品、环境保护等各个领域中主要的物质分析分离方法[3]。
2.1输液系统——泵由于色谱柱很细，填充剂粒度小，因此阻力很大，为达到快速、高效的分离效果，必须要提高柱前压力，以获得高速的液流，使分析、分离更加有效率的进行。
泵为液相提供了流动相流动所必须的压力。
2.2进样系统一般高效液相色谱对于进样系统多采用六通阀进样[4]。
先由注射器将样品常压下注入样品环[5]。
然后切换阀门到进样位置，由高压泵输送的流动相将样品送人色谱柱。
样品环的容积是固定的，因此进样重复性好。
高效液相色谱法综述
高效液相色谱法前言：高效液相色谱法适用的范围很广，是非常重要的分析方法之一，它在医药学及生命科学中成为一种主要的分离检测手段。
与分离方法的迅速发展的同时，检测技术的不断进步也是高效液相色谱技术得到广泛应用的原因之一。
近年来高效液相色谱检测技术从最常用的紫外可见分光光度检测器和差示折光检测器开始，已经发展了诸如能够实时定性和定量的二极管阵列紫外可见分光光度检测器，能够快速扫描和光谱分辨率更高的色散型紫外可见分光光度检测器以及适用于生物化学的电化学检测器等。
各种联用检测手段如与质谱联用的热喷雾和粒子束接口等已日趋成熟，与傅里叶变换红外光谱和拉曼光谱的联用技术亦在发展中。
各种检测器的灵敏度、线性范围、稳定性和重现性等主要指标日益提咼。
许多新的检测手段已为科技工作者所熟悉和使用。
目前比较引人注目和发展较快的为手性化合物的直接检测和通用型质量检测技术。
分离原理在互不相溶的两相一一流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配，这种分配过程即为色谱过程。
由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离，这就是色谱分析法的实质。
也就是说，当一种不与被分析物质发生化学反应的被称为载气的永久性气体（例如H2、N2、He Ar、CQ等）携带样品中各组分通过装有固定相的色谱柱时，由于试样分子与固定相分子间发生吸附、溶解、结合或离子交换，使试样分子随载气在两相之间反复多次分配，使那些分配系数只有微小差别的组分发生很大的分离效果，从而使不同组分得到完全分离，例如一个试样中含A、B二个组分，已知B组分在固定相中的分配系数大于A,即K B > K A，如图1-1所示。
当样品进入色谱柱时，组分A、B以一条混合谱带出现，由于组分B在固定相中的溶解能力比A大，因此组分A的移动速度大于B,经过多次反复分配后，分配系数较小的组分A首先被带出色谱柱，而分配系数较大的组分B则迟被带出色谱柱，于是样品中各组分达到分离的目的。
高效液相色谱的应用研究进展
高效液相色谱的应用研究进展【摘要】从1903年，色谱的开始使用，各种色谱技术应运而生，其中高效液相色谱由于其分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广等优点，作为物质分离的重要工具，在各个方面都取得了很大的发展，并且出现了许多的新型色谱。
本文综述了变性高效液相色谱在生物遗传方面的应用，及高效液相色谱在医学方面的应用。
【关键字】HPLC（高效液相色谱） DHPLC（变性高效液相色谱）1.高效液相色谱概要色谱法是利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，当流动相推动样品中的组分通过固定相时，在两相中进行连续反复多次分配，从而形成差速移动，达到分离的方法。
根据流动相的状态可分为气相色谱法和液相色谱法。
在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器来完成。
这种色谱称为高效液相色谱(1iighperformance liquid chromatography，HPLC)。
由于高效液相色谱法有分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广等优点，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在有机化学、生物化学、医学、药物学与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛。
另外，在高效液相色谱法的基础上不断发展，变性高效液相色谱法(DHPLC)随之兴起，广泛用于生物学、遗传学等领域。
2.高效液相色谱在生物学的应用变性高效液相色谱法(DHPLC)是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法。
DHPLC采用高压闭合液相流路，将DNA样品自动注入并在缓冲液携带下流过DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下，由荧光检测被分离的DNA样品，从而实现对DNA不同的分析它因使用的温度不同而有不同的应用价值：①在非变性温度(40℃～5O℃ )条件下对不同长度的双链DNA进行分离，用于定量反相PCR、长度多态性分析以及杂合性缺失(LOH)分析等；②在部分变性温度(51℃～75℃)条件下进行基因突变，单核苷酸多态性和CpG甲基化的检测；③在完全变性温度(70℃～8O℃)条件下对寡核苷[1]酸进行质量控制和纯化，RNA分离及已知位点基因型的分析等。
酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的测定 高效液相色谱法-概述说明以及解释
酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的测定高效液相色谱法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述酿酒葡萄及葡萄酒中的单宁酸含量一直是葡萄酒品质和特性评估的重要指标之一。
单宁酸是一种天然存在于葡萄皮、种子和葡萄酒中的多酚类化合物，具有抗氧化、抗菌和抗癌等多种生物活性。
其含量不仅影响着葡萄酒的风味和质感，还对葡萄酒的稳定性和品质有着重要的影响。
为了准确测定酿酒葡萄和葡萄酒中的单宁酸含量，研究人员开展了大量的研究工作，提出了多种测定方法。
其中，高效液相色谱法因其分离效果好、灵敏度高、操作简便等优点被广泛应用于单宁酸的测定。
本文将介绍酿酒葡萄和葡萄酒中单宁酸的重要性，以及高效液相色谱法的原理与应用，为后续研究提供参考。
1.2 文章结构本文主要包括引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将介绍酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸的重要性，以及本文的目的和意义。
在正文部分，将详细介绍高效液相色谱法的原理与应用，以及单宁酸含量的测定方法。
最后在结论部分，将对整个研究进行总结，探讨研究的意义，并展望未来可能的研究方向。
整个文章结构清晰，层次分明，具有逻辑性和连贯性，旨在为读者提供全面深入的了解和信息。
1.3 目的本文旨在探讨酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸含量的重要性，并介绍利用高效液相色谱法对单宁酸进行准确测定的原理和应用。
通过深入研究单宁酸的测定方法，可以帮助酿酒业者更好地控制葡萄酒的质量和口感，提高产品竞争力。
同时，对单宁酸的测定也有助于消费者了解葡萄酒的营养成分，选择适合自己口味和需求的产品。
在全面了解单宁酸的作用和含量后，可以更好地利用这一重要成分，促进葡萄酒产业的健康发展。
2.正文2.1 酿酒葡萄及葡萄酒中单宁酸的重要性酿酒葡萄是酿造葡萄酒的原料之一，其中的单宁酸是葡萄酒中的重要成分之一。
单宁酸是葡萄酒的主要质量指标之一，对于葡萄酒的口感、色泽和质地起着至关重要的作用。
首先，单宁酸是葡萄酒中的一种多酚类物质，具有抗氧化的作用。
它可以帮助延缓葡萄酒的氧化过程，保持葡萄酒的新鲜和持久口感。
高效液相色谱法测水溶性维生素综述
具有高灵敏度 、高选择性的高效快速分离分析技 且 干扰 物质 多 ， 定结 果偏 高 ； 子荧光 法 的样 品 测 分
术 。 既能用 于微 量组分 的分 析测 定 ， 能用 于大 预处理也很复杂 ，在对多维片和维生素强化食品 它 又 量 的制 备分 离 ， 灵活多 样 ， 其应 用范 围已超 过其 他 进行多种维生素的检测时 ；会给定量带来一定的 各 种分 离方 法 ，尤其 在生 化 医药样 品的分 析 分离 困难 ； 而用 高 效液 相色 谱 法测 定水 溶性 维生 素 ， 样 方 面更 充分 发挥 它 的特长 ，为推动 该 领域 的进 步 品前处理简单， 品用量少 ， 样 分离速度快 ， 可一次
维生 素为维持 生物体 正常机 能 的必需物质，
常作为营养强化食品的添加因子， 它广泛存 在于
１ 合预 混合饲 料 中维生 素 Ｂ族 的测定 ． 复
目前复合预混料 中都 添加有多种维生素， 因
谷类 、 果蔬 、 肉禽及蛋类 等加工 品中， 因此， 维生素 为动物都具有潜伏的维生素不足症， 这些潜伏 的 的检测对食 品 一 饮料 、 、 …日制药【、 饲料【等领域 维生素不足症不能观察 出来， ２ １ 习 但在不利环境条件 都 有非 常重 要 的意义 。 下便可立即诱发并显示出缺乏症来。如果动物完 水溶性维生素与人体 的生长发育及健康密切 全缺少一种或数种维生素， 或者是摄人量不足， 某 相关 。水溶性维生素中又以维生素 Ｃ及 Ｂ族维生 些代谢过程就将受到损害， 而导致生长受 阻或 从 素较为重要【 １ 。水溶性维生素的测定方法主要包 者疾病。现就复合预混合饲料 中维生素 Ｂ 、２ ｌＢ 、
维普资讯
２０ ０７年第 １ 期
湖南 饲料
检测分析
高效液相色谱法测水溶性维生素综述
高效液相色谱法测定脱氢乙酸色谱条件综述
高效液相色谱法测定脱氢乙酸色谱条件综述摘要：本论文综述了高效液相色谱法测定脱氢乙酸的色谱条件。
通过文献回顾和实验总结，对色谱柱的选择、流动相的组成、流速、进样量、检测器的选择等关键参数进行了综述。
结果表明，脱氢乙酸可以在逆相和离子对色谱模式下得到有效分离。
同时，pH值、温度和样品前处理等因素也对分析结果产生影响。
本研究为脱氢乙酸的分析提供了可靠的参考，为相关领域的研究提供了重要的数据基础。
关键词：高效液相色谱法；脱氢乙酸色谱；处理因素引言脱氢乙酸是一种重要的有机物，在食品、药物和环境样品中具有广泛的应用。
因此，开发高效准确的分析方法对其检测和定量至关重要。
高效液相色谱法作为一种常用的分析技术，在脱氢乙酸的分析中得到了广泛应用。
本论文旨在综述高效液相色谱法测定脱氢乙酸的色谱条件，并总结相关文献和实验结果，为脱氢乙酸的准确分析提供可靠的参考和数据基础。
1.液相色谱法在脱氢乙酸分析中的应用概况液相色谱法在脱氢乙酸分析中的应用已得到广泛研究和应用。
常见的液相色谱模式包括反向色谱、离子对色谱和离子交换色谱。
反向色谱是最常用的方法，能够实现脱氢乙酸与其他有机酸的良好分离，但需要优化流动相组成来获得最佳结果。
离子对色谱则常用于对脱氢乙酸进行阳离子化处理，进一步增强分离度。
此外，离子交换色谱也被应用于脱氢乙酸的分析，通过离子交换树脂实现样品分离。
实验参数的优化，如流速、进样量和检测器选择，能够进一步提高脱氢乙酸分析的灵敏度和准确度。
总体而言，液相色谱法为脱氢乙酸分析提供了可靠的方法和技术支持。
2.实验方法与结果在本研究中，我们使用高效液相色谱法对脱氢乙酸进行分析。
我们选择了合适的色谱柱并对其性能进行评价。
通过对流动相组成的优化，找到了最适合分离脱氢乙酸的条件。
同时，我们进行了流速和进样量等操作参数的优化，以提高分析方法的灵敏度和准确性。
我们选择了合适的检测器来检测脱氢乙酸的峰信号。
实验结果表明，在逆相和离子对色谱模式下，能够有效地分离脱氢乙酸和其他有机物。
高效液相色谱技术在石油化工中的应用
高效液相色谱技术在石油化工中的应用摘要：高效液相色谱技术（HPLC）是一种高效的分离和分析技术，在石油化工行业中具有广泛的应用。
本论文综述了HPLC技术在石油化工中的应用，包括石油化工原料、成品的分析和质量控制，以及石油燃料分析和对环境监测的应用。
在石油化工行业中，HPLC技术已经成为重要的分析手段，可以快速、准确地分离和分析各种化合物，提高工作效率和质量。
关键词：高效液相色谱；石油化工；质量控制；石油燃料；环境监测引言石油化工是现代工业化的基础之一，广泛应用于汽车、航空、轮船、机械、电子、化学等行业中。
石油化工生产过程中涉及到大量的化学反应，需要对原料、中间体和成品进行检测和分析，以确保产品的质量。
而在这些检测和分析过程中，高效液相色谱技术（HPLC）被广泛应用，它可快速、高效地对复杂的样品进行分离检测和分析，提高工作效率和产品质量。
一、HPLC技术在石油化工原料和成品分析中的应用石油化工原料和成品的分析是石油化工生产的关键环节，也是确保产品质量的重要保障。
HPLC技术可以分析石油化工原料和成品中的各种化合物，包括烃类化合物、芳香烃、酯类化合物、萘、醇类化合物等。
目前，HPLC技术已经成为石油化工行业中重要的分析手段，用于检测原油、炼油产品、润滑油、塑料、橡胶、纤维材料、色素、催化剂等产品。
在石油炼制中，常常需要对石油中的各种化合物进行分离和分析，以确定炼油工艺和产品的质量。
例如，采用反相HPLC技术，可以分离石油中的芳香族和环烷烃类化合物，按照不同的色谱条件可以分离出分子量大小相近的化合物，或者加入流动相中的特定温度等因素，也可能增加分离区分度。
采用正相HPLC技术，则可以分离酸性化合物、醇类化合物、醛类化合物等。
而且，HPLC技术还可以检测用于炼油过程中的催化剂，分析催化剂中的有效成分，帮助炼油企业掌握催化剂的使用情况，调整生产工艺和质量控制。
二、HPLC技术在石油燃料分析中的应用石油燃料的分析是石油化工行业中的重要环节。
高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量【文献综述】
毕业论文文献综述应用化学高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量咖啡因（Caffeine ）是从茶叶、咖啡果中提炼出来的一种生物碱。
茶、咖啡、可乐这三大非酒精饮品和许多功能饮料都有咖啡因成分。
适量摄入咖啡因对人体是有益的，如可以缓解工作压力，起到提神醒脑作用等。
但是，大剂量或长期使用也会对人体造成损害，特别是它也有成瘾性，一旦停用会出现精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状，虽然其成瘾性较弱，戒断症状也不十分严重。
因此也被列入受国家管制的精神药品范围。
所以每人每天咖啡因的摄入量不宜过高。
摄入咖啡因量可分为以下等级:成人每天摄入80 ～250 mg 咖啡因( 1.1 ～3.5 mg/kg·d- 1 ) 为低摄入量, 300 ～ 400 mg ( 4 ～6 mg/kg·d- 1 )为中摄入量，超过500 mg(7mg/kg·d- 1 )为高摄入量。
滥用咖啡因通常也有吸食和注射两种形式，其兴奋刺激作用及毒副反应、症状、药物依赖性与苯丙胺相近。
咖啡因是受国家管制的精神药品。
作为中枢兴奋药中的清醒药,低、中摄入量时能够振奋精神、提高注意力、增强自信心、提高工作效率、减少疲乏感、增强识别能力、提高瞬时口头记忆力。
而高摄入量的咖啡因可引起焦虑、烦躁、失眠、易怒及精细运动功能受损。
作为中枢神经系统兴奋药，小剂量能兴奋大脑皮质，改善思维活动,提高对外界的感应性。
大剂量则可兴奋延髓的呼吸中枢和血管运动中枢,增加呼吸频率和深度。
已有研究表明大量摄入咖啡因容易上瘾 ,导致慢性中毒,引起众多严重后果,如影响睡眠, 引起局部缺血性心脏病，出现心律不齐、心悸及心动过速，降低女性受孕率，提高孕妇自然流产率和致畸率，引发阵发性惊厥和骨骼震颤，损害肝脏、胃、肾等器官,诱发呼吸道炎症、妇女乳腺瘤疾病等。
咖啡因在全球范围内作为一种神经兴奋剂被广泛使用，并且是唯一一种可以添加在食物中的药物。
虽然公认适量饮用不会有任何不良作用，但是咖啡因还是会增加患上一些疾病的风险。
HPLC综述
高效液相色谱在药物分析中的应用进展谢秋红邵大志（四平市中心人民医院吉林四平 136000）摘要:高效液相色谱法(High—Performance Liquid Chromatography，HPLC)是以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。
高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。
在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。
高效液相色谱已经广泛应用于药物的含量测定、组成分析、质量控制等方面，在药物分析中占主要地位。
其特点是分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单。
本文从以下几个方面综述了高效液相色谱法在药物分析中的研究进展。
关键词：高效液相色谱法药物分析应用现代药学的迅速发展促进药物及其代谢物在机体内处置过程的研究不断深入，一方面对体内药物分析研究方法和手段提出了越来越高的要求，另一方面也推动了体内药物分析研究方法的蓬勃发展[1]。
HPLC具有分离效能好、分析速率快，应用范围广等诸多优点，已成为药物分析中最重要的分析方法及医学研究与诊断常用的方法之一。
如今，HPLC已成为反映世界各国药典水平先进性的指标之一[2]。
1. 高效液相色谱作为常规分析方法在药物分析中的应用高效液相色谱法作为药物分析中的最主要的分析方法，常被作为常规分析检验方法而广泛应用[3]。
近年来在这个方面的研究比较多，康自华等[4]针对近几年国际奥委会医学委员会公布的禁用表中新增药物及一系列利尿剂的相关化合物进行了研究，比较了不同的提取方法及回收率，建立了同时分析13种利尿剂的高效液相色谱测定方法，检出限小于5ng。
张晓青等[5]采用反相离子对高效液相色谱法研究了唑来膦酸及其有关化合物的色谱分析与分离方法。
该方法简单快速，不需进行复杂的样品处理，唑来膦酸与有关化合物的分离良好，适用于唑来膦酸的常规分析。
高效液相色谱法在药物分析领域中的应用
高效液相色谱法在药物分析领域中的应用摘要对高效液相色谱法在药物含量测定，药物鉴别及添加违禁药物检查中的应用进行了综述。
并展望了高效液相色谱法的发展一联用技术在药物分析中的应用前景。
关键词高效液相色谱；药物分析；应用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等，是一种高压、高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快的分离分析技术，广泛应用于医学、药学、化学、生化、工业、农业、环保、商检和法检等科学领域。
高效液相色谱法适用于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。
在中国药典中主要用于药物的含量测定、有关物质检查和鉴别等。
1 高效液相色谱法在药物含量测定中的应用天然药物的来源有动物、植物和矿物之分。
由于化学成分复杂，有效成分可能有一个，也可以有多个，因此精确测定各有效成分的含量对药品质量控制，建立质量标准具有重要的意义。
高效液相色谱法可对天然药物的成分进行分离鉴定，并测定有效成分的含量。
葛根素是粉葛药材中的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉、降低血压、减少心肌耗氧量、抗心率失常、降血糖、降血脂、抗动脉硬化、改善微循环、抗肿瘤等多种药理作用。
刘宁等采用HPLC法测定四川粉葛中葛根素的含量，结果显示该方法简便易行，结果准确，可用于四川粉葛药材的质量控制。
中药复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成分，各有效成份的含量决定了药物的治疗效果。
高效液相色谱法适合分子量较大、难气化、对热敏感的等物质的分离分析，因此在中药复方制剂和化学复合制剂的分析中得到广泛的应用。
秦丽惠等采用高效液相色谱法测定了金麦胶囊中绿原酸含量，结果显示该方法测定样品分离度佳，灵敏度高，操作简便，结果准确可靠。
2HPLC在药物鉴别中的应用中药材是加工中药饮片和生产中成药的原料药，其品种的真伪、质量的优劣直接影响到临床用药的安全有效。
红花药材高效液相色谱指纹图谱初步研究的综述
关于红花药材高效液相色谱指纹图谱初步研究的综述摘要目的：利用高效液相色谱建立新疆地区红花的色谱指纹图谱。
方法：采用反相C18柱，乙腈一0．5％磷酸水溶液梯度洗脱；检测波长275 rim；流速1．0mIJmin进行试验。
结果：从7个地区出产的红花获得色谱共有峰，比较基本特征。
羟基红花黄色素A为指标成分，看哪个红花的含量为最高。
结论：该法为中药样品的鉴定提供了较全面的信息，红花样品指纹图谱及指标成分含量测定可用于全面控制红花药材的质量。
关键词红花；高效液相；指纹图谱前言：红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L. 的干燥花,具有活血通经、散瘀止痛的功效,是传统的活血化瘀中药现代药理研究表明红花对心血管系统有广泛而显著的作用,临床疗效确切,大量用于中成药生产和临床处方。
因此,建立红花药材有效的质量评价方法,对不同产地红花药材的质量进行系统的比较研究,确保红花药材质量稳定,直接关系到红花相关药品和临床处方的疗效。
谱指纹图谱用于中药的表征和质量控制已越来越引起广泛的关注。
色谱指纹图谱是在固定实验条件和实验方法，得到同一样品不同批次色谱图谱。
美国FDA最近几年制定的植物草药指南已把指纹图谱作为这类混合物质群的质量控制方法。
欧洲也将色谱指纹图谱作为植物药制剂的评价方法。
本文采用高效液相色谱法,建立红花药材的指纹图谱,对不同来源的红花药材进行比较研究,为红花的质量控制提供有效方法。
正文：1材料与仪器1．1仪器与试药Agilent一1100高效液相色谱仪；四元泵，DAD检测器；G137PA自动脱气机；标准自动进样器；柱温色谱柱Zorhax SB—C18柱(4．6mln×250 mln，5 tnn)。
乙腈为色谱纯(Fisher)；水为二次蒸馏水；羟基红花黄色素A对照品(中国药品生物制品检定所，批号：0782—200310)；红花药材由武汉大学药学院张洪教鉴定为菊科植物红花能心地矾淞tinctorius L．的干燥花(符合中国药典2000年版一部)。
高效液相色谱法-综述
Journal of Chromatography A,1217(2010)858–880Contents lists available at ScienceDirectJournal of ChromatographyAj o u r n a l h o m e p a g e :w w w.e l s e v i e r.c o m /l o c a t e /c h r o maReviewThe challenges of the analysis of basic compounds by high performance liquid chromatography:Some possible approaches for improved separationsDavid V.McCalley ∗Centre for Research in Biomedicine,University of the West of England,Frenchay,Bristol BS161QY,UKa r t i c l e i n f o Article history:Available online 3December 2009Keywords:HPLCBasic compounds Stationary phases Reversed-phase HILICa b s t r a c tThis review considers some of the difficulties encountered with the analysis of ionised bases using reversed-phase chromatography,such as detrimental interaction with column silanol groups,and over-loading which both lead to poor peak shapes.Methods of overcoming these problems in reversed-phase (RP)separations,by judicious selection of the column and mobile phase conditions,are discussed.Hydrophilic interaction chromatography is considered as an alternative method for the separation of some basic compounds.©2009Elsevier B.V.All rights reserved.Contents 1.Introduction.........................................................................................................................................8592.Choice of column....................................................................................................................................8592.1.Column testing procedures..................................................................................................................8592.2.The Tanaka test and the Snyder hydrophobic subtraction parison of results with direct peak shape measurements...8602.3.Monolithic silica columns ...................................................................................................................8632.4.Slow column equilibration.Anion-exchange behaviour of alkylsilica RP columns e of column materials other than silica...................................................................................................8653.Choice of mobile phase..............................................................................................................................8663.1.Choice of modifier ...........................................................................................................................8663.2.Choice of mobile phase pH.Problem of reduced retention of bases at low pH.............................................................8664.Overloading .........................................................................................................................................8674.1.Overview of the problem....................................................................................................................8674.2.Possible causes of overloading ..............................................................................................................8684.3.Effect of buffer anion on overload...........................................................................................................8704.4.Overloading on mixed-mode reversed-phase/cation-exchange columns..................................................................8714.5.Effect of buffer pH on overloading ..........................................................................................................8715.Temperature effects.................................................................................................................................8736.Hydrophilic interaction chromatography (HILIC)..................................................................................................8747.Concluding remarks.................................................................................................................................8787.1.Overloading..................................................................................................................................8787.2.Selection of mobile phase pH................................................................................................................8787.3.Quality and choice of column ...............................................................................................................8797.4.Temperature.................................................................................................................................8797.5.Alternative separation mechanisms—e.g.HILIC.............................................................................................879References...........................................................................................................................................879DOI of original article:10.1016/j.chroma.2009.11.067.∗Tel.:+441173282469;fax:+441173282904.E-mail address:david.mccalley@0021-9673/$–see front matter ©2009Elsevier B.V.All rights reserved.doi:10.1016/j.chroma.2009.11.068D.V.McCalley/J.Chromatogr.A1217(2010)858–8808591.IntroductionThe analysis of basic compounds by high performance liquid chromatography(HPLC)continues to be of interest,as over70% of pharmaceuticals are bases(with about20%being acids)[1–3].A large number of compounds of biomedical and biological signifi-cance are also bases.Reversed-phase(RP)separations are by far the most common in liquid chromatography(LC),due to advantages that include ease of use with gradient elution,compatibility with aqueous samples,versatility of the retention mechanism allowing changes in the separation to be brought about by changes in pH, organic modifier or additives,and long experience with the tech-nique,allowing the rapid establishment of suitable experimental conditions for the analysis of a given sample[4].Nevertheless,it has been recognised for a long time that the analysis of basic com-pounds poses particular difficulties in RP separations.Many of these problems are associated with the complex structure of the surface in silica-based RP packings,shown in Fig.1.The surface concentra-tion of silanols on bare silica is reported to be about8.0mol m−2 [5].C18ligands are too bulky to react completely with all silanols; thus,a maximum coverage of4–4.5mol m−2can be achieved.A further number of reactive silanols can be“endcapped”by reac-tion with smaller silylating agents such as trimethylchlorosilane, but as many as50%of the original silanol groups remain unreacted on a typical RP column.The average p K a of these silanol groups is around7.1,but their acidity can be enhanced by the presence of metal impurities in the silica.Some groups appear to be suffi-ciently acidic that their ionisation cannot be entirely suppressed using acidic mobile phases with a pH within the stability limit of typical RP columns(2.5–7.5).Over this range of operational pH values,basic compounds are likely to be ionised,leading to ionic interactions with ionised silanol groups.BH++SiO−M+→SiO−BH++M+(1) where BH+represents the protonated base,and M+the mobile phase buffer cation.The problem of poor column efficiency(N)and exponentially tailing peaks shown by small quantities of bases is often attributed to this mixed mechanism process of hydropho-bic interaction and ion-exchange with the silanols.The slower sorption–desorption kinetics of silanol ion-exchange sites(kinetic tailing)with sample ions may be responsible[6],which will occur regardless of sample size.The simple existence of two retention processes cannot per se be the sole cause of tailing,as mixed-mode phases with carboxylic acid functions embedded within a hydrophobic chain can show excellent peak symmetry for bases[7]. However,the kinetics of interaction of such embedded groups,and the stereochemistry around the active site,could be completely dif-ferent from that of ionised silanols,which may be buried beneath the hydrophobic chains on classical C18phases.Instead of sim-ple ion-exchange sites,Neue et al.[8]have proposed the existence of strong synergistic sites with combined RP and ion-exchange properties.The overall retention for bases was described by the equation:k=k RP+k IX+k∗RP k∗IX(2) where k is the total retention,k RP is the hydrophobic contribu-tion,k IX is the ion-exchange contribution from surface silanols,and k∗RP k∗IX is a multiplicative contribution of both processes.These syn-ergistic sites could correspond to the subset of very high-energy sites with slow kinetics which have been long suspected to be the cause of exponential tailing for bases,as they appear to be domi-nant in the retention process.It was shown that this type of tailing is not responsive to small changes in sample load in RP–LC at low pH[6].This result might indicate that exponential tailing is not caused by overload of a small number of strong sites on the column. In contrast,overload often gives rise to right-angled triangle peak shapes when ionisation of silanols is suppressed in RP–LC when working at low pH.Overload tailing still occurs even for the most modern columns operated under conditions where there are no or a negligible number of ionised silanols on the column surface.It was recognised more than20years ago that bonded phases synthesised from pure silica(Type B phases)made from the hydrol-ysis of metal-free tetraalkoxysilanes resulted in reduced silanol acidity,and their use has considerably improved the analysis of bases[9].Only small contamination of such materials occurs dur-ing the processing of such packings,or from the water used in the hydrolysis.Nevertheless,some other features of the analysis of these solutes(such as overloading)remain problematic,and these issues have not been resolved by the use of high-purity silica.Already in1988,Snyder and co-workers[10]had reviewed the problems of analysis of basic solutes and had proposed some pos-sible solutions.The following recommendations were made: (a)Judicious selection of the column to reduce the number of avail-able acidic sites.(b)Reduction of the mobile phase pH to suppress ionisation of thesilanols.(c)Increasing the mobile phase pH above the analyte p K a,such thatthe analyte is unprotonated.(d)Addition of a silanol blocker such as triethylamine to the mobilephase to interact preferentially with ionised silanols.(e)Reduction of the sample concentration to alleviate the satura-tion of the acidic sites.Most of the arguments in this paper remain true more than20 years later,and these conclusions can be used as a simple guide for the chromatographer aiming to achieve the best separations for basic solutes.Perhaps only the use of silanol blocking agents has fallen somewhat out of favour,as these are less necessary with modern high-purity silica phases,and can also have some undesirable effects.Such effects include the generation of addi-tional background in HPLC–MS,the difficulty of removal from the stationary phase after use leading to permanent alteration of its properties,and even chemical reaction with some solute types.This topic,and some other well-known aspects of the chromatography of bases have been covered adequately in earlier reviews[11–13]. However,other features of the chromatography of these“difficult”compounds are still extensively debated in the literature,for exam-ple,the problem of their ready overloading in RP separations.This review will concentrate on the latest research in these topics,while attempting to summarise briefly previousfindings.Thus,it will con-sider RP column choice by use of evaluation data obtained from the Tanaka and the Snyder“hydrophobic subtraction”tests;current theories and the effect of overload for ionised solutes;the use of high pH to improve peak shape;whether temperature is a useful parameter in improving peak shape;andfinally whether other sep-aration mechanisms such as HILIC can provide a viable alternative to RP–LC for the analysis of bases.2.Choice of column2.1.Column testing proceduresThe selection of an appropriate RP column for the analysis of bases can be a daunting task,as now many hundreds are com-mercially available,with a considerable number recommended especially by their manufacturers for the analysis of basic solutes. Nevertheless,several databases are now available where a large number of different columns have been subjected to the same test procedure by the same group of workers on the same or similar instruments,allowing a useful and objective comparison of perfor-860 D.V.McCalley /J.Chromatogr.A 1217(2010)858–880Fig.1.Structures present on a typical RP monomeric-bonded silica (C8)endcapped with trimethylsilyl groups.After U.D.Neue,“Silica Gel and its derivatization for Liquid Chromatography”,in “Encyclopedia of Analytical Chemistry”,R.A.Meyers,Ed.,John Wiley &Sons,Ltd.,Chichester (2000)11450–11472.mance to be made.A question arises as to the validity of databases constructed by evaluation of only a few or even a single column of a given type,as to whether the results obtained may be truly repre-sentative of the performance of this brand,due to column to column and batch to batch variations.However,a careful study [14,15]has suggested that columns from major manufacturers actually show a rather high degree of reproducibility,probably resulting from the use of stringent quality control procedures.Indeed,the industry is likely to be self-regulating to a degree,as dissatisfied customers would switch to the use of more reproducible brands.Tight reten-tion specifications exist in the HPLC user environment,especially in the pharmaceutical industry,and changes in the column can jeop-ardise product release.However,it is possible that a manufacturer could be forced to change the sourcing of a production raw mate-rial,which might occur for example,if the column manufacturer does not make their own silica.Thus,under some circumstances,a recently purchased column may not behave in the same way as one tested several years beforehand.Nevertheless,we believe that such situations are rare,and in most cases,manufacturers strive to main-tain the reproducibility of their products over a long period of time,as many customers have established methods on a given brand of phase.It appears more common to introduce a new name or name variant of an existing phase to mark definitively such changes or improvements to the production process.Taking this factor,and the reasonable reproducibility of commercial columns into account,it seems that the results of tests on a particular brand of column would generally reflect the performance of that brand throughout the product lifetime.Both of the column evaluation methods described in detail below incorporate strongly basic compounds as test probes.In each test,their retention is monitored at low and intermediate pH val-ues.Columns which give relatively low retention of basic probes are also likely to give higher efficiency for basic solutes,as shown by correlation studies for at least one of the procedures (see below).2.2.The Tanaka test and the Snyder hydrophobic subtraction parison of results with direct peak shape measurementsWhile many different column testing methods have been devel-oped,two have become prominent and have the distinct advantage that databases of results for many hundreds,rather than just a few columns,are available.The Tanaka method [16]and the hydropho-bic subtraction procedure developed by Snyder et al.[17]both incorporate tests which allow a user to select phases that are likely to be suitable for the separation of basic compounds.We will consider here the Tanaka method as adapted and applied by Euerby and Petersson [18]to the evaluation of over 200commercial columns that can be compared on a freely available program from Advanced Chemistry Development [19].These databases appear to be updated periodically;for instance,the ACD database contains evaluations of recently introduced sub-2m phases.An alternative adaptation of the Tanaka procedure and its application to a large number of different stationary phases has also been made [20],and data are again freely available [21].A fourth testing scheme is that published by the US Pharmacopeia.This protocol is an adaptation of the work of Sander and Wise [22].For activity towards bases,this method uses the tailing factor of amitriptyline (the same probe as used in the Snyder–Dolan procedure).At the time of writing,the database contained fewer columns than the two major proce-dures (∼100)and will not be considered further here.However,data for both this procedure and the Snyder–Dolan (S–D)method are available on the USP website [23].In the Tanaka–Euerby (T–E)procedure,columns are tested by measurement of k for pentylbenzene as a measure of sur-face area and surface coverage;hydrophobic selectivity from the ratio of k (pentylbenzene)/k (butylbenzene);shape selectivity from k (triphenylene)/k (o-terphenyl);hydrogen bonding capac-ity from k (caffeine)/k (phenol)in unbuffered methanol–water;total ion-exchange capacity from k (benzylamine)/k (phenol in methanol–phosphate buffer pH 7.6;and acidic ion-exchange capacity from k (benzylamine)/k (phenol)in methanol–phosphate buffer pH 2.7.The latter three tests are of particular interest for the analysis of basic solutes.The program [19]allows the comparison of the similarities and differences between various columns,and per-mits the separate weighting of the various factors—for example,columns can be ranked according solely to their total ion capacity at pH 7.6if so desired.The S–D model recognises that hydrophobic retention is the dominant process in RP chromatography,and in the absence of other retention mechanisms,plots of log k for one column versus another should be a straight line.However,these other mechanisms give rise to scatter in the plots.Clearly,ion-exchange and hydrogen bonding are important contributors to the retention of basic solutes.The general equation for retention in theD.V.McCalley/J.Chromatogr.A1217(2010)858–880861Table1Evaluation of some selected RP columns by two different procedures.For details on the procedure,see text.Column name k pentylbz k(pentbz)/k(butbz)k(triphen)/k(terph)k(caff)/k(phen)k(bzm)/k(phen)2.7k(bzm)/k(phen)7.6Tanaka–Euerby procedureChromolith 4.22 1.24 1.310.480.120.63Discovery Amide 1.65 1.35 1.810.490.190.44Discovery C18 3.32 1.48 1.510.390.100.28Inertsil ODS-37.74 1.45 1.290.480.010.29Resolve C18 2.40 1.46 1.59 1.29 1.23 4.06Spherisorb ODS-2 3.00 1.51 1.560.590.230.76Symmetry C18 6.51 1.46 1.490.410.010.68Symmetry Shield RP18 4.66 1.41 2.220.270.040.20Xterra MS C18 3.52 1.42 1.260.420.100.35Xterra RP18 2.38 1.29 1.830.330.070.20H S A B C(2.8)C(7.0)Snyder procedureChromolith 1.0030.0290.008−0.0140.1030.187 Discovery Amide0.7200.013−0.6250.218−0.092−0.025 Discovery C180.9840.027−0.1280.0040.1760.153 Inertsil ODS-30.9900.022−0.146−0.023−0.474−0.334 Resolve C180.968−0.1270.335−0.046 1.921 2.144 Spherisorb ODS-20.962−0.0760.070.0340.908 1.263 Symmetry C18 1.0520.0630.018−0.021−0.3020.123 Symmetry Shield RP180.8500.027−0.4110.093−0.7280.136 Xterra MS C180.9840.012−0.143−0.0150.1330.051 Xterra RP180.757−0.043−0.4830.097−0.170−0.173model is:log˛=log k/log k(ethylbenzene)=Á Hhydrophobic − S∗steric resistance(to bulky interactions)+ˇ Acolumn H-bond acidity(non-ionised silanols)+˛ BH-bond basicity(from sorbed water)+Ä Cion interaction(ionised silanols)(3)Ethylbenzene is used as a non-polar reference solute.Greek letters represent empirical,eluent-and temperature-dependent proper-ties of the solute,which are relative to the values for ethylbenzene, for which all solute parameters are identically zero.The selection of the optimum probes for evaluation of each retention mode has been made from detailed studies.Bold capitals represent eluent-and temperature-independent properties of the column;these val-ues are relative to a hypothetical average Type B C18column.Any column which behaves identically to this hypothetical reference column will have H=1and all other values S*,A,B,C=0.The dataset of columns evaluated by this procedure is even larger than that for the T–E procedure and presently extends to at least400columns.In some versions of the program,different weightings can be assigned to each evaluation parameter,as in the Euerby procedure.Results for some RP columns selected from each database are shown in Table1.The T–E data show clearly that the older Type A bonded phases(Resolve C18and Spherisorb ODS-2)give higher retention of benzylamine relative to phenol at pH7.6(alpha values 4.06and0.76,respectively)compared with newer Type B phases based on highly pure silica(Discovery C18and Inertsil ODS-3, alpha values0.28and0.29,respectively).Similarly with the S–D method,values of C(7.0)for Resolve C18and Spherisorb ODS-2 are high(2.144and1.263,respectively)compared with Discov-ery C18and Inertsil ODS-3(0.153and−0.334,respectively.Values of alpha(benzylamine/phenol)at pH2.7and values of C(2.8)are also higher for the Type A compared with the Type B phases using both procedures,indicating general agreement between them. Snyder and co-workers[24]have correlated a published dataset of“silanol activity”for a number of RP columns(measured by the average plate number for amitriptyline and pyridine with methanol-phosphate buffer pH6.0)with values of C at pH6.0,inter-polated from C(2.8)and C(7.0).Columns with a highvalue of C(6.0) correlated with columns of high silanol activity,and those with low values of C(6.0)with low silanol activity.In a later study[6]95%of Type B columns(designated either on the basis of manufacturer claims,or on the date a column wasfirst sold)were shown to have C(2.8)≤0.25,while only11%of Type A columns satisfied this crite-rion.Tailing of basic solutes(as measured by the asymmetry factor A s)was minimal for columns with C(2.8)<0.25(i.e.Type B columns) and tended to increase for larger values of C(2.8).From Table1,the Type A phases Resolve C18and Spherisob-ODS-2,now identified as such due to values of C(2.8)≥0.25,also give the highest values of hydrogen bonding acidity(parameter A,0.335and0.07,respec-tively,determined from the retention of amide probe compounds). Similarly,these phases also gave the highest relative retention of caffeine/phenol in the Tanaka procedure(1.29and0.59,respec-tively).The data can also be used to compare the effect of other features,e.g.the performance of embedded polar group phases (EPG)and the equivalent conventional C18phase,manufactured on the same silica.EPG phases include columns with embedded amide groups within the hydrocarbon chain:or carbamate groups:EPG phases have been proposed to give better peak shapes for the analysis of bases[24,27].The incorporation of an EPG in XTerra RP18reduces somewhat the Tanaka alpha(benzylamine/phenol) 7.6parameter to0.20,compared with0.35for the XTerra MS C18 column.Similarly,the S–D C(7.0)parameter is reduced to−0.173 for the EPG compared with0.051for the conventional phase.It is862 D.V.McCalley /J.Chromatogr.A 1217(2010)858–880possible that the reduced retention of benzylamine and other bases may be caused by a layer of water that is adsorbed close to the surface of EPG phases,providing some deactivating effect for the silanol groups [25,26].Other authors have compared conventional and EPG phases bonded on the same type of silica,on the basis of peak shape measurements.It was found that on average,peak shapes were indeed improved on the latter phases [27].Neverthe-less,it appears that the EPG technology gives more improvement in performance with phases bonded on older impure silicas,rather than the modern Type B silicas [27].This result seems to be reflected in the somewhat inconclusive data from Table 1concerning the rel-ative retention of bases on conventional and EPG phases.Thus the Discovery EPG phase (amide)has a slightly larger value of the T–E alpha (benzylamine/phenol)7.6parameter (0.44)compared with the regular C18phase (0.28).In contrast,the S–D C (7.0)parameter is smaller on Discovery Amide (−0.025)compared with Discovery C18(0.153).Similarly,while the T–E procedure indicates a con-siderable lower value of alpha (benzylamine/phenol)at pH 7.6for Symmetry Shield (0.2)compared with Symmetry C18(0.68),the S–D C (7.0)parameter for the EPG phases is slightly greater (0.136)compared with the regular phase (0.123).Euerby and Petersson pointed out that the extra retentiveness of phenols on EPG phases might invalidate the results of tests for silanophilic activity which involve the use of such solutes.They therefore suggested substitut-ing benzyl alcohol for phenol in the Tanaka test.Benzyl alcohol has retention properties similar to those of phenol but does not show excess retention on EPG phases [28].These particular comparisons point to some possible differences in the compatibility of column evaluations from either method.The Hoogmartens group looked more generally at the compati-bility of results from the S–D method and their own adaptation of the Tanaka procedure [29],finding a rather poor overall correlation between the two approaches.In a previous paper,this group had demonstrated a good correlation between their own method and the Euerby results.This latter finding is perhaps not surprising,as both are based on the Tanaka method.The problem of compatibility of the S–D and Tanaka methods may well be in the different mobile phase conditions and different probe solutes used in these tests.The S–D procedure uses the retention of the strong bases amitriptyline and nortriptyline in acetonitrile–phosphate buffer to calculate the cation-exchange term C (2.8)and derives the value of C (7.0)from the C (2.8)results by multiplying by the ratio of the retention fac-tors of the quaternary amine berberine at pH 7.0and 2.8;the T–E benzylamine tests use methanol as the organic modifier.Indeed the use of these different modifiers may explain the somewhat differ-ent evaluations of the EPG phases by either method.Even using the same mobile phase conditions,McCalley and Brereton [27,30–32]showed that peak shape data was not consistent between different basic probes.Thus,for example there was little correlation between A s for codeine and nortriptyline when using methanol–phosphate buffers at pH 3.0,whereas either of these solutes has been used as a single test compound to evaluate the relative silanol activity of different phases.One phase (Waters Symmetry Shield)gave,of 9highly inert RP columns,the highest N and lowest A s for nico-tine using acetonitrile–phosphate buffer at pH 7.0but the lowest efficiency for analysis of pyridine.Fig.2shows a principal compo-nents analysis (PCA)loadings plot for analysis of nine basic solutes on eight different RP columns using a mixture of methanol with a pH 3.0buffer.Lines can be drawn from the centre of the plot to each data point.Parameters that are opposed (i.e.appear at 180◦)measure equivalent but opposite trends.Thus N and A s values are opposed,with efficiency increasing as asymmetry decreases,as expected.Parameters that are at 90◦,like the asymmetry factors of pyridine and quinine,measure unrelated trends,and thus may be evaluating relatively different aspects of the detrimental inter-action of bases with the column surface.Conversely,the asymmetry parameters of nortriptyline and diphenhydramine have a smaller angle between them,and may be measuring more related proper-ties.It might therefore not be necessary to include both substances in a test mix for these particular mobile phase conditions.For over-all evaluation of column properties exploring different aspects of detrimental interactions,a test mix could include five compounds:codeine,quinine,amphetamine,nortriptyline and pyridine.The ranking of columns at pH 7using methanol was different from that at pH 7using acetonitrile;note that these correspond to the differ-ent modifiers of the T–E and S–D evaluation schemes,respectively.Snyder and co-workers [6]also observed that the tailing of basic (cationic)solutes on a given column appeared to be solute specific,finding that values of A s for the bases amitriptyline,nortriptyline,the quaternary compound berberine,and 4-n -hexylaniline corre-lated extremely poorly (r 2=0.01–0.19).The use of multiple basic test solutes and different mobile phase modifiers at different pH values would be a considerable task for the construction of these column evaluation databases.However,inclusion of a range of test compounds would undoubtedly improve the performance of these databases.It seems certain that these differences in test solutes and conditions contribute to the lack of correlation between the S–D and T–Etests.Fig.2.PCA loadings plots based on retention factor (k ),column efficiency (N ),Dorsey–Foley column efficiency (N df )and asymmetry factor (A s ).Data for eight different Type B reversed-phase columns and nine different probe compounds with methanol–phosphate buffer pH 3.0as mobile phase.See [30].。
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题目：高效液相色谱仪的综述
院 部 生命科学院 学科门类 生物仪器分析 专 业 生物技术一班 学 号 ********** 姓 名 王伟康 指导教师 陈金武
2014年6月15日
装
订
线
摘要
目前，高效液相色谱(HPLC)法由于对复杂样品中的分析物具有极高的分离效率而成为最有效的分离方法。
将具有高灵敏度的化学发光分析法和具有高分离效率的高效液相色谱分离法相结合已引起了国内外分析化学家的极大兴趣。
本文简单概述了高效液相色谱化学发光的特点、发展史、检测原理、化学发光反应体系以及发展前景。
关键词：高效液相色谱仪发展历史原理应用
ABSTRACT
At present, high performance liquid chromatography (HPLC) and become the most effective method for separating the separation efficiency of the analysis method of complex samples with high. Luminescence analysis method and high performance liquid with high separation efficiency of chemical with high sensitivity of chromatographic separation method has aroused great interest of chemists at home and abroad. This paper briefly introduces the characteristics, chemiluminescence HPLC detection principle, development history, chemiluminescence reaction system and the development prospects.
Key words:High performance liquid chromatography；Development history；Principle；Application
1 引言
高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是一种具有高效、快速及应用广泛的现代分离技术，它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论和技术，以高压输送流动相，采用高效固定相及较高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析方法己经成为有机物质分析的支柱技术，在生物化学、临床医学、食品检验、石油化工及环境污染监测等领域得到广泛的应用，成为分析化学家和生物化学家用以解决他们面临各种实际分析和分离必不可缺的工具。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
高效液相色谱仪是由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
从上个世纪70年代以来，人们经过努力已研究和开发了多种检测器，如紫外-可见光检测器(UV一Vls)、光电二极管阵列检测器(PDA)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、电化学检测器(ECD)、蒸发激光散射检测器(ELSD)、光电导检测器(PCD)、磁旋光检测器(MDR)、放射性检测器(RD)、热离子化检测器(TID)、化学发光检测器(CLD)和质谱(Ms)检测器等等。
随着色谱技术的发展，结合计算机各种软件的开发，使HPLC与各种检测仪器联用。
在众多的HPLC检测器中，化学发光检测器(CLD)结构简单，灵敏度高。
在大多数情况下，它的灵敏度比紫外一可见光检测器高2-3个数量级，由于它没有光源，不存在散射光引起的背景，用于荧光物质检测时，灵敏度比荧光检测器更高，对某些物质的检测甚至可与激光诱导荧光检测器媲美，灵敏度可达10-21 mol的单分子水平。
将高灵敏度的化学发光检测器与高分辨的高效液相色谱(HPLC)分离手段以适当的方式相
祸合，集分离与分析之精华于一体，发展成为一种理想的分析方法。
2 历史发展
1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。
1960年代末科克兰（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯（Horvath）、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。
高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。
1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法（HPLC）正式建立。
在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在医`学教育网搜集整理有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。
高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。
1960年代前，使用的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。
科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相，这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳，实现了高速传质，为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基础。
随着填料粒径的降低，更高的柱效也得以实现。
1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵，但后者的脉冲信号很大，难以满足高效液相色谱的要求。
1970年代，往复式双柱塞恒流泵，解决了这一问题。
1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶医`学教育网搜集整理，平均粒径只有7μm，具有极
好的柱效，并逐渐取代了无定形微粒硅胶。
之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高，多次使用成为可能。
1970年后，适合分离生物大分子的填料又成为研究的热点。
1980年后，改善分离的选择性成为色谱工作者的主要问题，人们越来越认识到改变流动相的组成事提高选择性的关键。
3 原理
重高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
4应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。
随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。
由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。
高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。